消肿止痛合剂对大鼠随意皮瓣血管再生的影响

目的:观察消肿止痛合剂对大鼠随意皮瓣血管再生及血管内皮生长因子(VEGF)-Dll4/Notch信号通路的影响.方法:将240只健康SD大鼠随机分为6组,分别为空白组、假手术组、模型组、消肿止痛合剂组(消肿组)、消肿止痛合剂+Notch阻断剂MK-0752(MK)组(消肿+MK组)和消肿止痛合剂组+VEGF受体抑制剂a...     

丁苯酞通过激活VEGF/VEGFR2-Notch1/Dll4信号促进HUVECs形成血管

目的:探索缺血缺氧(H/I)条件下丁苯酞(NBP)通过激活血管内皮生长因子(VEGF)/VEGF受体2(VEGFR2)-Notch1/Delta样配体4(Dll4)信号促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成的机制。方法:利用无血清培养基和缺氧罐模拟H/I条件,HUVECs传代培养后设置正常对照(control)组、H/I组、NBP高剂量(H/I+NBP_(high))组和NBP低剂量(H/I+NBP_(low))组,其中control组为常规培养的HUVECs,H/I组为H/I条件下培养的HUVECs,H/I+NBP_(high)组为在H/I环境下使用20μmol/L丁苯酞干预的HUVECs,H/I+NBP_(low)组为在H/I环境下使用5μmol/L丁苯酞干预的HUVECs。CCK-8法检测各组细胞的细胞活力,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力,体外血管形成实验检测各组细胞成管能力,Western blot法检测VEGFR2、Notch1和Dll4的表达,ELISA法检测培养基中VEGF的表达,qPCR检测VEGF、VEGFR2、Notch1和Dll4的mRNA表达水平。结果:丁苯酞可以提高H/I条件下HUVECs的存活率,促进细胞的迁移和体外血管的形成能力,且H/I+NBP_(high)组比H/I+NBP_(low)组更加显著。丁苯酞可以提高VEGF、VEGFR2、Notch1和Dll4的mRNA及蛋白表达。结论:丁苯酞可以在H/I条件下促进HUVECs形成血管,其机制可能与VEGF/VEGFR2-Notch1/Dll4信号的激活有关。     

重组人内皮抑素通过激活Dll4/Notch通路抑制大鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生

目的:观察重组人内皮抑素(rh ES)对大鼠动脉粥样硬化(AS)斑块内新生血管的抑制作用,探讨Dll4/Notch信号通路在其中的调控机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、AS组和AS+rh ES组,每组10只。N组始终喂基础饲料,其余2组采用高脂喂养、维生素D3负荷及球囊损伤动脉内膜建立大鼠AS模型。AS+rh ES组以10 mg·kg~(-1)·d~(-1)的rh ES腹腔注射4周,另2组注射等量生理盐水。采血检测各组的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-1(IL-1)和肌钙蛋白I(Tn I)等;免疫组化CD31染色观察新生血管密度;Western blot法检测主动脉内Dll4、Notch1蛋白表达。结果:与N组比较,AS组和AS+rh ES组的TC、TG、LDL-C、CRP和L-1水平均显著升高(P0.05),但上述指标在AS组和AS+rh ES组之间差异无统计学显著性。CD31染色结果显示,AS组的新生血管表达最丰富;与AS组比较,AS+rh ES组的新生血管密度显著下降(P0.05)。AS组的Dll4和Notch1蛋白水平显著低于N组(P0.05);相比AS组,AS+rh ES组的Dll4和Notch1蛋白水平显著升高(P0.05)。结论:rh ES能够抑制大鼠AS斑块内血管新生,Dll4/Notch通路的激活可能是rh ES抑制斑块内的血管新生的信号机制。     

miR-210对血管内皮细胞VEGF-Notch信号通路的调控

目的: 观察过表达miR-210对血管内皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)-Notch信号通路相关分子表达的影响,探讨miR-210调控血管新生的分子机制。方法: 采用常规方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)。通过转染LV- miR-210-GFP重组慢病毒载体上调内皮细胞miR-210表达,实验分为miR-210过表达组(LV- miR-210-GFP)和对照组(LV-GFP)。采用real-time PCR检测miR-210的表达变化,流式细胞术检测ephrin-A3的表达,采用real-time PCR、Western blotting、免疫荧光细胞化学染色法分别检测VEGF-Notch信号通路相关分子VEGF、VEGF 2(VEGFR 2)、Notch1的mRNA和蛋白表达水平。结果: Real-time PCR结果显示,与对照组相比,miR-210过表达组miR-210表达水平上调了(32.10±1.26)倍;流式细胞术结果显示,miR-210过表达组阳性细胞率 较对照组 明显增加(P<0.05)。Real-time PCR结果显示,miR-210过表达组 VEGF、VEGFR2、Notch1 mRNA分别较对照组上调了(7.40±0.67)、(2.50±0.10)、(9.70±0.72)倍,P<0.05;免疫荧光结果显示,miR-210过表达组VEGF和VEGFR2红色荧光信号均显著强于对照组(P<0.05)。Western blotting 结果显示,miR-210过表达组血管内皮细胞中Notch1的蛋白表达量(4.22±0.60)较对照组明显升高(P<0.05)。结论: miR-210过表达可显著上调VEGF-Notch信号通路分子的表达水平。     

缺氧诱导培养的人脑微血管内皮细胞VEGF表达及超微结构的变化

目的探讨缺氧条件下体外培养人脑微血管内皮细胞VEGF基因表达与细胞超微结构变化。方法取材于手术中切除的脑动静脉畸形周围黏连的新鲜脑组织,采用匀浆、过滤和酶消化技术分离微血管内皮细胞。免疫组化方法检测第八因子相关抗原(FⅧ-RA)表达。选用RT-PCR技术观察静态和缺氧状态下(体积分数95%N2,5%CO2;2 h、4 h和8 h)内皮细胞VEGF mRNA表达,同时以ELISA方法检测每组细胞上清液中VEGF蛋白含量,透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果相差显微镜下,培养的活细胞具有单层“卵石样”排列的典型特征,90%以上的细胞为FⅧ-RA阳性染色。缺氧4 h细胞VEGFmRNA和蛋白表达较对照组显著升高(P<0.01),8 h后表达下调,并出现线粒体肿胀、内质网扩张及溶酶体多囊泡形成。结论缺氧条件下脑血管内皮细胞的VEGF表达水平可能与其细胞超微结构变化有重要关系。     

预热应激对缺氧血管内皮细胞的保护作用及其机制

目的:研究预热应激对缺氧血管内皮细胞的保护作用及其发生机制,探索新的防治措施。方法:将血管内皮细胞分为:(1)缺氧组;(2)热应激组;(3)预热应激+缺氧组;(4)对照组。用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,以台盼兰染色法测定细胞死亡率,用Griess化学法测定细胞培养液中NO₂^-含量,以观察细胞NO生成量。结果:缺氧血管内皮细胞LDH的释放量和细胞死亡率显著大于对照组,39℃预热应激可使其分别降低29.47%和33.67%,41℃预热应激对缺氧细胞无明显保护作用。缺氧使血管内皮细胞NO生成量显著降低。39℃预热应激的缺氧血管内皮细胞NO生成量显著高于缺氧组,41℃预热应激的缺氧血管内皮细胞NO生成量显著低于对照及相应的缺氧组;血管内皮细胞NO生成量与细胞LDH释放量及细胞死亡率呈显著负相关。结论:一定强度的预热应激可以对缺氧血管内皮细胞产生保护作用。细胞NO产生增多在这种保护作用机制中可能具有重要作用。     

HOXD10 基因抑制结直肠癌细胞生长的机制研究

目的:探讨上调HOXD10基因表达对结直肠癌细胞增殖凋亡及免疫抑制因子VEGF和TGF-β1表达的影响。方法:Western blot检测结直肠癌HCT116、HT29、CaCO_2细胞中HOXD10的蛋白表达;将过表达HOXD10的质粒(pcDNA3. 1-HOXD10组)转染HT29细胞,同时转染阴性对照组(pcDNA3. 1组)及设置空白对照组,收集转染48 h的细胞,MTT及流式细胞仪分别检测细胞活力及凋亡率;Western blot检测免疫抑制因子VEGF和TGF-β1及Notch信号通路受体Notch1、配体Jagged1及下游靶基因Hes1的蛋白表达。结果:结直肠癌HCT116、HT29、CaCO_2细胞中HOXD10的表达均显著低于在NCM460细胞表达(P0. 05);转染pcDNA3. 1-HOXD10的HT29细胞HOXD10的蛋白表达显著高于pcDNA3. 1组(P0. 05);与pcDNA3. 1组比较,pcDNA3. 1-HOXD10组细胞活力明显降低,细胞凋亡率显著升高,TGF-β1、VEGF、Notch1、Jagged1和Hes1的蛋白表达均显著降低(P0. 05)。结论:上调结直肠癌细胞HOXD10基因表达可抑制癌细胞活力,诱导细胞凋亡,下调免疫抑制因子VEGF和TGF-β1表达,机制可能与下调Notch信号通路有关。     

姜黄素对缺氧下大鼠星型胶质细胞的影响及机制研究

目的：探讨姜黄素对缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、细胞凋亡率及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法：从大鼠大脑皮层分离培养星形胶质细胞,姜黄素干预缺氧条件星形胶质细胞,AG490作为JAK2/STAT3信号通路抑制剂,细胞缺氧处理24 h后,通过MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、JAK2/STAT3信号通路磷酸化的蛋白酪氨酸激酶2（p-JAK2）及磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：与对照组比较,缺氧组细胞活力显著升高,凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著升高（P<0.05）;与缺氧组比较,缺氧+姜黄素组胞活力显著降低,凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著降低（P<0.05）;与缺氧+姜黄素组比较,缺氧+姜黄素组+AG490组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论：姜黄素可降低缺氧下大鼠星型胶质细胞活力,抑制细胞凋亡,其机制与JAK2/STAT3信号通路有关。     

缺氧对高原藏族、汉族人脐静脉内皮细胞VEGF、iNOS和eNOS mRNA表达影响的比较

目的：比较缺氧对世居高原藏族人和移居高原汉族人脐静脉内皮细胞（UVECs）血管内皮生长因子（VEGF）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS） mRNA表达的影响。 方法： 分离脐静脉内皮细胞，体外原代培养，分为①世居高原藏族组和②移居高原汉族组两组，每组包括常氧对照和缺氧(0.5% O2)2 h、4 h、12 h和24 h时点。分离细胞总RNA，分别用RT-PCR检测VEGF、iNOS和eNOS mRNA表达。 结果： 缺氧可以诱导世居高原藏族人UVECs表达iNOS和VEGF mRNA表达增加，同时抑制eNOS mRNA表达。移居高原汉族人UVECs表达上述基因mRNA的特点与世居高原藏族人相似。 结论： 缺氧时世居高原藏族人UVECs VEGF、iNOS和eNOS mRNA表达特点与移居高原汉族人相似，提示上述基因表达的改变可能是缺氧反应机制的共同过程。     

阻断Dll4-Notch信号通路对哮喘小鼠Th17细胞分化的影响

目的:探讨哮喘小鼠体内Delta样配体4(Delta-like ligand 4,Dll4)-Notch信号通路阻断对辅助性T细胞17(Th17细胞)分化的影响。方法:30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、生理盐水对照组、哮喘模型组、Dll4单克隆抗体干预组和Ig G对照组。肺组织切片进行免疫组织化学染色,定性分析Dll4的表达。流式细胞术分析各组小鼠脾脏Th17细胞在CD4~+T淋巴细胞中的比例。采用Western blot法检测小鼠脾脏分离淋巴细胞中维甲酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan receptorγt,RORγt)的蛋白表达。应用酶联免疫吸附实验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测各组小鼠血清中白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)的含量。结果:与哮喘模型组比较,Dll4单克隆抗体干预组Dll4表达存在明显差异。与哮喘模型组比较,Dll4单克隆抗体干预组脾脏分离CD4~+T淋巴细胞中Th17细胞的比例和RORγt表达水平均存在统计学显著性(P0.05)。Dll4单克隆抗体干预组小鼠血清IL-17的表达与哮喘模型组之间的差异也存在统计学显著性(P0.01)。结论:阻断Dll4-Notch信号通路对哮喘小鼠Th17细胞分化起到抑制作用。     

Notch信号分子在ICA诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的作用

目的观察Notch信号通路在淫羊藿苷(ICA)诱导胚胎干细胞(ESC)向心肌细胞分化过程中的作用。方法实验分为自然分化组、ICA诱导分化组及ICA+MW167(Notch信号抑制剂)组。相差显微镜下观察各组自发性节律收缩细胞出现情况的差别,免疫荧光染色观察各组细胞心肌特异性蛋白ANP的表达,RT-PCR检测各组细胞ANP mRNA的表达。结果 ICA+MW167组自发性节律收缩细胞数明显多于自然分化组与ICA诱导分化组,ICA+MW167组心肌细胞特异性蛋白ANPmRNA和蛋白的表达水平随培养时间延长逐渐增加,明显高于自然分化组与ICA诱导分化组。结论 Notch信号通路参与了ICA诱导ESC分化为心肌细胞的过程,抑制该信号通路可以明显提高心肌细胞特异性ANP基因及蛋白的表达,上调分化的心肌细胞比率。     

通心络通过PI-3K/Akt/HIF信号通路改善血管内皮细胞缺氧损伤

目的: 观察通心络对缺氧血管内皮细胞中缺氧诱导因子(HIF)及其上游信号转导通路PI-3K/Akt的影响,探讨PI-3K/Akt/HIF信号通路在通心络改善血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用。方法: 将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为常氧对照组、通心络组、缺氧组和缺氧+通心络组。采用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性,Western blotting 检测HIF-1α、Bcl-2、Mcl-1、Bax表达变化及Akt的磷酸化情况。利用HIF-1α的显性负性突变体(DN-HIF)瞬时转染HUVECs,流式细胞仪分析细胞的凋亡情况。利用PI-3K和Akt的显性负性突变体瞬时转染HUVECs,探讨PI-3K/Akt信号通路在通心络改善血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用。结果: 与常氧条件下比较,通心络对缺氧内皮细胞虽有明显的促增殖作用,但程度明显减弱。通心络可显著上调HIF-1α、Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平及Akt磷酸化水平,且下调Bax的表达。利用DN-HIF抑制HIF-1α的活化后,通心络提高缺氧HUVECs活性的程度明显下降,但仍可一定程度上降低细胞凋亡百分率。进一步利用PI-3K显性负性突变体(Δp85)和Akt显性负性突变体(DN-Akt)阻断HIF-1α上游信号通路PI-3K/Akt后,通心络上调缺氧HUVECs HIF-1α蛋白表达的作用明显减弱,促进Akt磷酸化的作用基本消失。结论: 在缺氧条件下,通心络上调HUVECs HIF-1α蛋白表达水平,促进抗凋亡因子同时抑制促凋亡因子的表达,降低细胞凋亡率,从而提高缺氧细胞的增殖率,这些作用在一定程度上依赖于PI-3K/Akt/HIF通路的活性。     

罗格列酮对人腹膜微血管内皮细胞AQP1、VEGF-A及COX-2表达的影响

目的:探讨罗格列酮对人腹膜微血管内皮细胞水孔蛋白1(AQP1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)及环氧合酶2(COX-2)蛋白的影响。方法:(1)体外培养人腹膜微血管内皮细胞并分为4组;用倒置显微镜观察细胞形态学变化;(2)Western blotting检测细胞AQP1、VEGF-A和COX-2蛋白的表达;(3)real-time PCR检测细胞AQP1、VEGF-A及COX-2 mRNA的表达。结果:罗格列酮可促进人腹膜微血管内皮细胞增殖,上调AQP1蛋白及基因的表达(P0.05),下调VEGF-A和COX-2蛋白和mRNA的表达,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)拮抗剂GW9662可部分抑制罗格列酮上调的AQP1表达(P0.05),但对VEGF-A及COX-2表达无明显影响(P0.05)。结论:罗格列酮能够上调腹膜微血管内皮细胞AQP1的表达,下调VEGF-A及COX-2的表达,这可能与罗格列酮增加腹膜水转运、减轻腹膜纤维化有关。     

VEGF基因对缺氧诱导的内皮细胞凋亡和坏死的影响

采用缺氧诱导体外培养血管内皮细胞凋亡模型, 用脂质体介导的基因转移法将含血管内皮生长因子(VEGF)cDNA的真核表达载体pSVI21 导入血管平滑肌细胞(VSMC) 中, 取此VSMC条件培养液, 再行血管内皮细胞(VEC) 培养, 用透射电镜、原位末端标记和流式细胞仪分析法观察VEGF对凋亡产生的影响。结果发现: 缺氧组凋亡发生率明显增加, 而加用转基因VSMC条件培养液后凋亡发生率明显减少, 并可减轻缺氧致内皮细胞超微结构的改变。结果表明: VEGF可减少缺氧诱导血管内皮细胞凋亡的产生, 保持血管内皮细胞的完整, 有益于防止或减少缺氧时内皮受损及内皮功能紊乱     

淫羊藿苷通过VEGF 通路对缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞系RF/6A 增殖、侵袭和迁移能力的调节作用

目的:探索淫羊藿苷对缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞RF/6A增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:MTT检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;蛋白印迹检测VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平。结果:与对照组相比,缺氧组细胞增殖明显升高,侵袭和迁移能力明显增强(P0. 05)。淫羊藿苷处理缺氧组细胞后,细胞增殖能力明显下降,侵袭和迁移能力明显减弱(P0. 05)。而且,缺氧组VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平显著高于正常组(P0. 01)。与缺氧组相比,缺氧加药组VEGF、p-PI3K、p-AKT和Rac蛋白水平明显降低(P0. 01)。结论:淫羊藿苷通过VEGF通路抑制缺氧诱导的脉络膜视网膜内皮细胞RF/6A增殖、侵袭和迁移能力。     

康柏西普与雷珠单抗对RF/6A细胞增殖和迁移影响的比较

目的比较康柏西普与雷珠单抗对恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A cells)增殖和迁移的影响。方法将RF/6A细胞分为正常组、VEGF组、康柏西普组、雷珠单抗组、康柏西普+VEGF组和雷珠单抗+VEGF组。CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞迁移;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;Western blot检测蛋白AKT、p-AKT、P38MAPK及p-P38MAPK表达;实时定量PCR检测AKT mRNA和P38MAPK mRNA表达。结果 1)与正常组比,同时间不同浓度药物组细胞增殖率呈浓度依赖性降低。确定药物浓度225μg/m L和培养24 h继续实验。2)与正常组比,VEGF组细胞增殖率高,迁移数目多,单药组增殖率低,迁移数目少;与VEGF组比,VEGF+药组增殖率低,迁移数目少。3)与正常组比,VEGF组细胞凋亡率低,单药组凋亡率高;与VEGF组比,VEGF+药组凋亡率高。4)与正常组比,VEGF组磷酸化蛋白和mRNA表达高,单药组表达低;与VEGF组比,VEGF+药组表达低。结论两药通过AKT和P38MAPK信号通路抑制RF/6A细胞增殖、迁移及相关蛋白的表达。     

复制缺陷型腺病毒载体介导人血管内皮细胞生长因子cDNA促进静脉分叶皮瓣的成活

背景：静脉分叶皮瓣可修复多个手指皮肤软组织缺损,但静脉皮瓣普遍存在成活率不稳定,限制了其在临床上的应用。 目的：观察以复制缺陷型腺病毒介导血管内皮细胞生长因子165基因(cDNA)局部应用对兔静脉分叶皮瓣成活的影响。 方法：用新西兰大白兔制作侧腹壁双蒂轴型静脉分叶皮瓣,分别皮下注射介导血管内皮细胞生长因子165基因(Ad-VEGF)的复制缺陷型腺病毒、携带β半乳糖苷酶基因的腺病毒(Ad-Gal)和生理盐水。术后7 d对3组兔进行皮瓣存活率、免疫组织化学、新生血管计数和常规组织切片的检测。 结果与结论：术后7 d,Ad-VEGF165组皮瓣成活率和平均血管数目显著高于Ad-Gal组和生理盐水组(P < 0.01),皮瓣中血管内皮细胞及毛囊旁细胞中有大量VEGF蛋白阳性表达细胞,皮瓣中出现肉芽组织增生,新生血管大量形成。结果证实,以复制缺陷型腺病毒为载体介导的人VEGF cDNA能促进新生血管的形成并提高静脉分叶皮瓣的成活率。