姜黄素联合5-氟尿嘧啶下调YAP表达诱导人结肠癌细胞自噬

目的研究姜黄素与5-FU联用对人结肠癌细胞自噬及对YAP的影响。方法姜黄素、5-FU单独应用及两者联用作用于人结肠癌HCT116细胞和过表达YAP的结肠癌稳定HCT116细胞系24 h,MTT法检测细胞增殖情况,Western blot检测自噬标志物LC3-Ⅱ的变化,并检测癌基因YAP表达变化。结果 MTT法检测结果显示,2种药物联合应用后,肿瘤细胞的增殖抑制率明显高于单用药组(P0.01)。姜黄素组、5-FU组和药物联用组HCT116细胞的YAP蛋白表达水平下降,LC3-Ⅱ蛋白的表达水平增高。结论姜黄素和5-FU联用会下调YAP的表达,并诱导结肠癌细胞自噬的表达,YAP或许能成为结肠癌治疗的一个新的靶点。     

自噬参与香烟烟雾提取物诱导的肺动脉内皮细胞凋亡

目的:探讨自噬在香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导人肺动脉内皮细胞(human pulmonary artery endothelial cells,HPAECs)凋亡中的作用。方法:常规培养HPAECs,分为对照组、CSE组、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组和3-MA+CSE组,应用Hoechst 33342染色和Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色观察细胞自噬泡形成,Western bolt测定自噬相关蛋白beclin-1、LC3与cleaved caspase-3的水平。结果:MDC染色示CSE处理可以诱导细胞产生自噬泡,Western blot结果示自噬相关蛋白LC3及beclin-1表达升高,3-MA预处理后抑制上述蛋白的表达。Hoechst 33342染色和Annexin V/PI流式结果显示CSE组细胞凋亡率较对照组明显增加,在3-MA+CSE组,细胞凋亡率较CSE组进一步升高;同时,CSE组细胞cleaved caspase-3蛋白水平较对照组明显升高(P0.05),3-MA+CSE组的caspase-3表达较CSE组进一步升高。结论:CSE能诱导HPAECs发生自噬和凋亡,抑制自噬能够进一步促进CSE对HPAECs的凋亡作用,这种作用可通过激活caspase-3实现。     

雷帕霉素对过氧化氢诱导血管内皮细胞衰老的干预研究

目的:探讨雷帕霉素(Rapa)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的影响及其可能的机制。方法:把HUVECs分为空白组、衰老组(H_2O_2诱导)、Rapa+H_2O_2组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)+H_2O_2组。噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞活力;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老情况;透射电子显微镜观察细胞超微结构改变;Western blot检测Rb、磷酸化Rb(p-Rb)、p21、LC-3II和beclin-1的表达变化。结果:与空白组相比,衰老组细胞活力下降,SA-β-Gal染色阳性率增高,细胞结构紊乱,并伴有衰老蛋白表达显著增加(P0.01);与衰老组相比,Rapa+H_2O_2组细胞活力增强,细胞衰老染色减少,p-Rb和p21表达显著减少(P0.05),电镜下细胞结构趋于正常,并可见自噬小体,beclin-1和LC3-II表达显著增多(P0.01);与衰老组相比,给予自噬抑制剂3-MA的细胞则表现为细胞活力进一步下降,SA-β-Gal染色阳性率进一步增高,p-Rb和p21表达增多,细胞结构破坏明显,beclin-1和LC3-II几乎不表达(P0.05)。结论:Rapa可延缓H_2O_2诱导的血管内皮细胞衰老,这种抗衰老作用可能与促进自噬有关。     

miR-337靶向调节p53表达对结肠癌细胞自噬和迁移能力的影响

目的:研究微小RNA-337(miR-337)对结肠癌细胞自噬及迁移能力的影响并从靶向调节p53表达的角度探讨其可能机制。方法:采用免疫组化方法检测结肠癌组织中beclin-1、LC3B和p53蛋白的表达,分析beclin-1和LC3B蛋白的表达与临床病理特征的相关性及p53与beclin-1和LC3B蛋白表达的相关性。小干扰RNA敲减p53基因表达后电镜观察结肠癌细胞株HCT116中自噬小体的形成,Western blot检测beclin-1和LC3B蛋白的表达。生物信息学预测筛选靶向p53的miRNAs并用RT-qPCR方法验证在HCT116细胞中的表达,萤光素酶报告检测miR-337对p53基因的调控作用。过表达miR-337后用Western blot检测p53及beclin-1和LC3B的表达,Transwell实验检测HCT116细胞的迁移能力。结果:与癌旁黏膜组织相比,beclin-1和LC3B蛋白在结肠癌组织中表达降低,与结肠癌的发生发展以及侵袭、转移显著相关。p53在结肠癌组织中表达升高,与beclin-1和LC3B蛋白的表达显著负相关。敲减p53基因的表达使beclin-1和LC3B蛋白表达上调;过表达miR-337和敲减p53蛋白表达可使beclin-1和LC3B的蛋白表达上调,HCT116细胞迁移能力降低(P0.05)。结论:miR-337可促进结肠癌细胞自噬,抑制其迁移能力,其机制可能与靶向抑制p53表达有关。     

白藜芦醇调控miR-34a表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响

目的:探讨白藜芦醇通过调控微小RNA-34a(miR-34a)表达对骨肉瘤MG-63细胞生长、侵袭和自噬的影响。方法:将骨肉瘤MG-63细胞分为对照组及10、20、40、60和80μmol/L白藜芦醇处理组。采用MTT法、Transwell小室和Western blot实验检测各组骨肉瘤细胞的活力、侵袭能力及自噬蛋白表达;RT-q PCR检测各组骨肉瘤细胞中miR-34a的表达。转染miR-34a模拟物(miR-34a mimic)及阴性对照(miR-34a NC)至骨肉瘤细胞,检测miR-34a mimic和miR-34a NC在白藜芦醇处理后对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的影响,Western blot检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和beclin-1的蛋白表达。结果:与对照组相比,不同浓度的白藜芦醇可抑制肿瘤细胞的活力和侵袭能力,促进自噬(P0.05)。白藜芦醇可上调肿瘤细胞中miR-34a的表达,并具有剂量依赖性(P0.05),同时促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,beclin-1蛋白表达量上调(P0.05)。miR-34a mimic可增加白藜芦醇对骨肉瘤细胞活力和侵袭能力的抑制,并进一步促进自噬。结论:白藜芦醇可能通过上调miR-34a表达抑制骨肉瘤MG-63细胞生长并促进其自噬。     

TLR4介导可溶性尿酸诱导的肾小管上皮细胞自噬流异常

目的:探寻Toll样受体4(TLR4)与可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞HK-2自噬的关系。方法:用可溶性尿酸或/和氯喹(CQ)刺激HK-2细胞,采用Western blot检测LC3-Ⅱ和P62的表达水平,通过透射电子显微镜观察细胞内自噬小体及自噬溶酶体形成。在可溶性尿酸刺激HK-2细胞的基础上加上TLR4抑制剂TAK242后采用RT-qPCR检测TLR4的mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、LC3-Ⅱ和P62的蛋白水平,并通过自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)标记观察细胞内自噬流的变化。结果:可溶性尿酸可诱导HK-2细胞LC3-Ⅱ和P62的表达上调,其与CQ共同处理后LC3-Ⅱ及P62的表达进一步增加,透射电子显微镜下观察到自噬小体增多,自噬溶酶体少见,提示自噬流受阻。Western blot结果显示,与正常对照组相比,可溶性尿酸组TLR4、LC3-Ⅱ和P62的蛋白水平增高,而TAK242则抑制可溶性尿酸诱导HK-2细胞的TLR4、LC3-Ⅱ和P62的表达水平。自噬双标腺病毒实验结果显示,可溶性尿酸组与对照组相比,自噬小体显著增多,且自噬溶酶体较少;而与可溶性尿酸组相比,TAK242+可溶性尿酸组自噬小体减少,自噬溶酶体相对增多,表明自噬小体与溶酶体融合现象增多,形成自噬溶酶体的进程更顺畅。结论:可溶性尿酸导致肾小管上皮细胞自噬流受阻;同时,可溶性尿酸可通过TLR4介导肾小管上皮细胞自噬流异常。     

5-氟尿嘧啶诱导人肺腺癌A549细胞自噬

目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)是否诱导人肺腺癌A549细胞发生自噬.方法 吖啶橙(AO)荧光染色和透射电镜观察自噬泡的变化;细胞免疫化学法测定LC3-Ⅱ的表达;流式细胞术及吖啶橙染色结合激光扫描共焦显微镜检测细胞凋亡;DNA电泳检测凋亡梯形条带的产生.结果 吖啶橙荧光染色和透射电镜观察结果显示,5-氟尿嘧啶处理细胞...     

重组人脑钠肽对高糖诱导下内皮细胞的作用

目的:研究重组人脑钠肽(rhBNP)对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用和机制。方法:利用高糖诱导HUVECs凋亡模型,给予rhBNP、rhBNP+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或rhBNP+ERK通路抑制剂U0126干预,观察rhBNP对高糖诱导下HUVECs自噬、凋亡及其相关信号通路的影响。结果:体外高糖诱导HUVECs,细胞活力被抑制,细胞凋亡增加,自噬相关蛋白beclin-1表达水平和LC3-II/LC3-I比值均显著降低,ERK信号通路活性显著减弱(P0.05或P0.01)。1 mg/L rhBNP干预后细胞活力和迁移能力显著增强(P0.01),LC3-II/LC3-I比值提高(P0.05),beclin-1表达增加(P0.01),Bax/Bcl-2比值和cleaved caspase-3蛋白水平降低,ERK蛋白水平增加(P0.05)。加入ERK抑制剂后,beclin-1自噬蛋白表达减弱(P0.05),提示rhBNP可能通过激活ERK信号通路促进自噬蛋白表达进而调节HUVECs的生物学活性。结论:高糖抑制ERK信号通路,自噬降低,凋亡增加;rhBNP通过激活ERK信号通路,促进自噬发生,减少细胞凋亡,保护细胞。     

Taurine、EGCG和genistein联合对体外活化肝星状细胞自噬的影响

目的:探讨牛磺酸(taurine)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和三羟基异黄酮(genistein) 3种抗肝纤维化药物联合使用对体外活化大鼠肝星状细胞(HSCs)自噬的影响及可能机制。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立对照组、联合药物(taurine+EGCG+genistein,TEG)组、自噬抑制剂巴弗洛霉素A1(Baf-A1)组和联合药物+抑制剂(TEG+Baf-A1)组。采用CCK-8法分别检测各组HSCs的存活率,应用透射电镜观察HSCs内部自噬体超微结构变化,通过吖啶橙(AO)染色和荧光显微镜观察各组细胞内自噬溶酶体变化,Western blot分析自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和beclin-1的表达。结果:与对照组相比,TEG组、Baf-A1组和TEG+Baf-A1组细胞的存活率明显降低(P 0. 05);透射电镜观察到细胞内部出现双层或多层膜结构的自噬体,以及单层膜结构的自噬溶酶体。与对照组相比,AO染色结果显示TEG组和Baf-A1组红色荧光区域显著缩小,TEG组中LC3-Ⅱ和beclin-1的表达量显著降低(P 0. 05)。结论:活化的HSCs发生自噬现象,联合药物TEG可阻断HSCs的自噬过程,其作用机制可能与抑制HSCs中自噬体的生成有关。     

雷公藤甲素通过ERK通路诱导肺癌A549细胞自噬

目的:研究雷公藤甲素(tripchlorolide,TP)对肺癌A549细胞活力及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法:应用TP作用于肺癌A549细胞后,MTT法检测细胞活力;吖啶橙染色(AO)法在荧光显微镜下观察细胞自噬状态;GFP-LC3质粒转染实验观察细胞胞质中绿色点状聚集的自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达情况及有关的信号通路ERK蛋白水平的变化。结果:TP可以显著抑制肺癌A549细胞的增殖(P0.05),并呈一定的剂量-时间依赖关系。TP作用于肺癌A549细胞48 h后,细胞内酸性滤泡染成亮红色荧光比例增多。GFP-LC3转染实验结果显示在100 nmol/L TP处理后,细胞胞质中出现绿色点状聚集的自噬小体,而正常培养组极少细胞有自噬小体形成;同时转染GFP-control质粒的细胞在100 nmol/L TP处理及正常培养条件下均未观察到点状聚集的自噬小体产生。TP作用于肺癌A549细胞48 h后,与对照组相比,100 nmol/L TP组LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P0.01),同时p-ERK/ERK蛋白水平也显著升高(P0.01);与100 nmol/L TP组相比,TP+3-MA组LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著下降(P0.01),同时p-ERK/ERK蛋白水平也显著下降(P0.01)。结论:TP可显著抑制肺癌A549细胞活力并诱导细胞发生自噬,这种作用可能与影响ERK的磷酸化有关。     

miR-181a参与调控香烟提取物诱导的NR8383肺泡巨噬细胞自噬紊乱与促炎因子的生成

目的:探讨微小RNA-181a(miR-181a)对香烟提取物(CSE)诱导的NR8383大鼠肺泡巨噬细胞自噬紊乱与促炎因子生成的影响。方法:采用5%、10%和20%浓度的CSE刺激NR8383细胞,ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-8的分泌,RT-qPCR检测miR-181a水平,Cyto-ID染色检测自噬体数量,Western blot法检测LC3-Ⅱ、beclin-1和p62的表达。在20%CSE条件下,采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或自噬激动剂雷帕霉素(Rapa)预处理细胞,ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-8的分泌;进一步转染miR-181a mimic或miR-181a inhibitor后,分别采用ELISA和Western blot观察在20%CSE条件下,细胞TNF-α、IL-6和IL-8分泌及LC3-Ⅱ、beclin-1和p62表达的情况。结果:CSE浓度依赖性促进NR8383细胞促炎因子生成和自噬紊乱;3-MA促进CSE诱导的NR8383细胞促炎因子释放,而Rapa部分逆转CSE诱导的NR8383细胞促炎因子释放;miR-181a mimic显著抑制CSE诱导的NR8383细胞促炎因子生成,促进自噬,miR-181a inhibitor促进CSE诱导的NR8383细胞促炎因子生成,加剧自噬紊乱。结论:miR-181a调控CSE诱导的NR8383细胞促炎因子释放可能与其调控自噬紊乱有关。     

AZD8055对胆管癌细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双重抑制剂AZD8055对人胆管癌HuCCT1细胞自噬和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度的AZD8055对HuCCT1细胞活力的抑制作用;吖啶橙染色检测AZD8055处理胆管癌细胞后,细胞自噬小体形成情况;Western blot法观察细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3以及自噬相关标志蛋白beclin 1、LC3和p62的表达;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果:AZD8055显著抑制胆管癌细胞的活力(P0.05)。吖啶橙染色后,AZD8055用药组橙红色颗粒增多。Western blot实验显示,AZD8055处理后,与对照组相比自噬标志蛋白beclin 1表达上调,LC3-II/LC3-I比例上调,p62表达下调;cleaved caspase-3表达降低,促凋亡蛋白Bax表达降低,抑凋亡蛋白Bcl-2表达升高(P0.05)。流式细胞术显示,AZD8055可抑制细胞凋亡。结论:AZD8055可抑制胆管癌细胞的生长,其机制可能与诱导细胞自噬相关。     

NOD8抑制人胰腺癌细胞自噬及凋亡对其自噬作用的影响

目的:探讨NOD8(也称NLRP10或PYNOD)是否能抑制胰腺癌细胞发生自噬及其可能机制,并研究凋亡对NOD8调控自噬的影响。方法:用JetPRIME阳离子聚合物将空质粒pEGFP-C2和重组质粒pEGFP-NOD8分别转染入胰腺癌Panc-1细胞,并设立空白对照组,48 h后应用Western blot检测NOD8蛋白、自噬相关蛋白(beclin-1和LC3-Ⅱ)以及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白(Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR)的表达;并采用免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点的数量。此外,用caspase抑制剂Z-VAD-FMK作用于过表达NOD8的Panc-1细胞后,Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平;免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点数量。结果:pEGFP-NOD8组细胞NOD8蛋白表达明显高于对照组和pEGFP-C2组(P0.01)。与对照组和pEGFP-C2组相比,pEGFP-NOD8组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达及细胞LC3斑点数量显著降低;并且pEGFP-NOD8组细胞p-Akt及p-mTOR蛋白表达量显著上升(P0.01),而AKT和mTOR蛋白表达无明显差异。与pEGFP-NOD8组相比,pEGFP-NOD8+Z-VAD-FMK组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平及LC3斑点数量显著高于pEGFP-NOD8组。结论:NOD8可抑制Panc-1细胞自噬,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR通路有关;凋亡可增强NOD8对自噬的抑制作用。     

和厚朴酚通过mTOR信号通路诱导肺癌A549细胞自噬

目的:探讨和厚朴酚(honokiol)对人肺腺癌A549细胞自噬的诱导作用及可能的作用机制。方法:体外培养A549细胞,加入不同浓度(0、10、20、40、60和80μmol/L)的honokiol处理48 h,MTT法检测honokiol对细胞活力的影响;吖啶橙染色观察细胞酸性自噬泡情况;Western blot法检测honokiol及联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用后对自噬相关蛋白LC3及相关的信号通路mTOR蛋白表达的变化。结果:Honokiol剂量依赖地抑制肺癌A549细胞的活力(P0.05)。Honokiol处理肺癌A549细胞能显著增加细胞内发出亮红色荧光的酸性自噬泡的比例。在40μmol/L的honokiol作用下肺癌A549细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P0.01),3-MA作用则显著降低。Honokiol可显著降低p-mTOR蛋白表达水平(P0.01),而联合3-MA作用后则使p-mTOR蛋白水平显著升高(P0.01),mTOR总蛋白表达水平均无显著变化。结论:Honokiol可诱导肺癌A549细胞自噬,其机制可能与抑制mTOR信号通路相关。     

远程缺血后处理抑制心肺复苏后大鼠海马神经细胞自噬

目的:观察远程缺血后处理(RIPostC)对心肺复苏后(CPR)大鼠海马神经细胞自噬水平的影响。方法:45只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、心脏停搏(CA)/CPR组和RIPostC组,每组15只。通过夹闭气管导管建立窒息性CA/CPR模型。在自主循环恢复(ROSC)后不同时点进行神经功能缺损评分(NDS),ROSC后24 h处死大鼠并取出海马组织,Western blot法检测海马神经细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和beclin-1蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光观察LC3颗粒形成,透射电镜观察细胞自噬小体和线粒体的超微结构形态学变化。结果:与sham组相比,CA/CPR组NDS评分降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和beclin-1蛋白表达均升高(P0.05),神经细胞凋亡增多(P0.05);与CA/CPR组相比,RIPostC组的NDS评分升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和beclin-1表达下降(P0.05),神经细胞凋亡减少(P0.05),LC3颗粒形成减少,细胞内自噬小体减少,线粒体结构损伤减轻。结论:远程缺血后处理可改善心肺复苏后大鼠神经功能,这可能与抑制海马神经细胞过度自噬有关。     

鞣花酸通过降低自噬作用减轻缺氧缺血性脑损伤

目的:探究鞣花酸(EA)能否通过降低自噬减轻缺氧缺血性脑损伤。方法:将17只Sprague-Daw-ley(SD)大鼠的7日龄乳鼠随机分组为假手术组(n=5)、缺氧缺血性脑病(HIE)组(n=6)和HIE+鞣花酸预给药组(n=6)。将鞣花酸(10 mg/kg)混悬于玉米油(10 m L/kg)中,对预给药组的乳鼠进行灌胃。各组动物手术24 h后取大脑组织切片进行TTC染色和HE染色,以判断鞣花酸在体内的脑保护作用。利用Western blot技术检测损伤侧脑部皮质区的蛋白及PC12细胞中自噬相关指标(beclin-1、P62、LC3-II/-I和Atg5)的表达水平。利用氯化钴(800μmol/L)制作PC12细胞缺氧处理的模型,观察预给药组中鞣花酸(8μmol/L)对氯化钴处理后的细胞保护作用,利用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测氧化应激水平,单丹磺酰戊二胺(MDC)免疫荧光染色观察胞内的自噬情况,四甲基罗丹明乙酯(TMRE)荧光染色检测线粒体膜电位水平,以明确鞣花酸是否通过调节自噬机制达到减轻体外神经元缺氧损伤的目的。结果:7日龄乳鼠造模后HIE组脑部梗死面积较大,HE染色显示脑组织水肿及结构完整性破坏,神经元少见;鞣花酸预给药组脑部梗死面积减少,HE染色显示脑组织仅部分损伤,神经元分布较HIE组数量多且结构完整。提取HIE组乳鼠的脑组织皮质蛋白,发现Atg5、beclin-1和LC3-II/-I的蛋白表达水平显著高于正常组(P 0.01),而P62蛋白的表达水平降低(P 0.01);鞣花酸预处理后Atg5、beclin-1和LC3-II/-I蛋白表达水平均低于HIE组(P 0.01),而P62蛋白的表达呈现较高趋势(P 0.01)。氯化钴处理组的PC12细胞具有高氧化应激水平(P 0.01),鞣花酸有降低氧化应激的趋势(P 0.05)。另外,鞣花酸预处理组线粒体膜电位水平升高(P 0.05)。MDC荧光染色发现,相较于氯化钴处理组的MDC高荧光定量与自噬小体数量增多的趋势(P 0.01),鞣花酸确能减少PC12细胞内自噬小体的数量,减轻自噬强度,从而发挥细胞保护作用(P 0.01)。PC12细胞经氯化钴处理后,与正常组相比,其Atg5、beclin-1和LC3-II/-I的蛋白呈现高水平表达(P 0.01),而P62蛋白表达水平降低(P 0.01);鞣花酸预处理后的PC12细胞中,Atg5、beclin-1和LC3-II/-I蛋白表达水平均降低(P 0.01),而P62蛋白表达水平呈现显著升高(P 0.01)。结论:体内外初步实验表明,对缺氧缺血性脑损伤预给予鞣花酸可通过降低体内外神经元内过度自噬起到神经保护作用。     

缺氧和脂多糖促进小鼠树突状细胞自噬并增强表面共刺激分子CD40、 CD80的表达

目的研究缺氧和脂多糖(LPS)诱导的树突状细胞(DC)自噬发生及表面共刺激分子CD40、 CD80的表达情况。方法采用小鼠DC,分为正常组、缺氧组、脂多糖(LPS)处理组、缺氧联合LPS处理组。各组分别处理24 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖水平变化;Western blot法检测自噬微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、LC3Ⅱ和beclin1的蛋白水平;透射电镜观察LPS处理后DC自噬小体的形成;流式细胞术检测DC表面CD40、 CD80的变化;免疫荧光细胞化学染色检测小鼠DC表面CD40、 CD80的表达。结果缺氧及LPS均能诱导小鼠DC发生自噬,增加其表面CD40、 CD80的表达。缺氧联合LPS处理后,小鼠DC自噬发生明显加强,自噬小体增多,其表面共刺激分子CD40、 CD80的表达增多。结论缺氧及LPS均能引起小鼠DC发生自噬并增加CD40、 CD80的表达。     

粉防己碱通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导卵巢癌细胞自噬

目的:研究粉防己碱(tetrandrine)对人卵巢浆液性囊腺癌SKOV3细胞活力及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测不同作用浓度的粉防己碱对SKOV3细胞活力的影响。采用吖啶橙染色法观察粉防己碱对SKOV3细胞中自噬溶酶体形成的影响。Western blot法检测粉防己碱处理前后SKOV3细胞自噬相关蛋白LC3的表达情况及相关信号通路的变化。最后,采用MTT法检测粉防己碱单用及联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对SKOV3细胞活力的影响。结果:粉防己碱可显著抑制SKOV3细胞的活力(P0.01),作用24 h其半数抑制浓度为15.21μmol/L。吖啶橙染色结果显示,粉防己碱明显促进SKOV3细胞中自噬溶酶体的生成。Western blot实验结果显示,粉防己碱干预后,SKOV3细胞中LC3-Ⅱ和P62蛋白的表达水平明显上调;同时,粉防己碱能明显降低PI3K/AKT/mTOR信号通路中p-mTOR和p-AKT蛋白的水平(P0.01)。自噬抑制剂3-MA增强了粉防己碱对SKOV3细胞活力的抑制作用。结论:粉防己碱可通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬,同时,自噬活化参与了粉防己碱对SKOV3细胞生长的抑制作用。     

低氧诱导因子对缺氧缺糖诱导的心肌细胞损伤模型中自噬的调控作用

目的　探讨在缺血缺氧模型中低氧诱导因子（HIF-1α）对自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的影响及其对自噬的调节作用。 方法　建立缺血缺氧细胞模型,利用western blot 检测HIF-1α siRNA的干预效果;利用CCK-8实验检测HIF-1α siRNA对心肌细胞活性的影响;利用RT-qPCR与western blot检测HIF-1α siRNA对自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的影响。 结果　Western blot结果显示HIF-1α siRNA可有效敲低模型心肌细胞中HIF-1α的表达;CCK-8实验结果显示,HIF-1α siRNA可降低缺血缺氧细胞模型中心肌细胞的活性;RT-qPCR与western blot结果均提示HIF-1α siRNA可降低模型细胞中自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的表达,降低LC3II/LC3I的比率。 结论　HIF-1α siRNA敲低缺血缺氧细胞模型中的HIF-1α表达后,导致心肌细胞的活性进一步降低,细胞中Beclin1表达降低,LC3II/LC3I的比率降低,HIF-1α正调控缺血缺氧诱导的自噬而发挥心肌保护作用。     

雷帕霉素减轻氧糖剥夺对SH-SY5Y细胞的损伤

目的:观察雷帕霉素(Rapa)对氧糖剥夺(OGD)的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法:SH-SY5Y细胞随机分为4组:正常对照组(常规培养,不进行OGD处理)、Rapa组、OGD组(无糖培养基、1%O_2的三气培养箱内孵育细胞12 h)和Rapa+OGD组。进行形态学观察;MTT法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)漏出率判断细胞损伤的程度;caspase-3活性检测试剂盒检测酶活性;原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡水平;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ及自噬调控蛋白beclin-1的表达。结果:与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞存活率明显升高(P0.05),LDH漏出率及caspase-3酶活性明显降低(P0.05)。TUNEL染色观察结果显示,与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞凋亡明显减少(P0.05);Western blot实验结果显示Rapa+OGD组的Bcl-2、beclin-1及LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平显著高于OGD组(P0.05),而Bax蛋白水平明显低于OGD组(P0.05)。结论:Rapa对OGD损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用,其机制可能与上调beclin-1蛋白、激活自噬有关。