微小RNA-23b-3p通过靶向TGFBR3促进人心房肌成纤维细胞纤维化相关基因表达

目的:探究微小RNA-23b-3p(mi R-23b-3p)对人心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用及其可能作用靶基因。方法:分离并体外培养房颤患者心耳中原代心房肌成纤维细胞,并用细胞免疫荧光染色实验鉴定;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-23b-3p与潜在靶基因转化生长因子β受体3(TGFBR3) 3'端非翻译区(3'-UTR)的结合作用; CCK-8、Ed U染色及Transwell实验检测细胞活力、增殖及迁移能力,RT-qPCR和Western blot法检测TGFBR3及纤维化相关基因的m RNA和蛋白表达。结果:在人心房肌成纤维细胞中过表达mi R-23b-3p不影响细胞的活力、增殖及迁移能力,但可显著增强细胞中纤维化相关基因COL1A1、COL3A1和ACTA2的表达(P 0. 05或P 0. 01)。双萤光素酶报告基因实验显示mi R-23b-3p与TGFBR3 3'-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot结果证实mi R-23b-3p可在转录水平抑制TGFBR3表达。过表达mi R-23b-3p和沉默TGFBR3均能显著促进人心房肌成纤维细胞中Smad3激活和纤维化相关基因表达(P 0. 05或P 0. 01)。结论:TGFBR3是mi R-23b-3p的作用靶基因,并介导mi R-23b-3p促进心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。     

miR-556-3p通过靶基因SASH1调控子宫内膜癌细胞的活力、迁移和侵袭

目的:研究微小RNA-556-3p(miR-556-3p)是否通过靶向SASH1基因调控子宫内膜癌细胞的活力、迁移和侵袭。方法:采用RT-qPCR和Western blot检测miR-556-3p和SASH1的mRNA和蛋白在子宫内膜癌组织中的表达。向子宫内膜癌Ishikawa细胞转染anti-miR-556-3p或pcDNA-SASH1,采用MTT法检测细胞活力,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达。StarBase预测和双萤光素酶报告实验分析miR-556-3p和SASH1的靶向关系。将anti-miR-556-3p和si-SASH1共转染Ishikawa细胞,采用上述方法检测其对细胞活力、迁移和侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-556-3p的表达量显著增加,SASH1的mRNA和蛋白表达量显著减少(P<0.05)。抑制miR-556-3p表达或使SASH1过表达显著降低Ishikawa细胞活力、迁移细胞数、侵...     

mi R-34a-3p抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭转移并下调Smad2/TGF-β信号通路

目的 探讨miR-34a-3p对胰腺癌细胞的作用及可能机制。方法 RT-qPCR方法检测miR-34a-3p在人胰腺导管腺癌细胞SW1990和胰腺导管上皮细胞HPDE中的表达情况;转染miR-34a-3p mimics后,采用CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞侵袭情况;Western blot检测细胞上皮-间质转化情况;进一步用生物信息学预测miR-34a-3p的下游靶基因,并用荧光素酶报告基因实验验证;然后采用Western blot检测靶蛋白以及靶蛋白下游调控蛋白的表达。结果 RT-qPCR检测发现miR-34a-3p在SW1990中的表达低于HPDE细胞。miR-34a-3p在SW1990细胞中过表达后,SW1990细胞增殖受到抑制、侵袭能力降低、E-cadherin表达上调、N-cadherin表达下调。生物信息学网站预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot证实Smad2是miR-34a-3p的靶蛋白,同时发现其下游蛋白TGF-β表达也显著下调。结论 miR-34-3p在胰腺癌细胞中的表达下调,miR-34-3p能够抑制胰腺癌细胞增殖、侵...     

miR-194-3p调节TGF-β诱导的上皮-间充质转化抑制乳腺癌细胞侵袭

目的研究miRNA-194-3p在TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化(EMT)发生中的作用,探讨miR-194-3p抑制乳腺癌侵袭的机制。方法体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,采用TGF-β1加入人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞培养液中制备细胞模型,RT-PCR检测miR-194-3p在TGF-β1诱导前后的表达变化。采用miRNA拟似物和无关序列分别转染MDA-MB231的方法获得细胞模型。Western blot检测EMT标记分子(E-cadherin、Vimentin)的表达。Trasnwell实验检测miRNA-194-3p拟似物、TGFβ1和共同作用对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。结果 TGF-β1诱导乳腺癌细胞发生EMT,TGF-β组中E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调;过表达miRNA-194-3p抑制了TGF-β对E-cadherin、Vimentin的作用。在侵袭迁移实验中,TGF-β促进细胞的侵袭,过表达miRNA-194-3p可抑制TGF-β的促进作用。结论 MiR-194-3p调节TGF-β诱导的上皮-间充质转化抑制乳腺癌侵袭。     

miR-1247-5p对Smad2基因的靶向调控作用

目的利用miR-1247-5p过表达模拟物mimics,研究miR-1247-5p对TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的靶向调控作用。方法合成模拟miR-1247-5p过表达的模拟物mimics,及抑制miR-1247-5p表达的抑制物inhibitors;同时构建与miR-1247-5p互补靶基因Smad2的3'非翻译区,将其克隆到线性化的Report荧光报告载体中。将测序鉴定阳性的report-Smad2 3'-UTR重组质粒,与miR-1247-5p的mimics/inhibitors共转染至HEK-293T细胞,通过relative luciferase activity实验验证靶向关系,并通过Western blot实验进一步检测Smad2蛋白表达水平。结果成功构建report-Smad2 3'-UTR重组质粒,Western blot实验表明转染miR-1247-5p mimics组中Smad2蛋白表达下调(P0.05);而转染miR-1247-5p inhibitors组中,Smad2蛋白表达上调(P0.05)。结论证实miR-1247-5p直接靶向TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的表达,在蛋白水平对其进行调控,为进一步研究miRNA在细胞通路中的调控作用提供了依据。     

下调miR-153-3p可促进Nrf2表达从而减轻H_2O_2诱导的H9C2细胞损伤

目的:研究敲减微小RNA-153-3p(miR-153-3p)的表达在H_2O_2引起的H9C2细胞氧化损伤中的作用以及具体机制。方法:建立H_2O_2诱导的H9C2细胞氧化应激损伤模型,分别通过MTT实验和RT-qPCR检测细胞活力和miR-153-3p表达的变化。通过RNA干扰技术敲减miR-153-3p的表达,观察其对氧化应激状态下H9C2细胞氧化损伤的影响,并通过Western blot和双萤光素酶报告基因实验确定miR-153-3p的作用靶点。结果:H9C2细胞活力随H_2O_2浓度升高而逐渐降低(P0. 05),miR-153-3p的表达则逐渐增加(P0. 05)。敲减miR-153-3p的表达可提高H9C2细胞在氧化应激状态下的细胞活力,减少细胞凋亡,减少丙二醛(MDA)含量并升高超氧化物岐化酶(SOD)活性(P0. 01)。Western blot实验可见核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达和抗氧化反应元件(ARE)活性随H_2O_2浓度升高而升高(P0. 05);TargetScan分析和双萤光素酶报告基因实验结果显示Nrf2是miR-153-3p的潜在靶基因之一。Western blot实验进一步显示miR-153-3p过表达可抑制Nrf2的表达(P0. 01),抑制miR-153-3p则可促进Nrf2表达(P0. 01)。同时敲减H9C2细胞的Nrf2和miR-153-3p表达可显著降低H9C2细胞在H_2O_2环境下的细胞活力,促进细胞凋亡,增加MDA含量并降低SOD活性(P0. 01)。结论:抑制miR-153-3p表达可上调Nrf2/ARE通路从而减轻H_2O_2引起的H9C2细胞损伤。     

MicroRNA-483-3p对人神经胶质瘤细胞的作用

目的:探讨microRNA(miRNA)-483-3p对人神经胶质瘤细胞A172生长和迁移能力的影响及潜在作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)检测人肾胚细胞系HEK-293和不同神经胶质瘤细胞株(A172、U251和SHG44)中miRNA-483-3p的表达水平。转染miRNA-483-3p抑制序列(miRNA-483-3p inhibitor)下调A172细胞中miRNA-483-3p的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力和周期分布;Transwell实验检测细胞的迁移;Western blot检测周期相关调控因子及上皮-间充质转化相关蛋白的水平。双萤光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因。结果:miRNA-483-3p在各型神经胶质瘤细胞中高表达。沉默miRNA-483-3p后,A172细胞的活力下降并呈现出明显的周期阻滞,且细胞迁移率也显著降低。同时细胞中cyclin D1、周期蛋白依赖性激酶4、磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白、N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平均显著降低,E-cadherin和β-catenin的蛋白表达水平显著升高。双萤光素酶报告基因分析显示Smad4是miRNA-483-3p的可能作用靶点,A172细胞共转染miRNA-483-3p inhibitor和Smad4 siRNA可部分逆转miRNA-483-3p介导的细胞增殖及迁移抑制。结论:沉默miRNA-483-3p可通过靶向Smad4抑制神经胶质瘤细胞株A172的生长及迁移。     

miR-433在NIH-3T3细胞纤维化和矽尘诱导的小鼠肺纤维化中的作用

目的:本研究旨在探究微小RNA-433(miR-433)在纤维化中的作用及机制。方法:采用TargetScan预测miR-433的潜在靶基因。检测转化生长因子β1(TGF-β1)处理小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3细胞)24h后miR-433表达的变化。检测miR-433 mimic对TGF-β1处理的NIH-3T3细胞中p-SMAD2、纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结缔组织生长因子(CTGF)表达水平的影响。采用CCK-8法和流式细胞术检测转染miR-433 mimic对TGF-β1诱导的NIH-3T3细胞生长和S期阻滞的影响。构建矽尘诱导的小鼠肺纤维化模型并使用agomiR-433进行干预,HE染色和Masson染色观察miR-433对小鼠肺纤维化的影响,采用免疫组化检测小鼠肺组织中α-SMA的表达。结果:miR-433能特异性结合SMAD2的3’-UTR,并抑制其蛋白和mRNA的表达。TGF-β1能下调NIH-3T3细胞中miR-433的表达水平,上调p-SMAD2蛋白的水平,同时也增强FN、α-SMA和CTGF蛋白和mRNA的表达,并增强细胞活力,诱...     

微小RNA-22-3p负性调控人腹膜间皮细胞NLRP3的表达及功能

目的:探讨微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对人腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达及功能的影响。方法:将NLRP3基因的3′-非翻译区(3′-UTR)序列及其突变体克隆到双萤光素酶报告基因载体psiCHECK2中,构建野生型及突变型重组双萤光素酶报告质粒,与miR-22-3p mimic和miR-22-3p in?hibitor共转染LPS预处理的人腹膜间皮细胞株HMrSV5,检测萤光素酶活性;HMrSV5细胞随机分为以下6组:miR-22-3p NC+LPS组、miR-22-3p NC+LPS+ATP组、miR-22-3p mimic+LPS组、miR-22-3p mimic+LPS+ATP组、miR-22-3p inhibitor+LPS组和miR-22-3p inhibitor+LPS+ATP组。RT-qPCR和Western blot检测NLRP3 mRNA和蛋白的表达,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)的表达和caspase-1的活性,Western blot检测caspase-1 p20蛋白的表达。结果:NLRP3-3′-UT...     

缺氧条件下沉默DEC1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞活力、侵袭及迁移的影响

目的:探讨在缺氧条件下沉默人胚胎软骨发育基因1 (differentiated embryonic chondrocyte gene 1,DEC1)的表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及作用机制。方法:分别检测不同培养条件(常氧和缺氧)下MDA-MB-231细胞中DEC1基因的表达情况;设计、合成靶向抑制DEC1基因的小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA),通过脂质体转染入缺氧条件下的MDA-MB-231细胞中,采用RT-qPCR和Western blot法验证细胞转染效率,CCK-8法、Transwell和划痕实验分别检测沉默DEC1基因表达对MDA-MB-231细胞活力、侵袭及迁移能力的影响;此外,采用Western blot法分析转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad3信号通路关键分子的表达。结果:在缺氧条件下人乳腺癌MDA-MB-231细胞中DEC1表达显著增高(P0.05),沉默DEC1表达后,MDA-MB-231细胞的活力、侵袭和迁移能力显著下降(P0.01);Western blot结果显示,缺氧条件下,沉默DEC1后磷酸化Smad3 (phosphorylated Smad3, p-Smad3)蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:在缺氧条件下,沉默DEC1基因表达可能通过阻断TGF-β/Smad3信号通路进而抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的活力、侵袭及迁移能力。     

miR-203a-3p抑制人肝癌细胞系增殖

目的 探索miR-203a-3p对人肝癌细胞系增殖和凋亡的分子调节机制。方法 RT-qPCR检测临床肝癌(HCC)组织及肝癌细胞系中miR-203a-3p的表达;建立miR-203a-3p过表达的HepG2细胞模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;平板集落形成实验检测集落形成;细胞划痕实验检测细胞迁移;表达谱芯片检测mRNA水平;ELISA检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;Western blot检测TGF-β1表达。结果 miR-203a-3p在HCC组织中低表达(P<0.05),与肿瘤分期呈负相关(P<0.05);HepG2细胞中过表达miR-203a-3p可显著降低细胞增殖速率(P<0.05)、迁移能力(P<0.05)、克隆形成能力(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);TGF-β1表达降低(P<0.05),而TGFβR1表达升高(P<0.05);细胞培养上清中TGF-β1含量降低(P<0.05);细胞内TGF-β1的蛋白降低(P<0.05);加入TGF-β1重组蛋白可减轻miR-2...     

MG132抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化

目的探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化的影响及机制。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),随机分为对照组、TGF-β1组(10μg/L)和MG132(0.5μmol/L)处理组。Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达;RT-PCR和Western blot法分别检测细胞Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-βI型受体(TβRI)、Smad2和Smad3 mRNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,TGF-β1促进了α-SMA和COL1A1蛋白表达(P0.05),MG132抑制了TGF-β1的上述作用(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN mRNA表达较对照组增加(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN蛋白表达较对照组减少(P0.05),而MG132组Smad7和SnoN蛋白水平较TGF-β1组增加(P0.05)。结论 MG132可能通过阻止Smad7和SnoN蛋白泛素化降解,抑制TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化。     

miR-23b-3p靶向XIAP调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)靶向X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:应用RT-qPCR检测体外培养的RA滑膜成纤维细胞中miR-23b-3p和XIAP的表达水平。通过TargetScan预测分析miR-23b-3p与XIAP的靶向关系,并使用双萤光素酶报告基因实验进行验证。采用脂质体法将miR-23b-3p模拟物和抑制物转入细胞中,RT-qPCR法检测miR-23b-3p和XIAP表达水平的变化;CCK-8法和细胞流式术分别检测miR-23b-3p对细胞活力和细胞凋亡的影响;Western blot检测Ki67和Bcl-2蛋白表达量的变化。结果:类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中miR-23b-3p表达显著下调,XIAP表达显著上调(P0.05)。转染miR-23b-3p模拟物促使XIAP表达显著下调(P0.05),并且显著抑制细胞活力,促进细胞凋亡(P0.05),同时Ki67和Bcl-2显著下调(P0.05);转染miR-23b-3p抑制物的效果与之相反。结论:miR-23b-3p通过靶向XIAP抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖,促进其凋亡。     

miR-485-5p靶向作用于SOX5抑制肝癌细胞Hep3B的活力及侵袭和迁移能力

目的:研究微小RNA-485-5p(miR-485-5p)对肝癌细胞的活力及迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法:以正常肝细胞THLE-3为对照,采用RT-qPCR检测肝癌细胞中性别决定区Y框蛋白5(SOX5)mRNA和miR-485-5p的表达,Western blot检测SOX5、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达水平,MTT法检测Hep3B细胞的活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,双萤光素酶报告基因系统验证细胞中miR-485-5p与SOX5的调控关系。结果:与对照组相比,在肝癌细胞Hep3B、Huh7和HCCLM3中miR-485-5p的表达水平显著降低(P<0.05),SOX5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);过表达miR-485-5p可抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力(P<0.05);miR-485-5p靶向调控SOX5的表达,敲减SOX5的表达也可抑制Hep3B细胞的活力及迁移和侵袭能力;过表达SOX5可部分逆转过表达miR-48...     

法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响

目的探究法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响。方法无菌条件下获得家兔尿道瘢痕组织,采用酶解法提取原代尿道成纤维细胞,用10 ng/m L TGF-β或者联合不同浓度(0,25,50μM)法舒地尔处理后,通过Western blot检测α-SMA、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和自噬以及迁移相关蛋白的表达。采用Transwell实验和MTT实验分别检测成纤维细胞迁移以及增殖能力。结果 Western blot结果显示,TGF-β明显上调了α-SMA蛋白、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ,法舒地尔下调了胞外基质蛋白表达(P 0.05),并且呈浓度依赖性。Transwell实验和MTT实验显示,TGF-β增加了细胞迁移数量和细胞活性(P 0.05),而法舒地尔抑制了细胞迁移数量(P 0.05),下调了细胞活性(P 0.05)。Western blot结果还显示,TGF-β显著下调了p AKT、pm TOR和p62等蛋白表达(P 0.05),上调了ATG7、ATG5、LC3等自噬相关蛋白表达(P 0.05);而法舒地尔上调了p AKT、pm TOR和p62等蛋白表达(P 0.05),抑制了ATG7、ATG5、LC3等自噬相关蛋白表达(P 0.05)。结论法舒地尔可以通过激活细胞自噬从而抑制TGF-β诱导的成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成,其作用与促进AKT/m TOR信号通路相关。     

miR-7-5p和miR-152-3p联合调控Wnt/β-catenin通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响

目的探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)进程及紫杉醇耐药的分子机制。方法采用生物信息学软件预测miR-7-5p和miR-152-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测两者与TCF4的靶向关系;Western blot法检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键调控因子β-catenin及TCF4蛋白的表达;在转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics基础上给予Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl处理后,Western blot法检测MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达,Transwell小室实验检测MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力;MTT实验检测激活Wnt/β-catenin信号通路对MCF-7/TAX细胞紫杉醇耐药性的影响。结果 TCF4 3′UTR区域存在能够与miR-7-5p及miR-152-3p互补的结合位点;转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后可使TCF4野生型(TCF4-WT)报告基因载体的荧光素酶活性较NC组明显降低(P0.05)。Western blot结果显示,与NC组相比,转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后各组紫杉醇耐药MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平明显降低(P0.05),且两者共同转染后MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平较miR-7-5p组或miR-152-3p组进一步降低(P0.05)。Western blot结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和vimentin蛋白表达水平明显升高,而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P0.05)。Transwell小室结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力明显增强(P0.05)。MTT结果显示,不同浓度紫杉醇作用下,miR-7-5p+LiCl组细胞增殖活力较miR-7-5p组明显升高;同时miR-152-3p+LiCl组和miR-7-5p/152-3p+LiCl组细胞的增殖活力较NC组均明显升高(P0.05)。结论 TCF4是miR-7-5p和miR-152-3p的共同靶标。miR-7-5p和miR-152-3p可共同抑制MCF-7/TAX细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活化。     

miR-128-3p靶向TCF4抑制黑色素瘤A375细胞增殖、侵袭和上皮-间充质转化

目的:探究微小RNA-128-3p(miR-128-3p)对人黑色素瘤A375细胞增殖、侵袭和上皮-间充质转化的作用及其机制。方法:用miR-128 mimic和/或转录因子4(TCF4)表达质粒pcDNA-TCF4(pc-TCF4)转染A375细胞,RT-qPCR检测miR-128-3p的表达,Western blot法检测TCF4的表达,萤光素酶报告实验证明miR-128-3p和TCF4的靶向关系;Transwell检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测上皮标志蛋白E-cadherin和间充质标志蛋白vimentin的表达及TCF4下游靶分子cyclin D和c-Myc的蛋白表达水平。结果:过表达miR-128-3p能显著抑制TCF4的表达(P0.01),而转染pc-TCF4能明显减弱miR-128-3p对TCF4表达的抑制作用,miR-128-3p能显著减弱TCF4野生型质粒的萤光素酶活性(P0.01);miR-128-3p能显著抑制A375细胞增殖(P0.01),显著减少侵袭细胞数(P0.01);除此之外,miR-128-3p还能显著降低vimentin、cyclin D和c-Myc的表达水平(P0.01),显著升高E-cadherin(P0.01)的表达水平。结论:miR-128-3p能抑制黑色素瘤A375细胞的增殖、侵袭和上皮-间充质转化,作用机制与靶向TCF4及抑制其下游靶基因的表达有关。     

miR-129-5p靶向HMGB1对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制

为探讨miR-129-5p对卵巢癌(ovarian cancer,OC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制,qRT-PCR检测不同OC细胞株和正常人卵巢上皮细胞株中miR-129-5p的表达水平;在SKOV3细胞中分别转染miR-129-5p模拟物或无关序列,qRT-PCR检测转染后细胞中miR-129-5p的表达情况。生物信息学软件TargetScan预测miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein, HMGB1)基因靶向结合位点,qRT-PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验分析miR-129-5p对HMGB1的靶向调控作用。分别采用MTT和Transwell实验检测SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移能力。将miR-129-5p模拟物和HMGB1 siRNA或siRNA Control共转染至SKOV3细胞,MTT和Transwell实验检测其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果显示,SKOV3细胞中miR-129-5p的表达量显著低于正常人卵巢上皮细胞(P0.05)。在SKOV3细胞中转染miR-129-5p模拟物可显著提高miR-129-5p的表达量(P0.05)。miR-129-5p与HMGB1 3’非翻译区存在靶向结合位点,且过表达miR-129-5p可抑制HMGB1的表达,miR-129-5p模拟物转染后相对荧光素酶活性显著下降(P0.05)。过表达miR-129-5p后,SKOV3细胞增殖能力明显减弱,侵袭和迁移能力明显受到抑制(P0.05)。而转染HMGB1 siRNA后,miR-129-5p模拟物对SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用明显减弱(P0.05)。以上结果表明miR-129-5p通过靶向调控HMGB1的表达抑制SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-425-5p靶向TGF-β1/Smad2信号通路减少小鼠增生性瘢痕组织胶原纤维沉积

目的 探究miR-425-5p在增生性瘢痕(HS)形成中的作用及机制。方法 通过RT-qPCR和Western blot检测了16对HS组织和正常皮肤组织中miR-425-5p、转化生长因子-β1(TGF-β1)和SMAD家庭成员2(Smad2)的水平。将成纤维细胞分为9组：对照组(control组)、miR-425-5p-mimic组、NC-mimic组、miR-425-5p-inhibitor组、NC-inhibitor组、TGF-β1-pcDNA3.1组、NC-pcDNA3.1组、miR-425-5p-mimic+NC-pcDNA3.1组和miR-425-5p-mimic+TGF-β1-pcDNA3.1组，并采用Lipofectamine 2000对细胞进行转染处理。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-425-5p和TGF-β1的靶向关系。通过博莱霉素(BLM)诱导小鼠增生性瘢痕，然后将小鼠随机分为3组，对照组(NC-agomir)、模型组(NC-agomir+BLM)和转染miR-425-5p干预模型组(miR-425-5p-agomir+BLM),小鼠均治疗21 d。通过M...     

miR-24-3p靶向KLF6基因调控IL-6/STAT3信号通路影响食管癌细胞的活力和凋亡

目的:探讨微小RNA-24-3p(miR-24-3p)对食管癌细胞活力和凋亡的影响及机制。方法:以人正常食管上皮细胞HEEC为对照,采用RT-qPCR检测食管癌细胞TE11、Eca109和EC9706中miR-24-3p和KLF6 mRNA的表达,Western blot检测KLF6蛋白的表达。用anti-miR-24-3p和KLF6 siRNA转染EC9706细胞,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测检测细胞中与增殖、凋亡相关的蛋白以及IL-6/STAT3信号通路相关蛋白的表达,ELISA法检测IL-6的表达。双萤光素酶报告基因实验验证miR-24-3p与KLF6靶向调控的关系。结果:食管癌癌细胞TE11、Eca109和EC9706中miR-24-3p表达上调(P<0.05),KLF6的mRNA和蛋白表达下调(P<0.05)。敲减EC9706细胞miR-24-3p表达可抑制其细胞活力,诱导其凋亡,并抑制细胞CDK4、cyclin D1、CDC25A、p-STAT3、IL-6及Bcl-2的表达,促进caspase-3和Bax的表达。结论...