姜黄素对正常人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的研究姜黄素对体外培养的正常人表皮黑素细胞黑素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用MTT法测定姜黄素对人表皮黑素细胞的活力的影响,体外氧化DOPA反应方法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素生成量。结果姜黄素在浓度小于或等于10μmol/L时无明显细胞毒性。姜黄素在浓度大于或等于2.5μmol/L时呈剂量依赖性抑制酪氨酸酶活性,减少黑素生成,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论姜黄素抑制培养的人表皮黑素细胞的黑素生成,可能具有开发成为美白产品的前景。     

吡美莫司对人黑素细胞黑素合成的影响

目的:评价吡美莫司在体外对人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素生成的影响.方法:培养人原代表皮黑素细胞,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠法测定黑素含量.结果:随着剂量的增高,1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L吡美莫司对黑素细胞的酪氨酸酶活性(分别为112.87%,117.29%,120.49%和123.97%)和黑素生成(分别为118.92%,122.55%,128.25%和134.48%)的促进作用逐渐增强,10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L吡美莫司与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:吡美莫司对人表皮黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素生成有较强的促进作用.     

甲氧沙林对培养人表皮黑素细胞黑素合成的影响及信号转导的研究

目的：观察甲氧沙林(8-甲氧补骨脂素，8-MOP)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响，并初步探讨8-MOP诱导表皮黑素细胞分化的信号转导途径。方法：采用4种浓度(10～500μmol／L）的8-MOP作用于体外培养的人表皮黑素细胞，观察不同浓度、不同时间8-MOP对黑素细胞的形态、增殖、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响，并用放射免疫法测定8-MOP对细胞内环磷腺苷酸(cAMP)含量的影响。结果：100μmol／L 8-MOP作用黑素细胞120h能显著促进酪氨酸酶的活性，提高黑素细胞的黑素含量，8-MOP抑制黑素细胞增殖和提高细胞内cAMP的水平呈浓度依赖性。结论：8-MOP在体外能直接刺激表皮黑素细胞的黑素合成，上述变化可能通过cAMP依赖的蛋白激酶(PK)A信号通路发挥作用。     

丹皮酚在体外对人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

目的探讨丹皮酚对人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法培养人表皮黑素细胞及人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,475nm比色法测定黑素含量。结果50,100和200μmol/L丹皮酚对于黑素细胞及共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性抑制作用,100及200μmol/L丹皮酚与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论丹皮酚对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用。     

欧前胡素抑制人表皮黑素细胞黑素生成

目的：评价欧前胡素对培养人表皮黑素细胞黑素生成的作用。方法：体外分离、纯化培养人表皮黑素细胞。随机分为空白组、熊果苷组和欧前胡素组（12．5μM,25μM和50μM）,作用48h,观察黑素细胞形态．检测黑素细胞活力、酪氨酸酶活性和黑素含量,免疫荧光显微镜观察欧前胡素对黑素细胞酪氨酸酶的影响。结果：不同浓度（0、12．5μM、25μM和50μM）欧前胡素作用于黑素细胞48h后,细胞活力分别为100％、107．8％、87．5％和59．7％。低浓度欧前胡素不影响黑素细胞形态,高浓度（50μM）对黑素细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量有抑制作用,呈剂量依赖性。欧前胡素对酪氨酸酶蛋白在细胞内定位未见明显影响,但酪氨酸酶荧光强度降低。结论：欧前胡素抑制体外培养人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性而降低黑素生成。     

甲氧沙林对人毛囊黑素细胞增殖、活化和黑素合成作用的研究

目的 研究甲氧沙林对人毛囊黑素细胞活化、增殖和黑素合成的影响.方法 体外培养正常人毛囊黑素细胞,观察不同浓度甲氧沙林(10～500μmol/L)对毛囊黑素细胞形态、增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响.结果 50μmol/L甲氧沙林处理细胞7d后,毛囊黑素细胞树突明显增多延长,胞浆内出现较多棕褐色颗粒,酪氨酸酶活性和黑素含量增加显着高于对照组(P<0.01).结论 甲氧沙林能诱导毛囊黑素细胞树突增多延长,酪氨酸酶活性和黑素含量增加.     

人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法 人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2 ～ 5代细胞进行实验。采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子（MITF）的表达及cAMP应答元件结合蛋白（CREB）的磷酸化。结果 体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,黑素含量呈浓度依赖性增加（与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4% ± 5.7%、155.7% ± 6.3%、217.2% ± 11.7%）,酪氨酸酶活性增加（相对酪氨酸酶活性分别为117.9% ± 5.7%、158.2% ± 9.6%、182.6% ± 10.0%）。100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶（225.4 %± 12.8%）、MITF（313.5% ± 16.7%）蛋白表达明显升高（与溶剂对照组相比,P值均 < 0.01）,CREB磷酸化明显增加（322.5% ± 21.1%）（与溶剂对照组相比,P < 0.01）。100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用黑素细胞8 h,MITF蛋白表达无明显变化;作用24 h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P < 0.01。10 μmol/L的蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rb1引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均 < 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加。 结论 人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制。     

芦荟素抑制人表皮黑素细胞酪氨酸酶的最佳浓度选择

目的:研究抑制人表皮黑素细胞酪氨酸酶的芦荟素最佳浓度。方法:选择不同浓度的中药单体芦荟素(分别为0.010、0.001、0.100、1.000和10.000mmol/L),作用于体外培养的人表皮黑素细胞,测定黑素细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量。结果:10.000mmol/L芦荟素组导致黑素细胞死亡;与正常对照组相比,芦荟素浓度大于0.100mmol/L的黑素细胞增殖率明显下降(P<0.05);所有实验组黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素含量都显著降低(P<0.001)。结论:低浓度的芦荟素(0.001～0.010mmol/L)在不影响黑素细胞增殖的情况下可以显著抑制酪氨酸酶活性和黑素的合成。     

芍药苷对黑素细胞生物活性的影响

目的:检测芍药苷对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法:建立正常人表皮黑素细胞培养体系,加入不同浓度(5~640μg/mL)芍药苷并作用一定时间后,采用MTT法、体外氧化DOPA反应法、NaOH法等分别测定黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量的变化。结果:40~160μg/mL芍药苷呈剂量依赖性抑制黑素细胞增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);5-20μg/mL芍药苷对酪氨酸酶活性呈剂量依赖性促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);10-20μg/mL芍药苷对黑素细胞黑素合成起促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷在较高浓度范围内(40~160μg/mL)对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖有剂量依赖性抑制作用;在较低浓度范围内(10-20μg/mL)对其黑素合成有促进作用。     

苯烯莫德对白癜风患者黑素细胞系PIG3V细胞增殖、迁移及黑素合成的影响

目的探讨苯烯莫德是否对白癜风患者黑素细胞系PIG3V细胞的增殖、迁移以及黑素的合成产生直接影响。方法体外培养PIG3V细胞,加入不同浓度苯烯莫德,CCK-8法测定细胞活力,Transwell小室法检测细胞迁移,氢氧化钠法测定黑素含量,L-DOPA氧化法测定酪氨酸酶活性。结果与对照组相比,10-4~10-2μmol/L的苯烯莫德处理后,PIG3V细胞活力明显上升(P0.01),10-1~10μmol/L苯烯莫德处理后细胞活力无明显变化,苯烯莫德浓度大于25μmol/L时细胞活力开始出现下降。与对照组相比,0.1,1,10μmol/L苯烯莫德处理PIG3V细胞后,细胞迁移数量均增加(P均0.05)。10μmol/L的苯烯莫德处理PIG3V细胞后,黑素含量升高(P0.01)。0.1,1,10μmol/L苯烯莫德处理PIG3V细胞后,酪氨酸酶活性均增加(P0.01)。结论一定浓度的苯烯莫德对PIG3V细胞的增殖、迁移及黑素合成均有促进作用。     

17-β雌二醇对人表皮黑素细胞非经典Wnt通路作用的初步探讨

目的探讨非经典的Wnt通路对雌激素刺激后黑素生成相关基因的作用。方法原代培养人表皮黑素细胞,用含不同浓度17-β雌二醇的培养基培养黑素细胞,采用CCK-8法测定黑素细胞增殖率、多巴比色法测定酪氨酸酶活性、NaOH溶解法测定黑素含量。根据结果选择合适的雌激素浓度作用于黑素细胞,实时荧光定量PCR检测作用后非经典通路相关因子mRNA的表达,蛋白印迹法检测作用前后非经典通路相关因子蛋白的表达。使用单因素的方差分析法分析各组之间的差异。结果雌激素浓度为10~(-13)~10~(-5)mol/L时黑素细胞增殖率较对照上升(P0.01)。雌激素刺激后酪氨酸酶活性和黑素含量均较对照组升高(P0.01)。10~(-9)mol/L雌激素作用后,WIF-1基因mRNA表达升高(P0.01),JNK、MITF基因mRNA表达均降低(P0.01),WNT5A,TYR基因mRNA的表达与对照组相比无统计学意义(P0.05)。10-9mol/L雌激素作用后,WNT5A,WIF-1,TYR基因蛋白表达升高,MITF,JNK基因蛋白表达量降低。结论非经典通路相关基因参与了雌激素对黑素细胞黑素生成的调节作用。     

阿魏酸对黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨阿魏酸对体外培养的正常人表皮黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响.方法 以不同浓度的阿魏酸干预体外培养的正常人表皮黑素细胞,用MTS法分别检测培养24、48、72 h后黑素细胞的增殖活性.用NaOH裂解法检测培养72 h后黑素细胞的黑素合成.用多巴氧化反应法测定培养72 h后黑素细胞酪氨酸酶活性.用Western印迹法测定培养72 h黑素细胞c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平.结果 与对照组相比,0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸在作用24、48、72 h后,抑制黑素细胞增殖作用的差异有统计学意义（均P＜ 0.05）,其中1 mg/ml阿魏酸作用72 h抑制黑素细胞活性最高.0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸均能显著影响黑素合成和酪氨酸酶活性,并可降低黑素细胞中c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平,与对照组相比,差异有统计学意义（均P＜ 0.05）.结论 阿魏酸可抑制培养的人表皮黑素细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶活性,并可下调黑素细胞c-kit蛋白及ERK蛋白的表达.     

卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响及其作用的可能机制.方法 用噻唑蓝比色法(MTT法)、酶学方法及NaOH法,观察卡泊三醇对黑素细胞增殖及色素合成的作用;RT-PCR和蛋白印迹分别检测卡泊三醇对黑素细胞酪氨酸酶基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 10~(-9)～10~(-5) mol/L浓度范围的卡泊三醇对体外培养的黑素细胞增殖的影响与空白对照组比较差异无统计意义(P＞0.05).同样浓度范围下,10~(-9)、10~(-8)mol/L浓度的卡泊三醇能明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性和促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%、123%(P＜0.05),黑素含量分别增加40.63%、18.75%(P＜0.05).其中10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇增强黑素细胞的酪氨酸酶活性及促进黑素细胞的黑素含量最明显.与高浓度组、空白对照组比较,10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇使酪氨酸酶蛋白表达增高也最明显.较空白对照组增高270.4%(P＜0.05).结论 卡泊三醇对黑素细胞增殖无影响,可增加黑素细胞酪氨酸酶蛋白表达水平,提高酪氨酸酶活性,从而促进黑素细胞的黑素合成.     

山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞的作用

目的比较山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞增殖、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响,为探索色素沉着性皮肤病的发病机制以及筛选新的治疗药物提供理论依据。方法以不同浓度(1～100μmol/L)山柰素与熊果苷干预体外培养的人正常黑素细胞,比较两者对黑素细胞的黑素含量、细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响。结果对于黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的抑制作用,山柰素在各个浓度均优于熊果苷,差异有统计学意义(P<0.05),山柰素对细胞增殖抑制率无明显影响,而熊果苷在各浓度对细胞增殖抑制作用显著,且随其浓度增加,抑制率逐渐增强。结论山柰素对黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的抑制作用强于熊果苷,并对黑素细胞的增殖及形态无明显的负面影响,是一种有良好应用前景的酪氨酸酶抑制剂。     

欧前胡素、异欧前胡素对人表皮黑素细胞生物活性及迁移的影响

目的探讨欧前胡素、异欧前胡素对黑素细胞生物活性及迁移的影响。方法体外培养人表皮黑素细胞。检测不同浓度的欧前胡素、异欧前胡素对黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性、黑素合成的影响以及对黑素细胞迁移的影响。结果欧前胡素和异欧前胡素均能促进黑素细胞的增殖和上调酪氨酸酶活性。欧前胡素未显示出对黑素合成的促进作用,而异欧前胡素在20μg/m L浓度时显著促进黑素合成。欧前胡素未发现促进黑素细胞迁移的作用,而异欧前胡素组在20μg/m L浓度和50μg/m L浓度时显著促进黑素细胞的迁移。结论欧前胡素能促进黑素细胞的增殖,上调酪氨酸酶活性。异欧前胡素在正向调节黑素细胞生物活性三方面均有显著作用,并且能显著促进黑素细胞迁移。     

过氧化氢对黑素细胞生物学作用的研究

目的:研究不同浓度的过氧化氢(H2O2)对体外培养的正常人表皮黑素细胞的生物学作用.方法:分别以0.05、0.1、0.5、1 mmo1/L的H2O2作用于体外培养的黑素细胞24 h,采用多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素合成;比色法测定丙二醛(MDA)含量.结果:正常人表皮黑素细胞经H202处理后,酪氨酸酶活性降低,黑素合成量减少,丙二醛含量增多,其中以0.5、1 mmol/L的H2O2作用明显,与对照组相比有统计学意义(P＜0.05).结论:H2O2在-定浓度时可抑制正常人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性,减少黑素合成,并可致细胞过氧化损伤.提示H2O2在白癜风发病中可能起到一定作用.     

色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞的影响

目的 观察几种色素调节剂对体外培养的人表皮黑素细胞形态及功能的影响.方法 体外培养正常表皮黑素细胞,分别加入合适浓度的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、氢醌(HQ)、烟酰胺(NAA)、α-黑素细胞刺激素(α-MSH)和维生素C磷酸酯镁(AP-Mg)干预细胞72h,测定酪氨酸酶活性和黑素生成量.用黑素体相关蛋白单克隆抗体(NKI-beteb)染色鉴定黑素细胞,观察并摄片.结果 3mmol/L EGCG,0.5mmol/L HQ,6mmol/L AP-Mg与黑素细胞共同孵育72h后,其细胞酪氨酸酶活性及黑素生成受到抑制,但只有EGCG组细胞形态发生变化;50nmol/L α-MSH干预后,细胞酪氨酸酶活性及黑素生成显著增加,形态改变较显著.1mg/mL NAA组细胞酪氨酸酶活性无改变,而黑素生成减少,细胞异形化.结论 EGCG,HQ,NAA,AP-Mg和α-MSH对黑素细胞都有显著的影响,虽然作用于黑素细胞的机制有所不同,但也有一些相似的地方,其具体机理有待于进一步研究.     

α-硫辛酸对体外培养的黑素细胞影响的实验研究

目的　建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系 ,研究α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞的影响。方法　采用MTT法测定α 硫辛酸对黑素细胞活力的影响 ,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性 ,NaOH裂解法测定黑素合成 ,并与茶多酚的结果进行比较。结果　α 硫辛酸对黑素细胞活力有抑制作用 ,能使细胞增殖力降低 ,酪氨酸酶活性减弱 ,黑素合成减少。结论　α 硫辛酸对体外培养的黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用 ,这为临床应用α 硫辛酸治疗色素性疾病提供了实验依据。     

他卡西醇对人表皮黑素细胞增殖、黏附、迁移及c-kit表达的影响

【摘要】 目的 探讨他卡西醇对体外培养的人表皮黑素细胞增殖、黏附、迁移及c-kit mRNA相对表达的影响。 方法 用不同浓度的他卡西醇干预体外培养的人表皮黑素细胞,采用四唑氮氢氧化物（XTT）法分别检测培养24、48、72 h后黑素细胞的增殖活性;用纤维连接蛋白（FN）包被细胞培养板检测培养72 h后黑素细胞的黏附率;用Transwell微孔膜法检测培养24 h后黑素细胞在FN上的迁移情况;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测培养72 h后黑素细胞c-kit mRNA相对表达量。 采用重复测量方差分析及完全随机设计方差分析进行统计学检验。 结果 重复测量方差分析结果显示,10-10、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L他卡西醇促进黑素细胞增殖作用的差异有统计学意义（F = 9.47,P < 0.01）,上述浓度他卡西醇在培养24、48、72 h后促进黑素细胞增殖作用的差异有统计学意义（F = 14.44,P < 0.01）,药物浓度和培养时间之间存在交互作用（F = 2.47,P < 0.01）,其中10-8 mol/L他卡西醇与黑素细胞共同培养72 h黑素细胞增殖活性最高。10-8 ～ 10-7 mol/L他卡西醇可显著促进黑素细胞在FN上的黏附（均P < 0.01）;10-9 ～ 10-8 mol/L他卡西醇在培养24 h能显著促进黑素细胞迁移（均P < 0.01）;RT-PCR显示10-9 ～ 10-7 mol/L他卡西醇在培养72 h均能显著增加黑素细胞c-kit mRNA的相对表达量（均P < 0.01）。 结论 他卡西醇可促进培养的人表皮黑素细胞增殖及在FN上的黏附、迁移作用,并可上调黑素细胞c-kit mRNA的表达。 【关键词】 他卡西醇; 黑素细胞; 细胞增殖; 细胞运动; 原癌基因蛋白质c-kit     

白介素-10,白介素-17对人表皮黑素细胞生物活性的影响

目的观察不同浓度白介素-10,白介素-17对黑素细胞生物活性的影响。方法建立模拟正常生理状态的黑素细胞体外培养体系,用不同浓度白介素-10,白介素-17作用于黑素细胞后,采用CCK-8法测定白介素-10,白介素-17对黑素细胞增殖活性的影响、L-DOPA法测定对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响、流式细胞仪检测黑素细胞凋亡率。结果 1 50μg/ml IL-10组对黑素细胞的增殖率随着培养时间的延长而升高,当培养48h和72h后与空白对照组相比有极显著的统计学差异(P0.01)。但随着IL-10浓度的升高,其增殖率随着培养时间的延长反而有下降趋势,200μg/ml IL-10组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有统计学差异(P0.05);2 IL-17随着培养时间的延长呈剂量依赖性抑制黑素细胞的增殖,50μg/ml IL-17组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有统计学差异(P0.05);100μg/ml IL-17组和200μg/ml IL-17组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有极显著的统计学差异(P0.01);3在培养48h后,50μg/ml IL-10组黑素细胞酪氨酸酶活性升高,较空白对照组有统计学差异(P0.05)。50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml IL-17组抑制黑素细胞酪氨酸酶的活性,与空白对照组相比有统计学差异(P0.05);4用浓度为100μg/ml的IL-10,IL-17培养黑素细胞,48小时后细胞凋亡率分别为5.2%、32.1%,空白对照组为5.1%。结论 1适当浓度的IL-10可促进黑素细胞的增殖,提高酪氨酸酶的活性;2 IL-17对黑素细胞有损伤作用,但其作用机制还需进一步的试验和探讨。