大蒜素通过抑制caspase-12减轻巨噬源性泡沫细胞凋亡

目的:研究大蒜素对巨噬源性泡沫细胞凋亡和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡通路关键分子半胱天冬酶-12(caspase-12)的影响,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予大蒜素(12.5、25和50 mg/L)和4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h后,加入氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL;100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)处理24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况;采用相应的试剂盒测定细胞内caspase-3和培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的活性;采用Western blot技术检测caspase-12的表达变化;油红O染色检测细胞内脂质蓄积;酶比色法测定细胞内总胆固醇含量。结果:与ERS抑制剂PBA相似,大蒜素可减轻oxLDL所致的巨噬细胞损伤,表现为细胞活力增加、LDH漏出减少、细胞凋亡率和caspase-3活性降低(P0.05);ERS诱导剂TM可导致巨噬细胞活力下降,LDH漏出增多及细胞凋亡率升高(P0.05),大蒜素可明显阻断TM的上述作用;大蒜素明显抑制ox-LDL所致的caspase-12活化(P0.05);与TM组相比,大蒜素也可显著抑制TM所诱导的caspase-12活化(P0.05)。另外,大蒜素还可显著抑制ox-LDL所诱导的巨噬细胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成(P0.05)。结论:大蒜素可减少ox-LDL所致的巨噬源性泡沫细胞凋亡,其机制可能与抑制caspase-12活化有关。     

蜂胶醇提物通过抑制caspase-12减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡

 目的: 研究蜂胶醇取物(ethanol extract of propolis,EEP)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡的抑制作用,并探讨可能的分子机制。 方法: 体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予EEP(7.5、15和30 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;5 mmol/L)或二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodo-nium, DPI;5 μmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况;试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平。采用免疫印迹技术检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键蛋白caspase-12的表达变化。结果: 与ERS抑制剂PBA相似,EEP呈剂量依赖性减轻ox-LDL所致的巨噬细胞损伤,表现为细胞活力增加(P<0.01),凋亡率降低(P<0.05),且可抑制ERS诱导剂TM所引起的巨噬细胞活力下降和凋亡(P<0.05);与氧化应激抑制剂DPI相似,EEP可抑制ox-LDL诱导的氧化应激反应,表现为ROS和MDA生成减少(P<0.01),SOD活性增加(P<0.05);EEP显著抑制ox-LDL和TM所诱导的caspase-12活化(P<0.05);与ox-LDL组比较,PBA和DPI预处理组caspase-12活性也受到明显抑制(P<0.01)。结论: EEP可减轻 ox-LDL 所诱导的RAW264.7巨噬细胞凋亡,其机制可能与抑制氧化应激和caspase-12活化有关。     

载脂蛋白A-I模拟肽D4F通过抑制caspase-12减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡

目的:探讨载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,Apo A-I)模拟肽D4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键分子caspase-12的影响,并阐明其可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予12.5、25和50 mg/L D4F、5 mmol/L ERS抑制剂4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA)或5μmol/L二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium,DPI)预处理1 h后,再加入100 mg/L ox-LDL或4 mg/L ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)继续培养24 h。MTT法检测细胞活力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;试剂盒测定细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶活性;Western blot法检测caspase-12的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,D4F可抑制ox-LDL或TM所致的巨噬细胞活力降低和凋亡,且呈浓度依赖性(P0.05)。与氧化应激抑制剂DPI相似,D4F显著抑制ox-LDL诱导的氧化应激反应,表现为ROS和MDA生成减少(P0.01)、SOD活性增加以及NADPH氧化酶活性降低(P0.05);与PBA和DPI相似,D4F可减轻ox-LDL诱导的巨噬细胞caspase-12活化,且呈浓度依赖性(P0.05);另外,D4F还可抑制TM诱导的caspase-12活化(P0.05)。结论:D4F能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,其机制至少部分是通过减轻氧化应激继而抑制caspase-12活化实现的。     

蜂胶醇提物通过抑制C/EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:研究蜂胶醇提物(ethanol extract of propolis,EEP)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),给予EEP(7.5、15和30 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况;试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性。分别采用Western blot和real-time PCR技术检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和Bcl-2的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,EEP呈剂量依赖性地减轻ox-LDL所诱导的HUVECs损伤,表现为细胞活力增加(P0.01或P0.05),LDH漏出、凋亡率和caspase-3活性降低(P0.05或P0.01),且可抑制ERS诱导剂TM所致的HUVECs活力下降(P0.05),以及LDH漏出、细胞凋亡率和caspase-3活性增加(P0.05或P0.01);与PBA相似,EEP可抑制ox-LDL所诱导的CHOP上调和Bcl-2下调(P0.05或P0.01);另外,与TM组比较,EEP预处理组CHOP蛋白和mRNA表达上调也受到明显抑制(P0.05或P0.01)。结论:EEP可减轻oxLDL所诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制CHOP介导的ERS凋亡途径有关。     

自噬通过抑制C/EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡

目的:研究自噬对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致巨噬细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;3 mmol/L)、雷帕霉素(rapamycin,Rap;1μmol/L)或4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养12 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况;相应试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性;采用Western blot法检测自噬标志分子beclin-1和内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)及促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达的变化;采用激光共聚焦显微镜观测细胞内微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的变化。结果:ox-LDL处理可显著降低巨噬细胞活力,并增加LDH漏出、凋亡率及caspase-3活性;ox-LDL对细胞的上述损伤作用可被自噬抑制剂3-MA促进而被自噬诱导剂雷帕霉素拮抗。ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应,表现为beclin-1表达上调,LC3颗粒化显著;ox-LDL对自噬的诱导作用可被3-MA抑制而被Rap增强。另外,3-MA可促进ox-LDL所诱导的CHOP进一步上调,而Rap可明显拮抗ox-LDL对CHOP的诱导作用。PBA可显著抑制ox-LDL所诱导的GRP78上调,且明显减轻ox-LDL所诱导的自噬反应,表现为beclin-1表达下调,LC3颗粒化程度减弱。结论:内质网应激介导ox-LDL对巨噬细胞自噬的诱导作用,而一定程度的自噬可通过抑制CHOP表达从而减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞凋亡。     

乔松素对内质网应激所致内皮细胞凋亡的抑制作用及机制

目的:探讨乔松素对内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素(TM)所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的抑制作用及其机制。方法:体外培养HUVECs,分别给予6. 25、12. 5和25 mg/L乔松素预处理1 h,再加入TM(10mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞活力和细胞凋亡情况;采用试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,并采用Hoechst 33342/PI双染法检测细胞膜损伤情况;采用Western blot法检测ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和ERS凋亡途径关键蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况,以及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和真核翻译起始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平;免疫荧光细胞化学法检测活化转录因子6(ATF6)的核转位情况。结果:乔松素(12. 5和25 mg/L)预处理显著抑制TM所诱导的细胞活力降低、LDH漏出、PI阳性细胞率和凋亡率增加(P0. 05或P0. 01)。TM显著上调GRP78和CHOP的蛋白表达水平,且促进其上游调控蛋白PERK和e IF2α磷酸化及ATF6核转位,而乔松素显著拮抗TM所致的上述变化,并呈剂量依赖性(P0. 05或P0. 01)。结论:乔松素可减轻ERS诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制ATF6/PERK-CHOP信号通路的活化有关。     

RIP3对BCG感染后小鼠巨噬细胞凋亡的调控作用研究

目的:探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)在卡介苗(BCG)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡过程中的调控作用。方法:构建RIP3腺病毒干扰载体并感染巨噬细胞,并用BCG进行感染。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;利用流式细胞术对细胞凋亡率、线粒体膜电位及活性氧含量进行检测;通过Western blot检测RIP3及凋亡相关蛋白的表达水平。结果:BCG感染RAW264.7细胞后,细胞活力下降且RIP3蛋白表达量显著上调(P0.01)。而与BCG单独感染组相比,BCG感染结合RIP3干扰处理组细胞凋亡率及活性氧含量降低,线粒体膜电位升高,同时促凋亡蛋白Bax与cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著降低(P0.01)。结论:在BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的过程中,RIP3参与了BCG诱导的RAW264.7细胞的凋亡,且该过程可能是通过线粒体途径实现的。     

载脂蛋白A-I模拟肽D-4F对巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体A1的抑制作用

 目的:研究载脂蛋白A-I模拟肽D-4F对氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）所诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体A1（scavenger receptor A1,SR-A1）的抑制作用及其机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予不同浓度的D-4F（12.5、25和50 mg/L）、紊乱模拟肽sD-4F（50 mmol/L）处理1 h或者5 mmol/L内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）抑制剂 4-苯丁酸处理30 min后,再加入ox-LDL （100 mg/L）继续培养12 h。另外培养巨噬细胞给予50 mg/L D-4F 或sD-4F 处理1 h,再加入2 mg/L ERS诱导剂衣霉素（tunicamycin,TM）处理4 h。MTT法检测细胞活力;试剂盒检测细胞内总胆固醇含量;分别采用免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）技术检测SR-A1和ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78 （glucose-regulated protein 78,GRP78）蛋白和mRNA表达变化;采用多功能酶标仪检测DiI-ox-LDL摄取情况。结果:D-4F明显减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞损伤和细胞内的胆固醇蓄积。ox-LDL可显著上调SR-A1和GRP78表达,而D-4F对上述变化具有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。D-4F显著抑制TM所诱导的SR-A1和GRP78蛋白水平以及巨噬细胞对ox-LDL的摄取。结论: D-4F可通过抑制SR-A1 表达减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞内胆固醇蓄积和细胞损伤,其机制可能与抑制GRP78介导的ERS信号途径有关。     

对甲苯磺酰维达列汀抑制巨噬细胞焦亡和促进其凋亡的研究

目的:探讨对甲苯磺酰维达列汀(PV)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞焦亡和凋亡的影响,及其可能的抗炎机制.方法:MTT法检测RAW264.7的细胞活力;细胞流式术检测RAW264.7细胞的凋亡;Western blot检测caspase-3和caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞培养上清液中肿...     

氢分子通过激活自噬抑制C/EBP同源蛋白介导的巨噬细胞凋亡

目的:研究氢分子对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养鼠源RAW264.7巨噬细胞,处理前更换为饱和含氢培养基,分别给予3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA;5 mmol/L)和雷帕霉素(rapamycin,Rap;3μmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况,试剂盒测定培养基中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,Western blot法检测自噬标志分子beclin-1和内质网应激相关促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达的变化,激光共聚焦显微镜观测细胞内微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达变化。结果:氢分子显著抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞活力降低、LDH漏出增加、细胞凋亡及CHOP表达上调;ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应,表现为beclin-1表达上调,LC3颗粒化聚集,而氢分子可进一步促进ox-LDL对细胞自噬的诱导作用,且氢分子的这种促进作用可被自噬抑制剂3-MA拮抗,而被自噬诱导剂Rap增强(P0.01)。另外,氢分子对ox-LDL所致的巨噬细胞凋亡、细胞活力降低及CHOP上调的抑制作用也可被3-MA拮抗,而被Rap促进。在体外培养的人源THP-1巨噬细胞中也观察到类似的结果,即氢分子不仅可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡和CHOP上调,也可使beclin-1表达进一步上调(P0.01)。结论:氢分子可通过下调CHOP表达抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,其上游机制可能是通过激活自噬实现的。     

沉默CXCL12抑制ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7泡沫化和凋亡

目的 探讨CXC趋化因子配体12(CXCL12)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7泡沫化和凋亡的作用及其机制.方法 用60 mg/L的ox-LDL诱导RAW264.7泡沫化,记为ox-LDL组,不添加ox-LDL的作为对照(NC)组;将si-con和si-CXCL12转染至RAW2...     

M1型巨噬细胞对小鼠膀胱癌MB49细胞活力、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的:探究共培养体系下M1型巨噬细胞对小鼠膀胱癌MB49细胞活力、迁移、侵袭及凋亡的影响.方法:分别以0、50、100和200μg/L的脂多糖(LPS)刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞24 h后,采用免疫荧光技术、Western blot及流式细胞术检测M1型巨噬细胞标志物CD86和诱导型一氧化氮合酶的表达情况.建立R...     

黄芪甲苷对棕榈酸诱导的小鼠RAW264.7细胞铁死亡的调控作用

目的：探讨黄芪甲苷（astragaloside IV,ASIV）对棕榈酸（palmitic acid,PA）诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞铁死亡的调控作用。方法：选取对数生长期的RAW264.7细胞,加入终浓度为0、50、100、150和200 mg/L的ASIV,或0、100、200和400μmol/L的PA,细胞成像仪培养48 h后计数分析,观察ASIV和PA对RAW264.7细胞活力的影响。再将RAW264.7细胞分为对照组、PA(200μmol/L)组和PA(200μmol/L)+ASIV(100 mg/L)组。油红O染色观察RAW264.7细胞脂质沉积情况;细胞免疫荧光染色观察RAW264.7细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)的蛋白表达水平;RT-qPCR和Western blot测定GPX4、FTH1、P53和溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)的mRNA和蛋白表达水平;活性...     

多壁碳纳米管对单核巨噬细胞的毒性作用

目的:研究多壁碳纳米管(p-MWCNTs)与牛磺酸修饰的多壁碳钠米管(tau-MWCNTs)在体外对小鼠的单核巨噬细胞RAW264.7细胞的毒性作用.方法:p-MWCNTs与tau-MWCNTs作用于RAW264.7细胞后,观察RAW264.7细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞形态、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和凋亡...     

卡介苗诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化与上调CD36表达有关

目的探讨卡介苗(BCG)感染对小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响以及引起RAW264.7巨噬细胞泡沫化形成的相关机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞, 40μg/mL氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)预处理30 min,按BCG∶RAW264.7巨噬细胞=1∶1、 5∶1、 10∶1、 20∶1比例感染RAW264.7巨噬细胞24 h,油红O染色法检测不同感染比例的BCG感染对RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响,以确定BCG感染诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化形成的最适感染比例。接着分别用热灭活和未灭活的BCG以最适感染比例感染RAW264.7巨噬细胞,感染24h后分别对各组细胞进行油红O染色和提取RNA,探讨不同活力的BCG感染对RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响和对RAW264.7巨噬细胞脂质摄入相关受体清道夫受体A1(SR-A1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、 CD36的mRNA表达水平的影响。结果不同感染比例的BCG均可诱导RAW264.7巨噬细胞发生泡沫样改变,其中以10∶1的感染比例最为明显。灭活BCG与未灭活BCG均引起RAW264.7巨噬细胞泡沫化,其中未灭活的BCG感染组RAW264.7巨噬细胞泡沫化更为显著。与未感染组相比, BCG感染24 h后, CD36 mRNA的表达显著上调,且上调程度与RAW264.7巨噬细胞泡沫化程度相关。结论 BCG诱导巨噬细胞泡沫化形成可能与CD36的表达上调有关。     

ox-LDL对巨噬细胞内皮脂肪酶表达的影响

目的: 探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对鼠源RAW264.7巨噬细胞内皮脂肪酶(EL)表达的影响。方法: 用ox-LDL(0~100 mg/L)孵育RAW264.7细胞24 h使其活化,或者用PDTC (NF-κB抑制剂)预孵育RAW264.7细胞30 min再与ox-LDL(50 mg/L)共同孵育24 h;应用Western blotting 检测EL和NF-κB p65的表达。结果: ox-LDL孵育RAW264.7细胞明显增加EL表达(P<0.05);ox-LDL(50 mg/L)孵育RAW264.7细胞15~30 min可激活NF-κB,用NF-κB 抑制剂PDTC处理后则明显抑制ox-LDL诱导的EL表达增加(P<0.05)。结论: ox-LDL可明显增加RAW264.7细胞EL的表达,可能与NF-κB活化有关。     

睾酮对结核分枝杆菌感染的RAW264.7细胞自噬的影响

目的探讨睾酮对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的鼠源巨噬细胞RAW264.7细胞自噬的影响及其分子机制。方法 MTB感染RAW264.7细胞24 h后,给予10~(-8)mol/L睾酮处理24 h;采用透射电镜观察细胞自噬情况,Western blot法检测细胞自噬相关蛋白以及MAPKs信号通路蛋白。结果睾酮干预MTB感染的RAW264.7细胞后自噬体、自噬特异标志物LC3Ⅱ均明显增加(P0.01),通路蛋白JNK磷酸化水平明显上调(P0.001)。结论睾酮可能通过激活JNK信号通路诱导MTB感染的RAW264.7细胞自噬。     

γ-氨基丁酸促进水疱性口炎病毒感染小鼠巨噬细胞

目的 探究代谢物γ-氨基丁酸(GABA)对病毒感染RAW264.7细胞系和小鼠原代腹腔巨噬细胞的影响。方法 用0、10、30、50和70 mmol/L GABA或PBS处理RAW264.7细胞系10 h, CCK-8法检测细胞活性,用此剂量GABA预处理RAW264.7细胞系,2 h后用表达绿色荧光蛋白的重组水疱性口炎病毒(GFP-VSV)或VSV感染8 h,荧光显微镜观察细胞内GFP-VSV的含量;流式细胞术检测细胞内GFP-VSV的水平;RT-qPCR检测VSV RNA及细胞因子Ifnb1和Il-6的mRNA水平。用0、10、30、50和70 mmol/L GABA预处理小鼠原代腹腔巨噬细胞,2 h后用VSV感染8 h, RT-qPCR检测VSV RNA水平。结果 10、30、50和70 mmol/L的GABA对RAW264.7细胞系的活性没有影响,且此剂量的GABA能提高RAW264.7细胞系内GFP-VSV的蛋白水平、VSV RNA水平和细胞因子Ifnb1和Il-6的mRNA水平(P<0.05),也能提高小鼠原代腹腔巨噬细胞内VSV RNA水平(P<0.05),且均...     

黄连素抗Tg和Fuc诱导的小鼠巨噬细胞凋亡的实验研究

目的 研究黄连素抗小鼠巨噬细胞凋亡的作用,初步确定其抗凋亡的浓度,探讨其治疗动脉粥样硬化(athemsclemsis,As)的机制.方法 以0.5 μmol/L的毒胡萝卜素(Tg)和50 μg/ml的墨角藻聚糖(Fuc)诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡为实验模型,通过细胞毒性试验(MTT)法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/P1流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 浓度为800 μg/ml的黄连素组与正常对照组细胞存活率相比差异有统计学意义(P<0.01);随着黄连素浓度的下降,细胞凋亡率旱现下降的趋势,黄连素(0.02～0.63 μg/ml)能有效抑制Tg和Fuc诱导的小鼠巨噬细胞凋亡.结论 黄连素对RAW267.4细胞的增殖影响不大.黄连素能有效抑制Tg和Fuc诱导的小鼠巨噬细胞凋亡.     

内质网应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡

目的 探讨细胞内信号分子GSK3β在内质网应激(ERS)诱导肝细胞凋亡中的作用.方法 以小鼠肝癌细胞株Hepa 1细胞为研究对象,化学药物衣霉素(20 μg/ml)为ERS诱导剂,建立肝细胞凋亡模型.化学药物SB216763特异性抑制GSK3β活性,在衣霉素诱导细胞凋亡前1h给予干预处理.乙酰氧基甲酯(AM)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)对活细胞/凋亡细胞进行检测;再利用培养细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)的检测评价细胞死亡情况;Western blot检测p-GSK3β蛋白、ERS相关凋亡蛋白GRP78、CHOP、caspase-12以及caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达.结果 研究表明,衣霉素诱导的ERS促进GSK3β活性升高;抑制GSK3β活性缓解了衣霉素诱导的ERS:GRP78、CHOP和caspase-12的表达被抑制;与此同时抑制GSK3β活性显著减轻了ERS诱导的Hepa 1细胞凋亡.与ERS诱导Hepa 1凋亡模型组相比,SB216763干预组PI染色的凋亡细胞显著减少,培养细胞上清中的LDH显著下降;此外,Western blot结果显示GSK3β活性抑制减少了cleaved caspase-3活性蛋白的表达.结论 GSK3β是ERS诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子,抑制GSK3β活性通过减轻ERS而改善肝细胞凋亡.