重楼皂苷Ⅵ诱导急性髓系白血病THP-1细胞凋亡机制研究

目的探究重楼皂苷Ⅵ对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法采用CCK8实验考察重楼皂苷Ⅵ对THP-1细胞活力的影响,并确定给药剂量。流式细胞术检测重楼皂苷Ⅵ对THP-1细胞凋亡的影响。Western blot进一步检测细胞凋亡与p38 MAPK通路相关蛋白的变化,通过p38抑制剂SB203580验证THP-1细胞中上述通路与凋亡的关系。结果一定剂量的重楼皂苷Ⅵ能抑制THP-1细胞增殖且抑制效应呈浓度依赖与时间依赖性。流式细胞术显示,与对照组比较,给药组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。Western blot进一步表明,随着药物浓度增加,cleaved caspase-3与Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达下降,p-p38/p38比值增加(P<0.05),上述作用可被p38 MAPK抑制剂SB203580阻断。CCK8实验结果显示,抑制p38通路可降低药物导致的细胞增殖抑制。结论重楼皂苷Ⅵ可抑制急性髓系白血病THP-1细胞增殖并通过p38 MAPK通路诱导细胞凋亡。     

依托泊苷通过线粒体信号通路释放细胞色素C诱导Jurkat白血病细胞凋亡

目的：研究在人类Jurkat白血病细胞株中依托泊苷诱导凋亡的分子机制，揭示由依托泊苷启动的凋亡信号通路。 方法：分别用annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）染色，通过流式细胞仪测定annexin V阳性和出现亚二倍体DNA的凋亡细胞。以3,3＇-dihexyloxyacarbocyanine iodide ［DiOC6(3)］为染色剂，采用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的变化。采用离心技术分离细胞的胞浆与线粒体。细胞色素c从线粒体转入胞浆，caspase-3的激活，多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）的切割等蛋白质的表达由免疫印迹技术（Western blotting）检测。 结果：依托泊苷诱导Jurkat白血病细胞凋亡，细胞凋亡与依托泊苷的作用时间呈线性关系。广谱的caspase抑制剂zVAD.fmk可抑制依托泊苷诱导的DNA片段化和磷脂酰丝氨酸外翻。依托泊苷引起的线粒体膜电位下降早于DNA片段化和磷脂酰丝氨酸外翻，形成明显对照的是zVAD.fmk不能阻断依托泊苷诱导的线粒体膜电位的下降。依托泊苷介导细胞色素c从线粒体释放到胞浆，激活caspase-3，caspase-3的底物PARP被切割。 结论：依托泊苷诱导Jurkat白血病细胞株凋亡的机制是降低线粒体膜电位和释放细胞色素c到细胞浆启动线粒体信号转导通路, 最终激活caspase而导致细胞凋亡。     

TRAIL诱导Hela细胞凋亡的线粒体信号通路

 目的 探讨 TRAIL 诱导人宫颈癌 Hela 细胞凋亡的线粒体通路。 方法 琼脂糖凝胶电泳判断细胞凋亡;激光共聚焦、Western blot、荧光免疫和 caspase-3 活性检测测定细胞线粒体膜电位 (∆Ψm) 、Bcl-2 蛋白、细胞色素 c (Cyt c) 和凋亡诱导因子 (AIF) 蛋白在细胞中的定位以及 caspase-3 活性。结果 TRAIL 能诱导 Hela 细胞凋亡,有凋亡细胞特有的 DNA 梯状条带。同时,TRAIL具有时间依赖性致 ∆Ψm 和 Bcl-2 蛋白含量明显下降,线粒体 Cyt c 蛋白释放,AIF 蛋白向细胞质、细胞核转移,caspase-3 活性增强。结论 TRAIL 诱导 Hela 细胞凋亡途径之一是通过线粒体信号通路进行的。     

Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨以Gli为靶点的hedgehog信号通路抑制剂GANT61对人急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60增殖和凋亡的作用及机制。方法:采用CCK-8法观察不同浓度GANT61对HL-60细胞生长增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染检测GANT61对HL-60细胞凋亡的影响;RT-PCR检测48 h时HL-60细胞中gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;免疫荧光检测48 h时HL-60细胞中Gli1蛋白表达。结果:GANT61呈时间和浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖;GANT61呈浓度和时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡;GANT61呈浓度依赖性抑制gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;GANT61呈浓度依赖性抑制Gli1蛋白表达。结论:GANT61通过抑制Hedgehog-gli信号通路进而下调bcl-2和bcl-xl基因的表达,对人急性髓系白血病细胞HL-60起抑制增殖,并诱导其凋亡作用。     

细胞凋亡相关的信号通路

目前研究较多的细胞凋亡信号通路有wnt及JNK两条。Wnt信号通路有经典wnt通路,wnt/PCP通路和wnt/钙离子通路三个分支,引起细胞凋亡的机制主要有β-连环蛋白/tcf的转录调节途径,APC激活途径两种。JNK信号通路通过MKKKs-MKKs-MAPK转导。激活的JNK信号通路通过磷酸化转录因子、细胞骨架相关蛋白、酶等多种底物来调节细胞的生理过程,最终导致细胞凋亡。     

SDF-1/CXCR4信号轴通过NF-κB通路诱导人退变髓核细胞凋亡

目的探讨趋化因子SDF-1/CXCR4信号轴对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的调控作用及其分子机制。方法将术中摘取的椎间盘标本根据Pfirrmann退变程度分为正常组和退变组。用免疫组织化学法、定量PCR和Western blot等检测SDF-1和CXCR4的表达。用退变椎间盘髓核原代细胞培养,取第3~5代的细胞给予10 ng/mL SDF-1刺激、CXCR4-siRNA转染及NF-κB特异性抑制剂PDTC(20μmol/L)等不同处理,Western blot和q-PCR验证转染效率和信号通路上靶蛋白(基因)的表达;Annexin V/PI检测细胞凋亡率;细胞免疫荧光检测NF-κB的重要基团P65的核转移情况。结果 SDF-1和CXCR4在退变椎间盘组织中表达显著升高(P0.05);SDF-1可以诱导退变髓核细胞的凋亡,但在CXCR4的表达受到沉默后,SDF-1的促凋亡作用被抑制(P0.05);加入SDF-1的诱导后,磷酸化P65的表达水平明显增高(P0.05),P65向核内移位;用PDTC抑制NF-κB活性后,SDF-1促凋亡作用明显减弱(P0.05)。结论 SDF-1/CXCR4信号轴促进髓核细胞凋亡的机制可能与Akt/NF-κB信号通路相关。     

钙载体诱导慢性髓系白血病细胞分化成树突状细胞

目的：探讨用钙离子载体（Calcium ionorphore，CI）A23187诱导慢性髓系白血病（CML）病人来源的白血病细胞分化成树突状细胞（Dendritic cells，DCs）的方法和条件。方法：选择外周血白细胞计数较高的CML病人，采集外周血或骨髓液分离单个核细胞，通过两次贴壁法除去单核细胞和淋巴细胞，然后放入含或不含GM-CSF（200ng／ml）和CI（375ng／ml）的RP-M11640培养液中培养96小时以上，通过流式细胞仪分析细胞表型、倒置显微镜和电镜观察细胞的形态变化来观察CI对白血病细胞诱导成树突状细胞的作用，初步摸索和探讨CI诱导白血病细胞转化成树突状细胞的最佳条件。结果：发现对CML病人外周血或骨髓液分离的白血病细胞加入GM—CSF（200ng／ml）、CI（375ng／ml）和含10％胎牛血清的RPMI1640培养96小时，细胞能获得典型的成熟树突状细胞的形态，CD86、CD80、CD40、CD83和HLA-DR的表达显著提高。结论：CML细胞用GM-CSF和CI联合诱导能获得成熟树突状细胞的典型形态特征和免疫表型。     

mTOR信号通路与细胞凋亡

哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)主要通过上游信号转导通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)/mTOR信号通路及下游信号通路mTOR/ eIF4E结合蛋白1(4EBP1)、mTOR/p70S6激酶(p70S6K)在细胞生长、增值与分化和在血管再生、蛋白合成与降解中发挥作用.细胞凋亡是细胞的一种程序性死亡,在机体发育、组织代谢中有着重要作用,而细胞凋亡的异常调节与许多疾病的发生和发展紧密相连.近年研究发现,mTOR信号通路在细胞凋亡过程中扮演了重要角色,并已被作为新的药物治疗靶点.     

问号钩端螺旋体在体外诱导细胞凋亡及相关信号通路的研究

目的 了解问号钩端螺旋体诱导不同宿主细胞凋亡的作用及相关胞内信号传导通路.方法 建立问号钩体黄疸出血群赖型赖株小鼠单核-巨噬样细胞J774A.1、人脐静脉内皮细胞EVC304和人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549感染模型.采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况.分别采用荧光比色法和Western blot检测感染的J774A.1细胞caspase-3,-8,-9活性和凋亡相关蛋白FADD(Fas-associated death domain)表达水平.结果 问号钩体赖株感染1～6 h后,36.70%～63.70%的J774A.1细胞可H{现明显的早期凋亡,感染12 h时转变为晚期凋亡或坏死为主(53.68%).78.52%问号钩体赖株感染的A549细胞仪出现晚期凋亡或坏死.问号钩体赖株感染的EVC304细胞无细胞凋亡或坏死现象.感染的J774A.1细胞caspase-3和-8最大活性分别为(1453.41±36.07)和(1402.15±59.09)Fu,是未感染细胞的16.38和29.99倍.感染的J774A.1细胞caspase-9虽略有升高为(89.42±5.08)Fu,但明显低于caspase-3和-8(P<0.001).随着感染时间的延长,感染的J774A.1细胞FADD蛋白表达量逐步增加.结论 问号钩体诱导宿主细胞凋亡的效应町因细胞种类不同而有明显差异,FADD→caspase-8→caspase-3是介导问号钩体感染J774A.1细胞凋亡的主要信号通路.     

细胞凋亡信号的基本转导通路

在诱导细胞凋亡过程中,许多细胞外刺激常共用一段相同的信号转导路径,可称之为凋亡的基本信号通路。ＴＮＦ受体家族如ＴＮＦ受体及Ｆａｓ受体在与相应的配体结合后,通过蛋白死亡区的相互作用,激活ＩＣＥ蛋白酶家族;活化的蛋白酶引起多种底物如核酸酶抑制剂、细胞骨架蛋白等的降解,导致细胞出现凋亡的生化及形态学改变。     

白血病诱导分化和凋亡细胞研究通过鉴定

白血病诱导分化和凋亡细胞研究通过鉴定上海第二医科大学血液学研究所陈赛娟、陈竺、陈国强等，１９９３～１９９６年从临床、细胞生物学和分子生物学诸方面，对急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的诱导分化和细胞的凋亡调控进行了系统研究。该研究通过了上海市科委组织的专...     

Anti-IgM诱导人B淋巴瘤Daudi细胞凋亡的信号传导通路

目的 研究B细胞抗原受体（BCR）介导的细胞凋亡,探索其可能的信号传导通路。阐明B细胞凋亡的分子机制。方法 ^3H掺入法检测细胞生长,应用FACS方法分析细胞周期和细胞凋亡,Western blot检测anti-IgM刺激引起Daudi细胞信号分子的变化。结果 anti-IgM可导致人B淋巴瘤Daudi细胞发生凋亡。细胞凋亡的数量与anti-IgM浓度呈正相关,Western blot结果显示,anti-IgM刺激引起Daudi细胞内氨酸蛋白分子磷酸化水平的变化速度与浓度相关;但随时间的延长,变化状况趋于稳定;在48-72h,许多被激活的,呈现磷酸化的栈氨酸蛋白分子又回复到低磷酸化或去磷酸化的静止状态,另外,虽然JNK1和ERK2蛋白水平未发生明显改变,但JNK/SAPK的重要下游分子之一,c-Jun的蛋白表达水平及其63和73位点的丝氨酸磷酸化水平立即长高并维持在高水平状态。结论 anti-IgM刺激激活JNK/SAPK,JNK/SAPK通路可能参与了anti-IgM引起的Daudi细胞的凋亡过程。     

溶酶体中GAG抗氧化应激诱导细胞凋亡的信号传导通路

在氧化应激诱导细胞凋亡过程中,溶酶体中的葡萄糖胺聚糖（GAG）具有在早期溶酶体水平负调控细胞凋亡的作用。本文重点阐述溶酶体中葡萄糖胺聚糖抗氧化应激诱导细胞凋亡作用的信号传导通路。     

三氧化二锑诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的研究

目的 研究锑剂三氧化二锑（Sb2O3)对早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的诱导作用，以寻求早幼粒细胞白血病治疗的新方法。方法 采用细胞生长曲线，形态学及硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验，判定NB4细胞的生长，分化及功能。采用细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡。结果 Sb2O3能诱导早幼粒白血病细胞凋亡，且具有时间，剂量依赖性。结论 Sb2O3能有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡，提示锑剂诱导细胞半亡的疗法，有望成为临床治疗早幼粒细胞白血病的新方法。     

IL-4诱导THP-1细胞表达DC-SIGN的信号通路调节研究

目的 研究IL-4诱导THP-1细胞表达DC-SIGN的信号调节通路,探索DC -SIGN表达的信号调控网络.方法 以佛波脂(PMA)刺激THP-1细胞24h后加入IL-4作用48 h诱导DC-SIGN的表达,并设ERK阻断剂、NF-κB阻断剂、JAK-STAT阻断剂和MAPK阻断剂处理组.用RT-PCR检测DC-SIGN的mRNA表达,Western blot检测胞质内DC-SIGN蛋白的表达,流式细胞术检测细胞表面DC-SIGN的表达.另外,提取IL-4诱导0、10、20、30、60和120 min的THP-1细胞胞质和胞核蛋白,Western blot检测不同信号通路的信号蛋白及其磷酸化蛋白的变化.结果 IL-4可以大幅提高DC-SIGN在THP-1细胞上的表达,包括mRNA和胞膜蛋白水平.在mRNA、胞质和细胞表面蛋白表达3个水平上,ERK通路阻断剂阻断效果最好,几乎完全阻断了IL-4的诱导效果,JAK-STAT和NF-κB通路阻断剂具有部分阻断效果,而p38通路阻断剂无阻断效果.信号蛋白检测结果显示,IL-4诱导0～120 min内,胞质磷酸化ERK1/2、磷酸化STAT6以及NF-κBp65、NF-κBp50、磷酸化IKB和磷酸化AKT随时间推移浓度逐渐升高,而p38MAPK及其磷酸化蛋白浓度无明显改变.胞核内胞质磷酸化ERK1/2、磷酸化STAT6以及NF-κBp65和NF-κBp50随时间推移浓度逐渐升高.结论 ERK、JAK-STAT和NF-κB通路参与了DC-SIGN启动子的活化,其中以ERK通路为主.     

飞燕草素调节Numb/Notch信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡

目的 探讨飞燕草素调节Numb/Notch信号通路诱导卵巢癌细胞A2780凋亡的作用机制。方法 使用顺铂（500μmoL/mL）和低剂量（500μmoL/mL）、高剂量（1000μmoL/mL）飞燕草素处理卵巢癌细胞A2780，同时设立卵巢癌细胞A2780对照组，各组设6个平行样，培养72 h后。实验结束后，采用CCK-8试剂盒测定各组细胞增殖水平，流式细胞术检测细胞凋亡率，Transwell法测定细胞侵袭水平，划痕实验检测细胞迁移水平，实时荧光定量（RT-qPCR）及蛋白印记法（West-blot）检测细胞Numb、Notch1 m RNA和蛋白表达水平。结果 与A2780细胞组比较，顺铂组、飞燕草素低、高剂量组A值、存活率、穿膜数、迁移距离、Notch1 m RNA和蛋白表达降低（P<0.05）；与顺铂组比较，飞燕草素低剂量组A值、存活率、穿膜数、迁移距离、Notch1 m RNA和蛋白表达升高（P<0.05），高剂量组A值、存活率、穿膜数、迁移距离、Notch1 m RNA和蛋白表达无明显变化（P>0.05）；与飞燕草素低剂量组比较，飞燕草素高剂量组A值、存活率...     

髓系白血病患者的临床和细胞遗传学研究

目的研究髓系白血病(myeloid leukemia,ML)患者细胞遗传学特点和相关临床表现及预后。方法采用骨髓细胞直接法和(或)不加植物血凝素的24h体外细胞培养法制备骨髓染色体。应用热变性姬姆萨显带技术为主、胰酶消化技术必要时补充,进行染色体核型分析。结果在578例髓系白血病中:急性髓系白血病(acute myeloid leuckemia,AML)420例,223例检出有克隆性染色体异常,占53.1%(223/420)。t(8;21)、t(15;17)、inv(16)、del(11)分别与M2b、M3、M4Eo、M5特异性相关。慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)158例,153例检出有克隆性染色体异常,占96.8%(153/158例)。t(9;22)与绝大多数CML及少部分M0、M1、M2特异性有关。本组髓系白血病中有18例(AML13例、CML5例)患者,占3.1%(18/578),其细胞遗传学检查未见克隆性染色体异常,与患者的临床表现、骨髓象形态学及免疫学的诊断不尽相同。为此我们应用了荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,其中15例结果完全符合临床和髓系白血病的血液学改变,同时也明显提高了临床的诊断率。结论染色体核型分析不但有助于髓系白血病的诊断和鉴别诊断,而且还是临床监测病情缓解和复发、判断疗效的重要指标。在染色体核型分析基础上选用合适的FISH技术,可对大多数髓系白血病患者作出精确的染色体分析。     

FAK基因沉默诱导白血病细胞凋亡

目的:本研究靶向黏着斑激酶(FAK)基因,构建FAK-shRNA慢病毒载体,并研究FAK基因沉默对白血病细胞生长的影响。方法:化学合成人FAK基因的shRNA序列,应用分子生物学方法将该FAK shRNA序列插入含荧光素GFP慢病毒质粒。该FAK shRNA慢病毒载体在体外包装、浓缩,然后转染至人白血病细胞株。应用逆转录聚合酶链反应及蛋白质印迹方法检测FAK基因表达水平,予Annexin V标记检测细胞凋亡的情况。结果:经核苷酸序列分析提示FAK shRNA正确插入慢病毒质粒,该病毒载体在白血病细胞株的转染率为10%-25%。与对照组相比(无FAK shRNA的慢病毒载体),FAK shRNA慢病毒载体在细胞FAK mRNA及蛋白水平的抑制率分别为40%和70%。凋亡实验表明,对照组与FAK shRNA慢病毒载体组的Annexin V阳性率分别为(4.19±0.36)%和(8.48±0.58)%,两者差异明显(P0.05)。结论:我们成功构建FAK shRNA慢病毒载体,该载体能抑制FAK基因表达并诱导白血病细胞凋亡。     

PXD101诱导人前列腺癌细胞PC3凋亡的线粒体信号通路

目的:探讨PXD101(又称belinostat)诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的线粒体通路。方法:PXD101以不同刺激时间和剂量处理PC3细胞,CCK-8法检测细胞的活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;Western blot检测线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)和Bax;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。结果:PXD101能以时间和剂量依赖的方式抑制PC3细胞的存活(P0.05),流式细胞术检测结果表明PXD101处理后PC3细胞的凋亡率明显增加(P0.01)。PXD101能时间依赖性致线粒体膜电位降低和Bcl-2蛋白含量明显下降,Bax蛋白含量上升,促进线粒体释放Cyt C蛋白,caspase-3活性明显增强。结论:PXD101通过线粒体途径诱导人前列腺癌细胞系PC3细胞凋亡。     

JNK信号传导通路在抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导白血病细胞凋亡中的作用

目的:探讨JNK信号传导通路在抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导白血病细胞Jurkat和U937凋亡过程中的作用.方法:MTT法检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞的生长抑制作用;以Caspase抑制剂Z-VAD-FMK和JNK抑制剂SP600125进行干预,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析Jurkat和U937细胞凋亡;利用免疫印迹技术检测mDRA-6作用下凋亡细胞的JNK蛋白的表达情况.结果:mDRA-6对Jurkat和U937细胞具有明显的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测显示,10 μg/ml的mDRA-6作用Jurkat和U937细胞3小时,其凋亡率分别为62.62%和35.65%,JNK抑制剂干预后细胞凋亡明显增加;免疫印迹技术检测显示,mDRA-6作用细胞5分钟后JNK即呈现活性片段表达,并随作用时间的延长其活性增强,而Caspase全抑制剂干预后,5、15分钟JNK磷酸化增强,但随后随时间递减.结论:mDRA-6抑制Jurkat和U937细胞生长并诱导其凋亡,其凋亡过程中有JNK的激活并发挥抗凋亡作用.