碱提灵芝多糖的分离纯化、结构表征及免疫活性评价

目的从赤芝Ganoderma lucidum中提取、分离和纯化获得碱提多糖组分,在表征其基本理化性质和精细结构的基础上,对其体外免疫调节活性进行研究。方法赤芝子实体干燥粉碎后,利用碱提醇沉法提取粗多糖,经Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱柱纯化得到灵芝多糖组分(LZJ-0.15)。采用PMP柱前衍生-高效液相色谱法(HPLC)及高效凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射联用法(HPGPC-MALLS)测定LZJ-0.15的单糖组成及相对分子质量特征,并通过核磁共振氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)及二维谱(1H-1H COSY和1H-13C HSQC)对LZJ-0.15的精细结构进行表征。采用小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红实验对灵芝多糖LZJ-0.15进行免疫活性评价。结果 LZJ-0.15的相对分子质量、分子半径及Mw/Mn分别为24 700、46.6 nm和1.019,其单糖组成分析显示以葡萄糖为主(92.3%),核磁谱图显示LZJ-0.15为→3)Glc(β1→及→6)Glc(β1→连接为主的葡聚糖。RAW264.7细胞吞噬中性红实验显示LZJ-0.15具有较好的免疫调节活性。结论赤芝碱提灵芝多糖相较于水提多糖组分具有较优的免疫活性,有望开发成重要的免疫调节剂。     

栽培赤芝与紫芝化学成分的比较

本文对赤芝(含发酵菌丝体)、紫芝多糖含量进行了测定,多糖含量由高到低顺序为:赤芝发酵菌丝体>赤芝>紫芝;并用高效液相和薄层层析法对三萜酸类成分进行了定性鉴别。     

猴头菌丝体多糖的化学研究

目的:对猴头菌丝体的多糖类成分进行化学组成及结构研究。方法:DEAE 纤维素、DEAE-Sephadex 柱分离,葡聚糖凝胶柱层析测定纯度,凝胶过滤法测定分子量,酶解、气相色谱及光谱分析等测定化学组成及结构。结果和结论:从猴头菌丝体中分离得到5 个多糖均一体,其主要成分HEPA₁ 分子量6 .2 ×10⁴ ,为以葡萄糖为主的杂多糖,单糖组成摩尔比为葡萄糖∶阿拉伯糖∶木糖= 33 .1∶1 .7∶1 .0 ;HEPA₄ 分子量2 .6 ×10⁴ ,为杂多糖肽,肽部分由17 种氨基酸组成,占糖肽的3 .8 % ;HEPB2 分子量1 .2×10⁴ ,为以葡萄糖为主的杂多糖,单糖组成摩尔比为葡萄糖∶阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖= 50 .7∶2 .1∶1 .0∶2 .4 。各均一体单糖间的甙键构型均以α-甙键为主。     

低分子量灰树花多糖的分离、纯化和抗肿瘤活性

目的：从灰树花菌丝体中分离纯化低分子量多糖并进行结构鉴定和抗肿瘤活性检测．方法：采用大孔吸附树脂和离子交换纤维素进行分离，SephadexG200柱层析纯化，HPGFC测定分子量，紫外光谱、红外光谱、薄层色谱和高效液相色谱和气相色谱等进行纯度和结构鉴定．用荷瘤小鼠检测抗肿瘤活性．结果：得到大、小两种多糖组分，其中低分子量多糖为白色粉末状，分子量约为2600，单糖组成为D-葡萄糖，含α—1，3，α-1，6，α-1，4-糖苷键，对S180肉瘤、EAC腹水瘤、Heps实体瘤都有明显抑制作用。结论：分离得到一种灰树花菌丝体多糖，为低分子量的α-葡聚糖，初步药效试验表明其具有抗肿瘤作用。     

金针菇菌丝体中多糖的分离、结构鉴定及免疫学活性

目的：研究金针菇菌丝体的多糖成分进行理化性质及免疫活性。方法：通过热水提取、去蛋白、除色素、乙醇沉淀得到金针菇多糖（Flammulina veluapes polysaccharides，FVP），再通过离子交换法、凝胶柱层析法进行进一步纯化得到精品FVP-1，FVP-2。运用高效凝胶渗透色谱（HPGPC），柱前衍生化高效液相色谱（PDHPLC），IR和^13C-NMR等方法测定两种多糖的结构。由淋巴细胞转化试验检测多糖的免疫活性。结果：FVP-1相对分子质量为Mw=1．48×10^4，FVP-2为Mw=2．73×10^4。FVP-1单糖摩尔比为葡萄糖（Gk）：半乳糖（Gal）：甘露糖（Man）=100：2．5：1．5：FVP-2为Glc：Gal：Man：岩藻糖（Fuc）=100：14：7：4。FVP-1主要以[α-D-Glc（1→4）-]为主链，带有a-D．Glc（1，6）分支。FVP-2结构较复杂，存在多种单糖组成，葡萄糖具有α，β两种构型。FVP、FVP-1，FVP-2均有显著的促进细胞增值作用。结论：FVP-1，FVP-2相对分子质量、单糖组成及连接方式均存在差别，其中FVP-2具有更强的免疫增强活性。     

碱提灰树花多糖的分离纯化及其性质研究

灰树花液体深层发酵菌丝体经热水完全提取 ,剩余残渣用 2 %NaOH浸泡提取 ,提取液分别经乙醇沉淀 ,H2 O2 除色素 ,去蛋白 ,透析 ,DEAESepharoseFastFlow柱层析分离纯化得到碱提水溶性多糖GAP。紫外光谱分析表明 ,多糖不含核酸和蛋白质。经HPLC检测GAP为单一多糖 ,其相对分子量为 2× 10 4 。红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰 ,含有α -型糖苷连接键。气相色谱分析GAP单糖组成为 :鼠李糖 ,阿拉伯糖 ,木糖 ,甘露糖和葡萄糖 ,其摩尔比为 0 0 6 4∶0 0 4 4∶0 0 5 6∶1 0∶1 2 6     

超声波对古尼虫草菌丝体多糖免疫调节活性的影响

目的:研究古尼虫草菌丝体多糖经超声波解聚前后的免疫调节活性.疗法:用超声波解聚古尼虫草菌丝体多糖,并分别采用MTT法、中性红比色法测定古尼虫草菌丝体多糖及其解聚物对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞(PMφ)吞噬功能以及细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响.结果:解聚后的古尼虫草菌丝体多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖、PMφ吞噬功能以及CTL活性的免疫抑制效果明显增强,尤其在10μg/ml和100μg/ml剂量时的抑制效果更好.古尼虫草菌丝体多糖并不随超声波解聚时间的延长而提高其免疫抑制活性,解聚1～2h和4～8 h的抑制效果没有显著的差异.结论:古尼虫草菌丝体多糖经超声波解聚后有更强的免疫调节活性,其解聚时间以1～2 h为宜.     

白及多糖BSP-1的分离纯化、结构表征及抗肿瘤活性研究

目的从白及Bletillastriata块茎中分离纯化多糖BSP-1,并对其结构和抗肿瘤活性进行研究。方法将提取的粗多糖经DEAE-cellulose柱色谱分离得到3个多糖组分BP-1、BP-2、BP-3。BP-1通过SephadexG-200柱色谱纯化后得到组分BSP-1。采用HPGPC、IR、GC、GC-MS、甲基化及~1H-、~(13)C-NMR等方法对该多糖的结构进行表征,并考察BSP-1抗肿瘤活性。结果测得BSP-1相对分子质量为4.72×10~5,由葡萄糖和甘露糖组成。主链由β-1,4甘露糖,侧链由末端连接的葡萄糖组成,其物质的量比为8∶1。体外肿瘤细胞活性实验表明,BSP-1能抑制肝癌Hep G2细胞的增殖。BSP-1体内可显著抑制裸鼠的瘤质量,抑制率为66.42%。结论 BSP-1的结构确定为进一步阐明和开发白及中多糖类成分提供了一定的参考。     

赤芝孢子粉破壁前后多糖释放能力比较研究

目的 :探讨一种较准确测定中草药中水溶性多糖的分析方法。方法 :改良苯酚 硫酸法测定多糖释放能力。结果 :37℃、沸水浴及水煮条件下 ,破壁比未破壁孢子的多糖释放能力分别强 118.4% ,87.5%和 69.6% ;多糖含量的测定RSD<1.3%。结论 :该法适用于中草药或保健品的多糖含量测定。     

虎杖多糖的分离纯化及结构研究

目的分离纯化虎杖总多糖,并对其结构进行分析。方法采用水提醇沉法提取虎杖总多糖,联合DEAE-纤维素、Sephadex G-100柱色谱对虎杖总多糖进行分离纯化;采用高效凝胶渗透色谱法对均一多糖进行纯度鉴定和分子量测定;PMP柱前衍生-高效液相色谱法(HPLC)测定单糖组成;甲基化、气质联用(GC-MS)、红外光谱和核磁共振波谱对其结构进行分析。结果经分离纯化得到2个均一多糖PPⅠ、PPⅡ,其相对分子量分别为7780 Da、5720 Da。单糖组成实验表明PPⅠ、PPⅡ主要由葡萄糖构成。甲基化实验表明PPⅠ、PPⅡ均以1→4、1→3,4、1→4,6葡萄糖苷键存在,摩尔比分别为17∶1∶4、21∶1∶3。红外光谱及核磁波共振波谱对其结构分析证明PPⅠ、PPⅡ由α-型吡喃糖连接而成。结论 PPⅠ、PPⅡ是由α-(1,4)、α-(1→3,4)α-(1→4,6)吡喃葡萄糖苷键连接而成的不同结构、不同分子量的均一多糖。为进一步研究虎杖均一多糖的结构及活性提供依据。     

辣木叶多糖的提取及分离纯化

对辣木叶多糖的提取工艺、分离纯进行了研究。结果表明:辣木叶多糖的最佳提取工艺为:温度80℃,料液比1∶20,时间1.5 h,提取次数3次;最佳提取条件下粗多糖得率达到15.86%。经脱蛋白、脱色、DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-100柱层析,纯化得PSM2-1和PSM2-2两个多糖组分。为辣木叶多糖的深入研究提供了基础。     

二氧化氯对灵芝菌丝生长的影响

目的探讨二氧化氯作为消毒剂应用于灵芝栽培和液体培养。方法平板法测定灵芝菌丝的生长和摇瓶发酵法测定灵芝的生物量。结果在未高温灭菌的培养基中添加0.7%(v.v-1)的二氧化氯,灵芝菌丝生长良好;灵芝菌丝液体发酵重量接近对照组。结论为灵芝栽培和液体发酵培养奠定基础。     

灵芝未破壁孢子粉水溶性多糖的分离与鉴定

 目的研究灵芝未破壁孢子粉水溶性多糖(GLPS₃)的组成和性质。方法粗多糖经反复冻融、Sevag法脱蛋白、高速离心、柱色谱等方法分离纯化得组分GLPS₃。经HPLC、比旋度测定、醋酸纤维薄膜电泳等方法,证明其组成的均一性。同时运用气相色谱、红外光谱等方法对其组成和性质进行研究。结果GLPS₃为均一组分,GC分析其单糖组成为Gal和Glc,摩尔比为1∶5.05。结论GLPS₃为中性杂多糖,平均相对分子质量为1.41×10⁵左右。     

裙带菜茎中硫酸多糖的分离纯化及分析鉴定

用热水从裙带菜茎中提取多糖,乙醇沉淀,Sevag法除蛋白,并采用DEAE-52和Sephadex G-200柱对其进行分离纯化,得到三种多糖纯品F2、F3和F4,纯度鉴定为均一组分.紫外光谱显示不含蛋白质、多肽及核酸,通过硅胶G色谱分析,F2、F3和F4中的单糖有半乳糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖醛酸,F2中除这四种单糖外,还含有葡萄糖和鼠李糖.     

灵芝免疫活性多糖的化学研究

从灵芝中分离得到免疫活性多糖BN₃B,进一步分离纯化得到4个多糖均一体,对其中主要成分BN₃B₁及BN₃B₃进行化学研究证明,BN₃B₁为含β-(1→6)及(1→3)甙键的葡聚糖,BN₃B₃为含β-(1→6)及(1→3)甙键的阿拉伯半乳聚糖。     

山药多糖的提取分离和结构测定

目的：提取分离并测定山药多糖的结构。方法：依次用水提取，乙醇和十六烷基三甲基溴胺盐沉淀法得到粗多糖；用萄聚糖凝胶柱层析和高效液相层析纯化多糖并测定分子量；甲基化分析和薄层层析分析多糖酸水解产物，结合IR和^13CNMR确定单糖组成、连接方式和端基碳构型。结果：从山药中得到两个均-多糖S1和S2。结论：S1和S2的分子量分别为63000和7400Dal，它们均为[α-D—Glc(1→4)-]n型萄聚糖。     

夏枯草抗疱疹病毒多糖的提取及纯化工艺研究

目的:优化夏枯草抗疱疹病毒多糖的提取及纯化工艺,为新药研究提供科学依据。方法:以多糖含量和浸膏得率为指标,采用L9(34)正交试验法对夏枯草多糖提取过程中的提取次数,加水倍量及提取时间3个因素进行优化研究;以多糖含量及体外抗单纯性疱疹病毒I型(HSV-1)活性为考察指标,对超滤和醇沉两种纯化技术进行比较。结果:最优水提工艺为第1次加水14倍,第2、3次加水12倍,提取3次,每次提取时间1.5 h;采用超滤和醇沉两种技术分别纯化所得多糖。通过MTT法测得醇沉多糖和超滤多糖抑制HSV-1的IC50分别为(93.99±13.12)μg/m L和(51.35±15.30)μg/m L,结果表明超滤技术制备的多糖提取物抗单纯性疱疹病毒活性显著高于醇沉技术。结论:采用超滤技术制备的夏枯草多糖具有较高的含量及抗单纯性疱疹病毒活性,可作为夏枯草多糖开发新药的纯化工艺。     

绞股蓝多糖的提取纯化和含量测定

通过正交设计实验,综合考虑提取效率和成本,优化了绞股蓝多糖的提取方法,并对绞股粗多糖进行了初步纯化,测定了提取物的糖含量,其含量水平较前有明显提高,这将为绞股蓝进一步开发生产奠定基础。     

南沙参多糖理化特性的研究

从南沙参根提取得到粗多糖,经DEAE-纤维素和葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析得到两个均一的多糖成分(AP-1、AP-3),平均分子量AP-1为8.3万,AP-3为6.3万。糖组成分析表明:AP-1为一葡聚糖,AP-3是含有葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸(5:1:1:3)的杂多糖。     

四君子汤免疫活性部位多糖SJZPS-Vb-1～2的分离纯化及理化性质研究

目的 :为四君子汤免疫药理作用的物质基础研究提供资料。方法 :以多糖对小鼠溶血素抗体生成反应的影响为药效评价指标 ,比较四君子汤复方多糖免疫活性部位 (SJZPS V)各组分 (SJZPS Va～d)的免疫活性 ;应用凝胶过滤法 ,自免疫活性最强的组分SJZPS Vb中分离得到 2个酸性多糖SJZPS Vb 1～ 2 ,分别采用比色法、凝胶过滤法、甲基化分析、GC、GC/MS联用等技术 ,进行了理化性质研究。结果 :SJZPS Vb 1～ 2的分子量分别为 3 83及2 6 0万 ;组成单糖及其分子摩尔比分别为 :SJZPS Vb 1glucose :galactose :mannose 1∶0 4 6∶2 15 ;SJZPS Vb 2 glucose:galactose :mannose 1∶1 4 1∶4 18。甲基化分析结果表明 ,SJZPS Vb 1及SJZPS Vb 2的组成单糖中 ,末端、4 、6 、4或 6位分支的甘露糖残基数目基本相当 ,而半乳糖的连接位点则有较大差别。结论 :SJZPS Vb 1及SJZPS Vb 2的免疫活性有待研究 ,其结构的异同与活性有否相关值得研究。