抗生素链霉菌与弗氏链霉菌原生质体的种间电融合

许多链霉菌能够合成抗生素、酶及抗肿瘤剂等各种重要产物。最近,原生质体融合已经成为菌株改良的有效技术。对于链霉菌原生质体融合,几乎专门使用聚乙二醇(PEG)作促融剂。然而,同新发展的电融合法比较,该法存在许多缺点。因此,电融合法正成为酵母、植物及动物细胞融合的常规方法。虽然电融合法正在不同范围内推广使用,但对于像链霉菌这么小的原生质体,至今尚未加以应用。本文论述由抗生素链霉菌a20和弗氏链霉菌f2所制备的原生质体的电融合。利用由显微镜载玻片和铝箔构成的微型融合室来监测链霉菌原生质体的融合过程。     

麦迪霉素产生菌—生米卡链霉菌原生质体融合的研究

用甘氨酸—溶菌酶方法成功地分离生米卡链要菌(S.mycarofaciens)原生质体。在MgSO_4加倍的完全培养基(cm)上,原生质体再生频率远远超过R_2再生培养基。用3.68％的CaCl_2溶液,配制成30％(w/v)的PEG4000或6000溶液,可有效地诱导生米卡链霉菌原生质体融合,融合重组频率10~(-2)～10~(-3)。融合重组体和亲本在菌落形态、孢子形态和抗生素产量上有显著差异,不同的融合重组体之间,也表现了这些差异。实验分离到抗生素生产能力超过亲本40％的C_(69)菌株,经紫外光诱变后,又获得抗生素能力超过亲本15％(均以两亲本的平均值计)以上的C_(64112)菌株。融合重组体对紫外光的敏感度低于亲本,而抗生素生产能力的正变频率超过亲本。     

链霉菌的原生质体融合

链霉菌中许多品种可以产生抗生素,为此引起人们对它们极大的兴趣。关于在链霉菌中可以通过种内结合的方法来产生低频重组(<10~(-6))进行遗传学分析早有报道~[8]。但最近发现,在人工诱导原生质体形成后,即使是在已知性因子缺失的情况下,也可以产生高频的重组。这样,对于链霉菌的遗传学分析方便多了,推动了链霉菌基础研究及应用研究的发展。 原生质体再生 通过原生质体融合在链霉菌中建立有效的基因转移方法必须解决两个问题。即从细胞如何形成原生质体以及原生质体如何在合     

黑暗链霉菌原生质体融合

报道了黑暗链霉菌原生质体制备和融合的方法。将一原养型亲株原生质体经紫外线灭活2分钟,与另一苯丙氨酸缺陷型突变株原生质体等量混合,40％PEG处理,32℃保温3分钟,获得了重组后代,经分析,融合子的代谢产物中次组分的含量有所降低。     

壮观链霉菌原生质体融合研究

壮观放线菌素产生菌 Streptomycesspectabilis 2233经紫外线诱变获得的营养缺陷型菌株 SS 612(thr~-)和 SS 624(his~-),采用溶菌酶脱壁形成原生质体后,进行种内融合。以营养缺陷作为选择标记,获得了大量异养型及原养型重组子。融合频率达15%。重组子遗传分析表明,异养型和原养型重组子数量大致相等。但异养型重组子的双重营     

链霉菌原生质体融合:原生质体经紫外线照射后的融合

几种链霉菌的原生质体在聚乙二醇存在下可以融合,并产生高比例的染色体基因的重组子。这一发现对这些重要的抗生素产生菌的经典和应用遗传学有很大的影响。在许多链霉菌中,在融合后在再生培养基上产生的孢子总数中,重组子的比例或含有重组子的单个再生菌落的比例是很高的——在最适条件下至少达20％——这对分析融合杂交或分离特定需要的重组基因型十分适用且不需要每个亲株有任何     

泰洛星产生菌弗氏链霉菌变株TM4—180的生物学特性

本文报道泰洛星产生菌弗氏链霉菌诱变株的生物学特性:(1)变株TM4—180是弗氏链霉菌(StrePtomyces fradiae)A41多次诱变衍生的产生泰洛星并对泰洛星有高抗性(Tyl~ Tyl~r)的变株,其泰洛星产量是原始菌种A41的18倍。(2)用紫外线、亚硝基胍和光敏诱变剂等诱变剂做菌种诱变,效果很好。筛选的Tyl~ Ty1~r菌株,如TM1-32、TM4—180等产生抗生素的能力为直接亲株的160～200％。(3)TM4-180经γ—射线处理获得阻断变株TM5-221、TM5—257,它们不产生泰洛星,但其发酵时能产生泰洛星,其效价是单独发酵的10～20倍。(4)TM5—257(Tyl~-Tyl~r)用紫外线处理得变株TM5-257-60,它是泰洛星生物合成的回复突变株,具有隔代亲株TM4-180的相同功能。(5)变株TM4-180及有关菌株(Tyl~r)对泰洛星具有抗性,在含5～10mg/ml的培养基中正常生长。而TM5—221等变株Tyl~3)对泰洛星敏感,可能泰洛星抗性基因tlr C缺失。抗药标记的变化,是DNA突变多样性的表现。     

诺西肽产生菌活跃链霉菌的原生质体制备与再生

目的研究诺西肽产生菌活跃链霉菌的原生质体制备与再生的最适条件。方法使用溶菌酶脱去细胞壁制备原生质体,并考察原生质体制备和再生的各种影响因素。结果确定了原生质体制备的条件:一级培养采用种子培养基,培养30 h,转种量的体积分数为5%;二级培养采用R2YE培养基,培养时间为32 h,最适甘氨酸质量浓度为6.0 g.L-1,最佳溶菌酶质量浓度为1.5 g.L-1,酶解时间为60 min,原生质体再生率达到5.3%。结论上述条件为活跃链霉菌原生质体制备与再生的最适条件,该条件的建立为活跃链霉菌原生质体的诱变育种奠定了基础。     

泰乐菌素产生菌弗氏链霉菌的代谢调节:磷酸盐控制泰乐菌素的生物合成

本文叙述了无机磷酸盐对弗氏链霉菌(S.fradiae NRRL 2702)生物合成泰乐菌素(tylosin)、胞内腺苷酸水平、能量负荷和合成泰乐交酯(tylonolide)前体有关酶活性的影响。在生产期中,增加无机磷酸盐的水平(2.3、4.6和9.2g/l),菌体代谢未受影响,细胞干重和抗生素合成都未变化。生长最适磷酸盐浓度常常对抗生素合成产生抑制效应,基础培养基中的磷酸盐浓度达4.6g/l,泰乐菌素的合成就受到明显抑制,胞内腺苷酸水平明显增加,整个发酵过程中,水平都     

链霉菌的原生质体融合与菌种选育

原生质体融合是生物工程中细胞工程的一个重要方面,对于广大育种工作者来说,它是当前最具吸引力的一项新技术。原生质体融合技术又称细胞融合技术,是一个人工实验系统。它将遗传性不同的两个细胞融为一个新的细胞。这种在细胞水平上的遗传操纵属细胞工程,是现代生物技术的一个重要方面。因用于植物和微生物时,要去掉细胞壁,故称原生质体融合。 毫无疑问,同在动植物和其它微生物中一样,在链霉菌中原生质体融合技术也普遍     

青霉素产生菌的原生质体融合

将细菌血红蛋白基因引入青霉素产生菌产黄青霉H－106中而获得了产黄青霉基因工程菌1M5。产黄青霉20^#是一个青霉素产量高但产孢子能力偏低的生产菌。为提高产黄青霉的产量及产孢子能力，降低产黄青霉对氧的需求，我们采用原生质体融合技术，将通过UV诱变处理的检出的产黄青霉基因工程菌1M5 Met^-缺陷型菌株和产黄青霉20^#Arg^-缺陷型菌株分别用Novozyme 234和Cellulase R-10(1∶1）混合酶处理所得原生质体按1∶1混合后加入30％聚乙醇6000融合，产物分离纯化，得到融合株C－396^#菌株，其青霉素产量和产孢子能力都有所提高，对氧的需求有所降低。     

质粒间重组后弗氏链霉菌的新霉素磷酸转移酶基因在大肠杆菌内的表达

体外重组和分子克隆的技术促进了一种微生物的基因在另一个种系发生的远缘种内表达的研究。例如,已证实不同的革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和环状芽孢杆菌)的基因在大肠杆菌内表达。已构建能在链霉菌和大肠杆菌中复制的双功能复制子;链霉菌DNA     

林可链霉菌与委内瑞拉链霉菌种间原生质体融合的研究

本文报道氯霉素产生菌委内瑞拉链霉菌A-186株与林可霉素产生菌林可链霉菌林可变种78-11株种间原生质体融合的结果。首先,研究了委内瑞拉链霉菌A-186的原生质体制备和再生条件,再生率可达86％。然后,采用氯霉素产生菌S.venezuelae A-186的原生质体用紫外线灭活后,与具有耐药标记的S.lincolnensis var.lincolnensis78-11原生质体融合的方法,种间融合频率达到3.2×10~(-5) 。并筛选到一株遗传稳定的重组子,经初步鉴定它能同时产生两亲株所产的两种抗生素。     

生米卡链霉菌与北里链霉菌种间原生质体融合重组的研究

生米卡链霉菌和北里链霉菌用42％PEG4000做助融剂进行多配对原生质体种间融合,融合率为10~(-2)。同时,进行了UV灭活亲株的种间融合,融合率也为10~(-2)。采用液体培养基再生,表观融合率达10~(-1)。随机挑选形态各异的一定数量的融合子作产物分析,发现它们产生柱晶白霉素,总效价比直接亲本高5.9倍,比间接亲本高27％。高效液相色谱测定表明A_5组份从9.1％提高到43.4％。     

金色链霉菌原生质体电融合

为了提高去甲基金霉素的发酵效价,将金霉素链霉菌产生去甲基金霉素的变株的原生质体与金霉素高产变株热灭活的原生质体,用非交流电场法和交流电场法进行了电融合。在非交流电场法实验中。先用25％PEG将原生质体聚集,再以BAEKON 2000和SDⅡ型二种基因转移仪,采用几种不同的实验参数(脉冲强度、宽度和个数)进行融合,皆未能提高融合频率。交流电场法融合实验用SD3000细胞融合仪,当原生质体在交流电场(频率0.5MHz,强度800v/cm,作用时间60s)中形成串珠状后,施加直流脉冲(脉冲强度7kv/cm,宽度20μs,间隔0.5s,个数3),融合频率为2×10~(-4)左右,比50％PEG诱导的融合频率(2.5×10~(-5)高约一个数量级。对225株融合子进行了初筛发酵和效价测定。结果表明,其中效价高菌株所占百分数高于对照组(去甲基金霉素产生菌不同营养缺陷型的融合子),而且85％以上的融合子只产生去甲基组分。尽管融合子的发酵效价皆不稳定,但经过几次自然分离后仍获得了产量比出发菌株提高一倍左右并只产生去甲基组分较为稳定的融合子菌株。     

抗生素产生菌链霉菌基因表达的调节

Jacob和Monad对大肠杆菌K12菌株Lac操纵子的杰出研究距今已二十五年了。这些年来,众多天赋的科学家们已把这个相当简单的生物变成了了解基因结构和表达的微观世界。直到最近还证明“热休克”反应时所开启的那些基因的分化表达是依赖于迄今仍未知的一种RNA聚合酶。不过,在许多方面还会取得一些新进展。尽管如此,对在遗传能力上超出大肠杆菌的其它一些细菌也有必要进行广泛而深入的研究,链霉菌就属于这类细菌的范畴。链霉菌是革蓝氏阳性细菌,有两个显著的特征,一是形态发育的复杂性,包括了产生分枝菌丝和形成孢子。二     

抗生素产生菌原生质体融合技术的研究进展

原生质体融合技术又称细胞融合技术,是一个人工实验系统,它将遗传性不同的两种细胞融合为一种新细胞。这种在细胞水平上的遗传操作属细胞工程,是现代生物技术的一个重要方面,因该技术用于植物及微生物时,要去掉细胞壁,故称原生质体融合。从该技术现有内容来看,它不再仅仅是原生质体融合,而且已形成了以原生质体为基础的DNA或质粒DNA转化、转导技术,它们是基因工程不可缺少的组成部分。     

螺旋霉素产生菌螺旋霉素链霉菌遗传育种

本文是利用抗生素抗性与产量之间的相关性来进行螺旋霉素产生菌螺旋霉素链霉菌的遗传育种,旨在获得高效价菌株,从而提高螺旋霉素的生产水平。首先用正交试验法确定出发菌株最佳发酵培养基,并在此基础上通过紫外线诱变,和在螺旋霉素浓度梯度平板上筛选螺旋霉素抗性菌株。按上述方法理性化筛选得到的菌株多为正突变株。从本实验得到一株螺旋霉素抗性菌株SPM~r-248,其抗性较出发菌株提高300％,生产能力较出发菌株提高81.3％。菌株SPM~r-248的高效价生产性能遗传特性稳定。在7m~3罐做发酵放大,与出发菌株相比,发酵效价提高31.4％,发酵指数提高18.8％,具有一定的学术意义和经济价值。     

抗生素产生菌链霉菌基因表达与调节

链霉菌属于革蓝氏阳性细菌,具有两个不同于其他原核生物的特点:一是形态发育过程中,形成菌丝分枝及孢子;二是能够合成许多不同的代谢物.至今链霉菌仍是抗生素和其他生理活性物质最丰富的微生物来源.链霉菌具有显著的分化基因表达能力,从它的发育史可以表明.例如孢子含有的基因产物在其发芽的菌丝中是没有的.菌丝的分枝可能是与使细胞壁肽聚糖链重排的酶活性有关,形态遗传的特性是气生菌丝形成分隔期特殊基因活性的反映.     

螺旋霉素产生菌螺旋霉素链霉菌遗传育种

利用抗生素抗性与产量之间的相关性进行螺旋霉素产生菌螺旋霉素链霉菌的遗传育种,旨在获得高产菌株,提高螺旋霉素的生产水平。首先用正交试验法确定最佳发酵培养基,可使发酵单位提高25%。再通过紫外线