制动致福利损伤大鼠肝细胞中NF-κB表达的研究

【摘要】 目的 研究制动导致的福利损伤大鼠肝细胞内NF-κB的表达变化。 方法 选取?70gSD大鼠,雌雄各半,使用制动的方式造成其福利损伤,记录实验过程中的体增重和饲料消耗,而后分别使用实时定量PCR和免疫印迹法检测大鼠肝细胞内NF-κB p65的mRNA量和蛋白表达水平。 结果 与对照组相比,制动组大鼠的体增重和饲料能耗比均降低,且差异极显著（P＜0.01）;肝细胞中NF-κB p65的mRNA量和蛋白表达水平均大幅提升,同样差异极显著（P＜0.01）。其中制动组雄性大鼠的NF-κB p65的mRNA量和蛋白表达水平显著高于雌性（P＜0.05）,但对照组大鼠的雄性与雌性之间未表现出差异（P＞0.05）。 结论 实验大鼠福利受损时,肝细胞中NF-κB表达水平大幅提升,提示两者之间存在一定关联,表明NF-κB参与了大鼠福利损伤过程。     

大鼠实验性急性脊髓损伤时NF-κB表达的研究

目的探讨大鼠实验性急性脊髓损伤时NF κB表达的变化。方法应用免疫组织化学、电泳迁移率变化分析 (electrophoreticmobilityshiftassays,EMSA)、Westernblotanalysis(WBA)等方法 ,对脊髓胞核与胞浆内NF κB在各个时点表达的变化进行了系统观察。结果急性脊髓创伤性损伤中可使脊髓胞浆和胞核内NF κB的表达明显升高。结论NF κB被激活是急性脊髓损伤继发性损伤的重要分子机制。     

葛根素注射液对大鼠光损伤视网膜中NF-κB表达的影响

目的：探索葛根素（puerarin）对大鼠光损伤视网膜中NF-κB表达的影响。方法：48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、低剂量组和高剂量组。采用YZ20T眼科手术显微镜,距角膜距离为（150±3）mm照射右眼,照射时间为30 min,照度为（22 000±1 000）勒克斯建立急性光损伤模型。低剂量组、高剂量组尾静脉注射葛根素,空白组、模型组尾静脉注射等量生理盐水。每日1次,连续给药7 d。7 d后取眼球,观察视网膜外核层组织形态学及检测外核层细胞数,通过免疫组化测定视网膜中NF-κB的表达。结果：模型组视网膜外核层变薄,细胞减少,细胞排列较正常组稀疏,内外节排列紊乱,分界不清;低剂量组视网膜形态有改善。空白组视网膜外核层细胞浆中NF-κB阳性物质含量较多,模型组视网膜外核层细胞浆中NF-κB阳性物质含量较少。各用药组视网膜外核层细胞浆中NF-κB阳性物质有不同程度增加。结论：葛根素对手术显微镜导致的视网膜光损伤有修复作用,其作用机制可能是通过增加NF-κB的表达,从而拮抗细胞凋亡。     

细胞角蛋白18真核表达载体的构建及其对NF-κB信号通路的影响

目的 构建人细胞角蛋白18(CK18)真核表达载体,以研究CK18与NF-κB信号通路的关系.方法 经PCR扩增CK18基因片段,用pCMV-Myc及pDsRed1-N1载体构建真核重组质粒,瞬时转染HEK293细胞,用Western blot方法检测pCMV-Myc-CK18的表达,在荧光显微镜下观察pDsRed1-N1-CK18的定位情况.用双荧光素酶报告基因系统,检测CK18对NF-κB信号通路的影响.结果 构建了人CK18真核表达载体,发现CK18定位于细胞质,并抑制NFκB的转录活性.结论 构建了人CK18真核表达载体,CK18负调控NF-κB信号通路.     

乙醛调控大鼠HSC中NF-κB的表达及其意义

目的: 研究从大鼠肝脏中新鲜分离的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)在乙醛刺激下的增殖、IκB和NF-κB的表达,以探讨乙醛调控HSC中IκB和NF-κB的表达及其意义.方法: 用链霉蛋白酶、胶原酶以及密度梯度离心法分离培养大鼠肝星状细胞.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、免疫组化(Immunohistochemistry)和凝胶电泳迁移率法(EMSA)分别检测肝星状细胞的增殖、IκB和NF-κB的表达.结果: ①成功分离出大鼠肝星状细胞;② 200 μmol/L的乙醛刺激新分离培养的肝星状细胞后,细胞增殖明显[乙醛组A值(2.21±0.10),空白组(0.52±0.05),P＜0.01];③ 200 μmol/L的乙醛刺激传一代肝星状细胞后,IκB的表达量下降明显[乙醛组光密度值(0.32±0.02),空白组(1.60±0.32),P<0.01];④乙醛刺激传一代肝星状细胞后30 min,NF-κB的表达即有增加,到120 min时达最高值[乙醛组光密度值(3.92±0.82),空白组(0.82±0.04),P<0.01].结论: 乙醛可以使静止的肝星状细胞中IκB表达下降和NF-κB活性增加,从而使HSC活化增殖.     

大鼠脑挫伤后脑组织NF-κB表达与损伤时间的关系

目的观察大鼠实验性脑挫伤后不同时间内脑组织核转录因子（NF-κB）表达的变化,探讨NF-κB与脑损伤经过时间的关系。方法参照Feeney’s法建立大鼠脑挫伤模型,在伤后1h,4h,12h,48h,72h,7d,14d,运用Westernblot法分别检测NF-κB的表达量,以非损伤组做为对照。结果NF。KB表达在损伤后1h出现,12h即达到高峰,48h开始下降,7d后表达量仍高于对照组,14d后表达量基本恢复至接近对照组水平,各实验组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NF-κB在脑挫伤后的表达经历了一个先快速升高后又下降到接近正常水平的过程,其表达的时序性变化可望成为临床法医学脑挫伤的早期鉴定及推断脑损伤时间的指标之一。     

NF-κB在脑缺血再灌注损伤中的双重作用

核因子-κB(nuclear factor-kappaB，NF-κB)是一种重要的核转录因子，参与许多基因的表达，包括细胞因子、生长因子、急性期蛋白、黏附分子、转录因子、细胞表面受体等。它广泛存在于真核细胞中，在机体免疫、细胞发生与凋亡中起重要作用。近年来发现神经细胞和脑血管内皮细胞中都含有NF-κB位点，其与脑缺血时细胞死亡有密切关系。     

慢性肾衰竭大鼠主动脉NF-κB的表达变化

目的探讨尿毒症时主动脉局部炎症信号NF-κB表达变化。方法采用单肾切除、对侧肾动脉部分结扎法建立慢性肾衰竭模型，RT-PCR检测NF-κB p65亚基、I-κB mRNA表达水平，免疫组织化学检测p65亚基蛋白表达，凝胶迁移率法测定NF-κB活性，并用图像分析定量。结果与正常大鼠比较，慢性肾衰竭大鼠主动脉NF-κB p65亚基mRNA表达水平显著升高（P〈0．01），而I-κB mRNA表达水平显著降低（P〈0．01），NF-κB p65亚基蛋白表达和活性也显著增加（P〈0．01），并随病程延长而进一步上升。蛋白酶体抑制剂MG-132可明显抑制慢性肾衰竭大鼠主动脉NF-κB组分表达和活性升高。结论慢性肾衰竭大鼠主动脉NF-κB炎症信号通路存在显著活化。     

缺血再灌注损伤中PC12细胞胞质Ca2+浓度变化和NF-κB的表达

目的:建立大鼠肾上腺嗜络细胞瘤细胞(PC12)的缺血再灌注模型,观察其在缺血再灌注损伤中细胞胞质Ca2+浓度变化和NF-κB表达情况. 方法: 将传代培养的PC12细胞在特制装置中进行缺血再灌注处理,建立研究所需要的细胞模型,运用激光共聚焦显微镜检测不同处理条件下胞质的Ca2+浓度;应用免疫细胞化学、流式细胞术对NF-κB的表达进行检测. 结果: 试验组与对照组相比,胞质Ca2+浓度和NF-κB的表达均有升高,并于再灌注30 min左右达到高峰(P<0.01). 结论: 细胞胞质Ca2+和NF-κB可能在PC12细胞的缺血再灌注损伤机制中起着重要作用.     

大鼠高血压性脑出血血肿周围组织NF-κB的表达

①目的　观察大鼠高血压性脑出血血肿周围组织在不同时间点核因子 κB(NF κB)的表达情况。②方法　 72只Wistar大鼠随机分为对照组和出血组 ,大鼠高血压性脑出血模型采用双侧肾动脉前支部分热凝 ,立体定位仪下自体血脑内注入法建立。各组在相应时间点用SABC染色法检测血肿周围组织NF κB的表达。③结果大鼠高血压性脑出血后 2h后即开始表达 ,8h达到高峰 ,持续至 5d开始下降 (F =84 .397,q =5 .5 8～ 8.37,P <0 .0 1)。④结论　高血压性脑出血后早期即有NF κB的表达 ,并参与了出血后周围脑组织的继发性损伤过程。     

NF-κB在心肌梗死中表达量的变化及其意义

目的：为了研究NF-κB p65表达量在心肌梗死中的变化。方法：对大鼠进行心肌梗死造模,而后运用半定量PCR和Western blot技术分别在mRNA和蛋白水平上检测梗死心肌组织中p65表达量的变化。结果：造模成功,且在手术组中,p65在mRNA和蛋白水平上的表达量明显高于假手术组和正常组（P〈0.05）。结论：NF-κB p65的表达量与心肌梗死有密切关系。     

缺血后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤及NF-κB表达的影响

[目的]探讨缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤影响。[方法]夹闭左侧肾动脉60 min后再灌注6 h法制备肾脏缺血再灌注损伤模型。雄性SD大鼠18只随机分为3组：缺血再灌注组（IR组,n=6）,缺血后处理组（IPO组,n=6）,假手术组（Sham组,n=6）。测定血肌酐（Cr）浓度、尿素氮（Bun）,检测肾脏组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和髓过氧化物酶（MPO）活性;取左肾组织行HE染色,光镜下观察肾组织病理学改变,免疫组化法检测肾组织中NF-κB表达。[结果]与Sham组比较,IR组血Cr浓度和血Bun浓度上升,达到（93.02±13.44）μmol/L和（15.58±0.56）mmol/L（P〈0.01）,SOD活性下降为（185.87±17.68）U/mgprot（P〈0.01）,MDA含量和MPO活性增加分别达到（4.09±0.34）nmol/mgprot、（0.90±0.07）U/g（P〈0.01）。与Sham组比较IPO组血Cr、Bun浓度、MPO活性差异有统计学意义（P〈0.05）,SOD活性和MDA含量差异无统计学意义;病理损伤明显,肾脏组织中NF-κB表达增强。与IR组比较,IPO组血Cr和血Bun浓度降低分别为（58.98±8.02）μmol/L（P〈0.01）、（9.45±1.03）mmol/L（P〈0.01）,SOD活性升高为（230.90±9.19）U/mgprot（P〈0.01）,MDA含量降低为（3.67±0.20）nmol/mgprot（P〈0.01）,MPO活力降低为（0.78±0.06）U/g（P〈0.01）,病理损伤减轻,肾脏组织NF-κB表达减弱。[结论]缺血后处理对肾脏有保护作用,其机制与增强肾脏抗氧化能力,减轻肾脏组织炎性细胞浸润和抑制肾组织NF-κB表达有关。     

心肺复苏后大鼠脑神经元中NF-κB的表达

目的探讨全脑缺血再灌注后大鼠脑神经细胞中NF-κB的表达及其作用.方法 28只SpragueDawley大鼠,随机分成假手术组(对照组)以及复苏后3、6、12、24h组.采用窒息合并0.5mmol/L冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停-心肺复苏模型,停跳5min后开始心肺复苏,采用免疫组化法观察复苏后各时间段神经细胞中NF-κB的表达情况.结果复苏后6、12h海马区NF-κB表达明显增加,至24h已达11.2%,与对照组比较均有显著差异(P＜0.05);海马区周围的胶质细胞也有NF-κB表达.结论 NF-κB在大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞中的表达增加,可能具有保护和损伤双重作用.     

利多卡因对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织细胞间NF-κB表达的影响

目的观察利多卡因对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织细胞间NF-κB基因表达的影响,探讨利多卡因脑保护作用的机制。方法雄性SD大鼠32只,随机分为假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、利多卡因大剂量组(C组)和利多卡因小剂量组(D组),缺血前10min腹腔注射。脑缺血10min再灌注24h时,断头处死大鼠。用RT-PCR技术检测海马组织NF-κB的表达,用免疫组织化学、蛋白印记(westernblot)方法检测NF-κB蛋白表达情况。结果脑缺血再灌注后海马组织NF-κBmRNA及蛋白表达水平增高,利多卡因可下调NF-κB表达,缺血再灌注后,海马区神经元细胞出现明显坏死,利多卡因可减轻海马区神经元损伤。结论利多卡因可能通过抑制NF-κB基因表达而对脑缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。     

心肺复苏后大鼠脑神经元中NF-κB的表达

目的探讨全脑缺血再灌注后大鼠脑神经细胞中NF-κB的表达及其作用.方法 28只SpragueDawley大鼠,随机分成假手术组(对照组)以及复苏后3、6、12、24h组.采用窒息合并0.5mmol/L冰氯化钾停跳液致大鼠心跳骤停-心肺复苏模型,停跳5min后开始心肺复苏,采用免疫组化法观察复苏后各时间段神经细胞中NF-κB的表达情况.结果复苏后6、12h海马区NF-κB表达明显增加,至24h已达11.2%,与对照组比较均有显著差异(P＜0.05);海马区周围的胶质细胞也有NF-κB表达.结论 NF-κB在大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞中的表达增加,可能具有保护和损伤双重作用.     

肝细胞肝癌中survivin?caspase-3和NF-κB的表达及其相关性

目的:探讨survivin、caspase-3、NF-κB在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,及其与临床病理指标的关系.方法:采用免疫组织化学技术检测40例HCC组织及10例正常肝组织中survivin、cagpase-3、NF-κB的表达情况.结果:survivin在HCC组织阳性表达率为67.5%,在对照组中不表达,两者比较有显著性差异(χ2=12.082,P<0.05);门静脉癌栓者阳性表达率高于无门静脉癌栓者(χ2=5.405,P<0.05);有远处转移者阳性表达率高于无远处转移者(χ2=4.596,P<0.05).caspase-3在HCC组织阳性表达率为35.0%,在对照组中表达率为80.0%,两者比较有显著性差异(χ2=4.875,P<0.05).NF-κB在HCC组织阳性表达率为77.5%,在对照组中不表达,两者比较有显著性差异(χ2=17.238,P<0.05);中低分化阳性表达率高于高分化(χ2=4.198,P<0.05).cagpase-3的表达与survivin的表达呈负相关(r=-0.679,P<0.05);NF-κB的表达与survivin的表达呈正相关(r=0.519,P<0.05).结论:survivin、caspase-3、NF-κB在HCC的发生、发展中起着不同程度的作用;联合检测survivin、cagpase-3、NF-κB,有助于对HCC恶性程度的判定及侵袭转移能力的评估,进而为HCC的预后分析及临床治疗提供依据.     

姜黄素对肺纤维化大鼠肺组织NF-κB和IκBα表达的影响

目的观察姜黄素对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织NF-κB和IκBα表达的影响。方法 SD雄性大鼠144只,随机分为假手术组、模型组、醋酸泼尼松组及姜黄素高、中、低剂量组,每组24只。假手术组大鼠气管内一次性滴注等体积的生理盐水,余各组滴注盐酸博莱霉素。造模后第1天开始给药,持续到处死动物的前1天。各组动物于第7天、14天、28天随机处死8只,取肺组织分别采用免疫组化及Western-blot方法结合图像分析来检测各组大鼠肺组织中的NF-κB和IκBα表达水平。结果与假手术组相比,第7天、14天、28天时模型组大鼠肺组织中NF-κBp65的含量均显著升高（P〈0.01）,而IκBα的含量均显著降低（P〈0.01）;与模型组相比,醋酸泼尼松组及姜黄素高、中、低剂量均可降低大鼠肺组织中NF-κBp65的含量,而升高IκBα的含量,其中7 d、14 d时姜黄素中剂量组IκBα的含量升高较为显著（P〈0.01）,28d时,姜黄素高剂量组IκBα的含量升高最为显著（P〈0.01）。结论一定剂量姜黄素能促进肺组织中IκBα的表达,而抑制NF-κB的活化和表达。     

NF-κB与心肌缺血／再灌注损伤的相关性

缺血，再灌注损伤（Ischemic reperfusion injury，RPI）指心肌血供中断，一定时间内恢复血供．原缺血心肌发生较血供恢复前更严重的损伤。NF-κB是一种具有多向性调节作用的核转录因子．广泛调控与免疫反应、应激反应和炎症反应相关的基因表达。已经证实。心脏的缺血，再灌注可引起心脏局部某些细胞因子、粘附分子的过度表达。     

辛伐他汀对丙烯醛暴露大鼠NF-κB表达的影响

目的通过检测辛伐他汀对大鼠肺组织中NF活性的影响,了解其对减少丙烯醛引起的气道黏液高分泌的可能机制。方法大鼠雾化吸入丙烯醛建立气道黏液高分泌模型。干预组在雾化吸入丙烯醛同时用不同浓度辛伐他汀灌胃。蛋白印迹（western blot）检测MUC5AC蛋白的表达,凝胶阻滞迁移分析方法（EMSA）检测NF-κB的活性。结果丙烯醛吸入刺激后12天,与正常对照组相比,MUC5AC蛋白、NF-κB活性增加。辛伐他汀干预后,与丙烯醛组相比,MUC5AC蛋白、NF-κB活性降低,应用甲羟戊酸后可以部分抵消辛伐他汀的作用,使MUC5AC蛋白产生、NF-κB活性增加。结论辛伐他汀可抑制丙烯醛所致气道粘液高分泌,其部分机制可能通过甲羟戊酸途径抑制NF-κB活性。