Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的研制

目的 以Vero细胞为基质,研制安全有效的乙型脑炎灭活疫苗.方法 将经Vero细胞适应的乙型脑炎病毒P3株接种Vero细胞,培养后收获病毒液.采用β-丙内酯灭活,通过超滤浓缩、硫酸鱼精蛋白沉淀、蔗糖密度梯度离心等方法纯化病毒,最终配制成预防乙型脑炎病毒感染的疫苗.通过临床试验考察疫苗的安全性及免疫原性.结果 该疫苗的主要考核指标,如病毒滴度、总蛋白含量、Vero细胞DNA残留量、效价等均符合国家标准.临床观察结果显示,接种本疫苗后局部及全身反应轻微;各年龄组乙型脑炎病毒中和抗体阳转率均>90%.结论 采用本法制备的疫苗安全有效.     

流行性乙型脑炎疫苗致不良反应2例

20 0 2年 ,我院儿科共接种适龄儿童流行性乙型脑炎 (乙脑 )疫苗 13 8例次 ,出现严重不良反应 2例。报道如下。1　临床资料接种乙脑疫苗 13 8例次 ,其中 8个月～ 6岁 3 7例次 ,剂量0 .5ｍＬ ,～ 10岁 10 1例次 ,剂量 1ｍＬ ,均在院内接种。注射部位 :上臂三角肌皮下。严格执行“三查七对”和无菌操作常规 ,所有接种均在早餐后进行。流行性乙型脑炎疫苗 (简称乙脑疫苗 ,卫生部兰州生物制品研究所生产 ,批号 :2 0 0 0 0 40 2 ) ,有效期内使用 ,稀释液为同批号产品 ;一次性 2 .5ｍＬ注射器 (湖北天宇医药用品有限公司生产 ,批号 :3 15 0 2 4) ,…     

乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK21细胞上传代后的基因序列研究

目的：研究乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK₂₁细胞上传代后的病毒基因序列,以深入控制乙型脑炎减毒活疫苗的安全性。方法：将乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK₂₁细胞上连续传代,选取第二代病毒（P2）、第五代病毒（P5）、第十五代病毒（P15）提取RNA,反转录为cDNA后,进行各代病毒全基因序列分析,分析与乙型脑炎病毒毒力密切相关的关键位点基因是否发生改变。结论：乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2在BHK₂₁细胞上传5代后,病毒E蛋白上关键基因第279位（E279）氨基酸由甲硫氨酸（M）突变为赖氨酸（K）。     

乙型脑炎减毒活疫苗病毒中国SA14-14-2株在原代狗肾细胞培养中的适应和人用疫苗的制备

作者将乙型脑炎(JE)病毒SA14-14-2株在原代狗肾细胞(PCK)、原代鸭胚细胞(PDE)和恒河猴肺二倍体细胞(FRhI-2)中培养传代,结果在PCK细胞中传4代后,病毒滴度可达6.01og_(10)蚀斑形成单位(PFU)/ml,经进一步传代仍可维持该滴度,因此,选择PCK细胞作为制备疫苗种子病毒的细胞基质.疫苗种子病毒(PCK-7)在LLC-MK2细胞内的蚀斑形态为均匀的小型蚀斑,而亲本株的蚀斑则大小不一.但在高温培养时,根     

乙型脑炎减毒活疫苗原液的残余PHK细胞蛋白检测方法的验证

 目的   验证PHK细胞残余蛋白检测试剂盒检测乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）原液的残余PHK细胞蛋白的适用性。 方法   对PHK细胞残余蛋白检测试剂盒检测乙脑疫苗原液的残余PHK细胞蛋白的准确性、精密度、专属性、耐用性和线性进行验证。 结果   PHK细胞残余蛋白检测试剂盒检测乙脑疫苗原液的残余PHK细胞蛋白的准确性良好,PHK细胞蛋白标准品的回收率为96.16%~111.44%。该试剂盒在PHK细胞蛋白质量浓度为6.25~200.00 μg/L时呈现良好的线性,决定系数为0.997,最低检测限和最低定量限分别为6.70和22.33 μg/L。该试剂盒检测乙脑疫苗原液中的残余PHK细胞蛋白的专属性良好,而且操作人员、时间和试剂盒批号变化对检测结果没影响（相对标准偏差均≤15%）。 结论   PHK细胞残余蛋白检测试剂盒适用于乙脑疫苗中的残余PHK细胞蛋白检测。     

乙型脑炎减毒活疫苗检定用BHK21工作细胞库的质量控制

目的  对乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）检定用BHK21工作细胞库进行全面质量控制以确保其质量。方法  按照《中华人民共和国药典》2010年版三部收录的细胞鉴别试验、无菌检查、支原体检查、外源病毒污染检查和病毒敏感性检查方法,对检定用BHK21工作细胞库进行全面质量检定。结果  待检BHK21细胞的同工酶电泳图谱与BHK21细胞标准图谱一致。细菌、真菌、支原体、外源病毒检测结果均符合规定要求。病毒敏感性检测显示,待检BHK21细胞培养的乙脑疫苗病毒滴度为6.93 IgPDF/ml,与合格BHK21细胞培养的乙脑疫苗（病毒滴度为6.89 IgPDF/ml）相似,均达到质量标准要求（6.48~7.12 IgPDF/ml）。结论 合格的BHK21工作细胞库可用于乙脑疫苗的质量检定来保证乙脑疫苗质量。     

小鼠对乙型脑炎减毒疫苗株SA14-14-2的免疫应答

中国使用的乙型脑炎（JE）减毒活疫苗株SA14-14-2是由野毒株SA14减毒而来。SA14-14-2株在小鼠中的神经毒力明显低于SA14株。本文作者将SA14和SA14-14-2株在BHK-21细胞内蚀斑纯化后再在C6/36细胞内传3代,分别得到SA(V）和SA(A）株。对4周龄ICR品系小鼠腹腔接种10~4空斑形成单位（PFU）SA(V）或SA（A）,于接种后不同时间取脑、脾和血液,用BHK-21细胞蚀斑法     

乙型脑炎减毒活疫苗病毒滴定用BHK21细胞密度和代次的确认

 目的  确定乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗病毒滴定使用的BHK₂₁细胞的密度和代次范围。方法  抽取20批不同代次BHK21细胞在6孔细胞板内培养成单层,进行细胞计数,计算细胞密度,滴定同批次乙脑病毒滴度国家参考品。将BHK₂₁细胞从P95传代至P105,观察细胞形态及生长情况,与已用于检定的BHK21细胞（＜P95）对比。用P95~P105 BHK₂₁细胞重复6次滴定同批参考品,对滴度结果进行双因素方差分析,并与21细胞的病毒滴度检测结果进行趋势分析比较。结果  20批6孔板单层BHK21细胞密度均值1.55×10⁶  个/ml,差异较大（95%置信区间：7.89×10⁴～3.02×10⁶  个/ml）。病毒滴度结果均在规定范围内（6.48~7.12 lg蚀斑形成单位/ml,相对标准偏差<5%）,单层细胞密度对滴度结果无显著影响。P95~P105 BHK21细胞的生长情况及细胞形态与F=0.13,P=0.721 4）、不同细胞代次（F=1.17,P=0.337 6）及两者的交互作用（F=0.30,P=0.978 0）对检测结果的影响无统计学意义,试验结果与较低代次细胞（21细胞密度对滴度检测结果无显著影响。     

乙型脑炎减毒活疫苗单一病毒收获液在2～8℃条件下储存的稳定性研究

目的 考察在现行工艺规定的2～8℃储存条件下,乙型脑炎减毒活疫苗(乙脑活疫苗)单一病毒收获液病毒滴度的稳定性.方法 取常规生产中收获的高、中、低滴度的单一病毒收获液各6批,按正常生产程序和工艺条件储存于2～8℃,自第5天起每隔1d无菌取样,进行病毒滴定,采用极差控制图、线性回归、单因素方差分析等方法对收获液的病毒滴度结果进行统计分析.结果 常规生产中高、中、低滴度段的单一病毒收获液在2～8℃储存21 d,各单一病毒收获液的病毒滴度均呈下降趋势,并且不同滴度段病毒收获液间的日均下降滴度差异无统计学意义(F=1.67,P=0.222),总体日均下降滴度为0.036 lg蚀斑形成单位/ml.结论 掌握了单一病毒收获液在工艺规定储存条件下的滴度下降趋势及日均下降水平,为乙脑活疫苗半成品的点配制及其病毒滴度的一致性控制提供了数据支持.     

韩国儿童初免和加强免疫乙型脑炎病毒SA14-14-2株疫苗后的免疫应答

乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）ＳＡ１４－１４－２株减毒活疫苗由中国研制，为评价其在中国以外地区的使用效果，作者对韩国儿童初次和加强免疫该疫苗后的免疫应答进行了研究。研究对象为乙型脑炎低流行区的１～３岁儿童，对８４名儿童接种由中国成都生物制品研究所生产的ＳＡ１４－１４－２疫苗，滴度为６．８ｌｏｇ＿（１０）ｐｆｕ／０．５ｍｌ，其中６８名儿童为初免，１６名儿童有ＪＥＶ灭活疫苗接种史或ＪＥＶ接触史。另外，以２５名接种过２剂灭活疫苗（中山株）的儿童作为对照。采集所选对象免疫前和免疫后４周的静脉血，用蚀斑减少中和试…     

嵌合乙型脑炎活疫苗的Ⅱ期临床试验[英]／Monath TP，Guirakhoo F，Nichols R，et al／／J Infect Dis

美国Acambis公司Monath等以黄热病(YF)17D疫苗(YF-VAX)为载体，用乙型脑炎(JE)病毒SA14-14-2株的前膜和包膜蛋白基因(prM-E)取代其相应基因，制成载体活疫苗ChimeriVax-JE(CV-3E)，并进行Ⅱ期临床观察。