酶联免疫吸附法检测宫颈脱落细胞p16INK4a蛋白

目的 检测宫颈脱落细胞中p16INK4a蛋白,试图建立一种新的宫颈癌筛查方法 .方法 选取同时行液基细胞学(TCT)检查和宫颈组织活检的标本1356例.在进行活检之前所有标本用棉签拭子获取新鲜的宫颈脱落细胞,并用细胞刷取材行TCT检测.用ELISA方法 检测棉签拭子获取细胞及TCT保存液固定的宫颈脱落细胞中的p16INK4a蛋白的表达.结果 TCT方法 用于筛查宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变(CIN)的敏感性和特异性分别为82.93%和88.11%:ELISA方法 检测新鲜宫颈脱落细胞中的p16INK4a表达用于筛查的敏感性和特异性分别为87.80%和92.43%,其敏感性和特异性均优于TCT检查(P=0.023和P<0.001),ELISA检测p16INK4a蛋白的阳性率与宫颈病变程度呈正相关(r=0.774,P<0.001).结论 ELISA检测宫颈脱落细胞中p16INK4a表达用于筛查宫颈癌及CIN,其敏感性较高,特异性较强,有望成为一种新的宫颈癌筛查方法 .     

HPV16／18、survivin与宫颈癌进展关系的相关性及临床意义

【目的】探讨HPV16／18和survivin在宫颈癌进展中的相关性及临床意义。【方法】选择高危宫颈癌患者108例做常规宫颈脱落细胞和分泌物PCR-HPV-DNA检查,并在阴道镜下行宫颈多点活检做病检和免疫组化,比较不同分级HPV感染阳性率和survivin蛋白表达阳性率,分析HPV-DNA基因表达与sur-vivin蛋白表达的相关性。【结果】宫颈上皮内瘤样病变Ⅰ级（CINⅠ）、CINⅡ、CINⅢ级和宫颈癌患者的宫颈HPV16／18感染阳性率分别为42．42％、61．90％、68．42％和82．86％,显著高于正常体检者的15．00％,其差异有统计学意义（P＜0．05）;CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级和宫颈癌患者的宫颈survivin蛋白表达阳性率分别为81．82％、90．48％、100％和100％,显著高于正常体检者阳性率的10．0。％,其差异均有统计学意义（P〈0．05）;CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级和宫颈癌患者的HPVl6／18-DNA基因表达与survivin蛋白表达存在正相关（P〈0．05）。【结论】HPVl6／18和survivin与宫颈癌进展关系密切,且均随CIN分级和宫颈癌级别的升高而表达增加,两者联合检测有利于提高宫颈癌的诊断率。     

HPV L1壳蛋白与p16INK4a的免疫组化检查在宫颈病变诊断中的应用

目的检测宫颈上皮病变过程中HPV L1壳蛋白和p16INK4a蛋白的表达,探讨二者联合在宫颈病变诊断中的应用价值。方法用免疫细胞化学方法检测169例不同级别的宫颈液基细胞学标本中HPVL1壳蛋白和p16INK4a蛋白的表达,并与组织病理学检查结果比较。结果随着宫颈活检病理分级升高,HPV L1壳蛋白阳性[L1(+)]率降低(P<0.01),p16INK4a阳性[p16(+)]率升高(P<0.01)。HPVL1壳蛋白阳性率与病理分级呈负相关(rs=-0.436,P<0.01);而p16INK4a阳性率与病理分级呈正相关(rs=0.459,P<0.01)。在宫颈上皮内瘤变(CIN)CIN1、CIN2、CIN3及鳞状细胞癌(SCC)中,L1(+)/p16(-)的表达率分别为19.18%、2.44%、0.00%、0.00%,L1(-)/p16(+)表达率分别为30.14%、75.61%、92.86%、100.00%。L1、p16INK4a、L1(-)/p16(+)在CIN1的表达与CIN2、CIN3、SCC比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论HPV L1壳蛋白、p16INK4a均可作为诊断宫颈病变程度的生...     

子宫颈腺癌高危型人乳头状瘤病毒p16INK4A蛋白表达情况

目的探讨子宫颈腺癌高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)感染检测及p16INK4A蛋白表达的临床意义。方法选取25例宫颈上皮内瘤变CINⅠ、30例CINⅡ、35例CINⅢ、24例浸润性腺癌,同时选取35例正常宫颈组织(慢性炎症)患者。采用免疫组织化学方法检测组织中p16INK4A蛋白表达情况,并应用第二代杂交捕获法(HC-2)对13种HR-HPV DNA进行检测。结果宫颈上皮内瘤变CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织、浸润性腺癌HR-HPV感染阳性率和p16INK4A蛋白表达阳性率均显著高于正常宫颈细胞(P0.05);宫颈组织中HR-HPV感染阳性率与p16INK4A蛋白表达为显著正相关性(P0.05)。结论高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)导致的宫颈恶化转化与p16INK4A蛋白表达密切相关,采用p16INK4A与HR-HPV联合诊断有利于提高子宫颈癌及CIN阳性预测值。     

HPV-DNA检测联合p16～（INK4A）蛋白表达对于子宫颈腺癌的诊断意义研究

目的：探讨HPV-DNA检测联合P16～（INK 4A ）蛋白表达对子宫颈腺癌的诊断意义。方法选取2013年5月至2014年6月在本院接受治疗的宫颈腺癌变患者125例,其中CINⅠ患者40例,CINⅡ患者30例,CINⅢ患者25例,浸润性腺癌患者30例,同时选取25例正常宫颈组织,采用免疫组织化学方法检测患者组织中的P16INK 4A ,同时采用第二代杂交捕获法对患者体内的13种HPV-DNA进行检测。结果检测结果表明,宫颈腺癌病变中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织以及浸润性腺癌组织中HPV-DNA感染的阳性率以及P16INK4A蛋白表达的阳性率都明显的高于正常宫颈组织,进行比较差异显著（P＜0．05）;宫颈组织中 HPV-DNA感染的阳性率与P16INK 4A蛋白表达的阳性率呈正相关关系。结论 HPV-DNA检测联合P16～（INK 4A）蛋白表达对子宫颈腺癌的诊断,有利于提高自宫颈腺癌以及CIN的阳性预测值。     

采用组织芯片技术研究宫颈癌中HPV与细胞周期调控因子p27表达的关系

目的研究宫颈癌组织中HPV感染与细胞周期调控因子p27表达的关系及意义。方法采用组织芯片技术制作60例宫颈癌组织芯片，同时用S—P免疫组织化学和原位分子杂交方法检测宫颈癌组织芯片中HPV、p27、p27mRNA的表达。结果60例宫颈癌组织中HPV、p27、p27mRNA的阳性率分别为48．3％、38．3％、51．7％。淋巴结转移阳性宫颈癌中p27和p27mRNA阳性率明显低于淋巴结转移阴性宫颈癌（P〈0．01）。淋巴结转移阳性宫颈癌中HPV阳性率明显高于淋巴结转移阴性宫颈癌（P〈0．05）。宫颈癌和CINⅢ级宫颈上皮内瘤变组织中HPV阳性率明显高于CINⅠ级和CINⅡ级（P〈0．05）。而p27和p27mRNA阳性率明显低于CINⅠ级和CINⅡ级宫颈上皮内瘤变组织（P〈0．05）。宫颈癌中HPV与p27及p27mR—NA表达呈明显负相关（r=-0．574，P〈0．05；r=-0．612，P〈0．01）。结论HPV感染和细胞周期调控因子p27低表达与宫颈癌密切相关。HPV感染与p27低表达有关。HPV和p27可作为评估宫颈癌预后的参考指标。应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的，具有快速、方便、经济、准确的特点。     

高危型HPV负荷量和端粒酶活性表达与宫颈病变意义

目的了解宫颈癌及癌前病变中高危型人乳头瘤病毒（HPV）负荷量和端粒酶活性表达的作用及临床意义。方法随机选取宫颈病变病人130例,其中宫颈上皮内瘤变（CIN）80例,宫颈癌20例,慢性宫颈炎30例（对照组）。采用第二代杂交捕获技术（HCⅡ）检测病人宫颈脱落细胞HPvDNA含量,阴道镜下定位活检,并用免疫组织化学EnVision二步法检测宫颈组织标本中端粒酶活性的表达。结果随着宫颈病变程度的加重,高危型HPV的表达阳性率和病毒负荷量均增高,宫颈癌组和CINⅢ组高危型HPV表达阳性率明显高于对照组、CINⅠ及CINⅡ组（x^2=7．414～29．501,P〈0.01）;CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌组高危型HPV的病毒负荷量均高于CINI组,差异均有显著性（x^2=2045．871,P％0．05）。宫颈癌组端粒酶活性表达阳性率高于CINⅢ组,CINⅢ组高于CINⅡ组,CINⅡ组高于cINⅠ组,差异均有显著性（x^2=4．022～4．329,P〈0．05）。对照组、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌组的高危型HPV感染病人中端粒酶活性表达的阳性率分别为0（0／5）、25．00％（2／8）、37．50％（6／16）、72．22％（13／18）、100．00％（19／19）。结论高危型HPV负荷量和端粒酶活性均与宫颈癌前病变及宫颈癌的发生发展密切相关,两者联合检测有望成为宫颈癌早期筛查、处理及预后判断的辅助指标。     

细胞周期抑制蛋白p16INK4a在喉鳞状上皮病变中的异常表达

目的探讨喉鳞状细胞癌、喉鳞状上皮不典型增生及喉慢性炎中p16INK4a蛋白表达水平的变化及意义。方法应用免疫组化方法检测86例喉鳞状上皮病变（喉鳞状细胞癌16例、喉上皮不典型增生48例,喉慢性炎22例）组织中p16INK4a蛋白的表达,进行半定量分析及统计学检验。结果16例喉鳞状细胞癌中,p16INK4a全部阳性表达;48例喉上皮内瘤变中,35例p16INK4a阳性表达,阳性率为72．92％,其中轻度不典型增生,中度不典型增生,重度不典型增生p16INK4a阳性表达率分别是33．3％（4／12）、75％（15／20）、100％（16／16）,且三者间差异有统计学意义（P〈0．05）。22例喉慢性炎中,p16INK4a阳性表达6例,阳性表达率为27．27％。p16INK4a阳性蛋白在喉鳞状细胞癌、喉鳞状上皮不典型增生及喉慢性炎组织中表达水平依次降低,且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论喉鳞状细胞癌、喉鳞状上皮不典型增生中p16INK4a阳性表达明显高于喉慢性炎。p16INK4a在喉鳞状细胞癌、喉鳞状上皮不典型增生中过表达,提示其在喉鳞状细胞癌、喉鳞状上皮不典型增生发生发展中起重要作用。     

p16^INK4a和Ki-67免疫细胞化学染色在宫颈液基细胞学中的应用价值

目的 探讨液基细胞学检测(LCT)剩余细胞学标本中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色筛查宫颈鳞状细胞癌和宫颈癌前病变的价值.方法 采用免疫细胞化学和免疫组化法对194例细胞学标本和91例组织活检标本进行p16INK4a、Ki-67检测.结果 p16INK4a、Ki-67表达阳性率随着宫颈病变程度的加重而升高,与病变级别呈正相关.Ki-67的标记指数(LI)在HSIL组最高,与其他各组间均数的差异显著(P＜0.05).LSIL及其以上病变细胞学p16INK4a和Ki-67与组织学诊断符合率分别为87.3％和80.95%.宫颈脱落细胞学Ki-67、p16INK4a的免疫细胞化学染色检出高级别病变及鳞癌病变的敏感度、特异度分别为83.6％、86.7％和87.1％、100％. 结论 利用LCT液基细胞学涂片中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色作为辅助诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查,具有重要意义.     

宫颈上皮病变中高危型HPV感染与病变分级及P53、p16INK4a和细胞周期蛋白表达的关系

目的研究宫颈上皮病变(CIN)中高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染与病变分级及P53、p16INK4a和细胞周期蛋白表达的关系。方法回顾性收集首都医科大学附属北京妇产医院2014年3月至2018年3月期间接受宫颈活检、宫颈高频电刀圈环切除、宫颈冷刀锥切的CIN组织。测定HR-HPV的感染类型,并比较HR-HPV感染与否、不同病变分级CIN患者中P53、p16INK4a、细胞周期蛋白的蛋白表达水平。结果 84例CIN患者中,HR-HPV感染率为30. 95%;其中HPV16、HPV18为主要的HR-HPV感染类型,感染率分别为11. 90%、10. 71%。不同病变分级CIN中HR-HPV感染率以及P53、p16INK4a、Cyclin D1、Cyclin B1的蛋白阳性表达率的比较有显著性差异(P <0. 05);随着CIN分级的升高,HR-HPV的感染率以及Cyclin D1、Cyclin B1的蛋白阳性表达率明显升高,P53、p16INK4a的蛋白阳性表达率明显降低;合并HR-HPV感染的CIN中P53、p16INK4a的蛋白阳性表达率明显低于不合并HR-HPV感染的CIN,Cyclin D1、Cyclin B1的蛋白阳性表达率明显高于不合并HR-HPV感染的CIN(P <0. 05)。结论 CIN中HR-HPV感染与病变分级加重及P53、p16INK4a、细胞周期蛋白表达改变有关。     

宫颈癌前病变和宫颈鳞状细胞癌中HPV16／18感染与P16INK4A表达的临床意义

目的探讨P16INK4A在宫颈鳞状细胞癌及癌前病变中的表达规律及其与人乳头状瘤病毒（HPV）感染之间的关系。方法采用免疫组织化学supervision二步法和原位杂交HPV16／18DNA检测,在60例慢性宫颈炎,58例宫颈低级别上皮内瘤变,62例高级别上皮内瘤变和62例宫颈鳞状细胞癌中的表达。结果P16INK4A在慢性宫颈炎中呈阴性,与宫颈低级别上皮内瘤变（阳性表达率为13．79％,8／58）之间差异无统计学意义（P〉0．05）。随着上皮病变级别升高,表达也逐渐增强,在宫颈鳞状细胞癌中表达更强;HPV16／18DNA在四组中阳性表达率,除高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌两组间差异无统计学意义外（均为96．77％）,其余各组之间差异均有统计学意义（P〈0．01）;在宫颈低级别上皮内瘤变中P16INK4A蛋白表达和HPV感染相关无统计学意义,但在高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌两组中均呈正相关（r高级别=0．373,r鳞癌=0．416,P〈0．05）。结论P16INK4A过表达及HPV16／18感染在宫颈鳞状细胞癌形成的中晚期起作用,提示两者均可作为一个早期诊断恶性病变的指标。     

宫颈癌组织HIF-1α和IGF-2表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及胰岛素样生长因子-2（IGF-2）在宫颈癌（ICC）发生、发展中表达及意义。方法应用免疫组织化学S-P方法,检测20例正常宫颈（NCE）、28例宫颈上皮内瘤变（CIN）、70例ICC组织HIF-1α和IGF-2蛋白表达。结果 NCE、CIN、ICC组织HIF-1α蛋白的表达阳性率分别为0、32.14%、72.86%,IGF-2蛋白表达的阳性率分别为10.00%、28.57%、68.57%,各组间比较差异均有显著性（Hc=39.487,q=5.782~35.582,P〈0.01;χ2=25.570,P〈0.01）。ICC组织中HIF-1α和IGF-2表达呈正相关（r=0.629,P〈0.01）。结论 HIF-1α及IGF-2的表达与宫颈癌的发生发展密切相关,二者在ICC发展中可能起协同作用。     

宫颈上皮内瘤变组织NDRGl、P16和Ki-67蛋白表达及意义

目的探讨NDRGl、P16、Ki67蛋白在宫颈上皮内瘤变（CIN）组织中的表达及意义。方法应用免疫组化PV6000染色方法,检测159例C1N组织及58例正常宫颈组织NDRGl、P16、Ki67蛋白的表达。结果正常宫颈组织及不同级别CIN组织NDRGl、P16、Ki67蛋白表达比较差异均有统计学意义（H-122．92～145．73,q-5．35～30．64,P％0．01）。在CIN组织中,NDRGl蛋白阳性表达率明显下降,其表达水平与CIN病变级别呈负相关（r、=-O．73,P％0．01）;P16和Ki-67蛋白阳性表达率明显增高,其表达水平与CIN病变级别呈正相关（r、=0．74、0．81,P〈0．01）。结论NDRGl、P16、Ki67蛋白的异常表达可能与CIN的发生、发展有关。     

ARHI和环氧化酶-2蛋白在子宫颈腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨ARHI蛋白和环氧化酶-2（COX-2）蛋白在子宫颈腺癌发生中的作用及其相互关系。方法采用免疫组织化学法检测40例子宫颈腺癌及30例慢性子宫颈炎组织中。ARHI蛋白及COX-2蛋白的表达情况。结果ARHI在40例子宫颈腺癌组织阳性率为50．0％（20／40）,低于慢性子宫颈炎患者子宫颈组织阳性率90．0％（27／30）,差异有统计学意义（X^2=12．43,P〈0．05）;COX-2在40例子宫颈腺癌组织阳性率82．5％（33／40）,高于慢性子宫颈炎患者子宫颈组织阳性率0（0／30）,差异有统计学意义（x^2=46．16,P〈0．05）;ARHI蛋白阳性表达率与子宫颈腺癌临床分期（x^2=3．96,P〈0．05）及组织分化程度高低有关（x^2=7．04,P〈0．05）。COX-2蛋白与子宫颈腺癌组织分化程度有关（x^2=7．04,P〈0．05）,与临床分期无关（P〉0．05）;ARHI蛋白和COX-2蛋白与淋巴结有无转移均无关（P均〉0．05）;ARHI蛋白和COX．2蛋白表达有关联（r=0．31,P〈0．05）。结论子宫颈腺癌的发生与ARHI基因失活和COX-2蛋白表达异常有关,两者可能协同作用参与子宫颈腺癌的发生。     

宫颈上皮内瘤样病变和宫颈癌中CD44v6和P63蛋白表达及其意义

目的探讨CD44v6和p63蛋白在宫颈上皮内瘤样病变(C IN)和浸润宫颈鳞癌(ICC)中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法,检测30例ICC、20例C IN和10例正常宫颈组织(NCE)中CD44v6和p63蛋白的表达水平,并结合临床病理特征进行分析。结果(1)在ICC组织中CD44v6蛋白表达阳性率为80.0%(24/30),明显高于C IN(35.0%,7/20,P<0.05)和NCE(30.0%,3/10,P<0.05)。(2)全部30例ICC和10例C IN中p63染色均为阳性。ICC分化程度越低,阳性细胞数越高、细胞的着色越深。NCE中仅基底层及上基层细胞阳性。(3)p63表达与ICC组织学分级和淋巴结转移相关(P<0.05)。结论CD44v6和p63可能参与了调控ICC的发生、发展过程,可作为ICC早期诊断指标,其高表达预示ICC预后不良。     

Survivin和MMP-2在老年宫颈癌的表达及与肿瘤侵袭转移的关系

目的探讨Survivin和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在老年宫颈癌的表达及与肿瘤侵袭转移的关系。方法选择72例老年宫颈上皮内瘤病变(CIN)患者及58例老年宫颈癌患者为研究对象,采用免疫组织化学方法检测患者病变组织Survivin和MMP-2的表达。比较CIN患者与宫颈癌患者Survivin和MMP-2表达阳性率的差别,并探讨Survivin和MMP-2与老年宫颈癌肿瘤侵袭转移的关系。结果 CINⅠ～Ⅱ级、CINⅢ级及宫颈癌患者Survivin和MMP-2阳性率依次升高(P<0.05);Survivin和MMP-2阳性率与FIGO分期、淋巴转移、间质浸润有关(P<0.05)。结论不同级别宫颈病变Survivin和MMP-2阳性率不同,Survivin和MMP-2在老年宫颈癌患者肿瘤侵袭转移等生物学行为中起重要作用。     

钙激活性中电导钾离子与整合素在人宫颈组织中的表达

目的通过对人宫颈癌Hela细胞、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织及人正常宫颈上皮组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)蛋白含量及整合素β1蛋白产物的测定,探讨3种组织中IKCa1蛋白和整合素β1的差异表达及其与人类宫颈癌发生、发展的关联。方法 (1)复苏及培养人宫颈癌Hela细胞株,同时随机采集临床手术治疗的数十例宫颈CIN组织及正常宫颈上皮组织,在3组标本中加入细胞裂解液,采用低温离心法提取全蛋白质。(2)将提取的全蛋白质应用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测宫颈癌Hela细胞(25例)、CIN组织(20例)、正常宫颈上皮组织(15例)中IKCa1蛋白和整合素β1的各自表达率及相对表达水平,了解IKCa1蛋白和整合素β1在3种组织细胞中表达差异的趋势。结果 (1)IKCa1蛋白在25例宫颈癌Hela细胞中22例见IKCa1蛋白表达,阳性表达率为88%,表达水平为1.207±0.129,均明显高于CIN组织中IKCa1蛋白的阳性表达率和表达水平(分别为65%、0.928±0.104);15例正常宫颈上皮组织中3例见IKCa1蛋白表达,IKCa1蛋白阳性表达率为20%,表达水平为0.791±0.042,两两比较差异均有统计学意义(F=33.049,χ2=18.703,P<0.01)。(2)整合素β1在15例正常宫颈上皮组织中有12例呈阳性表达,其阳性表达率为80%,表达水平为0.95968±0.16476;20份宫颈癌前病变(CIN)组织中整合素β1呈阳性表达者有11例,阳性表达率为55%,表达水平为0.76108±0.16351;25例培养传代宫颈癌Hela细胞中整合素β1阳性4例,其阳性表达率为16%,表达水平为0.59166±0.10545,两两结果对比差异具有统计学意义(F=9.618,P=0.01)。结论 IKCa1蛋白的表达率及表达水平在宫颈癌、CIN、正常宫颈上皮组织三者间呈递减趋势;而整合素β1的表达率及表达水平在宫颈癌、CIN、正常宫颈三者间呈递增趋势。IKCa1和整合素β1的异常表达与宫颈癌的发生、发展密切相关,减低或增加其表达可能减少或减慢宫颈癌的进展。