萘普生对体外宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨萘普生对人子宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法:用含不同浓度的萘普生细胞培养液(1、10、100、300、500μg/mL)于不同作用时间(6、12、24、48h)处理宫颈癌Hela细胞48h后,采用MTT法检测不同浓度的萘普生细胞培养液在不同作用时间下对Hela细胞增殖率的影响;用500μg/mL的萘普生细胞培养液处理宫颈癌Hela细胞48h后荧光显微镜观察细胞形态变化,并采用Annexin V-FITC/PI染色,以流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:(1)MTT法显示,不同浓度的萘普生细胞培养液对Hela细胞均有抑制作用,不同药物浓度组在同一作用时间下对Hela细胞生长抑制率的差异有统计学意义(P<0.01),同一药物浓度在不同作用时间组之间的细胞生长抑制率的差异也有统计学意义(P<0.01)。(2)Hoechst33342染色后,经荧光显微镜观察,可见到染色质浓缩及凋亡小体等凋亡特征。(3)流式细胞仪检测显示萘普生处理宫颈癌Hela细胞48h后,细胞凋亡率明显增加。结论:萘普生在体外对Hela细胞增殖具有抑制作用,且抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性。     

二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用

目的以宫颈癌Hela细胞为研究对象,探讨二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用以及二甲双胍联合卡铂是否对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制有协同作用。方法将宫颈癌Hela细胞分为空白对照组、不同浓度(0.01、0.5、1、5、10、20mmol/L)二甲双胍组,采用MTT法检测不同浓度二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的增殖活性的影响;并应用AO/EB染色和流式细胞仪研究二甲双胍的体外抗肿瘤机制;将1.0mmol/L及5.0mmol/L的二甲双胍与25mg/L、50mg/L的卡铂单一或联合作用宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测各组细胞OD值,计算细胞增殖抑制率。结果二甲双胍对宫颈癌Hela细胞体外增殖能力有明显的抑制作用,且呈明显的浓度依赖性和时间依赖性;与对照组比较,荧光显微镜下计数发现不同浓度二甲双胍作用宫颈癌Hela细胞24h后,随着二甲双胍浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高(P0.05),而以不同浓度(0、1、5mmol/L)二甲双胍培养宫颈癌Hela细胞48h后,流式细胞仪检测实验组Hela细胞处于G0/G1期比例升高,S期细胞比例下降,差异具有统计学意义(P0.05);二甲双胍联合卡铂对抑制宫颈癌Hela细胞增殖具有协同作用,且随着二甲双胍浓度的增加,细胞增殖抑制率增加(P0.05)。结论证实二甲双胍对体外宫颈癌Hela细胞增殖有明显的抑制作用,它是通过诱导细胞凋亡、细胞周期G0/G1期阻滞来实现的;二甲双胍与卡铂联合应用能够增强卡铂对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用。     

β-咔啉类生物碱对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的 探讨β-咔啉类生物碱对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法 通过体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,将含有不同浓度(5、10、20、40μg/mL)β-咔啉类生物碱的培养液与SGC-7901细胞共同培养24 h和48 h。采用MTT比色法计算细胞抑制率;在荧光显微镜下用Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞形态学改变;流式细胞仪检测凋亡率及基因组DNA琼脂凝胶电泳检测凋亡梯状条带。结果 β-咔啉类生物碱对SGC-7901细胞的损伤呈浓度依赖性;β-咔啉类生物碱分别作用24 h和48 h后半数抑制浓度(IC50)分别为17.79μg/mL和12.17μg/mL;荧光染色可观察到有细胞核固缩及核断裂的凋亡现象;流式细胞术显示:阴性对照组(0μg/mL)及β-咔啉类生物碱5、10、20、40μg/mL浓度组24、48 h凋亡率为别1.66%、11.27%、20.32%、30.66%、41.42%和3.84%、15.29%、23.34%、34.87%、49.54%,细胞凋亡率伴随给药浓度增加而增加;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测到明显的凋亡梯状条带。结论 β-咔啉类生物碱能诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡,抑制细胞增殖。     

海洋珍珠生物提取液对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

背景:海洋珍珠生物提取液中富含锗、硒等微量元素。目的:观察海洋珍珠生物提取液对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法:MTT法检测0,6,30,45,60,75,150mg/L海洋珍珠生物提取液对Hela细胞增殖的影响;0,6,30,60mg/L海洋珍珠生物提取液干预Hela细胞后,流式细胞仪AnnexinV和PI双染检测细胞凋亡率,PI单染法测定细胞周期,RT-PCR法测定细胞株内bcl-2,bax基因表达。结果与结论:6～45mg/L海洋珍珠生物提取液对Hela细胞增殖有抑制作用,表现出浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05),在60～150mg/L范围内只表现出了浓度依赖性(P<0.05),无时间依赖性。6～60mg/L海洋珍珠生物提取液呈浓度依赖性促进Hela细胞凋亡,使细胞阻滞在G1期;30,60mg/L海洋珍珠生物提取液可降低细胞内bcl-2mRNA表达,升高baxmRNA表达。说明海洋珍珠生物提取液以浓度依赖性的方式抑制Hela细胞增殖,并通过降低bcl-2mRNA,升高baxmRNA来诱导细胞凋亡。     

20(S)-人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的作用

目的 观察20（S）-人参皂苷Rg3（SPG-Rg3）对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的作用及其可能作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察SPG-Rg3对Hela细胞的杀伤作用,并计算其半抑制浓度（IC50）.采用流式细胞术检测SPG-Rg3作用后Hela细胞的细胞周期及细胞凋亡情况.结果 SPG-Rg3浓度为20～400 μg/mL时,SPG-Rg3对细胞增殖的抑制率随其浓度的增高而增大,作用强度呈浓度依赖性,二者呈正相关（r=0.922 5,P〈0.05）.SPG-Rg3对Hela细胞的IC50为85.1 μg/mL.经SPG-Rg3作用48 h后,SPG-Rg3实验组Hela细胞处于S期的细胞数与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;SPG-Rg3实验组处于G2/M期的细胞数明显少于对照组（P〈0.01）.SPG-Rg3实验组Hela细胞于G1期峰前出现显著的凋亡峰,且凋亡细胞数与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 SPG-Rg3能杀伤体外生长的Hela细胞,并诱导其凋亡.     

马钱子碱对人白血病细胞株K562细胞的诱导凋亡作用

本研究旨在观察马钱子碱对人白血病细胞株K562细胞的诱导凋亡作用。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测马钱子碱对K562细胞生长抑制作用;应用AO/EB荧光染色、Annexin-V/PI细胞凋亡检测法、DNA-ladder片段凝胶电泳法检测马钱子碱对K562细胞凋亡的影响。结果显示:马钱子碱能有效抑制K562细胞的生长,在一定范围内,抑制率随马钱子碱浓度的增高而增高,马钱子碱浓度为400μg/ml作用72小时后对K562细胞抑制作用最为明显,抑制率达94.0%;K562细胞经浓度为400μg/ml马钱子碱作用72小时后大部分细胞核染色质被EB染成桔红色并呈固缩状或圆珠状显示为晚期凋亡的细胞形态;马钱子碱作用72小时可诱导K562细胞凋亡,在马钱子碱浓度为50-400μg/ml范围内随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐上升;马钱子碱400μg/ml作用72小时后的K562细胞出现细胞凋亡的典型梯形条带。结论 :马钱子碱能有效抑制K562细胞生长,诱导其凋亡,并且在50-400μg/ml范围内呈剂量效应关系。     

川芎嗪诱导肺癌细胞凋亡及其机制研究

目的探究川芎嗪对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养肺癌A549细胞,将细胞分为空白对照组(NC组)以及用不同浓度(200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)的川芎嗪处理人肺癌A549细胞实验组,用吖啶橙/嗅化乙锭(AO/EB)双荧光染色观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测A549细胞凋亡相关蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western Blot检测Fox M1的表达水平。转染过表达Fox M1质粒,用800μg/ml川芎嗪干预,分别用AO/EB双荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果相对于NC组,AO/EB双荧光染色结果显示不同浓度的川芎嗪干预后,可见橘红色荧光的凋亡细胞,并且随着川芎嗪的浓度增加而增加,呈浓度依赖性。流式细胞仪检测结果显示川芎嗪干预的A549细胞凋亡数显著增加。WB结果显示不同浓度的川芎嗪干预后,Bcl-2蛋白的表达水平下调,Bax蛋白的表达水平上调,呈浓度依赖。qPCR结果显示Fox M1 mRNA显著下降,WB结果同样显示Fox M1蛋白表达水平降低,并随着川芎嗪的干预浓度增加而下降,具有浓度依赖性。过表达Fox M1蛋白后,相对于阴性对照组,AO/EB双荧光染色结果显示肺癌A549细胞橘红色荧光减少,流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率降低。结论川芎嗪能有效地诱导肺癌A549细胞凋亡,其作用机制可能与下调Fox M1蛋白表达有关。     

紫草素诱导白血病细胞K562凋亡的研究

目的探讨紫草素对人白血病K562细胞的诱导凋亡作用。方法MTT显色法检测紫草素对K562细胞的增殖抑制作用;形态学观察分析DNA琼脂糖凝胶电泳;AnnexinV/PI双标记法检测紫草素对K562细胞的凋亡效应;Caspase检测K562细胞凋亡通路。结果紫草素0.25~8μg/ml浓度即能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性。1μg/ml紫草素作用48h后的K562细胞出现凋亡细胞的特征。1~4μg/ml浓度紫草素诱导K562细胞凋亡具有明显的量效关系,2μg/ml紫草素在0~72h内诱导K562细胞凋亡具有明显的时效关系;DNA凝胶电泳呈现细胞凋亡的典型梯形条带;紫草素诱导K562细胞凋亡经历了Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9的激活。结论紫草素能有效地诱导K562细胞凋亡,并主要通过线粒体凋亡通路。     

葡萄籽提取物原花青素对人膀胱癌BIU87细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨葡萄籽提取物原花青素(GSPE)对人膀胱癌细胞株BIU87细胞增殖和凋亡的影响。方法 BIU87细胞与50、100、200μg/ml的GSPE共同孵育24h后,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果 不同浓度（50、100、200μg/mL）GSPE对BIU87细胞的增殖抑制率分别为(13.0±1.5)%、(31.8±2.1)%和(48.6±1.8)%;凋亡率分别为(8.7±0.7)%、(28.2±1.6)%和(48.5±0.7)%;细胞增殖抑制率和凋亡率均随GSPE浓度的升高而增高（P＜0.01）。结论 葡萄籽提取物原花青素在体外可呈浓度依赖性抑制膀胱癌BIU87细胞增殖并促进其凋亡。     

20(S)-人参皂甙Rg3诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的研究

目的 探讨20（S）-人参皂苷Rg3（SPG-Rg3）对宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用。方法 采用MTT法观察SPG-Rg3对Hela细胞生长的抑制作用;流式细胞术观察SPG-Rg3作用后,Hela细胞之细胞周期的变化;AO/EB双染从形态学上观察SPG-Rg3对Hela细胞凋亡的作用。结果 经SPG-Rg3作用后,Hela细胞的生长受到明显的抑制（P〈0.05）,S期细胞数增加,G2/M期细胞数减少（P〈0.01）,凋亡细胞数增加。结论 SPG-Rg3可以诱导宫颈癌Hela细胞发生凋亡,可作为治疗宫颈癌的一种新途径。     

5，7-二甲氧基白杨素对体外培养人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

[目的】观察5,7-二甲氧基白杨素（dMchR）对体外培养人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。【方法】运用A0／EB荧光双染色法观察HeLa细胞凋亡形态;采用PI单染流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率;运用FITC荧光标记流式细胞术分析HeLa细胞的Bcl-2,Bax蛋白的表达。【结果]dMChR能有效地诱导HeLa细胞凋亡;dMChR能下调HeLa细胞的Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且呈浓度依赖性变化。【结论]dM—ChR具有诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,这种作用与上调细胞Bax／Bcl-2比值有关。     

粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响

目的:通过观察粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响,初步探讨粉防己碱对结肠癌的体外抗肿瘤效应。方法:采用MTT比色法观察粉防己碱对HT-29细胞的增殖抑制效应,利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及细胞凋亡荧光染色法检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用,以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和BAX表达水平的影响。结果:MTT比色法显示粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖有抑制作用,其抑制效应具有剂量依赖的特点,细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳表明粉防己碱可诱导HT-29细胞凋亡,免疫细胞化学法显示粉防己碱上调BAX基因表达,下调Bcl-2基因表达。结论:粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖的抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

醋酸棉酚对人鼻咽癌细胞凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:研究醋酸棉酚(gossypol acetic acid,GAA)对人鼻咽癌细胞系CNE2体外增殖的影响,初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测GAA对CNE2细胞的增殖抑制作用,Hoechst 33342/PI荧光染色观察细胞核的形态变化,流式细胞仪分析细胞周期的分布、凋亡率以及凋亡相关基因蛋白的表达情况。结果:GAA对CNE2细胞具有显著的增殖抑制作用并且呈剂量、时间依赖性,Hoechst 33342/PI荧光染色可观察到明显核固缩、染色质凝集等细胞凋亡现象;流式细胞仪检测发现细胞被阻滞于G0/G1期,G2/M期和S期细胞相对减少并出现典型的"亚二倍体峰",凋亡相关基因Bcl-2表达下调,而Bax表达则相对上调。结论:GAA能够抑制人鼻咽癌细胞系CNE2的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax而实现的。     

人巨细胞病毒体外感染诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡

本研究探讨人巨细胞病毒（hCMV）体外感染是否可引起早幼粒细胞的增殖、分化抑制、诱导其凋亡，并探讨其作用机制。采用hCMV AD169株体外感染早幼粒细胞白血病细胞HL-60，用PCR检测hCMV DNA，用形态学观察、DNA片段化检测及Annexin V／PI染色流式细胞仪检测等方法分析细胞凋亡情况。结果表明：hCMV AD169株在体外能明显抑制早幼粒细胞白血病细胞HL-60的生长，抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；PCR检测发现病毒感染组HL-60细胞中有hCMV IEA的表达；形态学观察和DNA片段化检测证实了细胞凋亡的存在；流式细胞仪检测结果显示HL-60细胞凋亡率随培养液中病毒浓度的加大和感染时间的延长而增高，二者呈依赖关系。结论：hCMV AD169株在体外可直接感染HL-60细胞；hCMV AD169株在体外感染HL-60细胞后，可抑制HL-60细胞的分化和增殖；hCMV AD169株体外感染HL-60细胞后可诱导其凋亡，且凋亡率与病毒剂量及作用时间呈依赖性关系。     

伊马替尼诱导c-kit阳性多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的 探讨伊马替尼在体外对c-kit表达阳性多发性骨髓瘤细胞的作用及机制.方法 不同浓度伊马替尼处理KM3细胞后,采用二甲氧唑黄比色法(XTT法)检测药物的细胞毒性作用,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V/PI双标流式细胞术和DNA片段分析法检测细胞凋亡,Westernblot法检测蛋白质水平变化.结果 伊马替尼浓度在0.25 μmol/L或以上时,可明显抑制KM3细胞增殖,呈量效关系,48 h IC50为0.33μmol/L(P＜0.01);阻滞细胞周期于G0/G1期;Annexin V和DNA凝胶电泳检测提示随着伊马替尼浓度的增大,KM3细胞凋亡率增加,且可以促使caspase-3和聚ADP核糖聚合酶(PARP)发生裂解;处理后c-kit表达降低,且阻断外源性IL-6对c-kit的促磷酸化作用.结论 伊马替尼可以通过抑制c-kit受体相关信号传导途径抑制KM3细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

重组人肿瘤坏死因子-α体内外对HL-60细胞作用的研究

为了研究重组人肿瘤坏死因子-α（recombinant human tumor necrosis factor-alpha,rhTNF-α）在体外及体内对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的作用,应用MTT法和集落形成试验测定HL-60细胞的增殖抑制,采用AO/EB荧光染色法、流式细胞术和TdT酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测凋亡细胞;利用HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型观察给药后瘤体重量、组织病理的改变,并采用透射电镜以及TUNEL法检测瘤组织细胞的凋亡.结果表明：rhTNF-α对HL-60细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;AO/EB染色后可见rhTNF-α处理组HL-60细胞核内染色质浓缩聚集或成碎片,呈现凋亡表象;流式细胞术显示随着rhTNF-α浓度的增加,细胞凋亡阳性率逐渐增高;TUNEL法检测显示,3 200 U/ml rhTNF-α作用于HL-60细胞48小时凋亡阳性率可达37.5%.在体内,rhTNF-α可抑制HL-60细胞裸鼠异种移植瘤生长,抑制率最高可达60.33%;病理检查发现,rhTNF-α处理组的瘤组织有程度不等的出血坏死区域;透射电镜及TUNEL法检测表明,处理组的瘤组织可见有较多凋亡细胞.结论：rhTNF-α在体内、外均可抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡.     

白桦脂酸对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226凋亡的诱导

为了探讨白桦脂酸对多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226的诱导凋亡作用,用MTT、Annexin—V／PI双标记流式细胞术、PI单标记流式细胞术和Hoechst33258染色分别检测白桦脂酸对RPMI一8226增殖抑制、凋亡诱导、细胞周期的作用和形态学变化.用RT—PCR技术检测加药后RPMI-8226凋亡相关基因bcl—xl和caspase3的表达的变化。结果表明：白桦脂酸对RPMI-8226作用24和48小时的Ic50值分别为10．156±0．659和5．434±0．212ng／ml,在一定浓度范围内,白桦脂酸对其增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。RPMI．8226细胞的凋亡率随药物浓度的增加而增加。细胞周期测定显示,随药物浓度的增加G0／G1期的细胞比例增高,处于S期的细胞比例减低,药物对G2／M期细胞影响不明显。Hoechst33258染色在荧光显微镜下可见药物处理组和对照组之间细胞形态的显著变化。RT—PCR测定示,随加药浓度的增加,bcl—xl基因的表达呈降低趋势,而caspase3基因的表达呈增高趋势。结论：在一定的浓度范围内,白桦脂酸可诱导RPMI-8226发生凋亡且呈时间剂量依赖性,该过程可能与其上调caspase3和下调bcl—xl基因的表达有关。白桦脂酸还可以影响RPMI-8226细胞系的G1／S期,使细胞阻滞在G0／G1期。