热休克蛋白70与加速度应激

现代高性能战斗机产生的高G值持续性正加速度可导致脑缺血、缺氧,继而引起脑功能障碍。热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）是生物体中广泛存在的一种蛋白质,其表达与脑缺血中的应激反应有重要关系,与神经细胞的缺血性损伤密切相关,目前大多数研究认为应激时HSP70的表达对神经元有保护作用。本文综述了HSP70的生物学特性及其在脑缺血后对细胞保护作用,并阐述了HSP70的表达与＋Gz暴露强度的关系。     

热应激下热休克蛋白70对细胞保护作用研究进展

热休克反应（heat shock response,HSR）是一切有生命细胞遇短暂高温、缺氧、亚砷酸盐及H2O2等应激原刺激时,所发生的一种以基因表达和调控变化为特征的细胞应激反应。HSR启动热休克基因表达,产生一组高度保守的热休克蛋白（heat shock proteins,HSPs）。而热休克蛋白（HSPs）是一类广泛存在所有原核和真核细胞内,具有高度保守性的蛋白家族。当生物细胞受到应激刺激（如热、缺血、缺氧、病毒感染等）和其损伤因素作用而发生应激反应时,就会自动启动HSPs合成基因,促使HSPs的合成,以对细胞起一定的保护作用。有人根据其分子量、等电点将HSPs分成5大类（或家族）,分别为低分子量HSPs家族、中等分子量HSPs家族、HSP70家族、HSP90家族和HSP110家族。几乎所有的细胞均能合成HSPs,其中HSP70家族含量最多亦是最重要的HSPs。目前认为HSP70具有多种功能,是一种非特异性细胞保护蛋白,因此是最受关注、研究最多的一种HSPs。     

中等强度运动训练对心理应激大鼠行为和淋巴细胞热休克蛋白70表达的影响

目的:探讨中等强度运动训练对心理应激大鼠行为和淋巴细胞热休克蛋白70表达的影响.方法:32只健康雄性SD大鼠随机分为4组:对照组、心理应激组、运动组和运动+心理应激组,每组8只.对照组不进行运动和心理应激干预,正常饲养;心理应激组前7周同对照组,第8周采用每天一次、每次2小时、持续3周的噪音刺激诱发建立心理应激模型;运动组每天无负重游泳训练1次,每次60分钟,共10周;运动+心理应激组运动10周,从第8周开始附加与心理应激组同样的应激.实验后测定各组大鼠旷场行为和外周血淋巴细胞热休克蛋白70表达.结果:(1)与对照组相比,心理应激组和运动组大鼠爬格块数均显著增加(P=0.024,P=0.047),心理应激组和运动组大鼠直立次数显著降低(P=0.03,P=0.001);双因素方差分析表明,运动训练和心理应激交互作用对大鼠爬格块数(F=30,P=0.02)和直立次数(F=6.91,P=0.01)有显著影响.(2)与对照组相比,心理应激组和运动+心理应激组大鼠热休克蛋白70表达均显著增加(P<0.01),运动组热休克蛋白70显著下降(P=0.04);双因素方差分析表明中等负荷运动训练和心理应激交互作用对大鼠淋巴细胞热休克蛋白70表达有显著影响(F=4.26,P=0.048).结论:中等强度运动训练能减小心理应激导致的大鼠行为和淋巴细胞热休克蛋白70表达的变化,提示适宜强度的运动能够拮抗心理应激对机体造成的损伤.     

热适应与热应激对大鼠肝细胞HSP70表达的影响

目的 :研究不同时段的热适应及再经受热应激时大鼠肝细胞HSP70的表达变化及临床意义。方法 :采用人工热气候室 ,建立热适应 (34℃± 1℃、相对湿度 6 0 % )和热应激 (4 1℃± 1℃、相对湿度 80 % )动物模型。SD大鼠 16 0只 ,分为对照组、热适应组、热适应后热应激组、单纯热应激组 ,每组又分为 2、7、14、2 8d四个时段。取肝组织作免疫组化SP法染色 ,应用图像分析系统分析组织HSP70含量的变化。结果 :在热适应的四个时段 ,肝细胞的HSP70表达强度呈如下趋势 :热适应后热应激组 >热适应组 >对照组 ;单纯热应激组 >对照组 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ;适应时段对HSP70表达强度变化无明显影响 ;2d时热适应组和热适应后热应激组的HSP70阳性枯否氏细胞数显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,单纯热应激组与对照组无差别。结论 :热应激与热适应都可作为独立因素使肝细胞中HSP70表达增强 ,热适应加热应激则使HSP70表达更进一步加强 ;短时热适应使枯否氏细胞HSP70阳性表达明显增加     

热休克蛋白70在创伤愈合中的表达及意义

热休克蛋白70(ＨＳＰ70)是一类具有细胞保护作用的应激蛋白,笔者探讨其与创伤愈合的关系。一、材料与方法昆明种小鼠25只,按伤后1,3,7,10天及愈合后随机分为5组,建立小鼠背部全层皮肤缺损模型,术后按预定时相点切取创伤组织标本行组织学及免疫组化观察。ＨＳＰ70单抗(Ｓｉｇｍａ公司),ＰＣＮＡ单抗及ＳＡＢＣ试剂盒(博士德公司)。二、结果创面愈合为痂下愈合,平均愈合时间为15.5天。伤后1天炎症反应明显,大量中性粒细胞浸润;伤后3天见肉芽组织生成及上皮新生;术后7,10天,肉芽组织中,细胞成分多,毛细血管丰富,新生上皮明显,组织增生活跃,炎性…     

热应激蛋白70与热应激反应

热应激蛋白(HSP)是机体在各种有害刺激条件下产生的一组高度保守的蛋白质，其中HSP70是最保守、最重要的一种。HSP70在各方面的应用都取得不少的进展，在热应激状态下对机体的保护作用是HSP70的一个重要研究方向。     

热休克蛋白70在创伤愈合中的作用

目的 探讨热休克蛋白70（heat shock protein70,HSP70）在创伤愈合过程中的变化及其意义。方法 取大鼠伤后1天伤口液作为创伤修复启动微环境,刺激真皮多能干细胞,24小时后检测细胞表达HSP70含量的变化。同时制作单纯创伤和难愈创伤动物模型,通过免疫组化和图像分析方法观察伤后不同时相点伤口组织HSPT0含量变化。结果 创伤早期伤口液作用真皮多能干细胞后,HSP70表达显著增加。单纯创伤组大鼠伤后各时相点伤口局部HSP70表达均显著增加,尤以真皮组织增加明显,其峰值为伤后3天。难愈创伤组大鼠伤口局部HSP70含量在伤后各时相点亦显著增加,但与单纯创伤组相比,其含量在伤后各时相点均显著减少,尤以真皮组织表达减少更为明显,并且HSP70表达峰值显著延迟,为伤后7天。结论 HSP70不仅是一种应激保护分子,而且还是参与调节创伤愈合的一种重要分子。     

高表达热休克蛋白70对骨骼肌细胞葡萄糖有氧氧化的影响

目的:探讨高表达热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)对骨骼肌细胞(C2C12)葡萄糖有氧氧化的影响。方法:通过构建重组p TRE2hyg-Hsp70质粒,稳定转染C2C12骨骼肌细胞系,建立Hsp70高表达的C2C12细胞系。另设未转染组为对照组。在转染前及转染后细胞培养的不同时间点(0天、3天、7天),采用生化仪检测培养液中葡萄糖和乳酸含量,用比色法测定柠檬酸合成酶(CS)、α-酮戊二酮脱氢酶(KGDH)、NADH-泛醌还原酶(complex I,CI)、泛醌-细胞色素C还原酶(complex III,CIII)等葡萄糖有氧氧化关键酶的活性,并测定细胞内ATP水平。结果:与对照组相比,高表达Hsp70的C2C12细胞在培养的3天、7天,培养液葡萄糖的消耗和乳酸的产生明显升高,细胞有氧氧化酶CS、KGDH、CI和CIII的活性显著下降(P<0.05),而细胞内ATP含量显著提高(P<0.05)。结论:高表达Hsp70的C2C12细胞有氧氧化相关酶的活性下降,抑制了葡萄糖的有氧氧化,提示Hsp70在骨骼肌细胞能量代谢中起重要调节作用。     

热休克蛋白70与缺血性脑损伤

目的　概述热休克蛋白 70 (HSP70 )与缺血性脑损伤应激反应的关系。　资料来源与选择　主要复习国内外文献。　资料引用　引用国内外期刊英文文献 14篇。　资料综合　 HSP70是生物体中广泛存在的一种蛋白质 ,其表达是脑缺血中一种重要的应激反应 ,与神经细胞的缺血性损伤密切相关 ,目前大多数研究认为应激时 HSP70的表达对神经元有保护作用。笔者综述了 HSP70的生物学特性 ,如能使细胞的热耐受性增加 ,以及增加细胞对缺血、缺氧耐受性 ;具有分子伴侣作用 ,能介导其它蛋白正确装配 ;可参与抗原的加工等 ,还阐述了脑缺血后不同细胞中的 …     

热休克蛋白70对中暑大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)对急性肺损伤的保护作用.方法 64只SD大鼠按随机数字表法分为假加热正常对照组(Sham组)、中暑组(HS组)、中暑加谷氨酰胺处理组(HS+GLN组)和中暑加槲皮素处理组(HS+QU组),每组16只.Sham组大鼠置于温度23℃,湿度55％ ± 5％环境中,其余3组大鼠置于模拟热气候动物舱(舱内温度39℃,相对湿度65％)内.监测大鼠直肠温度、收缩压和脉率,比较各组大鼠热应激反应的差异.以收缩压从峰值开始下降作为中暑的开始,之后将大鼠移至常温复温.分别在中暑恢复期0h和6h处死大鼠,每个时间点8只,留取支气管肺泡灌洗液(BALF)后分离肺脏组织行组织学观察.采用酶联免疫法检测BALF中的IL-1β、TNF-α和IL-6浓度,以及肺组织匀浆中的HSP70浓度.结果 与HS组和HS+QU大鼠比较,HS+GLN组大鼠承受更多的热负荷后才发生HS(P＜0.001),起病后的中位生存时间明显延长(P＜0.001).与Sham组比较,HS组大鼠肺组织匀浆HSP70浓度呈时间依赖性升高(P＜0.001);HS+GLN组HSP70浓度在各个时点与HS组比较均明显升高(P＜0.001),而HS+QU组的HSP70表达则受到明显抑制时点与Sham组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但明显低于HS组和HS+GLN组(P＜0.001).与HS组和HS+QU组比较,HS+GLN组大鼠BALF中的IL-1β、TNF-α和IL-6浓度明显降低(P＜0.001),病理结果显示其肺损伤更轻(P＜0.001),而HS+QU组则相反.结论 HSP70具有保护HS大鼠急性肺损伤的作用,其机制可能与增强大鼠热耐受能力和抑制HS大鼠肺部炎症相关.     

胃癌MG7-Ag模拟表位与HSP70融合基因疫苗的构建及其诱导小鼠免疫反应的研究

目的　以热休克蛋白 70 (HSP70 )为载体 ,构建胃癌MG7 Ag模拟表位与HSP70融合基因的DNA疫苗 ,并观察该疫苗诱导C5 7BL/ 6小鼠产生MG7 Ag特异性免疫反应的作用。方法　将胃癌MG7 Ag模拟表位 (九肽 )的编码序列设计在HSP70下游引物的 5′末端 ,通过PCR方法获得HSP70与模拟表位的融合基因片段。将PCR产物克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+) ,构建融合基因疫苗。将该融合基因疫苗接种C5 7BL/ 6小鼠股四头肌 ,每隔 3周加强免疫一次 ,共接种 3次。分别在每次接种后 3周收集免疫血清 ,用细胞ELISA法检测小鼠血清中抗MG7 Ag抗体的水平。末次免疫后 3周 ,收集脾细胞 ,用51Cr释放法检测MG7 Ag特异性CTL的杀伤活性。结果　PCR扩增得到大小约 2 .0kb的片段 ,与预期大小一致。将该片段克隆入pcDNA3.1(+) ,DNA序列测定证实MG7 Ag模拟表位的编码序列已成功融合于HSP70cDNA的 3′末端。基因疫苗免疫后 ,融合基因免疫组小鼠于第 9周出现抗MG7 Ag抗体 ,而对照组小鼠无MG7 Ag抗体产生 (P <0 0 5 )。51Cr释放实验结果表明 ,融合基因免疫组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率与对照组相比无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　MG7 Ag模拟表位与HSP70融合基因疫苗构建成功 ;该融合基因疫苗能够诱导MG7 Ag特异性的体液免疫反应     

幽门螺杆菌热休克蛋白A基因的克隆及论著高效分泌表达

目的 :从幽门螺杆菌 (Hp)分离热休克蛋白A基因 ,并实现在大肠杆菌中的融合分泌表达。方法 :提取Hp染色体DNA ,用PCR方法扩增hspA基因。经克隆、测序后 ,构建融合分泌表达载体 pMAL HspA ,转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达。 结果 :分离得到了高度保守的 354bp的hspA基因片段 ,并在大肠杆菌中实现了该基因的融合分泌表达。在 37℃诱导表达 3h后 ,其融合分泌表达蛋白可占细菌周质总蛋白的 66.6%。该表达带可被抗Hp的特异抗体所识别。 结论 :幽门螺杆菌hspA基因的克隆与表达为Hp疫苗的研制打下了基础。     

呼吸机所致肺损伤家兔HSP70和NF-κB表达的意义

目的研究呼吸机所致肺损伤（VILI）炎症反应中热休克蛋白70（HSP70）和核因子-kB（NF-kB）表达的意义，以及加用呼气末正压（PEEP）的影响。方法健康成年新西兰白兔30只，实施麻醉和气管切开术后分别接受不同潮气量（VT）的通气（通气时间均为4h）。随机分为以下三组：PEEP组（VT=40ml/kg，PEEP=3cmH2O,n=12）；ZEEP组（VT=40ml／kg，PEEP=0cmH2O,n=12）；对照组（VT=10ml／kg，n=6），始终以正常条件通气。机械通气开始后4h经颈动脉放血处死动物。在光镜下观察肺组织的病理学改变，Western blot检测家兔肺组织HSP70及NF-kB的表达。结果家兔在致伤机械通气4h后，光镜下可见肺组织有不同程度的损伤；各组肺组织HSP70、NF-kB表达均显著增加，且ZEEP组二者呈负相关。与ZEEP组比较，PEEP组肺组织的病理损伤明显减轻，NF-kB表达明显减少。结论HSP70可通过抑制NF-kB的活性，保护肺组织避免VILI；在机械通气过程中加用PEEP也可通过减少NF-kB的表达减轻肺组织损伤。     

呼吸机所致肺损伤家兔HSP70和NF-κB表达的意义

目的研究呼吸机所致肺损伤(VILI)炎症反应中热休克蛋白70(HSP70)和核因子-κB(NF-κB)表达的意义,以及加用呼气末正压(PEEP)的影响。方法健康成年新西兰白兔30只,实施麻醉和气管切开术后分别接受不同潮气量(VT)的通气(通气时间均为4h)。随机分为以下三组PEEP组(VT=40ml/kg,PEEP=3cmH2O,n=12);ZEEP组(VT=40ml/kg,PEEP=0cmH2O,n=12);对照组(VT=10ml/kg,n=6),始终以正常条件通气。机械通气开始后4h经颈动脉放血处死动物。在光镜下观察肺组织的病理学改变,Westernblot检测家兔肺组织HSP70及NF-κB的表达。结果家兔在致伤机械通气4h后,光镜下可见肺组织有不同程度的损伤;各组肺组织HSP70、NF-κB表达均显著增加,且ZEEP组二者呈负相关。与ZEEP组比较,PEEP组肺组织的病理损伤明显减轻,NF-κB表达明显减少。结论HSP70可通过抑制NF-κB的活性,保护肺组织避免VILI;在机械通气过程中加用PEEP也可通过减少NF-κB的表达减轻肺组织损伤。     

高温对大鼠热应激蛋白的影响

为了探讨高温环境对热应激蛋白（HSP70）的影响及HSP70在热应激中的作用，在模拟高温条件下，测定了大鼠HSP70的合成、HSP70mRNA基因的表达及肛温、心率、淋巴细胞形态学的改变。结果发现：机体心率加快、体温升高并伴有细胞损伤。三者与HSP70基因的表达呈负相关。提示：HSP70水平可成为判断机体热应激能力的敏感、特异指标。     

热打击致大鼠肠上皮IEC-6细胞钙超载损伤的初步研究

目的 研究不同程度热打击对体外培养大鼠肠黏膜上皮细胞IEC-6的钙超载及钙超载相关的损伤.方法 设置培养IEC-6细胞的温度梯度,Fluo-3Am探针加荧光显微镜及流式细胞术观察细胞内钙离子水平的改变,相差显微镜观察细胞形态学改变,考马斯亮蓝染色法观察细胞骨架变化,CCK-8法观察细胞活性改变,黏附实验观察基底膜黏附性改变.结果 与正常对照组比较,热打击组细胞内钙水平上升(P＜0.01),呈温度依赖性.热打击组细胞形态变圆,伪足变短,细胞间隙增大,45℃较43℃改变更为明显.考马斯亮蓝染色显示,热打击组细胞骨架增粗、紊乱,出现应力性纤维,45℃较43℃改变更为明显.CCK-8法显示,热打击组细胞活性下降(p＜0.01),呈温度依赖性.基底膜黏附实验显示,热打击组基底膜黏附性显著下降(P＜0.01),呈温度依赖性.结论 热打击可造成IEC-6细胞钙超载,并造成与钙超载相关的一系列细胞损伤,热打击对于肠黏膜上皮钙超载的影响及其机制的进一步研究将有助于了解热射病的发病机制.     

热应激复合敌敌畏中毒对小鼠全血乙酰胆碱脂酶和组织抗氧化能力的影响

目的研究热应激复合有机磷敌敌畏（O,O-dimethyl-O-2,2-dichlorovinylphosphate,DDVP）中毒对小鼠全血乙酰胆碱酯酶活性及组织脂质过氧化的影响。方法将54只小鼠随机分为对照组、热应激组和热应激复合DDVP中毒组。实验舱相对湿度控制在（60±5）%,对照组小鼠置于24℃环境下1 h,热应激组小鼠置于38或40℃的热环境下1 h。有机磷中毒组小鼠经腹腔注射给予9或15 mg/kg DDVP,对照组给予等量生理盐水。30 min后,取全血测量乙酰胆碱酯酶（AChE）活性,取心、脑和肝组织匀浆,测量其超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和羟自由基（.OH）抑制能力。实验期间观察小鼠一般情况,记录实验前后小鼠体质量。结果热环境（38或40℃）暴露使小鼠烦躁不安,活动量明显增加,摄水量降低,体质量减轻。与不同环境温度暴露的对照组相比,热应激复合DDVP中毒组小鼠全血AChE活性和心、脑和肝组织SOD活性和羟自由基抑制能力均明显下降（P〈0.05）,而MDA含量明显升高（P〈0.05）。热应激和DDVP中毒对上述指标的影响有交互作用。结论在本实验条件下,热应激和DDVP中毒对小鼠乙酰胆碱酯酶有显著的抑制作用,同时可引起组织脂质过氧化增强,提示氧化应激机制与高热复合DDVP中毒的加重效应有关。     

热休克蛋白在宫颈病变中的表达

目的研究几种主要热休克蛋白（heat shock protein, HSP）在不同病理改变的宫颈组织中的表达.方法根据病理诊断,把478例宫颈活检标本分为宫颈癌组（63例）、宫颈上皮内瘤形成组（CIN组,106例）、宫颈炎组（293例）及正常宫颈组（16例）.采用以特异性复合cRNA为内参照的定量RT-PCR法,检测各组标本的HSP70、HSP90α和HSP90β mRNA的表达.结果 （1）HSP70、HSP90α和HSP90β mRNA在宫颈浸润癌、CIN、宫颈炎及正常宫颈组织中的表达量均呈现阶梯式下降,差异均有极显著意义（P＜0.01）.（2）HSP90β mRNA在晚期宫颈癌中的表达比早期表达高（P＜0.05）;HSP70和HSP90β mRNA在低分化宫颈癌中的表达比高分化表达高（P＜0.05）;而HSP70、HSP90α和HSP90β mRNA在不同组织类型宫颈癌中的表达均无显著性差异（P＞0.05）.结论热休克蛋白在宫颈癌的发生和发展中起着重要的协同作用.HSP70和HSP90α与宫颈癌细胞的转化和增殖密切相关,HSP90β可能参与细胞的分化.     

高+Gx环境对猴舌黏膜上皮热休克蛋白质70表达的影响

目的 研究模拟高+Gx环境中猴舌黏膜上皮热休克蛋白质70(HSP-70)的表达. 方法 以9只雄性猕猴为对象,随机分为4组,对照组+1 Gx/300 s;实验1、2、3组,分别为+15 Gx/200 s、+18 Gx/165 s、+21 Gx/140 s.采用免疫组织化学方法 ,研究模拟高+Gx环境作用下猴舌黏膜上皮细胞组织病理学改变及HSP-70基因的表达情况,探讨其表达水平的改变与高+Gx环境的关系. 结果 组织病理学观察:实验组和对照组猴舌黏膜上皮细胞无明显变化;免疫组织化学观察:对照组舌黏膜上皮细胞核HSP-70呈阴性表达或弱阳性表达.实验组舌黏膜上皮细胞核HSP-70着色明显,呈强阳性表达,不同高+Gx组之间无明显差别. 结论 本研究表明模拟高+Gx环境可引起猴舌黏膜上皮细胞HSP-70基因表达增强.