多通道实时荧光定量PCR检测HPVDNA结果分析

目的探讨多通道实时荧光定量PCR检测HPVDNA的效果,并应用于日常检测工作。方法对临床1100例宫颈分泌物标本采用多通道实时荧光定量PCR仪进行8种高危HPVDNA分型及定量检测。8种高危HPV型别为主要高危型HPV16、18、45、31和次要高危型HPV33、52、58、67。结果在1100例标本中排除了14例B球蛋白为阴性的标本,剩余1086例标本总体的内标平均值为3．71×10^6IU／ml。随机重复性试验和对每个型别的各浓度标本进行的重复性试验每次扩增均为阳性,型别符合率为100％。共检测出阳性标本287例,HPV16、HPV18／45、HPV31、次要高危型和合并感染各有46、17、14、146和64例,分别占总阳性标本的16％、6％、5％、51％和22％。所有标本绝对定量值的分布近似于正态分布。结论多通道荧光定量PCR检测HPVDNA灵敏度高、复性好,可用于临床HPV感染的筛查与宫颈病变程度预测以及患者术后疗效观察。     

荧光定量PCR在检测儿童EB病毒感染中的应用

目的 探讨荧光定量PCR方法 检测Epstein-Barr Virus DNA(EBV-DNA)在儿童临床EB病毒感染诊断中的价值.方法 对480例表现为不明原因发热、咽炎、肝脾肿大等患儿采用实时荧光定量PCR方法 检测血浆EBV-DNA.结果 检测出 238 例患儿血浆EBV-DNA阳性,阳性率49.6%,其中男性132例,女性106例,其中阳性结果 拷贝数主要集中在4-5次方之间,占44.9%;其次1-4次方32.7%.临床表现以发热、淋巴结肿大、肝脾肿大居多,分别占66.8%、54.6%、65.1%.结论 荧光定量PCR方法 检测对儿童EB病毒(EBV)感染的检测具有早期、快速等优点,具有广泛的应用价值.     

鼠艾滋病模型血浆病毒载量荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立鼠艾滋病模型血浆病毒载量荧光定量聚合酶链（PCR）检测方法。方法将体外合成的鼠艾滋病病毒（FLV）核糖核酸（RNA）标准品稀释为10个浓度梯度，进行逆转录，PCR荧光定量检测，经批内与批间差异分析。再以PCR荧光定量检测不同倍数FLV脾悬液FLV拷贝数及相应被注射小鼠模型的血浆病毒载量，计算脾指数。结果研究设计的荧光定量PCR方法能检测到20—2×10^8copiesFLVRNA逆转录反应体系，在5个注射的FLV拷贝数范围内，血浆病毒载量与脾指数均不与初始注射的FLV拷贝数成正比，二者亦不呈现平行关系。结论研究采用的FLV荧光定量PCR方法敏感性好，特异性强，重现性好，显著提高FLV病毒的检测水平。     

实时荧光定量PCR法检测肾移植术后BK病毒和JC病毒感染及临床意义

目的检测肾移植患者术后BK病毒DNA和JC病毒DNA并探讨其临床应用价值。方法应用实时荧光定聚合酶链反应(PCR)对广东省第二人民医院125例同种异体肾移植患者术后血液及尿液标本分别进行BK病毒DNA和JC病毒DNA检测。结果 125例肾移植患者中,病毒尿症阳性共35例(28.0%),其中尿BK病毒DNA阳性25例(20.0%)、尿JC病毒DNA阳性10例(8.0%);病毒血症有20例(16.0%),其中血液BK病毒DNA阳性20例(16.0%)、JC病毒血症未检出;BK病毒DNA血液和尿液均为阳性有5例(4.0%),并经肾脏穿刺病理活检确证为BK病毒相关性肾病(BKVAN)。结论尿液、血液中的BK病毒和JC病毒检测能够早期发现BK、JC病毒感染,为预防肾移植术后多瘤病毒相关性肾病(PVAN)提供重要的依据。     

应用PCR方法检测头颈部肿瘤病人EB病毒的研究

多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法对一组头颈部肿瘤病人口咽部含漱液中Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ进行测定。结果表明：恶性肿瘤如鼻咽癌，恶性淋巴瘤，喉癌，鼻腔鼻窦癌，甲状腺癌等检出阳性率为７４．４７％；良性肿瘤如喉乳头状瘤，甲状腺瘤等检出阳性率为１３．５１％；对照组为鼻、咽、喉慢性炎症病人，仅１例结果阳性（７．１４％）。结果提示：ＥＢＶ可能参与了这些癌肿的发病。     

实时荧光定量PCR法检测肾移植术后BK病毒感染及意义

目的检测肾移植患者术后BK病毒DNA并探讨其临床应用价值。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)对86例同种异体肾移植患者术后血液及尿液标本进行BK病毒DNA检测。结果 86例肾移植患者中,尿BK病毒DNA阳性12例(14.0%),血液BK病毒DNA阳性6例(7.0%)。BK病毒DNA血、尿均为阳性5例患者中有4例经肾脏穿刺病理活检确证为BK病毒相关性肾病(BKVAN)。结论尿液BK病毒检测能够早期发现BK病毒感染,结合血液BK病毒检测为早期诊断、治疗并预防肾移植术后BKVAN提供重要的依据。     

用PCR法探讨EB病毒与胃癌的关系

胃癌组织中ＥＢ病毒的检出率因地区而异。为调查黑龙江地区胃癌ＥＢ病毒核酸的存在情况，我们用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法特异笥扩增本地区经临床病理确诊的胃癌组织中ＥＢ病毒ＥＢＮＡ１基因区域，结果２９例标本中有６例检出ＥＢ病毒ＤＮＡ，且胃癌病理类型均是胃腺癌，提示本地区胃癌特别是胃腺腺的发生与ＥＢ病毒感染密切相关。     

实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义

目的探讨实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA临床价值。方法对2367例临床血清标本用FQ-PCR方法进行HBV—DNA定量测定，并和ELISA两对半以及ALT结果进行比较。结果HBV—DNA阳性率为60．9％（1442／2367），其中大三阳HBV-DNA检出率为89．04％（845／949）、ALT升高47．84％（454／949）、小三阳HBV—DNA检出率为39．08％（408／1044）、ALT升高33．42％（349／1044）、单HBSAg63．8％（185／290）；单抗HBeHBV—DNA检出率4．54％（1／22）。结论实时跟踪定量检测的荧光定量PCR技术可以检测HBV的真实感染和复制情况是乙型肝炎病毒复制和传染性的直接病原学依据。     

应用EIA法检测血清EBV-IgM抗体早期诊断EB病毒感染

本文对儿科门诊发热、皮疹、全身淋巴结肿、心肌炎等不同临床表现的23例急性期患儿血清标本采用酶免疫法(EIA)检测抗EBV-IgM,检出2例阳性。此方法操作简便,取耳血单份血清标本即可检测,对临床早期诊断有重要意义。     

荧光定量PCR法检测乙肝病毒的临床意义

目的 探讨荧光定量PCR法检测乙肝病毒的临床意义。方法 荧光定量PCR法检测154例患者的乙肝病毒量,研究其与乙肝病毒抗体,谷丙转氨酶（ALT）及反映肝纤维化指标的透明质酸酶（HA）与层粘蛋白（LN）的关系。结果 免疫荧光定量PCR方法直接测定病毒量,明确反映病毒感染程度,其测定值与ALT呈一定程度正相关,与肝炎轻、中、重程度及肝纤维化程度成反比。结论 定量检测病毒可估计肝脏炎症程度并适时进行抗病毒及抗纤维化治疗。     

鼻咽癌患者血浆EBVDNA定量检测及临床意义

目的 探讨血浆EBV DNA 定量检测在鼻咽癌的诊断及监测鼻咽癌患者复发和转移中的临床价值. 方法 采用荧光定量PCR方法 检测血浆EBV DNA含量,比较治疗后缓解组与治疗前组、治疗后复发或转移组血浆EBV DNA含量的异差.结果 治疗前组患者血浆EBV DNA阳性率95.59%,中位拷贝数93×104copies/ml;治疗后缓解组阳性率16.67 %,中位拷贝数0 copies/ml;治疗后复发或转移组阳性率96.15%,中位拷贝数69×10 5copies/ml.治疗前组与治疗后缓解组、治疗后复发或转移组与治疗后缓解组相比较,差异均有显著性(P＜0.01).结论 血浆EBV DNA定量检测可作为鼻咽癌的诊断方法 之一,亦可作为监测鼻咽癌患者治疗后复发或转移的肿瘤标记物.     

全血EBV DNA载量检测在儿童EB病毒感染中的应用价值

目的：评价全血EBV DNA载量检测在儿童EB病毒（EBV）感染中的应用价值。方法将231例EBV活动感染儿童（原发感染174例,复发感染57例）、258例非活动EBV感染儿童（EBV既往感染）、45例无EBV感染健康儿童采用自动核酸提取实时荧光定量PCR法检测全血EBV DNA载量,探讨其与EBV感染的关系。结果 EBV活动性感染组全血EBV DNA阳性率81.8%,全血EBV DNA载量为（3.99±0.96）lg Copies/ml。EBV原发感染组与复发感染组的全血EBV DNA阳性率差异无统计学意义（字2＝0.419,P=0.517）,EBV DNA载量差异无统计学意义（t=1.236,P=0.221）。非活动EBV感染儿童组全血EBV DNA阳性率10.9%,全血EBV DNA载量为（2.89±0.20）lg Copies/ml。EBV活动性感染组与非活动性感染组的全血EBV DNA阳性率差异有统计学意义（字2＝251.600,P=0.0001）,全血EBV DNA载量差异有统计学意义（t=3.389,P=0.001）。非EBV感染组全血EBV DNA阳性率0。EBV原发感染组中,全血EBV DNA阳性率（82.7%）高于EBV- CA IgM阳性率（75.8%）,差异有统计学意义（字2＝6.160,P=0.008）,两者结果一致性不佳（Kappa=0.687）。以全血EBV DNA载量检测阳性作为诊断依据,敏感度75.9%,特异度91.2%,诊断符合率84.4%;在全血E-BV DNA载量为3.00lgCopies/ml时,是判断儿童EBV活动性感染的最佳临界点,敏感度70.1%,特异度95.3%,诊断符合率83.4%。结论全血EBV DNA载量是监测EBV活动性感染的独立指标,在儿童EBV感染诊断、疗效观察和愈后评估中的具有重要意义。     

荧光定量聚合酶链反应在患儿巨细胞病毒感染检测中的应用

本文通过荧光定量聚合酶链反应在小儿巨细胞病毒感染检测中的应用，认为其是检测小儿先天性或获得性感染的重要手段。     

48例颈淋巴结转移癌EB病毒PCR检测

应用ＰＣＲ技术检测４８例颈淋巴结转移瘤ＥＢ病毒ＤＮＡ，并与１０例淋巴结反应性增生对照。结果，４８例标本总阳性率为４７．９％，其中１７例经鼻咽部活检为鼻咽癌，７例原发性病灶为鼻咽部的转移性未分化癌均为阳性，２０例转移性腺癌中仅１例阳性，１０例反应性增生淋巴结皆阴性。     

EB病毒感染与结直肠癌的相关性

目的探讨EB病毒感染与结直肠癌发生的关系。方法用双温聚合酶链反应（PCR）扩增出EB病毒BamW区的121bp DNA片段,用此法对112份结直肠肿瘤和非肿瘤的肠镜活检标本进行了EB病毒DNA检测。结果结直肠腺癌肠镜活检组织中EB病毒阳性率2．9％（2／69）,10例配对癌旁、远离癌灶5cm以上结直肠组织和22例非肿瘤病变均阴性,1例直肠类癌亦阴性。结论结直肠癌活检组织中EB病毒感染率低,两者关系的进一步研究,有助于EB病毒致瘤机制的阐明。     

PCR技术检测大肠肿瘤及肿瘤样病变中EB病毒DNA

目的 探讨人类大肠肿瘤中是否存在疱疹病毒属中ＢＥ病毒的感染，ＥＢ病毒是否参与了肿瘤的致病作用。方法 应用ＰＣＲ方法对１０例大肠良性肿瘤或肿瘤样病变标本和１０例大肠恶性肿瘤病变标本进行ＥＢ病毒ＤＮＡ扩增。结果 在２０例病变标本中，ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性率为１９／２０，所得ＤＮＡ片段为３１１ｂｐ。结论 人类大肠良恶性肿瘤组织及某些称谓癌前病变的组织中存在的ＥＢ病毒感染。致病作用可能和宿主细胞之间基因调控，     

鼻咽癌病人多项免疫功能及EB病毒PCR检测的综合研究

为进一步了解ＥＢ病毒与鼻咽癌的关系,全面综合调查鼻咽癌病人的免疫功能,应用ＰＣＲ方法检测鼻咽病人组织块ＥＢ病毒ＤＮＡ,并对处国咽癌病人血清中ＥＢ病毒（ＥＢＶ－ＶＣＡ／ＩｇＡ）抗体、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、脂质过氧化物降解产物（ＭＤＡ）及数种微量元素含量进行测定。结果：从鼻咽癌病人鼻咽部活检组织中成功地检测出ＥＢ病毒ＤＮＡ片断。进一步证实了ＥＢ病毒与鼻咽癌的发生有密切关系。并对鼻咽癌病人血清Ｖ