卵巢上皮性癌OPCML基因的表达缺失和启动子甲基化

目的探讨OPCML基因在卵巢上皮性癌中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系。方法用逆转录—聚合酶链反应、限制性内切酶-聚合酶链反应检测卵巢正常组织、良性上皮性肿瘤、上皮性癌组织和SKOV-3、3AO、CAOV3卵巢癌细胞株OPCML基因的失表达及CpG岛甲基化。结果在卵巢癌中OPCMLmRNA的表达率显著低于正常卵巢组织(χ2=30·108,P=0·0000)和卵巢良性肿瘤组织(χ2=21·162,P=0·000)。SKOV-3和CAOV3细胞未见OPCMLmRNA表达,而3AO细胞可见OPCMLmRNA表达。在卵巢癌中,启动子CpG岛尤其是HapⅡ酶切位点甲基化率显著高于正常卵巢组织(χ2=13·630,P=0·0000)和良性肿瘤组织(χ2=11·797,P=0·000)。卵巢癌OPCML启动子CpG岛甲基化和mRNA失表达呈显著相关(r=11·589,P=0·002)。SKOV-3和CAOV3细胞有内切酶位点甲基化,而3AO细胞无酶切位点甲基化。结论卵巢上皮性癌细胞存在OPCML基因失表达;基因启动子CpG岛,尤其是HapⅡ酶切位点的甲基化是导致OPCML基因失表达的途径,但不是唯一途径。     

上皮性卵巢癌PTEN启动子CpG岛甲基化研究

目的探讨上皮性卵巢癌中抑癌基因PTEN启动子CpG岛的甲基化情况。方法选用甲基化敏感性核酸内切酶HpaⅡ酶切-PCR法,检测64例上皮性卵巢癌组织(浆液性卵巢襄47例,粘液性卵巢癌17例)以及12例正常卵巢组织中PTEN启动子CpG岛甲基化情况。结果正常卵巢组织、浆液性卵巢癌组织和粘液性卵巢癌组织中PTEN启动子甲基化阳性率分别为8.33％(1/12)、57.45％(27/47)和47.06％(8/17),浆液性和粘液性这两种不同组织学类型的上皮性卵巢癌之间的差异无显著性(P<0.05),但均与正常组织间有显著性差异(P分别<0.01,0.05)。结论 PTEN启动子CpG岛甲基化在浆液性卵巢癌和粘液性卵巢癌中均有很高的发生率,提示PTEN基因启动子异常甲基化可能是其在卵巢癌中主要灭活机制之一。     

APC基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的检测及临床意义

目的观察结肠腺瘤性息肉病（APC）基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的作用及临床意义。方法59例上皮性卵巢癌组织原发灶，32例相应的盆、腹腔转移灶，12例癌旁卵巢组织及30例正常卵巢组织，采用甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）法检测APC基因启动予区甲基化状态。结果上皮性卵巢癌组织原发灶及相应的盆、腹腔转移灶中存在APC基因启动子区异常甲基化，发生率分别为32．2％、40．6％，显著高于正常卵巢组织（P〈0．01）。12例癌旁卵巢组织中1例检测到APC基因启动子区甲基化，30例正常卵巢组织未检测到。APC基因启动子区甲基化的发生率在临床Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期（P〈0．05），在高分化癌中低于低分化癌（P〈0．05）。结论APC基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌发生密切相关，并可能与上皮性卵巢癌临床分期及分化程度有关。     

上皮性卵巢肿瘤中雌激素受体亚型表达的研究

目的　了解上皮性卵巢癌雌激素受体 (ER)α、β亚型表达在上皮性卵巢癌中的作用。 方法　选取 4 5例上皮性卵巢癌、10例良性卵巢上皮性肿瘤患者的石蜡病理切片 ,用SP免疫组化法测定ERα、ERβ蛋白表达情况 ,并与临床病理特征进行比较。结果　ERα、ERβ阳性染色均位于细胞核内。卵巢上皮性癌中 ,ERα(+) 5 1.1%(2 3 4 5 ) ,与良性肿瘤接近 (5 0 .0 % ) ;ERβ(+) 8.89% (4 4 5 ) ,显著低于良性肿瘤 (5 0 .0 % ) ,ERβ阳性率在卵巢浆液性癌、中低分化及Ⅲ、Ⅳ期癌中显著低于ERα(P <0 .0 1)。结论　ERα、β为核受体。原发性上皮性卵巢癌中ERβ阳性率显著降低 ,ERα ERβ升高可能为卵巢癌发生的一个标志。ERβ可能提示预后     

Wnt／β-catenin信号转导通路与卵巢癌的相关研究

目的研究Wnt／β-catenin信号通路的枢纽分子β-连环素（β-catenin）及其下游靶基因c—Myc在卵巢癌中的表达。方法应用免疫组化S-P法检测60例卵巢癌、24例卵巢上皮良性肿瘤以及26例正常卵巢上皮组织中β-catenin和c-Myc的表达情况。结果β-catenin在卵巢癌组织的异位表达与正常卵巢组织相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;β-catenin与卵巢癌的组织学分型以及分化程度具有相关性（P〈0．05）;c-Myc在卵巢上皮癌中表达分别与卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;c—Myc与卵巢癌分化程度相关（P〈0．05）;在卵巢癌组织中,β-catenin的异位表达与c—Myc的表达具有相关性（P〈0．05）。结论Wntβ-catenin信号通路可能是卵巢癌的发生途径。     

SOCS-3基因在结肠癌中的表达及甲基化测定

目的通过对细胞因子信号转导抑制因子-3（suppressor of cytokine siganaling-3,SOCS-3）基因在结肠癌和癌旁组织中的表达及其启动子甲基化状态的测定,探讨其与结肠癌发生、发展和转移等的关系。方法收集40例结肠癌患者的肿瘤标本,20例癌旁组织以及10例正常结肠组织．运用甲基化特异性PCR测定SOCS-3基因CpG岛甲基化状态,同时运用实时定量PCR分析SOCS-3基因在结肠癌组织中的表达水平。结果40例结肠癌组织中有34例（85％）存在SOCS-3基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中为2例（10％）,而正常结肠组织中没有检测到SOCS-3基因呈CpG岛甲基化;结肠癌组织中SOCS-3基因CpG岛甲基化组与无甲基化组相比．其SOCS-3基因的相对表达量明显减少（P〈0．05）,表明SOCS-3基因CpG岛甲基化可导致SOCS-3基因表达降低。与患者临床资料结合分析,发现SOCS-3基因CpG岛甲基化与性别、年龄无关（P〉0．05）,而与肿瘤病理分级和TNM分期有关（P〈0．05）。结论结肠癌中存在SOCS-3基因CpG岛异常甲基化,且因CpG岛的甲基化导致其基因表达降低。SOCS-3基因CpG岛甲基化可能参与了结肠癌的发生、发展和转移。     

雌激素受体亚型在卵巢子宫内膜样癌组织中的表达

目的：探讨雌激素受体亚型在卵巢子宫内膜样癌组织中的表达及其意义。方法：用ER－α单克隆抗体和ER－β多克隆抗体以免疫组化SP法检测30例卵巢子宫内膜样癌及30例卵巢上皮性良性肿瘤石蜡切片ER－α和ER－β的表达。结果：30例卵巢子宫内膜样癌组织中ER－α阳性率53．3％，ER－β阳性率46．7％；30例卵巢上皮性良性肿瘤中ER－β阳性率80％明显高于ER－α阳性率30％，两种亚型表达之间无联系（P＞0．05）。ER－α和ER－β的表达与FIGO手术分期和组织学分级之间无联系（P＞0．05）。结论：以上提示ER－α和ER－β可能与卵巢子宫内膜样癌的发生有关，免疫组化SP法检测雌激素受体亚型可能对临床治疗有一定指导意义。     

NF-κB在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨NF-κB在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学技术（S-P法）,对正常卵巢组织10例,卵巢上皮性良性肿瘤10例及上皮性卵巢癌49例组织中的NF-κB的表达进行检测。结果NF-κB在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为69.39%,显著高于正常卵巢和卵巢良性肿瘤（P〈0.05）。NF-κB的表达强度与病理分级呈正相关（P〈0.05）。结论上皮性卵巢癌组织中NF-κB表达显著增高,且在不同病理分级有显著差异,低分化组阳性率明显高于高中分化组,NF-κB可能在卵巢癌发生中起重要作用。     

卵巢上皮性癌组织中P27~（kipl）蛋白的表达及临床意义

【目的】探讨卵巢上皮性恶性肿瘤组织中P27kipl蛋白的表达及其临床意义。【方法】采用免疫组化染色（SP）法,检测47例卵巢上皮性恶性肿瘤组织、17例卵巢良性肿瘤组织及10例正常卵巢组织中P27kipl蛋白的表达。【结果】（1）卵巢上皮性恶性肿瘤组织中P27kipl蛋白表达的阳性率,明显低于卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织（P〈0.05）。（2）卵巢上皮性恶性肿瘤组织中,P27kipl蛋白表达的水平与患者的临床分期及病理学分级相关。（3）卵巢上皮性癌患者中,P27kipl蛋白表达阳性者患者的预后较好。【结论】P27kipl蛋白的表达可能在卵巢癌的发生、发展中起重要作用。P27kipl蛋白表达水平的检测有可能作为判断卵巢癌患者预后的有用指标。     

转化生长因子-β1在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的:探讨上皮性卵巢癌中TGF-β1基因及蛋白的表达。方法:应用逆转录-巢式PCR法检测上皮性卵巢癌40例、卵巢良性肿瘤40例及正常卵巢20例组织中TGF-β1 mRNA表达,并通过凝胶图像系统分析其相对表达量。同时采用免疫组化方法分析组织中TGF-β1蛋白的定位和表达。结果:TGF-β1 mRNA表达率上皮性卵巢癌组织为100%(40/40),明显高于良性卵巢肿瘤的70.0%(28/40)和正常卵巢组织55.0%(11/20)(P=0.0002;P<0.01)。免疫组织化学法显示上皮性卵巢癌组织中TGF-β1蛋白表达率和表达强度均明显高于卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织(P<0.05),且TGF-β1表达强度与卵巢癌淋巴结转移、腹水形成和肿瘤分期有关。结论:TGF-β1的表达与上皮性卵巢癌的发生发展、转移等密切相关。     

卵巢癌中ASC基因表达缺陷与其甲基化的关系

目的 探讨ASC(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD)基因在卵巢组织中的表达,并分析其临床意义及其表达缺陷与基因甲基化的关系.方法 以18例卵巢癌组织和8例正常卵巢组织、8例卵巢良性肿瘤作为研究对象,采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)检测卵巢组织中ASC基因启动子区域甲基化的状态,用RT-PCR和免疫组织化学SP法分别检测其mRNA和蛋白的表达.结果 在正常卵巢和卵巢良性肿瘤组织中均未扩增出甲基化条带,在卵巢癌组织中,ASC基因甲基化率为38.9%(7/18).在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织和卵巢癌组织中,ASC基因mRNA和蛋白的表达强度依次下降,其中发生甲基化组织的mRNA和蛋白的表达明显低于未发生甲基化的组织.ASC蛋白在高中分化的卵巢癌组织中的表达明显高于低分化组织.结论 卵巢癌中存在ASC基因甲基化,这可能是导致该基因沉默的原因之一,且在卵巢癌的发病机制中起作用.     

妇科恶性肿瘤组织p16基因5′CpG岛高甲基化及其临床意义

①目的　探讨 p16基因 5′CpG岛高甲基化在妇科恶性肿瘤发生发展中的作用。 ②方法　采用以PCR为基础的甲基化分析法 ,检测p16基因第 1外显子 5′CpG岛在 34例子宫颈癌、4 0例子宫内膜癌和 4 0例上皮性卵巢癌组织及其相应正常组织中的高甲基化情况。③结果　正常组织中均未见 p16基因第 1外显子 5′CpG岛的高甲基化 ,子宫颈癌、子宫内膜癌和上皮性卵巢癌组织中的高甲基化率分别为 2 9.4 %、30 .0 %和 10 .0 %。子宫颈癌、子宫内膜癌的高甲基化率高于正常宫颈组织 (χ2 =5 .4 0、4 .33,P <0 .0 5 )。子宫颈癌和子宫内膜癌组织的高甲基化与临床分期和组织学分级有关 (χ2 =4 .2 9～ 9.78,P <0 .0 5 )。④结论　p16基因 5′CpG岛的高甲基化在子宫颈癌和子宫内膜癌的发生发展中起一定作用     

胃癌p16基因启动子CpG岛甲基化研究

目的：探讨p16基因启动子CpG岛甲基化在胃癌中的表达及意义．方法：采用特异性甲基化PCR（MSP）法检测p16基因启动子CpG岛甲基化水平．结果：对照组未检测到CpG岛甲基化,胃癌细胞株均检测到CpG岛甲基化,23例（74％）胃癌组织检测到CpG岛甲基化．此外,17例（74％）癌旁组织检测到CpG岛甲基化．胃癌组织p16基因CpG岛甲基化与分化程度及淋巴结转移之间无相关关系（P〉0．05）．结论：胃癌广泛存在p16基因启动子CpG岛甲基化,并且可能是胃癌发生的早期分子事件．     

胃癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态及其与蛋白表达的关系

目的：探讨胃癌组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌生物学行为的关系,并分析hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化与其蛋白表达的相关性。方法：采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）技术和免疫组织化学SP法检测45例患者胃癌组织、正常胃组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况及蛋白的表达。结果：hMLH1基因启动子区CpG岛在胃癌及正常组织中的甲基化阳性率分别为33.3%和0（P〈0.05）;hMLH1蛋白在胃癌及正常组织中的阳性率分别为57.8%和95.2%（P〈0.05）;hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌的临床病理参数无关（P〉0.05）;hMLH1基因启动子甲基化与hMLH1蛋白表达呈明显的负相关（P〈0.05）。结论：hMLH1基因启动子区CpG岛的异常甲基化是引起蛋白表达缺失的主要原因,hMLH1蛋白表达缺失与胃癌的发生有关。     

YKL-40和VEGF在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨YKL-40和VEGF在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法选择青岛大学医学院附属医院2012年1月-12月收治的30例卵巢癌患者,另选择同期正常卵巢标本20例和卵巢良性肿瘤患者20例,利用免疫组化方法检测YKL-40和VEGF蛋白在卵巢组织的表达。结果卵巢癌组YKL-40和VEGF的表达阳性率分别为80%（24/30）和73.3%（22/30）,明显高于正常卵巢组和卵巢良性肿瘤组,结果具有统计学意义（P〈0.01）;YKL-40和VEGF的表达与卵巢癌的临床分期有关（P〈0.05）,与年龄、组织分级、组织分型都无关。结论 YKL-40和VEGF在上皮性卵巢癌的发生和转移中起重要作用,可以作为判断卵巢癌患者预后的一种新分子标志物。     

卵巢上皮性癌组织中P21蛋白的表达及其临床意义

目的：研究P21蛋白在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织及卵巢上皮性癌组织中的表达,探讨P21蛋白与卵巢上皮性癌临床病理特征的关系。方法：选取手术切除的组织标本,其中正常卵巢组织20例、卵巢良性上皮性肿瘤组织20例和卵巢上皮性癌组织58例。采用免疫组织化学法染色,检测上述3组患者组织中P21蛋白的表达情况。结果:P21蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达率明显低于在正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织（P<0.05）,并且P21蛋白的表达率随着组织病理分级的升高而逐渐降低,随着手术病理分期的升高而逐渐减弱,但在不同组织学类型中的表达率差异无统计学意义（P>0.05）。结论: P21蛋白的低表达可能促进卵巢癌的发生发展,其低表达可能预示着肿瘤恶性程度高、更具有侵袭性和不良预后。     

雌激素受体在卵巢癌研究中的进展

卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一,其发生的分子机制尚不清楚。近年来调查显示,在绝经期进行雌激素治疗的女性发生上皮性卵巢癌的风险明显上升,但目前对雌激素在卵巢癌发生发展中的作用机制还不清楚。有证据表明,在正常卵巢组织中主要表达雌激素受体（ ER ）β,在发生上皮性卵巢癌后ERα表达升高,且ERα/ERβ比值上调,这表明雌激素受体可能在上皮性卵巢癌发生发展中起重要的作用。作者就雌激素、雌激素受体与上皮性卵巢癌之间的关系以及雌激素的作用机制作一综述。     

钙网蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨钙网蛋白(calreticulin,CRT)在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测40例上皮性卵巢癌、20例卵巢良性肿瘤及10例正常卵巢组织中CRT的表达情况。结果 CRT在上皮性卵巢癌中表达明显高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,CRT在上皮性卵巢癌中的表达与组织病理分级、临床分期、淋巴结转移均有关,与组织学分型无关。结论 CRT表达升高在上皮性卵巢癌的发生、分化、进展过程中起重要的作用,CRT有可能成为早期诊断的新标志物及治疗卵巢癌的新靶点。     

卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白表达检测

目的:检测卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白的表达。方法:应用甲基化特异性PCR法和免疫组织化学SP法分别检测20例正常卵巢上皮组织、20例卵巢交界性上皮性肿瘤组织以及40例卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化状态以及β-catenin蛋白的表达。结果:在正常卵巢上皮、卵巢交界性上皮性肿瘤以及卵巢上皮性癌组织中,SFRP5基因启动子区甲基化率分别为0.0%、10.0%、67.5%,差异有统计学意义(P<0.001);β-catenin蛋白的异常表达率分别为5.0%、40.0%、72.5%,差异有统计学意义(χ2=24.962,P<0.001)。卵巢上皮性癌组织中β-catenin蛋白的异常表达与SFRP5基因启动子区甲基化有关联(rP=0.468,P<0.001)。结论:SFRP5基因启动子区甲基化可能导致β-catenin蛋白异常表达,并可能通过激活Wnt/β-catenin信号传导通路促进卵巢上皮性癌的发生发展。     

乳腺癌雌激素受体α基因启动子甲基化与其蛋白表达的关系

目的：检测乳腺癌雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）基因启动子区CpG岛甲基化状态,探讨乳腺癌ERα启动子甲基化与其蛋白表达及临床病理的关系。方法：采用免疫组化EnVisionTM二步法检测20例正常乳腺组织、44例乳腺癌组织ERα基因的表达,同时运用甲基化特异性PCR（Methylation-Specific PCR,MSP）及测序法分别检测ERα基因启动子A区和B区CpG岛的甲基化状态。结果：32例ERα阳性乳腺癌组织中,ERα启动子A区、B区甲基化率分别为28.2%和18.8%。12例ERα阴性乳腺癌组织中,ERα启动子A区、B区甲基化率分别为66.7%和58.3%。ERα阳性乳腺癌组、ERα阴性乳腺癌组、乳腺癌组的ERα启动子A、B区甲基化率均较正常组显著增高（P〈0.05）;ERα阴性乳腺癌组的ERα启动子A、B区甲基化率较ERα阳性乳腺癌组均显著增高（P〈0.05）。乳腺癌组织ERα表达与启动子区甲基化之间呈显著负相关。结论：乳腺癌组织ERα基因表达沉默与其启动子A区、B区CpG岛甲基化相关,后者有可能成为乳腺癌预后不良的分子检测指标。