鞘内注射GABA转运体-1抑制剂NO-711对CCI大鼠脊髓背角pERK表达的影响

目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)转运体-1(GAT-1)抑制剂NO-711对坐骨神经慢性松结扎(OCI)大鼠机械和热痛阈及脊髓背角神经元磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)表达的影响,探讨NO-711在脊髓水平抗痛敏的机制.方法 雄性SD大鼠126只,随机均分为六组(n=21):CCI+NO-711 50μg组(N50组)、CCI+NO-711 100 μg组(N100组)、CCI+NO-711 200 μg组(N200组)、CCI+生理盐水组(CN组)、CCI组、假手术组(S组).CCI组和S组在术前、术后1、3、5、7、14、21 d测定大鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL);其余各组大鼠在手术前5 d先进行鞘内置管,CCI手术后5 d鞘内注射不同剂量的NO-711或生理盐水,测定给药前、给药后30 min、1、2、4、8 h大鼠MWT、TWL及脊髓背角pERK表达的变化.结果 CCI组MWT和TWL术后3 d后各时点较术前2 d均降低和缩短、且相应时点均低于和短于S组(P＜0.01);与给药前比较,CN组大鼠各时点MWT和TWL,差异无统计学意义,而NO-711各剂量组大鼠给药后MWT和TWL均呈剂量依赖性增加;与CCI组和NS组比较,NO-711对脊髓背角pERK表达呈剂量依赖性抑制.结论 鞘内注射NO-711能明显抑制CCI大鼠机械痛敏和热痛敏及脊髓背角pERK表达,提示pERK介导NO-711在脊髓水平具有抗痛敏效应.     

脊髓背角γ-氨基丁酸转运体-1在大鼠骨癌痛中的作用

目的 评价脊髓背角γ-氨基丁酸转运体-1 (GAT-1)在大鼠骨癌痛中的作用.方法 清洁级健康雌性SD大鼠80只,体重150～180 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=16):假手术组(Ⅰ组);骨癌痛组(Ⅱ组)采用胫骨上段骨髓腔接种Walker-256乳腺癌细胞的方法制备大鼠骨癌痛模型;假手术+ GAT-1选择性抑制剂NO-711组(Ⅲ组)和骨癌痛+NO-711(Ⅳ组)于术后第14天鞘内注射NO-711 20 μg,1次.d,连续3d;骨癌痛+生理盐水组(Ⅴ组)于术后第14天鞘内注射10μl生理盐水,1次/d,连续3d.于术前1d、术后第3、5、7、10、14、16天时测定大鼠机械痛阈,术后第16天机械痛阈测定后处死大鼠,取腰段脊髓,采用Western blot法检测脊髓GAT-1的表达,采用免疫荧光双标法观察Ⅰ组和Ⅱ组大鼠患侧脊髓GAT-1和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应阳性产物的共表达.结果 与Ⅰ组和Ⅲ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组术后第7～ 16天机械痛阈降低,Ⅱ组和Ⅴ组术后GAT-1表达上调(P＜0.05);与Ⅱ组和Ⅴ组比较,Ⅳ组术后第16天鞘内给药后机械痛阈升高,脊髓背角GAT-1表达下调(P＜0.05);与Ⅰ组比较,Ⅱ组患侧脊髓GFAP和GAT-1共表达增加(P＜0.05).结论 脊髓背角GAT-1的表达上调参与了大鼠骨癌痛的形成与维持,该作用可能与脊髓星形胶质细胞的活化有关.     

脊髓背角P2Y1受体在大鼠骨癌痛形成中的作用

目的 评价脊髓背角P2Y1受体在大鼠骨癌痛形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雌性SD大鼠90只,体重150～180 g,随机分为5组(n=18):假手术组(Ⅰ组)、骨癌痛组(Ⅱ组)、假手术+P2Y1受体特异性拮抗剂MRS 2179组(Ⅲ组)、骨癌痛+生理盐水组(Ⅳ组)和骨癌痛+MRS2179组(Ⅴ组).采用胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌细胞的方法制备骨癌痛模型.Ⅲ组和Ⅴ组术后第7～9天鞘内注射MRS2179 100 pmol/10μl,1次/d,Ⅳ组注射等体积生理盐水.于术前及术后第3、7、9、12、15、18天给药后测定机械痛阈,于术后第9天测定机械痛阈后处死6只大鼠,取L4～6脊髓背角,测定P2Y1受体和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 与Ⅰ组和Ⅲ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组术后第7～18天机械痛阈降低,P2Y1受体和p-ERK1/2表达上调(P＜0.01);与Ⅱ组和Ⅳ组比较,Ⅴ组术后第9～18天机械痛阈升高,P2Y1受体和p-ERK1/2表达下调(P＜0.01).结论 脊髓背角P2Y1受体参与了大鼠骨癌痛的形成,可能与ERK1/2的激活有关.     

脊髓Cav3.2型钙通道在大鼠慢性神经病理性痛形成中的作用

目的探讨Cav3.2型钙通道在大鼠慢性神经病理性痛形成中的作用。方法健康雄性SD大鼠,制备大鼠背根神经节慢性压迫（CCD）模型,选取鞘内置管成功的32只大鼠,随机分为4组（n=8）：假手术组（S组）、CCD模型组（CCD组）、CCD＋Cav3.2反义寡聚核苷酸组（CCD＋Cav3.2-AS组）和CCD＋Cav3.2错义寡聚核苷酸组（CCD＋Cav3.2-MM组）。S组和CCD组于CCD后1～4d每天早晚鞘内注射生理盐水10μl;CCD＋Cav3.2-AS组和CCD＋Cav3.2-MM组于CCD后1～4d每天早晚鞘内注射Cav3.2反义寡聚核苷酸或Cav3.2错义寡聚核苷酸12.5μg（10μl）。各组于CCD前2d和CCD后1～5d测定大鼠机械刺激缩足反应阈值（MWT）和热刺激缩足潜伏期（TWL）。于CCD后5d处死大鼠,取L4,5脊髓节段采用免疫组化法测定脊髓背角神经型一氧化氮合酶（nNOS）的表达。结果与CCD前2d比较,CCD组、CCD＋Cav3.2-AS组和CCD＋Cav3.2.MM组CCD后1～5d MWT和TWL均降低（P〈0.05或0.01）。与S组比较,其余3组CCD后1～5d MWT、CCD后2～5d TWL降低（P〈0.01）。与CCD组比较,CCD＋Cav3.2-AS组术后3～5d MWT和TWL升高（P〈0.01）,CCD＋Cav3.2- MM组差异无统计学意义（P〉0.05）。与S组比较,其余3组脊髓nNOS表达上调（P〈0.01）;与CCD组比较,CCD＋Cav3.2-AS组nNOS表达下调（P〈0.01）,CD＋Cav3.2-MM组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论Cav3.2型钙通道参与了大鼠慢性神经病理性痛的形成,其机制与抑制脊髓背角nNOS的表达上调有关。     

脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S在大鼠骨癌痛维持中的作用

目的 探讨脊髓背角小胶质细胞组织蛋白酶S(CatS)在大鼠骨癌痛维持中的作用.方法 雌性未交配SD大鼠50只,4～6周龄,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将其分为5组(n=10):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、假手术+CatS抑制剂吗啉亮氨酸高苯丙氨酸乙烯基苯基砜(LHVS)组(S+L组)、骨癌痛+二甲基亚砜组(BCP+D组)和骨癌痛+LHVS组(BCP+L组).左侧胫骨骨髓腔内接种浓度为2×107/ml Walker256细胞5μl制备大鼠骨癌痛模型.分别于造模后10、11、12d时S+L组和BCP+L组鞘内注射LHVS 50 nmol/10l,1次/d,BCP+D组给予等容量二甲基亚砜.分别于造模前1d(基础状态)及造模后3、6、9、10、11、12 d(T0-6)测定机械缩爪反应阈(MWT),分别于鞘内给药前、鞘内给药后0.5、1.0、3.0、6.0、9.0、12.0、24.0 h时测定(MWT).处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定OX-42表达.结果 与S组比较,BCP组、BCP+D组和BCP+L组T2-6时MWT降低,脊髓背角OX-42表达上调(P＜0.01),S+L组MWT和脊髓背角OX-42表达差异无统计学意义(P＞0.05);与BCP组比较,BCP+L组T4-6时MWT升高,脊髓背角OX-42表达下调(P＜0.01),BCP+D组MWT和脊髓背角0X-42表达差异无统计学意义(P＞0.05).S+L组和BCP+D组鞘内给药后3.0、6.0、9.0h时MWT低于BCP+D组(P＜0.01).结论 脊髓背角小胶质细胞CatS激活参与了大鼠骨癌痛的维持.     

吗啡联合加巴喷丁对持续性术后痛大鼠脊髓Toll样受体4表达的影响

目的研究鞘内注射吗啡联合加巴喷丁（gabapentin,GBP）对持续性术后痛大鼠脊髓Toll样受体4（toll-likereceptor4,TLR4）表达的影响。方法选择鞘内置管成功的雄性sD大鼠100只,体重200g-250g,采用随机数字表法随机分为5组（每组20只）：假手术组（S组）、持续性术后痛组[皮肤／肌肉切口和牵拉（skin／muscle incision and retraction,SMIR）组]、SMIR组十鞘内吗啡组（M组）、SMIR组＋鞘内GBP组（G组）和SMIR组＋鞘内吗啡联合GBP组（M±G组）。S组和SMIR组于术前30min和术后1d-3d鞘内注射人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid, ACSF）20μl,1次／d;M组、G组和M组＋G组于术前30min和术后1d-3d分别鞘内注射吗啡2．5μg、GBP50μg和吗啡2．5μg联合GBP50μg,1次／d;采用Flatters法建立大鼠SMIR持续性术后痛模型;于术前1d及术后3、7、12d和22d测定机械缩足反应阈值（mechanical withdrawal threshold,MWT）;采用Western印迹法检测脊髓TLR4蛋白表达的变化。结果与术前及S组比较,SMIR组、M组、G组大鼠术后3、7、12d和22dMWT明显降低[术后12dMWT分别为（54．9±7．7）、（26．1±4．3）、（30．9±4．1）、（31．6±3．8）g]（P〈0．05）,术后3、7、12d脊髓TLR4蛋白表达明显增加[术后7dTLR4分别为（22．4±1．1）、（73．9±5．6）、（71．3±3．2）、（70．4±4．5）]（P〈0．05）,而SMIR组、M组、G组间比较差异均无统计学意义;与SMIR组、M组和G组比较,M＋G组大鼠术后3、7、12dMWT明显升高[分别为（49±6）、（47±7）、（43．8±2．9）g]（P〈0．05）,术后3、7、12d脊髓TLR4蛋白表达则明显较低[分别为（42．6±2．2）、（56．8±3．0）、（38．6±4．8）]（P〈0．05）。结论在SMIR持续性术后痛大鼠中,鞘内吗啡联合GBP的镇痛作用可能与抑制脊髓TLR4表达有关。     

大麻素受体2激动剂JWH-015对骨癌痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的影响

目的探讨腹腔注射大麻素受体（cannabinoid receptor,CB）2激动剂对骨癌痛大鼠脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（phosphorylated cyclic AMP respons eclement binding protein,pCREB）表达的影响。方法运用随机数字表法将63只雌性SD大鼠分为3组：肿瘤给药组（J组,15只）、肿瘤对照组（D组,24只）和假手术对照组（S组,24只）。J组、D组的大鼠左侧胫骨上端骨髓腔被注入5μl Walker256大鼠乳腺癌细胞制备骨癌痛模型;S组则注入等量的生理盐水。在造模后第10天,J组腹腔注射JWH-015（100μg/500μ1）,D组、s组注射等量JWH-015溶剂二甲基亚砜（dimethylsulfoxide,DMSO）。每组大鼠于造模前1d,造模后4、7、10d,腹腔注射后2、6、24、48、72h,检测手术侧机械刺激缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold,pwMT）和行走痛行为学评分。D组和S组大鼠于造模后4、7d,J组、D组和S组大鼠于造模后10d及腹腔注射后6、24、72h,取脊髓腰膨大进行免疫印迹分析。结果与S组比较,J组和D组大鼠造模后7d PWMT开始降低（P〈0.05）,造模后10d行走痛行为学评分增加（P〈0.05）,脊髓背角pCREB表达水平于7、10d上调（P〈0.05）.与D组比较,腹腔注射JWH-015后24h,J组PWMT（8.7±1.6）g显著上升（P〈0.05）,行走痛行为学评分（1.0±0.6）分和pCREB的表达（0.56±0.10）明显下降（P〈0.05）。结论腹腔注射JWH-015可能通过下调脊髓背角pCREB的表达改善骨癌痛大鼠的痛行为。     

氯胺酮对大鼠脊髓背角星形胶质细胞的保护机制

目的 探讨氯胺酮对N-甲基-D天冬氨酸（NMDA）诱导的大鼠脊髓背角星形胶质细胞损伤的保护机制。方法 取新生2～3dWistar大鼠40只T12～L5脊髓背角星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞随机分六组：NMDA组（N组）,氯胺酮组（K组）、NMDA加不同浓度氯胺酮组（标记为NK1～NK3组）,对照组（C组）。加药后培养30min或24h取各组细胞检测超氧化物岐化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量,免疫细胞化学观察Bcl-2／Bax表达,流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率和胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）。结果 与C组比较,N组细胞发生大量凋亡（P〈0．01）,Bax强阳性表达,Bcl-2阴性表达,SOD活性显著降低（P〈0．01）,MDA含量明显增加（P〈0．01）,[Ca^2＋]i显著升高（P〈0．01）。与N组比较,NK2、NK3组细胞凋亡明显减少（P〈0．05或P〈0．01）,Bcl-2阳性表达,Bax阴性表达,[Ca^2＋]i低（P〈0．05或P〈0．01）,SOD活性增加（P〈0．01）,MDA含量低（P〈0．01）。结论 氯胺酮抑制激活的背角星形胶质细胞内Ca^2＋超载,增强Bcl-2蛋白表达,抑制NMDA诱导的细胞凋亡,并增强抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化反应引起的细胞损伤。     

骨癌痛大鼠脊髓背角T细胞死亡相关基因8表达的变化

目的 探讨骨癌痛大鼠脊髓背角T细胞死亡相关基因8(TDAG8)表达的变化.方法 雌性未交配SD大鼠224只,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组:正常对照组(Ⅰ组,n＝64)、生理盐水组(Ⅱ组,n＝64)和骨癌痛组(Ⅲ组,n＝96).采用左侧胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌肿瘤细胞的方法建立骨癌痛模型.Ⅲ组于接种前1天(基础状态)及接种后第1、3、6、9、12、15、18天、Ⅰ组和Ⅱ组于相应时点取8只大鼠,测定左后肢机械缩足阈值(MWT).Ⅲ组于接种前1天(基础状态)及接种后第6、9、12、15、18天各处死16只,Ⅰ组和Ⅱ组相应于接种后第18天处死16只,取L4～6脊髓,免疫组化染色法测定脊髓背角TDAG8阳性细胞计数,实时定量PCR法检测脊髓TDAG8 mRNA的表达.结果 与Ⅰ组及基础值相比,Ⅲ组接种后第6～ 18天MWT降低,脊髓背角TD-AG8阳性细胞计数升高,脊髓TDAG8 mRNA表达上调(P<0.01),Ⅱ组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨癌痛大鼠脊髓TDAG8表达上调,该变化可能是骨癌痛形成的机制.     

七氟烷诱导大鼠海马HO－1基因表达信号转导通路的研究

目的：探讨七氟烷诱导大鼠海马血红素氧合酶－1（NO－1）表达的信号转导通路。 方法：40只Wistar大鼠随机分为5组（n=8）：正常培养组（C组）、0．6MAC七氟烷组（s组）．0．6MAC七氟烷＋SB203580组（SB组）、0．6MAC七氟烷＋U-0126组（u组）、0．6MAC七氟烷＋SP600125（SP组）。C组大鼠正常喂养。S组大鼠吸入0．6MAC七氟烷60min后继续培养24h。SB组、U组和SP组在大鼠吸入0．6MAC七氟烷时分别腹腔注100mg／kg SB203580、100mg／kg U-0126或1mg／kg SP600125后同S组处理。检测大鼠海马组织中HO－1－mRNA和磷酸化ERK1／2（p^ERK1／2）、磷酸化P^38（PP^38）．磷酸化JNK（P^JNK）、磷酸化HO-1（P^HO-1）蛋白的表达。 结果：与C组比较，S组大鼠海马HO-1～mRNA的表达增加（P〈0．05），p^ERK1／2（P〈0．05），PP38（P〈0．05）和HO^-1（p〈0.05）蛋白表达增加。与S组比较，SB组大鼠海马HO^-1 -mRNA的表达减少（P〈0．05），PP^38（p〈0．05）和PHO^-1（P〈0．05）蛋白表达减少，P^ERK1／2（p〈0．05）和P^JNK（p〈0．05）蛋白表达变化不明显（P〉0．05）。与S组比较，U组大鼠海马HO^-1-mRNA的表达减少（p〈0．05），P^ERK1／2（P〈0．05）和PHO^-1（P〈-．05）蛋白表达减少．PP^38（p〉0．05）和P^JNK（p〉0．05）蛋白表达变化不明显。与S组比较，SP组大鼠海马HO^-1-mRNA的表达变化不明显（p〉0．05），p^JNK蛋白表达减少（P〈0．01）．P^ERK1／2（p〉0．05），PP^38（p〉0.05）和PHO^-1（P〉0．05）蛋白表达变化不明显。 结论：七氟烷通过^ERK1／2和P^38信号转导通路诱导大鼠海马HO－1－mRNA的表达。     

鞘内复合应用氯胺酮和L-NAME对甲醛炎性疼痛大鼠脊髓c-fos表达的影响

目的观察鞘内复合应用非选择性一氧化氮合酶（NOS）抑制药-N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯（L-NAME）对氯胺酮抑制甲醛炎性疼痛大鼠脊髓后角c-fos表达效应的影响。方法选择鞘内置管后无神经损伤症状的雌性SD大鼠24只，随机均分为四组，分别经鞘内导管注入均为10μ1容量的生理盐水（K0组）、氯胺酮25μg（K1组）、氯胺酮150μg（K2组）和氯胺酮25μg加L-NAME100μg（KL组）。20min后在大鼠右足底皮下注射5％甲醛40μl，另选4只大鼠在右足底皮下注射生理盐水作为对照（N组）。观察大鼠的疼痛行为表现，并采用免疫组化方法检测脊髓后角FOS阳性细胞（FIL）的数目。结果K1、K2和KL组大鼠同侧脊髓后角FIL总数分别较K。组大鼠分别降低了32．4％、48．5％和39．1％。K1组和K：组大鼠脊髓后角板层Ⅰ～Ⅱ和板层Ⅴ～Ⅵ／Ⅹ内的FIL数目均显著低于K0组大鼠（P〈0．05），而KL组大鼠仅脊髓后角板层Ⅴ～Ⅵ／Ⅹ内的FIL数目显著低于K1组大鼠（P〈0．05）。结论鞘内注射氯胺酮呈剂量依赖性抑制甲醛炎性疼痛大鼠脊髓后角内c—fos的表达，并且复合应用L-NAME可选择性增强其对脊髓后角深层c—fos表达的抑制。     

p38MAPK信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用.方法 雌性sD大鼠56只,体重150～170 g,随机分为4组(n=14):生理盐水对照组(NS组)、骨癌痛组(BC组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和p38MAPK抑制剂组(SB203580组).骨髓腔内注射Walker256细胞悬液制备大鼠骨癌痛模型,注射后10 d,DMSO组和SB203580组分别鞘内注射5%二甲基亚砜和SB203580(10 μg)10 μl.各组随机取8只大鼠,于注射Walker256细胞悬液前、注射后1、3、5、7、10 d,鞘内给药后1、3、6、12、24 h时采用von Frey纤维丝测定术侧后爪机械缩足反射阈值(MWT);各组余6只大鼠鞘内给药后6 h时取L_(4,5)脊髓,采用免疫组化法检测脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)的表达水平.结果 骨髓腔内注射Walker256细胞悬液后7 d大鼠术侧后爪MWT开始降低,鞘内注射SB203580提高了MWT;骨髓腔内注射Walker256细胞悬液后脊髓背角pCREB表达上调,鞘内注射SB203580后脊髓背角pCREB表达下调.结论 鞘内注射SB203580可通过抑制脊髓背角pCREB的表达减轻骨癌痛;p38MAPK信号转导通路在骨癌痛中起重要作用.     

脊髓原钙粘蛋白20在大鼠骨癌痛形成中的作用

目的 探讨脊髓原钙粘蛋白20 (PCDH20)在大鼠骨癌痛形成中的作用.方法 SPF级雌性SD大鼠36只,体重180 ～ 200 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=9):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、慢病毒对照组(LC组)、PCDH20 siRNA-LV组(P组).LC组和P组分别于脊髓内注射对照慢病毒和PCDH20 siRNA慢病毒4μl.1周后建立骨癌痛模型,采用右侧胫骨上段骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞的方法制备.于病毒注射前1 d(T1)、骨癌痛模型建立前1 d(T2)、模型建立后7、14和21 d(T3、T4、T5)时测定机械缩足阈值(MWT).骨癌痛模型建立后21 d MWT测定结束后,取术侧胫骨,HE染色后光镜下观察胫骨癌细胞侵犯情况;取脊髓组织,采用免疫组化法和Western blot法测定脊髓PCDH20和突触后致密物蛋白质95(PSD95)蛋白的表达水平,采用RT-PCR法测定脊髓PCDH20和PSD95 mRNA的表达水平.结果 BCP组、LC组及P组肿瘤细胞突破骨髓腔,侵犯骨皮质,骨皮质结构严重破坏;与S组比较,BCP组、LC组和P组T3～T5时MWT明显降低,BCP组和LC组脊髓PCDH20和PSD95 mRNA及其蛋白表达水平明显上调,P组脊髓PCDH20蛋白水平上调(P＜0.05);与BCP组比较,LC组各时点MWT、脊髓PCDH20和PSD95 mRNA及其蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05),P组T4和T5时MWT明显升高,脊髓PCDH20和PSD95 mRNA及其蛋白表达水平下调(P＜0.05).结论 PCDH20通过调控大鼠脊髓PSD95的表达,调节兴奋性突触的功能,从而参与骨癌痛的形成.     

异丙酚对大鼠内脏抗伤害作用与中枢γ-氨基丁酸受体A受体的关系

目的探讨异丙酚对大鼠内脏抗伤害作用与中枢γ-氨基丁酸受体A（BABAA）的关系。方法49只雄性SD大鼠，体重180～240g，随机均分为7组：腹腔异丙酚10mg／kg体重组（Pi．P．）、侧脑室荷包牡丹碱0．25μg组（Bici．c-v．）、脊髓蛛网膜下腔荷包牡丹碱0．25μg组（Bici．t．）、侧脑室与脊髓蛛网膜下腔荷包牡丹碱各0．125μg组（Bici．c．v．／i．t．）、侧脑室预注荷包牡丹碱0．25μg＋腹腔异丙酚10mg／kg体重组（Bici．c．v．＋Pi．P．）、脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱0．25μg＋腹腔异丙酚10mg／kg体重组（Bici．t．＋Pi．P．）、侧脑室与脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱各0．125μg＋腹腔异丙酚10mg／kg体重组（Bici．c．v．／i．t．＋Pi．P．）。侧脑室或／和脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱后10min腹腔给药。采用结直肠扩张内脏痛模型，以腹壁明显收缩变平的最小扩张压力值为痛阈，观察给药前及给药后各时间点的大鼠痛阈变化。结果腹腔注射异丙酚10mg／kg体重，5min后结直肠扩张痛阈显著提高（P〈0．05，P〈0．01），10～15min达高峰，持续20min；侧脑室、脊髓蛛网膜下腔或侧脑室＋脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱后结直肠扩张痛阈均无明显变化（P〉0．05）；侧脑室、脊髓蛛网膜下腔或侧脑室＋脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱后10min腹腔注射异丙酚10mg／kg体重，3组给药后5～20min内结直肠扩张痛阈也均有提高，但其增高值均明显低于Pi．p．组（P〈0．05，P〈0．01）；且这3组之间最大镇痛效应差异无统计学意义（P〉0．05）。结论侧脑室、脊髓蛛网膜下腔、侧脑室＋脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱，均可部分拮抗异丙酚的内脏抗伤害作用，因而异丙酚的内脏抗伤害作用受脊髓与脊髓上中枢γ-氨基丁酸A受体介导。     

异丙酚或氯胺酮对内毒素性急性肺损伤大鼠肺小动脉BMP-2表达的影响

目的评价异丙酚或氯胺酮对内毒素（LPS）性急性肺损伤大鼠肺小动脉骨形态构建蛋白-2（BMP-2）表达的影响。方法雌性Wistar大鼠60只，体重220—260g，6—7周龄。随机分为6组，每组10只。对照组（C组）：1．5h内经股静脉输注生理盐水5ml；LPS组（L组）：1h内输注生理盐水3ml，然后30min内输注内毒素1mg／kg（溶于2ml生理盐水中）；异丙酚20mg／kg＋LPS组（P1组）、异丙酚50mg／kg＋LPS组（P2组）、氯胺酮20mg／kg＋LPS组（K1组）、氯胺酮50mg／kg＋LPS组（K组）1h内经股静脉分别输注不同剂量的药物，然后30min内输注LPS1mg／kg（溶于2ml生理盐水中）。输注完毕后72b断头处死大鼠。RT-PCR法测定肺小动脉BMP-2mRNA、BaxmRNA表达。免疫组织化学法、Western blot测定肺小动脉BMP-2、Bax、Bcl-2表达。显微成像分析系统测量肺小动脉中膜厚度。结果各组肺小动脉BMP-2、Bax、Bcl-2均有表达。与C组比较，其余组BMP-2、Bax蛋白水平和mRNA表达降低，Bcl-2水平升高（P〈0．05或0．01）。与L组比较，异丙酚或氯胺酮使BMP-2、Bax蛋白水平及mRNA表达升高，Bcl-2水平降低（P〈0．05）。各组肺小动脉中膜厚度较C组增加（P〈0．05）；异丙酚或氯胺酮减轻了肺小动脉中膜的增厚（P〈0．05）。结论异丙酚或氯胺酮可以抑制大鼠LPS致急性肺损伤肺血管的重建，其机制可能与BMP-2、Bax基因表达上调，Bcl-2基因表达下调有关。     

慢性神经病理性疼痛大鼠背根神经节和脊髓背角pCREB表达的变化

目的 探讨背根神经节和脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白（pCREB）表达在慢性压迫性神经损伤（CCI）致神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏中的作用。方法 成年雌性SD大鼠32只，体重230-270g，随机分为4组（n=8）：空白组、sham组、CCI 2w组和CCI 4w组。CCI前测定痛阈[机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）]基础值，CCI后（空白组、sham组和CCI 2w组于CCI 14d；CCI 4w组于CCI28d）再次测定痛阈。最后一次测定痛阈后次日，取I4-5脊髓和I5背根神经节，免疫组织化学染色，计数pCREB免疫反应阳性（pCREB-IR）神经细胞数量。结果 MWT：CCI后sham组、CCI2w组、CCI 4w组均低于基础值，CCI后sham组低于空白组，CCI2w组低于sham组（P〈0．01）；1wL：CCI2w组短于基础值，CCI2w组短于sham组，CCI后CCI4w组长于CCI2w组（P〈0．01）。sham组背根神经节pCREB-IR神经细胞数量多于空白组，CCI2w组背根神经节及脊髓背角pCREB-IR神经细胞数量多于sham组，CCI4w组背根神经节及脊髓背角pCREB-IR神经细胞数量少于CCI2w组（P〈0．05或0．01）。结论 CCI致慢性神经病理性疼痛大鼠背根神经节和脊髓背角pCREB表达增加，这可能是外周神经损伤后中枢和外周敏感化的分子机制。     

鞘内注射胍丁胺对骨癌痛大鼠痛觉及脊髓背角NMDA受体1表达的影响

目的 观察鞘内注射胍丁胺对骨癌痛大鼠痛觉及脊髓背角NMDA受体1(NR1)表达的影响.方法 成年雌性Wistar大鼠,体重180～220 g,假模型组(A组,n=14)接种PBS液,骨癌痛模型制作成功大鼠随机分为三组,其中B组(n=14)不行鞘内注射,另两组分别鞘内注射生理盐水10 μl(C组,n=14)和胍丁胺160 mg/kg(D组,n=14).用von Frey丝测定大鼠机械缩足反射阈值(MWT),于鞘内注射后120min用Western blot方法测定脊髓背角NR1蛋白的表达.结果 建模7d后B、C和D组大鼠MWT明显低于A组(P＜0.05),鞘内注射胍丁胺后D组MWT显著高于B、C组(P＜0.05).鞘内给药120 min后B、C、D组NR1蛋白的相对表达量明显高于A组(P＜0.05),D组明显低于B、C组(P＜0.05).结论 鞘内注射胍丁胺可通过抑制大鼠脊髓背角NR1的表达减轻胃癌痛.     

脊髓水平GABAA受体在异丙酚对内脏痛大鼠镇痛效应中的作用

目的 探讨脊髓水平γ-氨基丁酸（GABA）A受体在异丙酚对内脏痛大鼠镇痛效应中的作用。方法 35只雄性SD大鼠，体重180—240g，随机分为5组，每组7只，腹腔注射生理盐水0．5ml组（C组），腹腔注射异丙酚10mg／kg组（P1组），腹腔注射异丙酚20mg/kg组（P2组），鞘内注射荷包牡丹碱0．25馏组（B组），鞘内注射荷包牡丹碱0．25μg＋腹腔注射异丙酚10mg/kg组（BP组）。采用结直肠扩张法制备内脏痛动物模型，以腹壁明显收缩变平的最小扩张压力值为痛阈，观察给药前即刻（T0）及给药后5min（T1）、10min（T2）、15min（T3）、20min（T4）、25min（T5）、30min（k）、40min（B）、50min（T8）大鼠的痛阈，并计算最大镇痛效应百分率（MPE）。结果 与C组比较，P1组T1-4时、P2组T1-5，时的痛阈升高（P〈0．05或0．01）；与P1组比较，P2组痛阈升高（P〈0．01）。与P1组比较，B组T1-4时MPE降低，BP组T2-4时MPE升高（P〈0．05或0．01）；与B组比较，BP组，T1-4时MPE升高（P〈0．05或0．01）。结论 异丙酚部分通过介导脊髓水平GABAA受体，对大鼠结直肠扩张所致内脏痛具有镇痛作用。     

RNA干扰树突细胞主要组织相容性复合物1表达后诱导抑制性T细胞对小肠移植耐受的影响

目的探讨RNA干扰树突细胞（Dc）组织相容性复合物1（MHC-1）表达后获得的CD8＋CD28-抑制性T细胞（Ts）对小肠移植免疫耐受的的影响。方法通过siRNA干扰DC MHC—I表达后,诱导获得CD8^＋CD28^-Ts。建立由Wistar大鼠移植到SD大鼠的小肠移植模型36例,随机分为A组（转染实验组）、B组（未转染组,注射普通T细胞）和C组（移植对照组,注射生理盐水）。术后14d,每组各随机挑选6例,取移植大鼠小肠和血液标本行移植小肠组织病理学检查．并检测移植大鼠血清TGF-β、IFN-γ水平及回肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性,观察移植大鼠的存活时间。结果术后第14天,A组移植大鼠血清中TGF—β和IFN-γ表达水平高于B、C组（P〈0．05）。A组大鼠肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性为（6．3±1．0）kU／g,明显高于B组的（3．6±0．9）kU／g和C组的（2．9±1．3）kU／g（P〈0．05）。A组移植小肠病理Parks评分分级明显低于B组和C组（P〈0．05）。A、B和C组移植后大鼠中位生存时间分别为32．0、17．5和21．0d,A组存活时间明显优于B组和C组（P〈0．05）。结论将RNA干扰DCMHC—I表达所获得的CD8^＋CD28^-Ts过继小肠移植大鼠．可以减轻移植大鼠的损伤程度．抑制免疫排斥反应．     

神经病理性疼痛大鼠鞘内注射SB203580的镇痛作用

目的 观察神经病理性疼痛大鼠鞘内注射p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580的镇痛作用,探讨p38MAPK信号转导通路在慢性神经病理性疼痛中的作用。方法雄性SD大鼠,体重220～250g,建立坐骨神经结扎性损伤（CCI）疼痛模型,第一部分40只CCI大鼠,随机分为5组,对照组、SB0．1μg组、SB0．5μg组、SB2．5μg组和SB5μg组,（n=8）,CCI后7d,鞘内注射2％二甲基亚砜或不同剂量的SB203580（0．1、0．5、2．5、5μg）10μl,在给药前和给药后0．5、3、6、12、24h用von Frey丝测定大鼠术侧后爪机械缩足反射阈值（MWT）;另外36只大鼠,随机分为6组（n=6）：Sham组、CCI组、DMSO组、SB0．1、0．5、5μg组,CCI后7d鞘内注射相应剂量SB203580 10μl,给药后6h取L4.5脊髓,用免疫组织化学方法检测脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（pCREB）的表达。结果CCI后大鼠产生了机械痛敏。鞘内注射SB203580剂量依赖性地提高了MWT。CCI后脊髓背角pCREB阳性神经元增加,鞘内注射SB0．5、5μg抑制了CCI引起的脊髓背角pCREB表达增加（P〈0．01）。结论鞘内注射SB203580能减轻CCI引起的痛敏,抑制脊髓背角CREB的磷酸化,p38MAPK信号通路参与慢性神经病理性疼痛。