Caspase与肿瘤治疗

对肿瘤发生发展的分子机制研究的最新进展表明 ,细胞凋亡障碍在肿瘤发病学上有重要的意义。在细胞凋亡的过程中Caspase家族起着关键性的作用。已经发现一系列新的与Caspase有关的诱导凋亡的方法来治疗肿瘤 ,对大部分肿瘤的治疗有实际的意义 ,并可望在恶性肿瘤的治疗上取得新的突破     

Caspase 8与肿瘤的发生

肿瘤发生与细胞凋亡异常密切相关,Caspase 8是细胞凋亡途径中的重要分子。研究发现,在肿瘤细胞中存在caspase 8基因突变、甲基化引起的表达降低等异常,导致细胞对凋亡刺激的敏感性降低,可能与肿瘤的发生,发展及治疗有关。     

Caspase家族与细胞凋亡调控

Caspase即天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶,它们瀑布式活化后降解其底物,引起细胞形态学上的改变使凋亡最终得以完成,在细胞凋亡过程中处于关键地位。近年来关于Caspases的生化特性、克隆测序、底物及抑制物、活化机理、对细胞凋亡的调控作用等研究取得了较大进展,本文对以上若干进展作一综述。     

Caspase抑制剂研究进展

细胞凋亡与许多疾病密切相关.半胱氨酸酶-Caspase家族是细胞凋亡过程能够有效地抑制Caspase的活性,阻止细胞凋亡.来源于病毒的CrmA,p35以及内源性的IAP分子能够抑制多种Caspase的活性,但缺乏特异性;而人工合成的针对不同Caspase底物结合区的多肽抑制剂则可特异地抑制相应的Caspase.这些新抑制剂的发现及研制将对攻克凋亡相关疾病起重要作用.     

用荧光定量法检测Caspase—3的活性

目的,通过检测Caspase-3的活性反映Jurkat细胞凋亡。方法,用放线菌素D诱导Jurkat细胞8h,裂解细胞,荧光分光光度计测定Caspase-3的活性。同时,用Hoechst法进行检测,并进行闰行的方法学比较。结果Jurkat细胞经不同浓度（50μmol/L和100μmol/L)有放线菌素D诱导后,Caspase-3的活性显著增高,倍增值分别为10．091和10．818,相应的Caspase-3活性单位为0．641和0．659,而未经诱导的Jurkat细胞仅为0．061,加入Caspase-3抑制剂后,倍增值分别为0．101和0．119,Caspase-3的活性单位为0．006和0．007。而且Hoechst法染色时,可见Jurkat细胞仅出现早期凋亡的形态学改变。结论荧光定量法是一种良好的定量检测Caspase-3的方法,可用于检测早期的细胞凋亡。     

Caspase8未参与白藜芦醇诱导的CNE-2Z细胞凋亡

Caspase (半胱天冬酶 )家族是一类与细胞凋亡密切相关的蛋白酶。近年来对白藜芦醇 (resveratrol,Res)诱导的一些肿瘤细胞凋亡中是否有Caspase 8的活化有不同报道[1,2 ] 。为探讨Res诱导人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE 2Z凋亡过程中是否有Caspase 8的参与 ,本文对此进行了分析。1　材料与方法1 1　材料　Res购自南京学子医化研发中心 ,纯度 >98% ;羊抗人Caspase 8p2 0多克隆抗体为SantaCruz公司产品 ;兔抗羊IgG HRP为博士德生物工程有限公司产品 ;Caspase 8底物AC IETD pNA为Alexls公司产品 ;RT PCR试剂盒为Promega公司产品。1 2…     

人类caspase家庭蛋白酶与凋亡

Ｃａｓｐａｓｅ家庭量种半胱氨酸蛋白酶家族,在细胞凋亡的分子机制中作为重要的效应子执行凋亡。迄今为止发现人类１１种ｃａｓｐａｓｅ家族成员,它们具有一些共同特点。该家庭可能至少以链工激活,循环放大和异聚化三种方式参与凋亡发生,通过破坏,激活某些酶或破坏细胞骨架等方式导致一系列凋亡相关反应及细胞形态改变。     

Caspase与急性胰腺炎研究进展

细胞凋亡、细胞因子和炎症介质在急性胰腺炎 (acutepancreatitis,AP)的发病过程中起重要作用 ,Caspase与它们有着密切联系 ,参与了AP的发病机制。抑制Caspase可降低AP的严重程度和并发症     

Caspase在T细胞活化与增殖中的作用

半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶( caspases)是一类同源蛋白酶,主要参与细胞的凋亡过程.近年来的研究表明,该家族部分成员在T细胞活化与增殖中亦发挥重要作用,主要体现在以下3个方面:T细胞活化过程中检测到多种caspases活性;caspase-8失活后导致了人与鼠T细胞免疫的缺陷;体外实验中,caspase抑制剂能够阻断抗CD3单抗及超抗原引起的T细胞的活化与增殖.目前,部分体内实验已经证实了caspase抑制剂抗免疫反应及抗炎症反应的有效性,这为免疫性及炎症性疾病提供了新的治疗思路,为研制新型抗免疫、抗炎药物提供了依据.     

线粒体与细胞凋亡

线粒体是所有真核细胞内重要的细胞器 ,是ＡＴＰ生成的主要部位 ,对维持细胞能量代谢和正常功能活动起重要作用。新近研究发现 ,线粒体内包含一些与细胞凋亡有密切关系的物质 :如ｐｒｏ ｃａｓｐａｓｅ ,细胞色素Ｃ (ＣｙｔＣ) ,Ｓｍａｃ Ｄｉａｂｌｏ ,ＡＩＦ等。在一定因素的刺激下 ,线粒体膜的通透性增加 ,这些物质可由线粒体释出 ,诱导细胞凋亡。因此线粒体在细胞凋亡的发生中起重要作用 ,被形象地称为细胞凋亡的“燃烧室”。大多数细胞发生凋亡时均伴有 :(1)胞浆酸化 ;(2 )线粒体结构与功能障碍 ;(3)Ｃａｓｐａｓｅ活化。细胞发生凋亡…     

凋亡的分子基础

凋亡是指细胞将自身裂解为许多膜包小泡的一种精确的细胞死亡过程。凋亡之所以引起学的们的广泛关注，在于它在保证许多生物的健康生存上起到了十分关键的作用。凋亡过程失灵将引起十分严重的后果：凋亡过少将导致癌症和自身免疫性疾病，凋亡过多将导致神经变性性的疾病例如Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ‘ｓ病等。     

细胞凋亡与线粒体

细胞凋亡过程一般经过诱导－调控和执行－效应三个阶段。线粒体不仅对细胞凋亡的启动和调控具有重要意义,而且是细胞凋亡执行的关键元件。死亡信号诱使线粒体ＰＴ开启导致凋亡相关活性物质的释放。并继而对ｃａｓｐａｓｅ酶系激活是细胞凋亡实现的最基本的生物化学途径。     

人类caspase家族蛋白酶与凋亡

aspase家族是一种半胱氨酸蛋白酶家族,在细胞凋亡的分子机制中作为重要的效应子执行凋亡。迄今为止已发现人类11种caspase家族成员,它们具有一些共同特点。该家族可能至少以链式激活、循环放大和异源寡聚化三种方式参与凋亡发生,通过破坏、激活某些酶或破坏细胞骨架等方式导致一系列凋亡相关反应及细胞形态改变。Caspases参与机体多种生理和病理过程,可能成为调控凋亡的一个新环节。对caspase家族中某些成员的检测可能有助于探讨某些恶性肿瘤的发病机理,如恶性淋巴瘤等,也可能有助于这些肿瘤的诊断及预后的判断     

Caspase 9及其相关分子基因表达水平改变对同型半胱氨酸内皮凋亡的影响

目的 了解caspase 3信号传导通路中上游分子Bcl 2、细胞色素c（cytochrome-c）、caspase 9在同型半胱氨酸作用下的人脐静脉血管内皮细胞内的mRNA及蛋白表达水平的改变，揭示线粒体参与信号传导链在caspase 3所介导的内皮细胞凋亡过程中的作用。方法 培养人脐静脉内皮细胞，用不同浓度同型半胱氨酸作用于细胞后，用逆转录-聚合酶链反应及Western印迹分别检测各分子基因及蛋白表达水平的改变。结果 Bcl 2、cytochrome-c和caspase 9在同型半胱氨酸作用下mRNA及蛋白表达水平下降，并且随同型半胱氨酸浓度的升高而降低。结论 Bcl 2可能参与了同型半胱氨酸促进细胞凋亡的信号传导途径。Caspase 3没有通过上游分子apoptosome和caspase 9途径活化。这些研究结果提示，同型半胱氨酸诱导细胞凋亡并不是通过以线粒体凋亡通路为主的信号传导通路。     

在免疫老化中Ｔ细胞结构与功能的变化

２１世纪人口的老龄化对人类社会是一个重大的挑战,我国目前已经步入老年型社会,随着社会性人口的衰老,与人口衰老相关疾病的发生百增加,特别是阿尔采默痴呆（ＡＤ）、帕金森病（ＰＤ）、骨质疏松和ＩＩ糖尿病为代表的老年性疾病引起的智能衰退、行动障碍、骨折和肾功能衰竭等严重的影响老人的生活质量,为社会和家庭带来沉重负担,老年性疾病并非简单地由机体老化所致,也非疾病在老年期的明显表现,但是以老化为其发病基础的,同时,遗传因素和体内外环境因素在老年性疾病的发生与发展方面起一定作用,然而,目前大多数老年性疾病研究尚处于资料的积累阶段,迫切需要有科学假说的提出,从多个角度全方位地对老化和老年性疾病的发生机制进行研究,进而为临床提供有效的手段用于老年性疾病的防治。     

重构型Caspase-6对HeLa细胞凋亡的诱导作用

目的 将人Caspase-6基因大小亚基顺序颠倒，表达为重构型Caspase-6分子，探讨其对细胞凋亡的促进作用。方法 RT－PCR获取人Caspase-6基因，测序判断正确后，通过重组PCR的方法构建大小亚基顺序颠倒的重构型Caspase-6（RevCasp6)基因。将其克隆入含绿色荧光蛋白（GFP）蛋白的真核表达载体pIRES2-EGFP中，转染人宫颈癌细胞系HeLa，在荧光显微镜下观察细胞形态的变化，用电子显微镜进一步观察细胞的凋亡特征。结果 获得了人Caspase-6基因，并成功地构建了大小亚基顺序颠倒的Rev-Casp6基因。以构建的RevCasp6真核表达载体，转染HeLa细胞后，荧光显微镜观察到细胞生长不良，细胞核结构破坏和细胞死亡。电子显微镜观察显示，转染了RevCasp6基因的细胞呈凋亡的典型特征。结论 RevCasp6基因具有诱导HeLa细胞凋亡的作用。     

应用VPA调节组蛋白乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase的影响

目的:探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)调节染色体组蛋白低乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达及活性的影响,同时通过检测VPA与Caspase3、Caspase8、Caspase9特异性抑制剂协同作用后细胞凋亡的变化加以验证.方法:应用0.75~4.0 mmol/L VPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7 48小时后,流式细胞术分析细胞凋亡的变化;分光光度法检测Caspase3、Caspase8、Caspase9活性;流式细胞仪间接免疫荧光法定量分析Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达.结果:0.75~4.0 mmol/L VPA干预48小时后,FCM分析可见HepG2、BGC-823、MCF-7细胞凋亡率显著增加,与对照组比较差异有显著意义(P<0.001)并且呈剂量依赖趋势;HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达均被明显上调、活性升高,与对照组相比有显著差异(P<0.001);Caspase8活性及蛋白表达在HepG2、MCF-7细胞未见明显改变,BGC-823细胞仅轻度增加.VPA与Caspase3、9相应特异性抑制剂共同作用后,Caspase3、Caspase9活性被抑制,细胞凋亡率较VPA单独干预组显著降低(P<0.005);VPA与Caspase8特异性抑制剂共同作用组细胞凋亡率与VPA单独作用组比较无明显变化(P>0.05).结论:应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达及活性可起明显的调控作用;对Caspase8的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异,但总体趋势不明显.     

线粒体在细胞凋亡中的作用

线粒体在凋亡中的作用越来越受到重视,它在细胞凋亡中起中心作用,释放凋亡活性物质,介导凋亡的酶促反应,参与凋亡调控,决定细胞是凋亡还是坏死。     

细胞凋亡与线粒体

细胞凋亡过程一般经过诱导—调控和执行—效应三个阶段。线粒体不仅对细胞凋亡的启动和调控具有重要意义,而且是细胞凋亡执行的关键元件。死亡信号诱使线粒体PT开启导致凋亡相关活性物质的释放,并继而对caspase酶系激活是细胞凋亡实现的最基本的生物化学途径。Bcl2和BclXl通过对线粒体的作用阻抑细胞凋亡的发生。细胞凋亡线粒体机制的揭示对于认识细胞死亡的生物学本质,探索对细胞死亡的调控提供了重要启示     

Caspases和Caspases抑制剂控制细胞凋亡的分子机制

目前关于细胞凋亡的概念、基因克隆、基因敲剔、基因调控、信号传导及在疾病发生中的作用得到较为深入的研究。在哺乳动物中发现至少有12种Caspases家族成员,它们具有两种酶催化活性,参与打靶、激活及调控起着级联反应,在执行和控制细胞凋亡的过程中的过程中发挥着重要作用。已发现Caspases抑制剂对控制Caspases级联反应具有重要价值,将为细胞凋亡的分子机制和控制疾病的认识提供了新的思路。