姜黄素与羟基脲对K562细胞的体外联合作用

目的 了解姜黄素与羟基脲合用对人白血病Ｋ５６２细胞的体外作用。方法 采用ＭＴＴ法测定药物的体外杀伤作用,应用ＡＯ／ＥＢ荧光染料染色观察药物诱导细胞凋亡,金氏公式进行联合用药分析。结果 姜黄素５,１０ｕｇ／ｍｌ,羟基脲２５,５０ｕｇ／ｍｌ同时给药,对Ｋ５６２细胞可产生单纯相加的协同杀伤效果。姜黄素与羟基脲同时给药诱导Ｋ５６２细胞凋亡率高于羟基脲单独用药,低于姜黄素单独用药。结论 姜黄素与羟基脲同时联     

低剂量羟基脲联合丁酸钠对K562细胞γ珠蛋白基因表达的作用

目的：探讨低剂量羟基脲（hydroxyurea,HU）与丁酸钠（sodium butyrate,NaB）联合诱导人白血病细胞株（K562）细胞对γ珠蛋白基因表达的作用。方法：以K562细胞株为研究对象,用不同浓度HU和／或NaB作用于K562细胞,台盼蓝拒染活细胞计数观察细胞生长;联苯胺染色了解细胞红系分化,RT—PCR测定珠蛋白基因γ-mRNA表达。结果：25μmol／L HU与100μmol／LNaB是最佳用药组合,其对细胞生长抑制率为（46．09±1．54）％,与HU100μmol/L（64．31±5．19）％、NaB500μmol／L（86．25±1．10）％比较差异有显著性（P〈0．05）;联苯胺染色阳性细胞率达（17．72±0．58）％,与HU100μmoL／L（15．72±0．27）％、NaB500μmol／L（14．32±0．74）％比较差异有显著性（P〈0．05）;与亲本细胞比较Gγ—mRNA表达上调（2．04±0．13）倍,Aγ-mRNA表达上调（1．27±0．01）倍,差异有显著性（P〈0．05）。结论：低剂量HU与NaB联合用药能使K562细胞γ珠蛋白基因表达上调,并减轻细胞生长抑制,为临床联合用药提供实验依据。     

川楝素对K562细胞增殖和凋亡作用的影响

目的：探讨川楝素对人白血病K562细胞增殖和凋亡作用的影响.方法：MTT法检测川楝素对K562细胞和健康成人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的增殖抑制率.瑞氏染色观察川楝素对K562细胞、PBMC形态的影响.透射电镜观察K562细胞超微结构改变.流式细胞术检测细胞凋亡率.琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA片段化现象.比色法检测Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活性变化.免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bcl-xl,Bax和Fas的表达.结果：川楝素对K562细胞有明显增殖抑制作用,呈时间和浓度依赖性（P〈0.01）,作用72h后IC50值为（52.13±0.82）nmol/L,而对PBMC几乎无影响.普通光镜下分别观察K562细胞和PBMC,K562细胞可见典型的凋亡形态学改变,PBMC形态无明显变化.超微结构显示K562细胞核染色质聚集,固缩,可见凋亡小体;以10,30,50nmol/L川楝素处理细胞72h后,K562细胞早期凋亡率分别为9.66%,26.06%,52.70%（P〈0.01）;琼脂糖凝胶电泳可见典型“梯状”条带;川楝素激活K562细胞Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活性;凋亡相关蛋白Bcl-xl表达降低,Bax,Fas表达增强（P〈0.05）.结论：川楝素对K562细胞与PBMC之间具有选择抑制作用和诱导K562细胞凋亡的作用,可能通过线粒体途径和死亡受体途径双重机制介导.     

哌唑嗪对K562白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究α1受体拮抗剂哌唑嗪在体外对K562白血病细胞系增殖及凋亡的影响。方法：采用四唑盐（MTT）比色实验、集落形成实验为指标观察哌唑嗪对K562细胞增殖作用的影响;采用细胞形态学、Hochset33258荧光染色实验、流式细胞术检测细胞凋亡。结果：哌唑嗪能抑制K562细胞的增殖,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。在5×10-6mol/L哌唑嗪作用下,K562细胞在形态学上可以看见凋亡细胞;流式细胞术也可检测到凋亡峰。结论：哌唑嗪能抑制K562白血病细胞的增殖,并能诱导其凋亡。     

人参皂甙单体Rh2对K562细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的 研究人参皂甙单体-Rh2(GS-Rh2)对人K562细胞增殖和凋亡作用的影响.方法 采用MTT比色法观察GS-Rh2对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度GS-Rh2对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR).结果 MTT比色法测定显示,细胞经GS-Rh2作用后生长受抑制,呈剂量依赖性和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)为25.8 μg/ml.结论 GS-Rh2能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

苦参碱对K562细胞增殖及凋亡相关分子表达的影响

目的 研究苦参碱对人白血病细胞K562增殖、凋亡的影响及其机制。方法 苦参碱（0.2mg/ml）作用于K562细胞,每日计数白细胞、计算抑制率;流式细胞分析仪检测苦参碱对K562细胞周期的改变及凋亡的影响;电子显微镜观察凋亡细胞形态;Western blot检测BCL－6及增列细胞核抗原（PCNA）表达情况。结果 苦参碱对K562细胞有明显的抑制作用,用药72h的细胞增殖抑制率达69％;用药5d后,G1期细胞明显增多,高达58.5%,68％的细胞发生凋亡。电子显微镜可观察到苦参碱诱导的早、中、晚期K562凋亡细胞;BCL－6表达增强,PCNA表达下降。结论 苦参碱能显著抑制K562细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与细胞增殖周期受阻及PCNA表达下降、BCL－6表达增加有关。     

大麻受体激动剂WIN对白血病K562细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

目的探讨大麻受体激动剂W／N-55,212-2（WIN）对白血病K562细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法将细胞分成对照组和不同剂量大麻受体激动剂wIN用药组。CCK-8测定WIN对K562细胞增殖的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;JC-1分析线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化;Western印迹法分析Bax、Bcl-2及C-myc蛋白的表达。结果与对照组相比较,5、10、20μmol／L的WIN处理K562细胞24、48h后,增殖抑制作用明显且具有剂量依赖性,差异有统计学意义（P〈0．05）。DAPI染色和线粒体膜电位检测结果显示,K562细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率升高。WIN处理24h后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性均增加（P〈0．05）。Western印迹法显示,Bax蛋白表达增加,C-myc、Bcl-2蛋白表达下降。结论大麻受体激动剂WIN能抑制白血病K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过上调Bax蛋白表达,下调C-myc、Bcl-2蛋白表达,以及促使线粒体跨膜电位下降。激活Caspase．3、Caspase-8、Caspase-9蛋白而实现。     

亚砷酸和STI571单用及联用对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的研究亚砷酸(As2O3)、STI571单用及联用对K562细胞增殖和凋亡的影响,为As2O3和STI571联合应用于临床提供理论依据.方法细胞增殖采用细胞生长及活力测定;细胞凋亡采用细胞形态、Annexin-V/PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法测定.结果在As2O3和(或)STI571作用下K562细胞生长受抑伴随活力下降,流式细胞仪检测出凋亡细胞百分率呈时间剂量依赖关系,基因组DNA电泳出现““梯““状条带.结论 As2O3和STI571均有抑制K562细胞增殖和诱导该细胞凋亡的作用,两药联用效果更佳.     

维生素E和低浓度三尖杉酯碱对K562细胞增殖动力学作用的研究

本文应用外细胞培养、克隆形成及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入技术观察了低浓度三尖杉酯碱和维生素Ｅ对人白血病Ｋ５６２细胞作用的细胞增殖动力学变化。     

大蒜素对人红白血病细胞株K562细胞增殖的影响

目的 研究大蒜素对人红白血病K562细胞增殖的影响.方法 用不同浓度的大蒜素处理对数生长期的K562细胞,通过形态学观察、瑞氏染色、MTT比色法,观察大蒜素对K562细胞增殖的影响.结果 562细胞在大蒜素作用后,出现凋亡的形态学改变;MTT比色法测定显示大蒜素能明显抑制K562细胞的增殖,并且抑制率随浓度增加和作用时间延长而升高.结论 大蒜素对K562细胞有明显的增殖抑制作用.     

甲基莲心碱在K562/A02细胞对STI 571敏感性中的作用

目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI 571敏感性中的作用，并探讨其逆转耐药的机制。方法:MTT法比较STI 571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用；RT-PCR法检测mdr1 mRNA转录水平及Western Blot法检测P-gp表达水平。结果:Nef与STI 571联合应用对K562/A02细胞增殖的抑制作用明显增强。单独应用STI 571对K562/A02细胞的IC50为3.02μmol/L，加Nef后,IC50为0.689μmol/L，逆转倍数为4.38倍(P＜0.05）。STI 571与Nef联合应用使mdr1 mRNA转录水平下调(45.4±2.5)%(P＜0.01)，使P-gp的表达下调40.58%(P＜0.05)。结论:甲基莲心碱能增强K562/A02细胞对STI 571的敏感性，下调其mdr1 mRNA的转录和阻断P-gp的表达，从而逆转白血病的多药耐药性。     

RNA干扰survivin基因对K562细胞化疗敏感性的影响及机制

目的应用小分子干扰RNA（siRNA）技术抑制survivin基因的表达,观察其对K562细胞化疗敏感性的影响,为临床白血病治疗提供理论依据。方法实验分为RNA干扰组、脂质体对照组、空白对照组。转染48h后用RT—PCR法,免疫组化法分别检测survivin在mRNA及蛋白水平的表达;MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性;流式细胞仪检测细胞内阿霉素的药物浓度;免疫组化法检测K562细胞中3种耐药相关蛋白P—gP、TOPO-2、GST-π的表达。结果①RNA干扰组K562细胞的survivin基因表达水平明显下降;②RNA干扰组K562细胞对阿霉素敏感性增高;③RNA干扰组K562细胞中阿霉素浓度增高;④RNA干扰组K562细胞耐药蛋白GST-π表达水平下降,而P-gP,TOPO-2的表达与对照组比较无显著差异。结论特异性siRNA能够有效抑制survivin基因的表达,并可能通过降低耐药蛋白GST-百的表达增加K562细胞对阿霉素的敏感性。     

奋乃静对K562白血病细胞的诱导分化作用

目的：观察吩噻嗪类抗精神病药奋乃静对K562白血病细胞的诱导分化作用。方法：采用液体培养实验，MTT实验，集落培养实验观察奋乃静对K562细胞增殖能力的影响，采用 W-G染色观察细胞形态学变化和流式细胞术检测膜CD71分化抗原观察K562细胞功能变化三个方面评价奋乃静对K562细胞的诱导分化作用。结果：吩噻嗪类抗精神病药奋乃静可上调K562细胞膜CD71分化抗原的表达量，升高细胞内Hb含量，抑制 K562 细胞增殖并在形态上有趋向分化的改变。结论：奋乃静有诱导K562细胞分化的作用。     

K562细胞survivin基因表达对淋巴细胞增殖和功能的影响

目的探讨K562细胞中survivin基因的表达对淋巴细胞增殖和功能的影响。方法将融合重组质粒pEGFP-C1-survivin和靶向survivin基因的RNAi的重组质粒pTZU6^＋1-survivin分别转染K562细胞,得到K562/survivin^＋和K562/survivin^-2种细胞,用G418筛选K562/survivin^＋细胞,用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法及免疫细胞化学法检测K562/survivin^＋和K562/survivin^-2种细胞中survivinmRNA及蛋白水平的表达,并与K562细胞作对照。将这3种细胞与健康人外周血单个核细胞（PBMC）混合培养（MLTC）,检测混合培养体系中淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性及培养上清中IFN-γ水平。结果K562/survivin^＋组的淋巴细胞增殖指数明显低于其余两组。survivin基因的表达水平与NK细胞活性呈负相关。混合培养上清中分泌的IFN-γ,K562/survivin＋组是K562组的1/4.5,是K562/survivin^-组的1/8。结论高表达的survivin可以抑制淋巴细胞的增殖、NK细胞活性及IFN-γ的分泌。     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562的凋亡作用及机制

目的 探讨硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562(K562R)的诱导凋亡作用及机制.方法 采用浓度梯增法建立耐伊马替尼K562细胞系.应用CCK-8法检测不同浓度硼替佐米分别作用K562和K562R细胞24 h、48 h后,对细胞的增殖抑制的效果.使用流式细胞术方法分别检测硼替佐米单独或联合伊马替尼作用于K562R细胞48 h后的细胞凋亡.应用Western blotting检测不同浓度硼替佐米作用K562R细胞48 h后,Mcl-1、Bcl-2、Bcr/Abl蛋白表达的异同.结果 成功将对伊马替尼敏感的K562细胞诱导为K562R,耐药倍数为31.8;硼替佐米对K562及K562R细胞的增殖抑制呈浓度、时间依赖(P均<0.05);随着硼替佐米浓度增加,对K562R细胞的诱导凋亡作用增强,且硼替佐米与伊马替尼联合具有协同作用(P<0.05);硼替佐米可抑制K562R细胞Mcl-1,Bcr/Abl蛋白的表达,Bcl-2无变化.结论 硼替佐米具有对K562R细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与下调K562R细胞Bcr/Abl和MCL-1的表达以及促进MCL-1发生切割有关.     

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

survivin反义寡核苷酸对K562细胞增殖的抑制作用

目的:采用反义寡核苷酸技术研究凋亡抑制基因survivin对白血病细胞增殖的影响.方法:1.细胞抑制率实验分5组:111nmol/L反义寡核苷酸组、333nmol/L反义寡核苷酸组、555nmol/L反义寡核苷酸组、777nmol/L反义寡核苷酸组、空白组.转染后24、48、72h收集细胞进行检测:用台盼蓝染色进行活细胞计数,计算细胞抑制率.2.细胞周期及survivin蛋白表达实验分4组:555 nmol/L寡核苷酸组、544nmol/L无义组、脂质体组、空白组,转染后24、48h流式细胞仪检测细胞周期;免疫组织化学方法检测survivin蛋白水平.结果:不同浓度的反义寡核苷酸对K562细胞的细胞抑制率均高于空白组(P<0.05),并随反义寡核苷酸的浓度增大抑制率增加;随作用时间延长,抑制作用越明显,抑制率与浓度及时间呈正相关;555nmol/L反义寡核苷酸作用后,K562细胞被阻滞在G0/G1期,细胞周期进程受到明显阻滞,而无义、脂质体、空白组细胞周期进程无明显变化(P<0.05);反义寡核苷酸作用48h后survivin蛋白表达水平明显降低,与各对照组比较有显著性差异(P<0.05).结论:survivin反义寡核苷酸能抑制K562细胞的增殖.     

青蒿酸对人红白血病K562细胞增殖抑制的体外研究

目的：探讨青蒿酸体外作用对K562细胞增殖的影响及其机制.方法：采用MTT法检测青蒿酸对K562细胞增殖的影响,流式细胞术分析细胞周期分布情况,透射电子显微镜进行形态学观察.结果：青蒿酸作用K562细胞24h、48h,能显著抑制细胞增殖,随药物浓度增加,对细胞增殖的抑制强度也显著增高.经青蒿酸作用48h,处于G0/G1期K562细胞增加,且能诱导K562细胞发生凋亡.电镜可观察到细胞凋亡的形态学改变.结论：青蒿酸能抑制K562细胞增殖,这种抗肿瘤作用可能与抑制K562细胞进入细胞增殖周期和诱导细胞凋亡有关.