不同治法方药治疗小鼠自身免疫性卵巢功能衰退的比较研究

目的：比较补肾法、活血法、疏肝法对小鼠自身免疫性卵巢功能衰退（premature ovarian failure,POF）的干预作用。方法：以BALB／C雌性小鼠卵巢组织制备卵巢抗原。皮下和两后脚掌多点注射免疫同种雌性小鼠建立自身免疫性卵巢功能衰退模型。六味地黄丸、少腹逐瘀颗粒及柴胡疏肝丸分别治疗3周后,酶联免疫吸附测定法检测血清雌二醇（estradiol,E2）、卵泡刺激素（follicle—stimulating hormone,FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、催乳素（prolactin,PRL）、睾酮（testosterone,T）以及抗卵巢抗体和抗透明带抗体。结果：模型组小鼠血清FSH、LH较正常组明显升高,E2显著下降（P〈0．05）,PRL、T含量与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;模型组小鼠抗卵巢抗体阳性率为84．2％,抗透明带抗体阳性率为78．9％。与正常组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。六味地黄丸显著下调小鼠血清FSH、LH水平,提高E2含量（P〈0．05）;而抗卵巢抗体及抗透明带抗体仅有下降趋势,与模型组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。少腹逐瘀颗粒组小鼠血清FSH、LH含量有下降趋势,E2含量稍有升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）;其抗卵巢抗体和抗透明带抗体阳性率与模型组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。柴胡疏肝丸组小鼠抗卵巢抗体和抗透明带抗体阳性率,与模型组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。各种治疗对血清PRL和T含量无明显影响。结论：补肾中药可以显著改善自身免疫性卵巢功能衰退小鼠生殖内分泌轴功能,活血及疏肝中药可以调整自身免疫性卵巢功能衰退小鼠体液免疫功能。     

补肾活血方对小鼠自身免疫性卵巢功能衰退的防治作用

目的：探讨补肾活血中药对小鼠自身免疫性卵巢功能早衰（premature ovarian failure．POF）的防治怍用。 方法：以BALB／c雌性小鼠卵巢组织制备卵巢抗原，皮下和两后脚掌多点注射免疫同种雌性小鼠建立卵巢早衰模型。分别在第1次免疫以及第3次免疫后给予补肾活血中药，灌服中药后分析阴道脱落细胞涂片．酶联龟疫法检测外周血雌二醇（estradiol，E2）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone．FSH）以及黄体生成素（1uteinizing hormone，LH）浓度。 结果：POF小鼠卵巢间质可见淋巴细胞浸润，外周血FSH和LH升高,E2下降明显（P〈0.05）；而补肾活血中药能减少POF小鼠外周血FSH和LH含量，提高体内E2水平。早期预防比岳期治疗用药作用显著。 结论：补肾活血中药主要通过纠正紊乱的生殖内分泌轴，恢复部分卵巢功能，对免疫性卵巢早衰具育防治作用。     

透明带3多肽诱导的免疫性卵巢早衰小鼠模型子宫组织中Ki-67、ER的表达

目的以透明带3多肽（pZP3）诱导的免疫性卵巢早衰（POF）小鼠为研究对象,观察其子宫Ki-67、雌激素受体（ER）的表达,
以进一步探讨免疫性卵巢早衰患者辅助生殖相关的子宫预处理方案。方法取7~8周龄的健康雌性BALB/c小鼠40只,随机分
为对照组和模型组。通过阴道脱落细胞涂片、血清性激素、卵巢组织形态及抗卵巢ZP3抗体鉴定建模成功。检测两组小鼠子宫
组织形态变化及子宫Ki-67、雌激素受体α亚型（ERα）及雌激素受体β亚型（ERβ）的表达。结果8周后80%小鼠建模成功。与对
照组相比,模型组子宫萎缩,内膜变薄,单位面积内腺体数量减少。模型组子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞及间质细胞中Ki-67
的表达较对照组减弱,且有胞核转位至胞浆现象。对照组小鼠子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞及间质细胞的胞浆强表达ERα,
而模型组呈阴性表达。两组小鼠子宫内膜ERβ均呈阴性表达。结论pZP3可以诱导小鼠成功构建免疫性卵巢早衰疾病模型,
同时引起子宫内膜上皮细胞及间质细胞的增殖降低和ERα表达减弱。
     

巢衰复元汤治疗卵巢早衰38例临床观察

目的 观察巢衰复元汤治疗卵巢早衰的临床疗效.方法 治疗组38例运用中药方剂巢衰复元汤(自拟)治疗;对照组19例采取激素替代疗法.均治疗5个疗程,治疗结束3个月后进行疗效比较.结果 治疗组总有效率为71.1%,对照组为36.9%,差异有显著意义(P＜0.05).治疗组症状总改善率为61%,对照组为17%,差异有非常显著意义(P＜.01).结论 巢衰复元汤治疗卵巢早衰疗效显著,中药疗效肯定.     

自体卵巢冷冻后移植治疗卵巢早衰的实验研究

目的 研究卵巢早衰小鼠自体冷冻卵巢移植后移植卵巢的存活、生长及功能恢复情况.方法 将60只雌性昆明鼠分为化疗组、放疗组、化疗+移植组、放疗+移植组、正常组、去势组,每组10只.取出小鼠单侧卵巢经液氮冷冻后,利用环磷酰胺、白消安或60Coy照射处理小鼠,使其卵巢功能衰竭,随后将解冻后自体卵巢植入部分小鼠肾脏包膜下.观察冻融后卵巢组织学变化,移植后卵巢、子宫内膜组织学变化及雌二醇(E2)水平.结果 解冻后卵巢中卵泡的数量与新鲜卵巢相似,但卵泡体积变小,卵母胞与周嗣颗粒细胞之间的空隙增大.化疗、放疗组卵巢呈典型的早衰样组织学改变:表现为卵巢明显萎缩,卵泡闭锁,卵母细胞及透明带退行性改变,黄体及间质纤维化、坏死等.冷冻卵巢移植后,可见不同阶段的发育卵泡,并可见间质腺和黄体,移植组小鼠阴道上皮细胞及子宫内膜有雌激素效应.血清学结果显示,移植组血清E2水平[化疗+移植组(27.47±1.98)pg/L,放疗+移植组(25.89±2.78)Pg/L]明显高于未移植组[化疗组(16.88±2.06)]pg/L,放疗组(15.50±1.17)P孚/L,P<0.05],而与正常组[(30.93±4.05)pg/L]之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 卵巢早衰小鼠自体冷冻卵巢移植后能在异位存活、生长发育并具有内分泌功能.     

特发性卵巢早衰的临床特点分析

摘要：目的探讨特发性卵巢早衰(POF)的临床特点,为早期诊断POF提供依据。方法回顾性分析2009年2月~2010年1
月的39例特发性卵巢早衰患者的临床资料,对月经特点、发病情况、B超结果和妊娠情况等进行研究。结果1例患者为原
发性闭经,38例为继发性闭经,平均闭经5.82±3.88年,2例（5.1%）在月经初潮后有1~2次月经即出现闭经,闭经前月经规
律而突然闭经患者9例(23%),月经紊乱27例(69%),其中3例(7.7%)月经频发,24例(61.5%)患者早期表现月经稀发,逐渐
出现闭经。30岁以前发病的POF患者占87.2%,94.9%患者初潮后15年发病。特发性POF患者的子宫体积、卵巢体积小
于正常组,基础窦卵泡计数(AFC)明显少于对照组,阴道超声检测有35例(89.7%)患者至少探及一侧卵巢,31例(79.5%)患
者有窦卵泡样回声。用阴道B超定期监测有2例患者恢复排卵后自然妊娠,妊娠率5.1%。结论对月经不规律、稀发、频
发患者,应用B超监测子宫体积,卵巢体积和AFC,同时进行激素测定,及早识别是否有POF的可能;使用HRT时积极监
测,必要时辅助生殖技术助孕。     

卵巢早衰抗卵巢抗体和抗透明带抗体及其分类

目的　探讨卵巢早衰 (POF)患者血清中抗卵巢抗体 (AoAb)、抗透明带抗体 (AZpAb)水平及其分类情况 ,研究免疫性卵巢早衰的发病机理。方法　用酶联免疫法测定卵巢早衰、抗精子抗体 (ASAb)阳性不孕妇女和不明原因不孕症妇女血清中AoAb ,AZpAb并对其进行分类。结果　POF患者、ASAb阳性不孕妇女组及不育患者组血清中AoAb、AZpAb均比正常妇女组高 (P <0 0 1)。在抗体的分类证明 ,各组抗体以IgG为主 ,IgA ,IgM也有一定的比例。结论　POF与自身免疫异常密切相关 ,该结果对于深入研究和预防自身免疫性卵巢早衰有重要意义     

免疫性卵巢早衰小鼠生殖能力的研究

目的：探讨补肾复方左归丸对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠动情周期、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、受孕率的影响。方法：以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/c雌性小鼠建立免疫性卵巢早衰模型。设左归丸低、中、高不同剂量进行治疗,以泼尼松、己烯雌酚为阳性对照,观察动情周期、受孕率,ELISA法检测外周血清FSH、E2水平。结果：模型组小鼠动情周期紊乱,FSH增高,E2降低,受孕率低下。左归丸各剂量组动情周期时间延长,但仍有规律性变化。FSH升高及E2降低均不明显,受孕率也低下。结论：模型组卵巢功能损伤、破坏。左归丸能改善、保护卵巢功能,但对受孕率改善不明显。     

骨髓来源间充质干细胞对卵巢早衰小鼠的修复作用

目的：研究小鼠同种异体骨髓来源间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在环磷 酰胺诱导的小鼠卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)损伤中的修复作用及其机制。方法：分离培养小鼠BMSCs, 应用流式细胞术检测BMSCs表面标志;小鼠腹腔注射50 mg/(kg.d)环磷酰胺,连续15 d,建立POF模型。建模后第7 天,按每只小鼠2×106个BMSCs尾静脉注射移植到POF模型小鼠体内;移植后第7天,采用HE染色观察细胞移植治疗 后小鼠卵巢结构变化,RT-PCR检测BMSCs移植对POF小鼠卵泡发育相关基因mRNA表达的影响。结果：BMSCs高表达 间充质干细胞标志CD29和CD90,低表达内皮细胞标志标志CD31和造血干/祖细胞标志CD34。POF模型小鼠各级发育 卵泡数量明显减少,闭锁卵泡数量明显增加(P<0.05),颗粒细胞凋亡降解。与对照组比较,BMSCs移植组小鼠卵巢窦 状卵泡和次级卵泡数量明显增加,闭锁卵泡数量明显减少(P<0.05),颗粒细胞数量明显增加,但原始卵泡和初级卵泡 数量两组间差异无统计学意义(P>0.05);BMSCs移植组卵巢组织卵泡发育相关基因Nano3,Nobox,Lhx8 mRNA水平明 显高于对照组(P<0.05)。结论：BMSCs能促进POF小鼠卵泡发育和卵巢组织结构恢复。     

补肾养血方对卵巢早衰大鼠中抗苗勒氏管激素(AMH)的影响

目的 建立雷公藤多苷致卵巢早衰大鼠的模型,研究补肾养血方对卵巢早衰大鼠中抗苗勒管素（anti-mullerian hormone,AMH）的影响。方法 使用雷公藤多苷建立卵巢早衰大鼠模型,造模成功后,分别采用高,中,低剂量补肾养血方对大鼠灌胃,每日一次,共30 d。给药完毕后于显微镜下观察各组大鼠卵巢组织形态。酶联免疫吸附法、免疫组化染色法和定量反转录聚合酶连锁反应（qRT-PCR）分别检测大鼠血清中AMH含量以及卵巢内AMH的蛋白和mRNA表达水平。结果 组织形态学显示高中低剂量组的卵泡和黄体的生长均比模型组好;酶联免疫吸附法、免疫组化和qRT-PCR结果显示补肾养血方呈剂量依赖性逆转雷公藤多苷导致大鼠血清中AMH浓度以及卵巢中AMH表达水平的降低。结论 补肾养血方可逆转雷公藤多苷引起卵巢中AMH水平降低,提示补肾养血方具有防止卵巢早衰的功效。     

育泡饮对小鼠自身免疫性卵巢损伤保护作用的实验研究

目的探讨中药复方育泡饮对实验性自身免疫性卵巢早衰(POF)小鼠卵巢功能的影响。方法以成熟的SD雌性大鼠卵巢组织制备卵巢抗原,皮下多点注射免疫BALB/C雌性小鼠,建立卵巢早衰模型。在3次免疫后连续灌服中药复方,以强的松为阳性对照,酶联免疫法检测外周血雌二醇水平(E2)、卵泡刺激素(FSH)、外周血抗卵巢抗体(AoAb),IL-4、IL-10,观察卵巢的形态学变化,并计数各级卵泡及黄体数目。结果POF小鼠外周血E2下降,FSH升高,AoAb阳性,IL-4、IL-10明显提高,卵巢内有大量淋巴细胞浸润,各级卵泡及黄体数目减少。育泡饮能提高体内E2水平,减缓POF小鼠外周血FSH升高,抑制AoAb产生,降低IL-4与IL-10水平,减轻卵巢内淋巴细胞浸润,使各级卵泡及黄体数增加,育泡饮高剂量组比中剂量、低剂量组作用显著。结论育泡饮能减轻卵巢自身免疫性炎症损伤,对自身免疫性卵巢早衰具有治疗作用。     

激素补充治疗卵巢早衰的疗效观察

目的探讨卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）患者性激素补充的规范治疗。方法将40例POF患者根据发病至就诊时间分为短病程组和长病程组,均接受性激素补充治疗,比较治疗前及治疗半年后更年期症状评分（Kupperman评分）、血清促卵泡刺激素（sF）水平、雌二醇（E2）水平、子宫体积、子宫内膜厚度及卵巢体积的变化情况。结果短病程组患者治疗后SF下降（P〈0．01）,E2升高（P〈0．05）;长病程组患者治疗后虽然SF有所下降,E2升高,但差异无统计学意义。两组受试患者治疗后均有规律性撤退性出血,短病程组中有1例于治疗后5个月自然妊娠,伴有低雌激素症状者均得到不同程度改善。短病程组Kupperman评分均值由治疗前29．11分降低至3．41分,长病程组Kupperman评分均值由治疗前22．17分隆低军4．13分．结论早期发现POF日存闭经1年内讲行激素补充治疗可以取得更好的疗效。     

脐带基质干细胞移植在卵巢早衰模型小鼠体内的分布

目的观察人脐带基质干细胞(umbilical cord-matrix stem cells,UC-MSCs)移植后在卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)小鼠模型中的分布与生长情况。方法用环磷酰胺(cyclophosphamide,CPA)和白消安(busulfan,BUS)处理,建立小鼠POF模型;分离扩增UC-MSCs,采用腺病毒介导Ad-GFP转染方式对其进行标记;将GFP阳性细胞移植入POF小鼠体内,分别于移植后1、10、20 d留取组织,通过激光共聚焦显微镜观察UC-MSCs在小鼠卵巢及其他组织中的定位与生长情况。结果腺病毒介导Ad-GFP转染UC-MSCs效率达95%左右。POF小鼠经尾静脉接受UC-MSCs移植后1 d,卵巢可见GFP阳性细胞,移植后10 d及20 d的卵巢GFP阳性细胞明显增加,而小鼠骨髓、大脑、肝脏、肾脏、胰腺等组织无明显GFP阳性细胞存在。结论人UC-MSCs经尾静脉移植可向POF小鼠卵巢归巢,并能在局部存活生长,提示其可能具有卵巢损伤修复的作用。     

育肾养血方治疗卵巢早衰的实验研究

目的探讨全国名老中医朱南孙教授的经验方——育肾养血方治疗卵巢早衰的疗效及作用机制。方法采用75只性周期规律的雌性Wistar大鼠的卵巢组织制备卵巢抗原;另取50只大鼠随机分成正常组(n=10)和模型组(n=40)。模型组采用卵巢抗原皮下注射自身免疫法建立卵巢早衰大鼠模型,造模成功后再分为四组(n=10):中药中、高剂量组(灌服中药复方)、西药对照组(灌服己烯雌酚)、模型对照组(灌服等量生理盐水);正常组为空白对照组(不造模仅灌服等量生理盐水),均连续2周。治疗结束后经腹主动脉采血,留取卵巢组织标本。采用ELISA法检测血清雌二醇(E2)和促卵泡激素(FSH)水平,免疫组织化学法检测卵巢抑制素B(InhB)蛋白阳性表达水平,观察卵巢、子宫湿重变化及组织学改变。结果育肾养血方能提高卵巢早衰大鼠血清E2水平和降低FSH水平;但与模型对照组比较,西药对照组的E2和FSH水平、中药高剂量组的FSH水平差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较,西药对照组和中药中、高剂量组大鼠卵巢InhB蛋白表达均显著增加(P<0.01);卵巢内淋巴细胞浸润减轻,各级卵泡数增多,卵巢和子宫的湿重增加。结论育肾养血方可以促进卵巢...     

卵巢早衰60例临床特征及自身免疫变化分析

目的了解卵巢早衰（Premature ovarian failure POF）患者的临床特征及自身免疫状况。探讨自身免疫异常在POF发生发展中的作用,为早期预测及临床治疗POF提供新途径。方法分析60例POF患者的临床特征。对POF患者（POF组）与70例健康育龄妇女（对照组）的临床数据进行比较。用酶联吸附实验测定两组性激素促卵泡生成素（FSH）,雌激素（E2）及血清中InIrA,InIrB水平。用流式细胞仪检测两组外周血CD4＋、CD8＋及CD4＋/CD8＋变化。结果POF组BIM大于对照组（P〈0.05）,POF组子宫及卵巢体积明显减小（P〈0.01）,POF组初潮年龄与对照组差别无统计学意义（P〉0.05）。POF组CD4＋低于对照组（P〈0.05）,CD8＋明显高于对照组（P〈0.01）,CD4＋/CD8＋明显降低（P〈0.01）,POF组血清抑制素A、BCInhA、B下降（P〈0.05）。通过线性相关性分析显示：CD4＋、CD4＋/CD8＋分别与E2呈正相关,CD8＋与E2呈负相关。结论遗传因素和自身免疫因素与POF的发病有关系,E2有免疫抑制作用,可抑制T细胞免疫应答,血清Ihn水平下降和外周血T淋巴细胞亚群的变化可做为早期预测POF的参考指标。     

卵巢功能早衰治疗的研究进展

卵巢早衰病因复杂,近年来发病率呈上升趋势,是严重影响妇女健康和生育的疾病之一,其治疗难度较大,除传统的激素替代方法,又提出了诱发排卵、辅助生殖、保存卵巢功能、卵巢异体移植、免疫治疗等方法。     

微RNA-21和Peli1在自身免疫性早发性卵巢功能不全小鼠体内的表达及意义

目的探讨miR-21和其下游靶基因Peli1在自身免疫性早发性卵巢功能不全（POI）模型小鼠的表达和意义。方法将24只雌性BALB/c小鼠随机均分为POI组和对照组（n=12）,分别予皮下注射ZP3多肽和生理盐水。通过小鼠卵泡计数,观察动情周期和检测血清中E2、FSH和AMH评估卵巢功能,酶联免疫吸附法(ELISA)测定炎性因子IFN-γ和IL-10,流式细胞仪分析脾脏Treg细胞比例,生物信息学预测miR-21的靶基因,qRT-PCR法检测外周血、卵巢组织miR-21表达和外周血、脾脏Treg细胞Peli1表达。结果二次免疫6周后,POI组小鼠基本无动情期,而对照组动情周期均正常。Peli1为miR-21的靶基因。POI组小鼠各级卵泡计数,E2、AMH、IL-10水平,脾脏Treg细胞比例,miR-21、Peli1表达均明显较对照组低（p＜0.05）,而FSH、IFN-γ水平明显较对照组高(p＜0.05)。结论miR-21和其下游靶基因Peli1在自身免疫性POI小鼠模型中的表达均明显降低,提示miR-21和Peli1可能参与自身免疫性POI的发病。     

葛根素对顺铂诱导小鼠卵巢早衰的作用研究

目的 探讨葛根素对顺铂诱导小鼠卵巢早衰的作用.方法 选取雌性C57BL/6J小鼠,随机分为3组,每组10只.给药途径均为腹腔注射.模型组给予生理盐水(4.0 ml/kg×9 d),顺铂(4.5 mg/kg×5 d)及生理盐水(4.0 ml/kg×5 d);实验组给予葛根素(200.0 mg/kg×9 d),葛根素(20...     

利用不同浓度气态甲醛建立小鼠卵巢早衰模型的研究

目的:探讨利用不同浓度气态甲醛建立小鼠卵巢早衰模型的方法及可行性。方法:将40只性成熟SPF级雌性昆明小鼠随机分为空白对照组和3个不同浓度(0.1mg/m3、1.0mg/m3、10mg/m3)气态甲醛染毒组(模型组)。对照组给予吸入经过滤的新鲜空气,模型组采用不同浓度气态甲醛动态吸入式染毒,6h/d,连续14d,观察气态甲醛对小鼠一般状态、动情周期、性激素水平及卵巢脏器系数的影响。结果:不同浓度气态甲醛染毒均可使小鼠一般状态差,模型组小鼠动情周期延长且不规则,血清E2水平明显降低,FSH、LH及FSH/LH水平明显升高,卵巢脏器系数显著降低,与对照组比较均有明显差异(P<0.05)。结论:利用10mg/m3浓度气态甲醛慢性染毒建立小鼠卵巢早衰模型是可行的。     

卵巢早衰的病因及治疗研究进展

卵巢早衰是指未满40岁女性出现卵巢功能衰退,继而出现闭经、不孕、围绝经期综合征,并伴有高促性腺激素、低雌激素状态的一组疾病。近年来该发病率不断升高,其病因复杂,治疗困难,严重损害女性身心健康。本文较系统地阐述卵巢早衰的病因及治疗研究进展。