一种急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型的改良

目的 首次将共培养体系及混合腹水技术应用于急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型,并与常见的雨蛙素及雨蛙素联合脂多糖（LPS）模型进行对比研究,以观察其改良效果。方法 体外培养的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J分为4组:对照组（培养液+PBS）,雨蛙素组（培养液+10 nmol/L雨蛙素）,雨蛙素+LPS组（培养液+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L LPS）及改良腹水组。改良腹水组采用牛黄胆酸钠诱导的重症急性胰腺炎动物模型腹水,混合后加入共培养体系,刺激体外培养的同源腺泡细胞造模。共培养体系的设置为:培养板中置入孔径为1 μm的小室,以体积比1∶1于孔板和小室中分别加入培养液及混合腹水。各组刺激24 h后收集腺泡细胞,采用流式细胞术检测腺泡细胞的凋亡/坏死率,Western blot检测凋亡/坏死相关蛋白B淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、受体相互作用蛋白1（RIP1）的表达情况,透射电镜观察腺泡细胞的亚显微结构。结果 改良腹水模型中腺泡细胞以坏死特征为主,与其余3组相比,其凋亡率及坏死率均上调,RIP1及BAX蛋白表达水平上调,而Bcl-2蛋白呈下调趋势。透射电镜结果显示改良腹水组腺泡细胞细胞器结构破坏,细胞膜降解。而雨蛙素及雨蛙素+LPS模型与对照组相比,腺泡细胞凋亡率上调,坏死率无改变;促凋亡蛋白Bax表达升高,而RIP1蛋白的表达水平无显著上调。透射电镜结果显示雨蛙素及雨蛙素+LPS组细胞染色质固缩成团,胞质降解,细胞膜完整,呈现出典型的凋亡特征。结论 相较于以腺泡细胞凋亡特征为主、研究轻症急性胰腺炎的雨蛙素及雨蛙素+LPS模型,改良的腹水模型以腺泡细胞的坏死特征为主,是研究腺泡细胞坏死及重症急性胰腺炎的良好模型。     

大鼠急性胰腺炎凋亡相关蛋白Fas、FasL、Bcl-2的表达及意义

目的 :探讨凋亡调控基因Fas、FasL、Bcl 2在大鼠急性胰腺炎中的表达情况及其与胰腺炎严重程度的关系。方法 :通过胰胆管逆行注射不同浓度的脱氧胆酸钠 ,制作急性水肿性胰腺炎 (AEP)和急性坏死性胰腺炎(ANP)模型。用免疫组化法检测Fas、FasL、Bcl 2蛋白的表达。结果 :急性胰腺炎时 ,Fas蛋白主要表达在胰腺腺泡细胞胞膜 ,AEP组和ANP组均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且AEP组高于ANP组 (P <0 .0 5 ) ;FasL在各组腺泡细胞胞浆中均有不同程度表达 ;Bcl 2蛋白表达在胰腺导管细胞胞浆 ,对照组Bcl 2蛋白表达弱 ,AEP组和ANP组表达明显增强 ,ANP组高于AEP组 ,统计学处理两组间无明显差异 ,但均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :Fas/FasL系统在大鼠的急性胰腺炎过程中可能参与诱导胰腺腺泡细胞凋亡 ,减轻胰腺炎症反应程度 ;而Bcl 2基因可能参与防止导管细胞凋亡而促进其增生并且形成导管管状复合体     

JAM-C单抗对实验性急性胰腺炎肾损伤的治疗作用

目的观察连接黏附分子-C(JAM-C)单克隆抗体对小鼠急性坏死性胰腺炎肾损伤的保护作用。方法采用雨蛙素和内毒素(LPS)联合腹部注射的方法建立小鼠重症急性胰腺炎(ANP)模型。(1)生理盐水对照组(NS组):小鼠给予腹部注射无菌生理盐水(10mL/kg)6次,每次间隔1h。(2)坏死性胰腺炎(ANP)模型组(ANP组):小鼠给予腹部注射雨蛙素(50μg/kg)6次,每次间隔1h,末次注射后立即给予腹部注射内毒素10mg/kg。(3)抗小鼠JAM-C单抗(anti-JAM-C mAb)处理组(anti-JAM-C mAb组):小鼠给予腹部注射雨蛙素(50μg/kg)6次,每次间隔1h,在首次注射30min时予每只小鼠腹部注射anti-JAM-C mAb0.3mL(300μg),末次雨蛙素注射后予腹部注射内毒素10mg/kg。在末次注射3h后,收集血液检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、淀粉酶(AMY)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,收集肾和胰腺组织进行病理评分。结果 anti-JAM-C mAb组胰腺和肾脏病理评分显示,BUN、Cr、AMY和TNF-α水平均明显低于ANP组。结论 anti-JAM-C mAb能有效缓解小鼠ANP模型的肾损伤。     

LncRNA H19对大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(LncRNA) H19对雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响.方法 在体外通过用雨蛙素刺激AR42J细胞建立AP模型,采用qRT-PCR和Western blot检测沉默以及过表达H19后凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果 H19沉默后,凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平下降,细胞凋亡率也相对减少(P＜0.05);而过表达H19后,Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平增加,细胞凋亡率也是升高的(P＜0.05).结论 沉默LncRNA H19可减少雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,提示其可能成为治疗急性胰腺炎的潜在有效靶点.     

蛋白酶体抑制剂PS-341在重症急性胰腺炎中的治疗作用研究

目的探讨蛋白酶体抑制剂PS-341对重症急性胰腺炎的治疗作用。方法将144只小鼠用完全随机方法分成3组：PS-341治疗组（64只）：注射脂多糖前0.5h腹腔注射PS-341（0.5mg/kg）0.2ml;模型对照组（40只）：注射脂多糖前0.5h腹腔注射50%二甲基亚砜（DMSO）0.2ml（0.9%氯化钠溶液稀释）;空白对照组（40只）：用0.9%氯化钠溶液代替雨蛙素和脂多糖,依照同样的方法腹腔注射。造模后8h将小鼠处死,用自动生化分析仪检测血清淀粉酶、C反应蛋白和乳酸脱氢酶,ELISA法检测IL-1β和IL-6;光镜下观察小鼠胰腺和肺脏的病理形态;TRNEL法检测腺泡细胞的凋亡数;EMSA法检测NF-κB活性和免疫印迹法检测I-κB水平。结果与模型对照组相比,治疗组小鼠血淀粉酶、乳酸脱氢酶、C-反应蛋白、IL-1β、IL-6明显下降（P〈0.05）;治疗组小鼠胰腺和肺脏的病理结果显示组织的炎细胞浸润及出血明显减少（P〈0.05）;治疗组凋亡的腺泡细胞数明显增加（P〈0.05）,I-κB降解明显减少,NF-κB活性降低（P〈0.05）。结论PS-341通过抑制NF-κB活性及加强细胞凋亡对重症急性胰腺炎有一定的治疗作用。     

Fas和FasL在急性胰腺炎中的共表达及其与凋亡的关系

目的探讨凋亡调控基因Fas、FasL在大鼠急性胰腺炎中的表达及其与腺泡细胞凋亡的关系。方法通过胰胆管内逆行注射不同浓度的牛磺胆酸钠,建立不同严重程度的急性胰腺炎模型,用RT-PCR、免疫组化法检测胰腺组织Fas、FasL mRNA及蛋白的表达,原位末端标记法检测各组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡。结果在正常的胰腺腺泡细胞中即存在着Fas、FasL mRNA及蛋白的表达,且呈现共区域化特点,凋亡细胞极少。在炎症程度较轻的胰腺组织,Fas和FasL mRNA的表达水平显著提高．腺泡细胞凋亡指数亦明显提高,随胰腺炎症程度的加重,Fas和FasL mRNA的表达逐渐下降．腺泡细胞凋亡指数亦逐渐下降。结论Fas／FasL系统可能参与了正常胰腺组织的细胞更新和自稳;是介导急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡的一个重要途径。     

急性水肿型胰腺炎小鼠小肠隐凹素-4mRNA基因表达变化的研究

目的通过观察急性水肿型胰腺炎(AEP)小鼠小肠隐凹素-4mRNA表达的变化,从分子水平上探讨胰腺炎时肠细菌移位机制。方法将30只ICR小鼠随机分成9h模型组、18h模型组和对照组,两模型组腹腔注射雨蛙素(Cn)每次250μg/kg,连续4次,每次间隔1h,内毒素(LPS)10mg/kg(与最后一次Cn共同注射)。分别于注射后9、18h处死。对照组采用相同方法注射等量0.9%氯化钠注射液,于注射后18h处死。取血送淀粉酶检查,取胰腺送病理检查。用RT-PCR法测定末端回肠隐凹素-4mRNA表达。结果Cn加LPS腹腔注射成功诱导了小鼠AEP,胰腺病理损害以首次注射后18h最明显,注射后9h隐凹素-4mRNA表达轻微下调,18h下调更明显。结论小肠隐凹素-4的获得性缺陷可能是胰腺炎时发生肠道细菌移位的重要原因之一。     

miR-let-7b-5p对急性胰腺炎AR42J细胞凋亡及自噬的作用研究

目的 探讨miR-let-7b-5p对急性胰腺炎AR42J细胞凋亡和自噬的影响。方法 以未处理的AR42J细胞作为正常对照组,1×10^-8 mol/L浓度的雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)24h建立体外急性胰腺炎模型,慢病毒携带miR-let-7b-5p的模拟物(miRNA mimic)、抑制物(miRNA inhibitio)和空病毒转染急性胰腺炎模型细胞作为miR-let-7b-5p过表达组、低表达组和阴性对照组,RT-qPCR验证转染效果,检测凋亡基因Caspase-3 mRNA和自噬基因LC3ⅡmRNA的表达量;Western Blot检测Caspase-3及LC3Ⅱ的蛋白表达。结果 与正常对照组相比,阴性对照组的miRlet-7b-5p表达量显著降低(P <0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表达显著增加(P <0.01),自噬基因LC3ⅡmRNA及蛋白表达增加(P <0.05)。与阴性对照组相比,过表达组miR-let-7b-5p表达量显著增加(P <0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表...     

白细胞介素-1受体拮抗剂在急性胰腺炎中作用及机制探讨

目的 从胰腺腺泡细胞凋亡的角度探讨白细胞介素-1受体拮抗剂（IL-1Ra）在急性胰腺炎中的作用及机制。方法 用牛磺胆酸钠建立大鼠急性坏死性胰腺炎模型,IL-1Ra腹腔注射诱导胰腺腺泡细胞凋亡,并应用细胞凋亡原位标记检测(TUNEL) 染色、免疫组化等技术检测胰腺细胞凋亡及Fas/FasL的蛋白表达。结果 干预组1、2、6、12 h胰腺细胞凋亡指数显著高于胰腺炎组相应时间点(均P <0.01);对照组见较弱的Fas的表达,干预组各时间点胰腺细胞Fas染色阳性率明显高于胰腺炎组(均P < 0.01) ;胰腺炎组、干预组中均没有见到胰腺腺泡细胞中FasL 表达,但是在间质中均可见浸润的炎性细胞FasL免疫组化染色阳性。结论 IL-1Ra减轻急性胰腺炎的机制可能不仅限于对炎症反应的抑制,它可能是通过上调凋亡调控基因Fas/ FasL系统的表达,诱导胰腺腺泡细胞的凋亡从而减轻胰腺炎的严重程度。     

Survivin基因在急性胰腺炎中的表达及其意义

目的 探讨survivin基因在鼠急性胰腺炎中的表达及其意义.方法 采用胰胆管逆行穿刺注射牛磺胆酸钠建立不同炎症程度的急性胰腺炎模型,应用免疫组化、Western blot及RT-PCR等方法检测survivin基因在胰腺组织中的表达,TUNEL法检测胰腺泡细胞凋亡的变化.结果 正常胰腺组织无survivin的表达;建立急性胰腺炎模型后,随胰腺炎症程度的加重,Survivin蛋白和mRNA的表达水平逐渐升高,而腺泡细胞凋亡率则逐渐下降.结论 Survivin蛋白不仅通过其抗雕亡作用参与了急性胰腺炎时胰腺腺泡细胞凋亡的调节,而且通过其抗凋亡作用使受炎症损伤的胰腺细胞由凋亡转为坏死,从而加重急性胰腺炎病情,可能是预测急性胰腺炎严重程度的一个重要指标.     

白细胞介素1受体拮抗剂诱导急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡机制的研究

目的:从胰腺腺泡细胞凋亡的角度探讨白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)干预急性胰腺炎的可能机制。方法:72只SD大鼠,随机分为胰腺炎组、IL-1Ra干预组、对照组,每组24只,各组造模后在1,2,6和12 h 4个时间点分别检测6只大鼠。干预组分别于制模前12,6,2 h及制模时各注射IL-1Ra 1 mg/100 mg体质量,胰腺炎组仅同时注射等量生理盐水。应用细胞凋亡原位标记(TUNEL)染色、免疫组化技术等检测胰腺细胞凋亡及凋亡调控基因Bax,Bcl-2,Fas,FasL的蛋白表达。结果:干预组1,2,6和12 h胰腺细胞凋亡指数显著高于胰腺炎组相应时间点(均P<0.01);对照组见较弱的Bax、Fas的表达,干预组各时间点胰腺细胞Bax、Fas染色阳性率明显高于胰腺炎组(均P<0.01);对照组未见Bcl-2表达,干预组各时间点胰腺细胞Bcl-2染色阳性率与胰腺炎组相比无显著差异性(均P>0.05);胰腺炎组、干预组中均没有见到胰腺腺泡细胞中FasL表达,但是在间质中均可见浸润的炎性细胞FasL免疫组化染色阳性。结论:IL-1Ra干预急性胰腺炎的机制可能不仅限于对炎症反应的抑制,它可能是通过上调凋亡调控基因Bax和Fas/FasL系统的表达,诱导胰腺腺泡细胞的凋亡从而减轻胰腺炎的严重程度。     

急性胰腺炎大鼠胰腺组织核因子-κB动态变化

目的: 观察急性胰腺炎大鼠胰腺组织中核因子-κB (NF-κB)的表达和血清中细胞因子的变化,探讨胰腺组织NF-κB的表达和血清细胞因子的变化关系。方法: 实验动物随机分为5组,正常对照组(Normal组)、急性水肿性胰腺炎6h组(AEP6h组)和急性坏死性胰腺炎3h组(ANP3h)、6h组(ANP6h)、12h组(ANP12h),观察各组血清淀粉酶(Amy)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量及胰腺组织NF-κB的表达。结果: 急性水肿性胰腺炎大鼠TNF-α、IL-6、胰腺组织NF-κB的表达均较正常组明显增高(P<0.01),急性坏死性胰腺炎TNF-α、IL-6及胰腺组织NF-κB表达较水肿性胰腺炎增高(P<0.05~P<0.01),6h达高峰,此后下降。结论: 胰腺组织NF-κB参与急性胰腺炎的发病并呈动态变化;胰腺组织NF-κB表达与TNF-α、IL-6含量呈正相关。     

胰腺腺泡细胞钙超负荷在诱发大鼠由水肿性向坏死性胰腺炎转变中 …

OBJECTIVE: To investigate the potential of pancreatic acinar cell calcium overload in the conversion of acute edematous pancreatitis (AEP) to necrotizing pancreatitis (ANP). METHODS: Ninety-six Sprague-Dawley rats were randomized in three experimental groups. Sham-operated control (Group I) AEP (Group II) was induced by pancreatic duct ligation and intravenous injection of bombesin (100 micrograms/kg) and secretin (10 micrograms/kg). ANP (Group III) was induced same as group II but with a large dose of dextran 110,000(500 mg/kg) intravenously. Pancreatic acinar cell Ca2+ overload was studied using fluorescent probe Fura2. Cytosolic free Ca2+ concentration ([Ca2+]i) in isolated pancreatic acinar cells and Ca(2+)-ATPase activity in pancreatic cell plasma membranes were determined 1, 3, 6, 9 h respectively after treatment. RESULTS: The results showed that pancreatic acinar cell [Ca2+]i was elevated at 1 h[(213 +/- 19) nmol/L, P < 0.05] and increased to (464 +/- 29) nmol/L at 6 h(P < 0.05) in rats with ANP, pancreatic cell plasma membrane Ca(2+)-ATPase activity decreased significantly from (29.8 +/- 0.4) nmol.min-1.mgp-1 at 1 h to (18.6 +/- 0.5) nmol.min-1.mgp-1 at 9 h in rats with ANP (P < 0.05). CONCLUSIONS: In ischemia-induced conversion of AEP to ANP, there exists Ca2+ overload in the pancreatic acinar cells. The decreased pancreatic cell plasma membrane Ca(2+)-ATPase activity may be an important reason for acinar cell Ca2+ overload in the development of acute pancreatitis.     

生长抑素对大鼠坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响

目的: 研究生长抑素对急性坏死性胰腺炎(ANP)胰腺腺泡细胞凋亡的影响.方法: 将90只SD大鼠随机分为3组:假手术组、坏死组和生长抑素治疗组,用改良十二指肠闭襻法诱导急性坏死性胰腺炎模型.分别切取3组大鼠的胰腺标本行病理组织学检查,荧光显微镜下观察细胞凋亡及流式细胞光度术定量观察凋亡情况.结果: 坏死组组凋亡少见,以细胞坏死为主;生长抑素治疗后可减轻胰腺腺泡细胞的坏死,增加其凋亡的发生.结论: 胰腺炎腺泡细胞中存在细胞凋亡现象,细胞凋亡与坏死呈负相关,生长抑素可减轻胰腺炎病理损害促进其凋亡发生.     

大黄素对重症急性胰腺炎大鼠腺泡细胞凋亡的影响

目的: 探讨大黄素对重症急性胰腺炎大鼠腺泡细胞凋亡的影响。方法: SD大鼠30只,随机分为对照组、胰腺炎组和大黄素组,5%牛磺胆酸钠1 ml/kg制作大鼠重症急性胰腺炎模型,大黄素组为模型制作完成时及3 h后腹腔内注射大黄素2.5mg/kg,观察12 h后各组大鼠血清淀粉酶、IL-6和腺泡细胞凋亡情况。结果: 大黄素组血清淀粉酶、IL-6值低于胰腺炎组(P<0.01),细胞凋亡指数增加(P<0.01),病理损害减轻。结论: 大黄素促进重症急性胰腺炎大鼠腺泡细胞凋亡,减少淀粉酶和IL-6释放,减轻胰腺病理损害。     

外周血中性粒细胞凋亡与急性胰腺炎的关系探讨

目的探讨AP模型中外周血中性粒细胞凋亡与急性胰腺炎的关系。方法sD大鼠90只,随机分为3组,每组30只,分别建立大鼠急性坏死性胰腺炎（ANP）、水肿型胰腺炎（AEP）及对照组模型,在制模后0、3、6、12、24h分期分批处死大鼠,抽取下腔静脉血测定血清淀粉酶含量,作中性粒细胞分离并检测外周血中性粒细胞凋亡。切取胰腺标本组织,病理切片苏木精-伊红染色,并对胰腺组织进行病理评分。结果ANP组PMN凋亡率明显降低,至术后24h降至（1．87±0．41）;AEP组PMN凋亡率则明显升高,术后12h达到峰值（12．33±0．41）;对照组PMN凋亡维持在（6．30±6．57）水平。各时相点组间比较,3、6、12、24hANP组PMN凋亡率低于AEP组（P〈0．05）。结论ANP组外周循环中的中性粒细胞凋亡明显降低,而AEP组外周循环中的中性粒细胞则存在较多的凋亡,提示急性胰腺炎的转归与循环中性粒细胞功能密切相关。