兔心脏缺血再灌注损伤后重组水蛭素的保护作用及其机制

背景重组水蛭素能否通过抑制白细胞浸润来拮抗心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,IR)损伤,从而起到对心肌的保护作用?目的观察重组水蛭素对缺血心肌内白细胞浸润的影响,进一步探讨重组水蛭素对心肌保护的作用机制.设计随机对照的实验研究.地点、材料和干预本实验在第四军医大学唐都医院心血管病实验室完成.选取24只日本大耳白兔随机分为2组,每组12只.IR组;心脏左冠状动脉前降支IR动物模型,缺血45 min、再灌注120 min,再灌注前后静脉应用生理盐水;重组水蛭素组缺血45 min、再灌注120 min,再灌注前15 min静注重组水蛭素(1 mg/kg),再灌注时继以持续静滴重组水蛭素[1 mg/(kg·h)]120 min.主要观察指标心肌梗死范围及缺血心肌内白细胞浸润的变化.结果重组水蛭素组的心肌梗死范围为(11.7±2.4)%,与缺血再灌注组的(21.2±5.3)%比较,梗死范围明显缩小(t=7.436,P＜0.01).缺血再灌注组的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性为(56.01±3.83)nkat/g,重组水蛭素组(35.51±1.67)nkat/g.重组水蛭素组缺血心肌内白细胞聚集较缺血再灌注组显著减少(t=3.935,P＜0.05).结论重组水蛭素能够抑制再灌注期缺血心肌内白细胞浸润,拮抗心肌IR损伤.     

1，6-二磷酸果糖对大鼠心肌再灌注损伤的干预效应

目的：探讨1，6-二磷酸果糖(fructose 1．6-diphosthate．FDP)的抗再灌注心肌损伤作用与脂质过氧化的关系。方法：实验于2003—06／07在大连医科大学中心实验室完成，选取健康SD大鼠60只，随机分成对照组、心肌缺血组、缺血再灌注组、缺血再灌注+FDP组和缺血再灌注+超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)组。采用硫代巴比妥酸法和肌酸固定法，分别测定丙二醛及血清肌酸激酶(creatine kinase，CK)在大鼠心肌缺血和再灌注条件下的含量变化。结果：心肌缺血组SD大鼠CK含量明显升高，(4684．27&;#177;533．44)nkat／L；缺血组再灌注血清丙二醛和CK含量急剧上升，分别为(3．90&;#177;0．73)l,rmol／g，(5784．49&;#177;883．51)nkat／L；缺血再灌注+FDP组和缺血再灌注+SOD组丙二醛和CK含量均显著降低，分别为(2．82&;#177;0．4611,tmol／g，(3767，42．4&;#177;833．50)nkat／L；(3．22&;#177;0．72)μmol／g，(4234．18．4&;#177;766．82)nkat／L(P&;lt;0．01)。结论：再灌注心肌损伤加重；FDP对再灌注心肌损伤有明显的保护作用。     

α-黑素细胞刺激素对抗大鼠肠缺血再灌注损伤的作用及机制

目的：探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对抗大鼠肠缺血再灌注损伤的作用及机制。方法：60只大鼠随机数字表法分3组：假手术组、缺血再灌注组和治疗组，每组20只。采用大鼠小肠缺血60min再灌注模型，治疗组静脉注射α-MSH，用放免法检测血中肿瘤坏死因子α-(TNFα-)、白细胞介素6含量，用髓过氧化物酶(MPO)定量测定法评价缺血后肠组织中中性粒细胞浸润程度，免疫组化法检测肠黏膜Fas蛋白表达情况，并电镜观察超微结构的改变。结果：α-MSH能明显改善电镜下细胞超微结构的损害；与缺血再灌注组比较，治疗组再灌注后肠组织Fas表达下调，其光密度值由1．4509&;#177;0．0192下降为1．3241&;#177;0．0140，MPO，TNF-α，白细胞介素6含量于再灌注后6h，分别由(8．50&;#177;0．150)nkat／g下降为(5．17&;#177;0．317)nkat／g，(1．86&;#177;0．53)ltg／g下降为(1．41&;#177;0．39)μg／g．(301．06&;#177;67．23)ng／g下降为(201．56&;#177;26．42)ng／g，两组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：α-MSH可能通过减轻肠缺血后炎症反应以及阻止肠组织细胞凋亡的发生等机制对肠缺血再灌注损伤具有保护作用。     

醒脑静注射液对脑缺血再灌注损伤家兔血清白细胞介素8的影响

背景：目前有关醒脑静注射液(xingnaojing injection，XNJI)对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury，CIRI)时血清白细胞介素8水平的影响，及其脑功能保护机制研究尚少。目的：观察XNJI对CIRI家兔血清白细胞介素8水平的影响，并探讨其脑保护机制。设计：完全随机设计，对照实验研究。地点与材料：本研究的地点为温州医学院病理生理教研室。材料为选用28只日本大耳白兔，雌雄不拘，体质量2．2～3．0kg，由温州医学院实验动物中心提供。干预：28只家兔随机分为假手术对照组、缺血再灌注组和醒脑静注射液组，分别在缺血前、缺血30min、再灌注30min，60min，120min取静脉血，测定血清白细胞介素8浓度，实验结束取脑组织观察脑超微结构的变化。主要观察指标：血清白细胞介素8浓度的动态变化；脑组织超微结构的改变。结果：脑缺血再灌注期间，缺血再灌注组不同时点血清白细胞介素8水平明显高于醒脑静注射液组[缺血30min为(0．62&;#177;0．18)ng／L及(0．43&;#177;0．08)ng／L，P&;lt;0.05；再灌注30min，为(0．73&;#177;0．19)ng／L及(0．45&;#177;0．09)ng／L；再灌注60min，为(0．87&;#177;0．29)ng／L及(0．47&;#177;0．06)ng／L；再灌注120min为(1．03&;#177;0．43)ng／L及(0．44&;#177;0．07)ng／L，再灌注各时点组均P＜0．01]，超微结构发生异常改变；醒脑静注射液组不同时点血清白细胞介素8浓度显著低于缺血再灌注组[醒脑静注射液组缺血30min为(0．48&;#177;0．07)ng／L，P＜0．05；再灌注30min，(0．50&;#177;0．08)ng／L；再灌注60min为(0．55&;#177;0．14)ng／L；再灌注120min为(0．59&;#177;0．17)ng／L，再灌注各时点组P＜0．01]，其超微结构异常改变较缺血再灌注组明显减轻。结论：XNJI能有效降低白细胞介素8的水平，这可能是它减轻CIRI的又一重要机制。     

大剂量硝酸甘油对大鼠离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和Bax及Bcl-2的影响

目的：研究硝酸甘油是否对大鼠离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2／Bax水平存在直接的影响。方法：实验选用SD大鼠30只，随机分为硝酸甘油组和对照组，每组15只。制备大鼠离体心肌缺血再灌注模型(缺血30min，再灌注120min)在再灌注开始时分别给以大剂量硝酸甘油(15μg／h，以950mL／L乙醇为溶剂)或950mL／L乙醇(3μL／h)。再灌注结束后，将缺血区剪下，制备石蜡切片，采用TUNEL技术检测心肌凋亡，免疫组化技术检测心肌组织的Bcl-2和Bax水平。结果：硝酸甘油组细胞发生凋亡数[(35．2&;#177;6．7)％]明显多于对照组细胞[(5.2&;#177;0．8)％](t=28.1，P&;lt;0.01)。对照组Bcl-2表达(5.7&;#177;1.3)明显强于硝酸甘油组(1．8&;#177;0.8)(t=11．9、P&;lt;0．01)。对照组Bax表达(5.9&;#177;1．3)明显弱于硝酸甘油组(9.1&;#177;1.3)(t=9．2，P&;lt;0．01)。结论：大剂量的硝酸甘油促进了大鼠离体缺血／再灌注心肌细胞凋亡，提高了Bax蛋白的水平，降低了Bcl-2蛋白水平；大剂量硝酸甘油对Bcl-2／Bax的调节可能是其促凋亡的主要机制之一。     

黄芩素甙对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的：研究黄芩素甙对脑缺血再灌注损伤的作用及其对三磷酸腺苷(ATP)及羟自由基含量的影响。方法：沙土鼠前脑缺血再灌注模型，缺血时间10min。动物分为假手术组、对照组、黄芩素甙Ⅰ组(45mg／kg，腹腔注射)、黄芩素甙Ⅱ组(90mg／kg，腹腔注射)。高倍镜下计数海马CA1区存活锥体细胞数目，ATP及羟自由基含量测定采用高效液相法。结果：再灌注4d时，对照组海马CA1区存活锥体细胞数目仅为假手术组的5％[(5&;#177;2)，(96&;#177;12)&;#215;10^4／mm^2，t=8．607，P&;lt;0．01]，而黄芩素甙Ⅰ组和Ⅱ组分别为假手术组的23％和42％，明显多于对照组[(22&;#177;8)，(40&;#177;9)，(5&;#177;2)&;#215;104／mm^2，t=1．747，3．622，P&;lt;0．01]。再灌注60min，黄芩素甙Ⅰ组和Ⅱ组ATP含量均高于对照组，[(0．70&;#177;0．08)，(0．81&;#177;0．15)，(0．51&;#177;0．19)mmol／kg，t=1．277，1．562，P&;lt;0．05]，但两组间差异无显著性意义。缺血末和再灌注60min，黄芩素甙Ⅱ组羟自由基含量低于对照组[(0．43&;#177;0．12)，(0．65&;#177;0．16)mmol／L，t=1．871，P&;lt;0．05；(0．42&;#177;0．15)，(0．72&;#177;0．13)mmol／L，t=2．747，P&;lt;0．01]。结论：黄芩素甙(45mg／kg和90mg／kg)可减轻脑缺血再灌注损伤，其机制可能与其减轻细胞能量代谢障碍和减少羟自由基产生有关。     

大鼠心脏缺氧缺血再灌注损伤与果糖二磷酸镁的保护途径

目的：观察具有改善心脏能量代谢作用的果糖二磷酸镁对实验性大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护性途径。方法：实验于2005-03在锦州医学院药理学实验室完成。24只SD大鼠随机分为3组：对照组、缺血再灌注组和果糖二磷酸镁组，每组8只。3组大鼠均实施主动脉递引灌流，采用Langendorff方法用KH缓冲液[(NaCI 118．5，NaCO325．0，KH2PO4 1．2，KCI 4．8，MgSO4 1．2，CaCl2 2．0，葡萄糖1．0)mmol／L]制备离体大鼠心脏缺血再灌注模型，将果糖二磷酸镁(2.4mmol／L)加入灌流液内，停灌时间30min，再灌注时间1h。分别在心脏灌流稳定20min，再灌注60min记录左室收缩压、左室压力变化速率，并收集1min冠状动脉血流量。取左心室标本测总超氧化物歧化酶活性用黄嘌呤氧化酶法，测组织丙二醛含量用硫代巴比妥酸法。结果：24只SD大鼠均进入结果分析。①再灌注后左室收缩压比较：果糖磷酸镁组明显低于缺血再灌注组[(73．0&;#177;6．8，109．0&;#177;9．2)mmHg，τ=10．789，P&;lt;0．05)]。②再灌注后左室压力变化速率比较：缺血再灌注组明显低于对照组[(913&;#177;233，1889&;#177;304)mmHg／s，τ=6．756，P&;lt;0．01)]。③再灌注后心脏冠状动脉血流量比较：果糖磷酸镁组明显高于缺血再灌注组[(4．6&;#177;0.4，3．5&;#177;0．5)mL／min,τ=2．693，P&;lt;0．05)]。④再灌注后左心室肌组织总超氧化物歧化酶活性比较：果糖磷酸镁组明显高于缺血再灌注组[(33．06&;#177;3．03，22．18&;#177;4．79)NU／mg，(τ=8．123，P&;lt;0．01)]。⑤再灌注后左心室肌组织丙二醛含量比较：缺血再灌注组组明显高于对照组[(10.00&;#177;1．13，2．56&;#177;0．63)nmol／mg，(τ=18．76，P&;lt;0．01)]。结论：果糖二磷酸镁对再灌注损伤心肌可改善其收缩功能，并降低心肌组织中的丙二醛含量，从而减少氧自由基的产生，起到抗脂质过氧化而保护心肌的作用。     

缺血预处理对缺血骨骼肌收缩功能的影响

背景：缺血预处理能有效提高骨骼肌缺血耐受性，减轻骨骼肌缺血再灌注期间的坏死范围，但缺血预处理对骨骼肌收缩功能的影响文献报道不多。目的：探讨缺血预处理对骨骼肌缺血再灌注期间收缩功能的影响。设计：以实验动物为研究对象的随机对照研究。单位：华中科技大学同济医学院及解放军第二五二医院。材料：实验地点为解放军第二五二医院中心实验室。选用健康雄性SD大鼠14只。方法：采用大鼠后肢缺血再灌注模型，将14只大鼠随机分为对照组和实验组。对照组：持续缺血4h，再灌注1h；实验组：缺血5min，再灌注5min，重复3次后。持续缺血4h再灌注1h。测定缺血再灌注期间腓肠肌收缩功能变化及再灌注1h后，血清磷酸激酶(CK)，丙二醛和腓肠肌^99锝^m亚甲基二磷酸钠(^99Tc^mMDP)吸收量变化。主要观察指标：缺血预处理对腓肠肌收缩力及对血清CK。丙二醛及^99Tc^mMDP吸收量的影响。结果：实验组腓肠肌收缩力在缺血4h时为(14．32&;#177;5．05)g，再灌注1h时为(25．71&;#177;7．58)g，对照组分别为(0.4．73&;#177;2．05)g，两者相比差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，实验组血清CK为(104．85&;#177;9．84)nkat／L，丙二醛为(3988．60&;#177;455．92)nmol/L，^99Tc^mMDP吸收量为(56．0&;#177;8．1)mBq/g&;#183;min，对照组CK为(136．36&;#177;14．50)nkat／L，丙二醛为(6542．90&;#177;536．72)nmol／L，^99Tc^mMDP吸收量为(97．3&;#177;5．8)mBq／g&;#183;min，两者相比差异有显著性意义(P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)。结论：缺血预处理能有效改善缺血再灌注期间骨骼肌的收缩力，减轻骨骼肌坏死程度。因此，缺血预处理对缺血骨骼肌的收缩功能具有保护作用。     

黄芪和当归注射液对兔肾缺血再灌注损伤时腺苷三磷酸酶的影响

背景：近年研究表明，黄芪和当归具有抗自由基的作用，对肾缺血再灌注损伤具有保护作用。目的：观察黄芪、当归注射液在肾缺血再灌注损伤中对腺苷三磷酸酶(ATP酶)的保护作用及机制。设计：以实验动物为研究对象的观察对比实验。单位：一所医学院的生理教研室及肾功能保护研究室。材料：本实验于2001-01／2001—03在泸州医学院生理实验室完成。选择健康成年日本大耳白兔33只，由泸州医学院实验动物中心提供，雌雄不拘，体质量(1．63&;#177;0．22)b。按随机数字表法分为假手术对照组8只、单纯缺血再灌注组8只、黄芪注射液+缺血再灌注组(黄芪组)8只、当归注射液+缺血再灌注组(当归组)9只。方法：术前1d、手术当天、术后1d，黄芪组、当归组每天分别静脉注射药物(黄芪1．25g／kg、当归12、5g／kg)，对照组和单纯缺血再灌注组每天注射生理盐水5mL／kg。肾缺血lh再灌注48h后，下腔静脉采血，取右肾上极组织置入30mL／L戊二醛固定，下极组织制成组织匀浆。电镜检查肾组织超微结构，测血清肌酐含量及肾组织中ATP酶活性。主要观察指标：肾组织超微结构、血清肌酐含量及肾组织中ATP酶活性。结果：单纯缺血再灌注组肾组织变性显著，黄芪组、当归组病变较单纯缺血再灌注组明显减轻。单纯缺血再灌注组血清肌酐含量明显高于假手术对照组(P&;lt;0．05)；黄芪组、当归组血清肌酐含量较单纯缺血再灌注组降低(P&;lt;0、05)。单纯缺血再灌注组Mg^2+-ATP酶、Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-ATP酶含量分别为(0．155&;#177;0．020)，(0、179&;#177;0、018)，(0、150&;#177;0、022)nkat／g，与假手术对照组[(0、174&;#177;0、012)，(0、198&;#177;0．012)，(0．18l&;#177;0．017)nkat／g]相比明显降低(t=2．344，2．438，3．014，P&;lt;0．05)；黄芪组及当归组的Mg^2+-ATP酶、Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-ATP酶活性分别为(0．172&;#177;0．023)，(0．196&;#177;0．077)(0．175&;#177;0．016)(0．177&;#177;0．015)(0．200&;#177;0．011)和(0．181&;#177;0．025)nkat／g，除黄芪组Mg^2+-ATP酶活性较单纯缺血再灌注组差异无显著性外，余均较单纯缺血再灌注组高(t=2．372．2．786，P&;lt;0．05)。结论：黄芪、当归具有抑制ATP酶下降和改善肾局部血流调节紊乱的作用，为其通过保护ATP酶而减轻肾缺血再灌注损伤提供实验学基础。     

大鼠胰腺缺血再灌注损伤微循环改变的实验

目的：探讨胰腺缺血再灌注后微循环的改变与胰腺损伤的关系。方法：实验于2002—12／2004—01在徐州医学院神经生物学研究中心实验室，解放军第九十七医院实验科、徐州市心血管研究所实验室完成。24只大鼠随机分为假手术组，缺血再灌注1h组，缺血再灌注6h组，每组8只。测定血淀粉酶，脂肪酶了解胰腺外分泌功能；光镜、电镜观察胰腺组织结构改变；微循环显微镜检测胰腺微循环的血管直径、血流速度、血流状态；测定胰腺组织干／湿比，了解组织含水量的变化。结果：24只大鼠全部进入结果分析。①胰腺缺血再灌注后血清淀粉酶、脂肪酶含量：缺血再灌注1h组淀粉酶和脂肪酶含量高于假手术组[(26．67&;#177;9．99)μkat／L,(5．24&;#177;1．82)μkat／L,(14．53&;#177;3．98)μkat／L,(2．83&;#177;1．64)μkat／L，(t=2．60，349，P&;lt;0．05)]，缺血再灌注6h时明显高于假手术组[(41．59&;#177;10．95)μkat／L，(10．66&;#177;2．61)μkat／L，(t=7．35，7．54，P&;lt;0．01)]。淀粉酶、脂肪酶随着再灌注时间延长而增加。②胰腺缺血再灌注后形态学改变：缺血再灌注1h组光镜下呈现急性水肿性胰腺炎表现，缺血再灌注6h组损伤加重，出现出血、坏死。③胰腺缺血再灌注后微循环的改变：缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微动脉口径小于假手术组[(18&;#177;6)μm，(20&;#177;9)μm，(22&;#177;8)μm，(t=2．42—3．85，P&;lt;0．05)]。缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微静脉口径均较假手术组扩张[(30&;#177;8)μm，(35&;#177;15)μm，(25&;#177;10)μm，(t=2．42—3．85，P&;lt;0．05)]，缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组微静脉口径明显扩张(t=3．69，P&;lt;0．05)。缺血再灌注1h组与缺血再灌注6h组的血流速度均较假手术组减缓[(0．44&;#177;0．12)mm／s，(0．21&;#177;0．04)mm／s，(0．56&;#177;0．03)mm／s，(t=2．42—4．19．P&;lt;0．05—0．01)]，并且缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组血流速度显著减缓(t=5．19，P&;lt;0．01)。④胰腺再灌注后胰腺组织干湿比的改变：缺血再灌注1h组胰腺干湿比明显少于假手术组[(26．5&;#177;2．3)％，(30．1&;#177;2．1)％，(t=3．23，P&;lt;0．05)]，缺血再灌注6h组胰腺干湿显著减少[(20．4&;#177;2．2)％，(t=8．23，P&;lt;0．01)]。结论：胰腺缺血再灌注1h时即发生微循环障碍及组织损伤，再灌注6h微循环障碍进一步恶化，胰腺缺血再灌注后，胰腺组织损伤与微循环紊乱的发展呈现一致性。     

蛋白激酶C活化对大鼠缺血再灌注心肌细胞核三磷酸肌醇受体结合活性的影响

目的：观察具有抑制心肌细胞凋亡作用的蛋白激酶C活化对缺血再灌注心肌细胞核三磷酸肌醇受体结合活性的影响，以探讨其对心肌的保护作用。方法：实验于2003—04／07在解放军第三军医大学药理教研室完成。选用SD健康大鼠12只。随机分为2组，缺血再灌注组及假手术对照组，每组6只。缺血再灌注组：冠状动脉结扎30min，再灌注3h。假手术对照组：只埋线不结扎冠状动脉。采用蔗糖密度梯度离心法提纯心肌细胞核，将分离纯化的两组心肌细胞核分别平等进行2个亚组：磷酸化组和非磷酸化组，磷酸化组进行蛋白激酶C激动剂12—o-十四烷酰佛波醋酸酯-13磷酸化干预后，与非磷酸化组同时进行氚-1，4，5三磷酸肌醇的放射受体分析，比较两组细胞核经磷酸化后细胞核三磷酸肌醇受体结合活性变化。结果：进入结果分析大鼠12只。①心肌细胞凋亡指数：缺血再灌注组明显高于假手术对照组(9．88&;#177;0．33，0．6&;#177;0．0，P(0．01)。②大鼠心肌细胞核膜三磷酸肌醇受体的结合活性：缺血再灌注组与磷酸化组明显低于非磷酸化组【(88．27&;#177;0．08)，(136．05&;#177;0．05)pmol／g,P&;lt;0．05】。③大鼠心肌细胞核膜三磷酸肌醇受体的结合力：磷酸化组和非磷酸化组无明显差异【(102．83&;#177;0．09)，(106．24&;#177;0．26)pmol／g，P&;gt;0．05】。结论：大鼠心肌缺血再灌注时，蛋白激酶C可能是通过抑制心肌细胞核膜三磷酸肌醇受体的结合活性，进而参与了抑制缺血再灌注性心肌细胞凋亡的发生与发展。     

丙酮酸对大鼠小肠缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨丙酮酸(Pyruvate)对大鼠小肠缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：建立大鼠小肠缺血再灌注损伤的动物模型，实验组和对照组分别经肠腔给予含有丙酮酸钠和等能量的右旋糖酐-70营养液，对不同缺血再灌注时间的肠组织进行病理学观察并利用酶联免疫法检测肠组织中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平。结果：经丙酮酸处理后的小肠组织损伤情况：缺血45min为(2．17&;#177;1．17)分，再灌注30min为(2．17&;#177;0．98)分，再灌注60min为(2．33&;#177;1．03)分。较对照组明显减轻，P&;lt;0．01，t值分别为55．00，57．00，57．00。小肠黏膜组织中TNF-α和IL-6水平减低，TNF-α缺血45min，再灌注30，60min分别为(0．36&;#177;0．06)，(0．87&;#177;0．06)，(0．70&;#177;0．17)μg／L，与对照组比较P&;lt;0．01、F值分别为313．58，815．77，105．84。IL-6缺血45min，再灌注30，60min分别为(122．88&;#177;3．75)，(213．37&;#177;8．91)。(154．53&;#177;7．32)ng／L，与对照组比较P&;lt;0．01、F值分别为1587．18，1232．96，2447．93.结论：丙酮酸对大鼠小肠缺血再灌注损伤具有保护作用；该保护作用与丙酮酸减少小肠组织中的TNF-α和IL-6水平有关。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤与心肌肽素的保护作用

目的：探讨心肌肽素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及作用途径。方法：实验于2004-04/06在阜外心血管病医院麻醉研究室完成。选择健康雄性SD大鼠24只，随机分为3组，每组8只，分别为假手术组、缺血再灌注组、心肌肽素用药组。大鼠冠状动脉左前降支结扎30min造成心肌缺血模型，复灌24h造成心肌缺血再灌注损伤模型。①再灌注结束后大鼠血清肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶水平采用全自动生化仪检测。②检测大鼠心肌细胞凋亡指数应用原位末端标记法。③心肌肌动蛋白表达采用特异性免疫组化二步法检测。④大鼠心肌病理学改变光镜下半定量评分以10倍物镜下，随机选取若干视野观察整个左室心肌切面，从心肌变性坏死、出血、间质水肿和中性粒细胞浸润四方面观察心肌病变分布情况并计分，计算每种病变的视野比例(有心肌病变的视野数/镜下观察的总视野数)，正常心肌计0分；病变灶性，病变视野比例≤1／4计1分；病变视野比例为1／4～1／2计2分；病变弥散性，病变视野比例≥1／2计3分。每方面的得分求和即为最后计分。⑤大鼠心肌病理学电镜下半定量评分：从心肌纤维、线粒体、核染色质、细胞水肿和小血管内皮五方面观察其超微结构改变并计分，结构正常为0分；轻度改变且病变灶性，小于全部视野面积的1／4为1分；中度改变，病变占全部视野面积的1／4～1／2计2分；重度改变且病变弥散性，大于全部视野面积的1／2为3分。每方面的得分求和即为最后计分。结果：进入结果分析大鼠24只，每组8只。①大鼠血清肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶水平、心肌细胞凋亡指数：心肌肽素用药组明显低于缺血再灌注组[(5．59&;#177;0．52)μ kat/L，(1．06&;#177;0．09)μkat／L，(4．34&;#177;1．15)％；(10．52&;#177;0.32)μ kat/L，(1．97&;#177;0.21)μ kat／L，(11．16&;#177;1．09)％，P&;lt;0．05]，缺血再灌注组、心肌肽素用药组明显高于假手术组[(2．58&;#177;0．32)μ kat／L，(0．57&;#177;0．15)μ kat／L，（0．85&;#177;0．42)％，P&;lt;0．05]。②大鼠心肌肌动蛋白含量和电镜、光镜评分组间差异性与血清酶学检测心肌细胞凋亡指数组间差异相同。结论：心肌肽素通过抑制心肌细胞凋亡，减轻心肌细胞结构损伤发挥对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。     

高氧液对家兔心肌缺血／再灌注细胞凋亡的影响

目的 观察高氧液对心肌缺血／再灌注心肌梗死面积、心肌结构和细胞凋亡参数的影响，探讨高氧液抗心肌缺血／再灌注损伤的保护作用机制。方法 家兔心脏左冠状动脉前降支缺血／再灌注动物模型，缺血30min，再灌注2h，60只家兔随机数字表法分成3组：对照组(Ⅰ组，n=20)只暴露左冠状动脉前降支，不结扎；缺血／再灌注组(Ⅱ组，I／R组，n=20)，在缺血再灌注前10min静脉注射生理盐水(20ml／kg)；高氧液治疗组(Ⅲ组，n=20)，在缺血前10min静脉注射高氧液(20ml／kg)。分别按TCC法染色，用图像分析系统计算梗死面积；原位末端TUNEL法检测细胞凋亡指数；免疫组化ABE法检测Fas、Bel-2的含量，同时电镜观察心肌细胞的超徽结构。结果 Ⅲ组心肌梗死细胞面积为(2．29&;#177;0．02)cm，与Ⅱ组的(3．38&;#177;0．07)cm比较，梗死面积明显缩小。Ⅱ组的AI(20．8&;#177;0．36)，明显高于Ⅰ组(4．1&;#177;0．25)，P&;lt;0．01，t=170．4，Ⅲ组的AI(13．3&;#177;0．35)显著低于Ⅱ组，P&;lt;0．01，t=66．8，但仍高于Ⅰ组，P&;lt;0．01，t=92．8。Ⅰ组Fas的OD值为2．80&;#177;0．07，Ⅱ组3．70&;#177;0．05，Ⅲ组3．10&;#177;0．04。Ⅰ组Bcl—2的OD值为2．7&;#177;0．02，Ⅱ组0．60&;#177;0．03，Ⅲ组2．90&;#177;0．02。结论 高氧液具有抗心肌缺血／再灌注损伤的作用，其作用机制可能是通过调节Fas和Bcl—2介导的心肌缺血/再灌注细胞凋亡而实现。     

脑缺血再灌注损伤后炎症反应与赛来昔布的脑保护作用

目的：细胞间黏附分子1及白细胞浸润参与了脑缺血再灌注损害过程，观察赛来昔布对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的脑梗死体积、脑缺血坏死区周边细胞间黏附分子1和白细胞浸润的影响，探讨其是否具有脑保护作用。方法：实验于2003-12／2004-02在大连医科大学附属第二医院中心实验室进行。SD大鼠36只随机分为3组：赛来昔布组(n=16)、安慰剂组(n=16)及假手术组(n=4)，其中赛来昔布组和安慰剂组按脑缺血再灌注2，4，6，24h分为4个亚组(n=4)。手术前10min赛来昔布组用赛来昔布灌胃(0．25mg／g,以3mL生理盐水溶解)，安慰剂组安慰剂灌胃，剂量相同，然后参照改良的Longa-Zea线栓法制作大脑中动脉闭塞及再通模型，假手术组仅做颈部正中切口暴露右侧颈总动脉后缝合皮肤。观察大鼠大脑中动脉闭塞2h再灌注2，4，6，24h4个时相点梗死体积，缺血区白细胞计数，并应用免疫组织化学法染色观察细胞间黏附分子1阳性微血管数。结果：36只大鼠进入结果分析。①赛来昔布组再灌注后2，4，6，24h的梗死体积明显小于同时段安慰剂组[(4．8l&;#177;0．13)％，(8．22&;#177;0．25)％，(11．83&;#177;0．62)％，(15．93&;#177;0．42)％，(6．56&;#177;2．07)％，(10．12&;#177;2．37)％，(13．53&;#177;1．47)％，(17．86&;#177;2．78)％，P&;lt;0．05]。②假手术组细胞间黏附分子1阳性表达为(0．63&;#177;0．62)个，未见白细胞浸润。脑缺血再灌注后，脑缺血坏死区周边微血管内皮细胞细胞间黏附分子1达及白细胞浸润增多，并于24h达高峰，此时细胞间黏附分子1表达及白细胞浸润赛来昔布组低于同期安慰剂组[(43．00&;#177;1．41)，(6．25&;#177;1．26)，(59．50&;#177;2．25)，(6．75&;#177;1.8)个，P&;lt;0．01]。结论：赛来昔布可缩小脑缺血再灌注后的脑梗死体积，抑制局灶性脑缺血再灌注时炎症反应，非特异性地起到脑保护作用。 黏附分子l；白细胞     

缺血后处理对肺再灌注损伤中脂质过氧化反应的调整

目的：缺血后处理即在全面恢复再灌注前反复短暂多次预再灌、停灌，探讨缺血后处理对在体大鼠肺缺血再灌注损伤的脂质过氧化反应的影响。方法：实验于2004-05／06在汕头大学医学院附属肿瘤医院中心实验室完成。通过阻断左肺门建立大鼠在体左肺缺血再灌注模型，将24只健康雌性SD大鼠随机分为①假手术组8只：持续灌注105min。②缺血再灌注组8只：缺血45min，再灌注60min。③缺血后处理组8只：缺血45min后，短暂再灌注1min，缺血1min，反复5次，然后再全面恢复灌注60min。试验结束后处死动物，切取新鲜肺左叶组织制成100g／L组织匀浆，测定丙二醛含量用硫代巴比妥酸比色法，测定超氧化物歧化酶活性用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)。结果：3组24只动物均进入结果分析。①肺组织丙二醛含量测定结果：假手术组为(0.934&;#177;0.086)μmol／g，对照组为(1.230&;#177;0．169)μmol／g，缺血后处理组为(1.064&;#177;0．090)μmol／g，缺血后处理组与对照组相比明显降低(P&;lt;0．05)。②超氧化物歧化酶活性测定结果：假手术组为(2．838&;#177;0．509，)μkat/g，对照组为(1．183&;#177;0．222)μkat／g，缺血后处理组为(2．008&;#177;0．298)μkat／g，缺血后处理组与对照组相比显著升高(P&;lt;0．01)。结论：对照组与假手术组相比，肺组织经历45min缺血60min再灌注后丙二醛含量明显升高，抗自由基酶类超氧化物歧化酶活性显著下降，说明再灌注期肺组织脂质过氧化反应增强，抗氧化能力降低。缺血后处理组较对照组肺组织中脂质代谢产物丙二醛含量下降，抗自由基酶超氧化物歧化酶活性增加，表明缺血后处理可减轻在体大鼠肺缺血再灌注损伤的脂质过氧化反应而产生肺保护作用。     

缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的延迟保护作用

目的：脊髓缺血再灌注损伤机制复杂，各种单一药物保护作用有限。为此探讨缺血预处理(ischemic preconditioning，IPC)对兔脊髓缺血再灌注损伤的延迟保护作用。方法：将大白兔随机分为3组。缺血组和IPC组各30只，采用肾下腹主动脉阻断法，建立脊髓缺血再灌注模型；假手术组10只，手术开始步骤同其他两组，但不做肾下腹主动脉阻断即缝合伤口。IPC组先阻断腹主动脉5min，开放10min，重复3次，48h后阻断腹主动脉35min后开放灌注，缺血组阻断腹主动脉35min后开放灌注。于术后4，8，24，48h，7d分别进行神经功能评分，观察脊髓标本的病理学改变，细胞凋亡情况及脊髓组织中白细胞介素8(IL-8)的水平测定。结果：各时间点假手术组所有动物神经功能正常。缺血再灌注8，24，48h，7d神经功能Jacobs评分，缺血组分别为(1．90&;#177;1．65)，(1．34&;#177;1．76)，(0．71&;#177;0．75)，(0．61&;#177;0．57)分，IPC组分别为(3．50&;#177;1．46)，(3．80&;#177;1．60)，(3．77&;#177;1．75)，(3．50&;#177;1．29)分，两组比较差异有非常显著性意义(t=3．98～11．12，P&;lt;0．01)。IPC组组织病理学变化各时间点明显好于缺血组，凋亡细胞数明显低于同时间点缺血组。再灌注8，24，48hIL-8水平，缺血组分别为(5877．32&;#177;530．40)，(6015．49&;#177;441．55)，(5050．49&;#177;271．22)pg／g，IPC组为(5086．34&;#177;284．16)，(5215．61&;#177;411．66)，(4385．86&;#177;230．93)pg／g，两组比较差异有显著性意义(t=2．63-3．69，P&;lt;0．05)。结论：IPC组通过调动机体内源性抗损伤机制对缺血脊髓发挥延迟保护作用。     

缺血预处理及磺脲类降糖药物对在体大鼠缺血再灌注损伤心肌的作用

目的：观察经典缺血预处理对在体大鼠缺血再灌注心肌损伤的保护效应以及磺脲类降糖药物对其产生的影响。方法：将实验动物分为假手术组、缺血再灌注组、经典缺血预处理组和磺脲类降糖药物处理组，每组8只，观察经典缺血预处理和磺脲类降糖药物对心肌超微结构的影响，同时测定心肌组织丙二醛含量。结果：经典缺血预处理后缺血再灌注后的心肌丙二醛含量[(0．99&;#177;0．26)μmol／g]明显降低，与模型组[(1．68&;#177;0．33)μmol／g]比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，而且保护心肌超微结构；磺脲类药物预处理组心肌丙二醛含量[(1．71&;#177;0．26)μmol／g]与模型组比较，差异无显著性意义，且心肌超微结构明显破坏。结论：磺脲类药物预处理可以取消经典缺血预处理对在体大鼠缺血再灌注心肌损伤的保护效应。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及其相应基因的调控

目的 观察胰岛素（insulin,RI)对缺血再灌注损伤后细胞凋亡及其相应基因的调控作用。评估RI对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将健康wistar大鼠56只，随机分为对照组、缺血再灌注盐水组(NS)、缺血再灌注胰岛素组(RI)。采用pulsinelli4血管阻塞模型，观察RI、NS在4．24，48h海马CA1区存活神经元数目，TUNEL阳性细胞数目，Bcl-2蛋白的表达，以观察比较缺血再灌注阶段细胞凋亡的变化。结果 再灌注NS组CA1区神经元数目(36&;#177;6)个／mm^2较再灌注RI组(88&;#177;9)个／mm^2少(t=3．34，P&;lt;0．01)。再灌注后CA1区细胞凋亡数：4h时再灌注NS组(12&;#177;3)个／mm^2高于再灌注RI(8&;#177;1)个／mm^2和假手术组(2&;#177;1)个／mm^2：组间比较，F=127．66，P&;lt;0．001。Bcl-2对海马CA1细胞凋亡评估4h时。再灌注NS组43．0&;#177;9．8,高于再灌注RI组24．0&;#177;5．4和假手术组2．7&;#177;0．8。结论 全脑缺血再灌注时急用RI可减轻脑缺血再灌注神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤引起的神经元延迟性坏死有保护作用。     

纳洛酮对急性心肌梗死再灌注后梗死面积和肌酸激酶同工酶活性的影响

目的：通过制造大鼠急性心肌梗死再灌注损伤模型，探讨纳络酮对大鼠急性心肌梗死再灌注损伤的保护作用。方法：实验于2003—05／10在兰州医学院解剖教研室实验室完成。成年SD大鼠30只随机分为手术对照组、单纯缺血再灌注组、缺血加纳络酮组，每组10只。用戊巴比妥钠(40mg／kg)腹腔注射麻醉大鼠，从根部结扎左冠状动脉前降支制备心肌缺血-再灌注模型。单纯缺血再灌注组在结扎左冠状动脉前降支心肌缺血30min后，剪断结扎线恢复心肌再灌注4．5h。缺血加纳洛酮组在术前10min及结扎后0．5h．4h，静脉注射纳洛酮0．517mg／kg。其余两组注射同体积的生理盐水。处死大鼠后迅速摘取心脏，经处理后氯化三苯基四氮唑法染色和数码照相计算机图象分析系统计算心肌梗死面积，测定血清中肌酸激酶同工酶含量。结果：30只大鼠全部进入结果分析。缺血加纳洛酮组与单纯缺血再灌注组比较，心肌梗死面积明显缩小[(37．53&;#177;5．77)％，(26．73&;#177;3．67)％，P&;lt;0．01]，血清中肌酸激酶同工酶活性明显降低[(210．59&;#177;17．87)kat／L，(153．12&;#177;22．16)kat／L，P&;lt;0．01]。结论：纳洛酮可明显缩小缺血再灌注心梗面积，降低血清肌酸激酶同工酶含量．改善心功能。