基于肠道尿酸转运体ABCG2的芒果苷降尿酸作用机制分析

目的:探讨芒果苷对尿酸诱导的高尿酸血症小鼠血尿酸、肠道尿酸转运体三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2[ATP-binding cassette superfamily G(White)member 2,ABCG2]mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨芒果苷降尿酸的作用机制。方法:昆明种小鼠60只,随机分为6组,每组10只,分为正常组,模型组组,芒果苷(1.5,3.0,6.0 mg·kg~(-1))组和阳性药苯溴马隆(25.0 mg·kg~(-1))组,除正常组外,以腹腔注射的方式给予小鼠尿酸,诱导形成高尿酸血症模型,同时灌胃给予芒果苷及苯溴马隆,2周后磷钨酸法检测小鼠血尿酸,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠空肠、回肠部ABCG2 mRNA和蛋白的表达,并采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠回肠病理学变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠血尿酸显著升高,小鼠的空部、回肠部ABCG2 mRNA明显降低,小鼠的空部、回肠部ABCG2蛋白明显升高(P0.05,P0.01),病理变化不明显;灌胃给药2周后,与模型组比较,芒果苷(3.0,6.0 mg·kg~(-1))组小鼠血尿酸明显下降(P0.05,P0.01),芒果苷(1.5,3.0,6.0 mg·kg~(-1))组小鼠的空部、回肠部ABCG2 mRNA表达均明显的上调,芒果苷(6.0 mg·kg~(-1))组小鼠空肠部ABCG2蛋白明显下调,而在小鼠回肠部,芒果苷(3.0,6.0 mg·kg~(-1))组的ABCG2蛋白表达明显下调(P0.05)。结论:芒果苷可明显降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平,并能使小鼠肠道ABCG2 mRNA和蛋白表达改变恢复至正常水平。     

虎杖-桂枝药对配伍对大鼠慢性高尿酸血症和肾、肠尿酸转运体表达的影响

目的:研究虎杖-桂枝药对配伍对大鼠高尿酸血症的防治作用及对尿酸盐阴离子转运体1(URAT1),有机阴离子转运蛋白3(OAT3),三磷酸腺苷结合盒转运蛋白2(ABCG2)表达的影响。方法:84只SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,苯溴马隆组(10 mg·kg~(-1)),痛风定组(160 mg·kg~(-1))和虎桂低、中、高剂量组(3.5,7,14 g·kg~(-1))。以皮下注射氧嗪酸钾(200mg·kg~(-1))和ig次黄嘌呤(50 mg·kg~(-1))和乙胺丁醇(250 mg·kg~(-1))的方法,建立高尿酸血症大鼠模型。第4天开始各组大鼠ig给予相应药物,每天1次,连续2周,测定血尿酸(SUA),尿尿酸浓度(UUA),肌酐(Cr),尿素氮(BUN),谷丙转氨酶(GPT)水平;以RT-PCR方法测定大鼠肾脏URAT1和OAT3和小肠ABCG2的mRNA表达水平,以Western blot方法测定大鼠肾脏URAT1和OAT3的蛋白表达水平;以免疫组化方法测定大鼠小肠ABCG2的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血尿酸水平显著升高,尿尿酸排泄减少,肾脏URAT1 mRNA和蛋白高表达,肾OAT3和小肠ABCG2 mRNA和蛋白低表达,具有明显统计学差异(P0.01)。与模型组比较,虎桂药对高中剂量组能显著降低血尿酸和尿素氮水平,增加24 h尿酸排泄量;虎桂药对高中剂量组能显著降低肾脏URAT1 mRNA和蛋白表达量水平,升高肾脏OAT3和小肠ABCG2 mRNA和蛋白的表达量水平,均具有明显统计学差异(P0.01,P0.05)。结论:虎桂药对有明显的抗高尿酸血症作用,可能是通过下调大鼠肾脏URAT1的表达,并上调大鼠肾脏OAT3和小肠ABCG2的表达而减少尿酸的重吸收并增加其排泄。     

黄芪葛根汤对高脂血症大鼠的降血脂作用机制研究

目的探讨黄芪葛根汤对高脂血症大鼠的降脂作用机制。方法将50 只SD 大鼠随机分为正常组、模 型组、阳性药组（阿托伐他汀钙片,5 mg·kg-1）及黄芪葛根汤低、高剂量组（5、10 g·kg-1）,每组10 只。采用高 脂饲料喂养大鼠复制高脂血症模型,模型复制的同时各给药组按照上述剂量灌胃给药,正常组和模型组给予等 量生理盐水灌胃,每天1 次,连续灌胃20 d。检测大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆 固醇（HDL-c）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）水平;采用HE 及油红染色观察大鼠肝脏病理变化;采用qPCR 及Western Blot 法检测小肠组织尼曼-匹克C1 型类蛋白1（NPC1L1）、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5（ABCG5） 和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G8（ABCG8）mRNA 及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清 TC、TG、LDL-c 水平及小肠组织NPC1L1 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.01,P＜0.05）,HDL-c 水平 明显降低（P＜0.01）,肝细胞脂肪变性程度和脂滴积聚明显增加。与模型组比较,黄芪葛根汤低剂量组大鼠血 清TC、TG、LDL-c 水平与小肠组织NPC1L1 mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.01,P＜0.05）,ABCG5、 ABCG8 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.01,P＜0.05）,肝细胞脂肪变性程度明显降低,脂滴积聚明显减 少。结论黄芪葛根汤对高脂血症大鼠具有明显降血脂作用,能降低肝细胞脂肪变性程度和减少肝细胞脂滴积 聚,可能与其下调小肠组织NPC1L1 的表达以抑制胆固醇的吸收,同时上调小肠组织ABCG5 及ABCG8 的表达 而增加胆固醇的排泄有关。     

以MRP2/MRP3转运体为作用靶点的何首乌中肝毒性成分筛选

目的：建立以胆红素外排转运体多药耐药相关蛋白2 (MRP2)、MRP3为靶点的何首乌中潜在肝毒性成分的快速筛选方法,并评价相关化合物的肝毒性大小。方法：采用计算机分子对接方法对何首乌中的主要单体成分进行高通量筛选,以MRP2、MRP3转运体底物胆红素为参考对象,将48个目标单体与MRP2、MRP3蛋白进行分子对接,实现虚拟筛选;采用CCK-8细胞计数试剂盒法考察目标单体对肝细胞HepaRG的毒性作用;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定目标单体对HepaRG细胞外排转运体MRP2、MRP3 mRNA相对表达量的影响。结果：MRP2对接结果显示,大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-(6’-O-乙酰基)-葡萄糖苷、反式二苯乙烯苷高于底物胆红素与MRP2对接打分值的80%;MRP3对接结果显示,大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-6-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-(6’-O-乙酰基)-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷及芦荟大黄素-8-O-β-D-葡...     

大黄灵仙胶囊调控胆结石小鼠肝细胞转运蛋白表达及胆汁代谢谱的机制研究

目的通过Western blot法和气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术观察大黄灵仙胶囊对小鼠胆结石肝细胞转运蛋白表达及胆汁代谢谱的影响,探讨其可能机制。方法将50只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(N组)、模型组(M组)、熊去氧胆酸(UDCA)对照组(U组)、药物对照组(Y组)及大黄灵仙胶囊治疗组(D组),每组10只。N组和Y组小鼠普通饲料喂养,M、U、D组给予高脂、高热量、高胆固醇饲料诱导胆囊结石的形成。同时U组每天给予130mg/kg UDCA溶液灌胃;Y组和D组每天给予大黄灵仙胶囊汤药13g/kg灌胃,N组和M组给予相同体积的生理盐水灌胃。干预8周后,观察小鼠成石率,利用Western blot法观察肝胆管侧膜细胞转运蛋白三磷酸腺苷结合盒转运子B亚族成员11(ATP binding cassette subfamily B member 11,Abcb11)和三磷酸腺苷结合盒转运体c2(ATP binding cassette subfamily C member 2,Abcc2)变化,GC-MS技术检测小鼠胆汁代谢组学特征。结果造模期间因灌胃操作不慎,U组1只小鼠挣扎时灌胃针扎破小鼠食管导致死亡。M组成石率为100.00%,高于N组和Y组(均为0.00%,χ2=20.00,P0.01);与M组比较,U组及D组成石率降低(44.44%,χ2=7.54,P=0.011;30.00%,χ2=10.77,P=0.003)。经红外光谱分析检测后在2939、1 446、1 382、1 056cm-1处可见胆固醇特有吸收峰。5组小鼠Abcb11和Abcc2转运蛋白总体比较差异有统计学意义(F=41.89;P0.01;F=90.01,P0.01)。与N组比较,M组Abcb11和Abcc2表达降低(P0.01);与M组比较,U、Y、D组转运蛋白Abcb11和Abcc2表达均升高(P0.01)。与其他组比较,模型组小鼠胆汁内源性代谢物丙氨酸、柠檬酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、胆固醇、LDL、甘油、苹果酸及丙酮浓度升高,乳酸、谷氨酰、胺甘氨酸、胆碱及牛磺酸浓度降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论大黄灵仙胶囊具有稳定肝胆管侧膜细胞转运蛋白表达、改变或改善病理性胆汁的分泌及其代谢物的作用,从而达到防治胆结石的目的。     

三七细粉与破壁粉对高脂血症模型大鼠药效对比研究

目的:对比研究三七细粉与破壁粉对高脂血症模型大鼠的作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用高脂复合饮酒诱导高脂血症大鼠模型,造模成功后灌胃给予三七细粉0.15、0.3、0.6 g/kg以及破壁粉0.15、0.3、0.6 g/kg,每天给药1次,连续20 w。给药期间,测定大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)的含量,以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察肝脏病变及脂质沉积情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中游离脂肪酸(NEFA)、载脂蛋白A(Apo-A)、载脂蛋白B(Apo-B)以及肝脏中TC、TG、TBA和粪便TC、TBA水平;采用RT-PCR检测肝脏中肝X受体α亚型(lxrα)、三磷酸结合盒转运蛋白A1(abca1)、三磷酸结合盒转运体G1(abcg1)的mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清TC、LDL-c含量、AST、ALT活力及肝脏TC、TBA水平明显升高(P<0.05或P<0.01);肝组织病变及脂质沉积严重,血清HDL-c、Apo-A水平明显降低及肝脏abca1、abcg1 mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,三七细粉和破壁粉均能降低高脂血症模型大鼠血清中TC、TG、LDL-c及肝脏中TC、TBA水平,升高Apo-A和粪便TBA及尾部微循环水平(P<0.05或P<0.01);减轻大鼠肝脏脂肪空泡、炎性细胞浸润及脂质沉积(P<0.05或P<0.01);能上调肝脏abca1和abcg1 mRNA表达,下调lxrα mRNA表达(P<0.05或P<0.01),且破壁粉的作用强于细粉。结论:三七破壁粉调节血脂的作用优于细粉,主要表现在改善肝功能及肝脏脂质沉积上,其作用机制可能与调节lxrα、abca1、abcg1 mRNA表达而促进胆固醇流出有关。     

葛根素对人肾近曲小管上皮细胞ABCG2表达影响

  目的：探讨葛根素(Pur)对人肾近曲小管上皮细胞(HK2)内三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ABCG2) 基因与蛋白表达的影响,阐明葛根素治疗痛风的可能机制。  方法：体外培养HK2细胞,分为对照组与25、50、100、200 mg/L 葛根素给药组。CCK-8法检测葛根素对HK2细胞的影响;检测ALP活性,观察HK2细胞内酶促反应状态;荧光定量PCR法、Western blotting法检测对照组与给药组HK2细胞内ABCG2基因蛋白表达。  结果：葛根素对HK2细胞有促进增殖作用(P<0.05);100 mg/L葛根素组ALP活性最佳(P<0.01)。荧光定量 PCR和Western blotting法检测结果显示,葛根素组HK2细胞内ABCG2基因及蛋白表达明显高于对照组,其中100 mg/L葛根素组HK2细胞内ABCG2最为明显,差异有统计学意义(P<0.01)。  结论：葛根素能够增加HK2细胞内ABCG2基因蛋白的表达,这可能是葛根素调节痛风患者血尿酸水平的重要分子机制之一。     

外排转运体和代谢酶与黄酮的相互作用及其对黄酮肠吸收影响的研究进展

黄酮类化合物大量存在于植物界中,具有广泛的药理作用,可预防及治疗癌症、心脑血管疾病、骨质疏松等.口服给药后,大量黄酮类化合物存在生物利用度低的现象.国内外诸多学者对其吸收代谢机制进行了研究.研究表明,肠上皮细胞的ATP-依赖性外排转运体如P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白-2(MRP2)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和细胞内的Ⅱ相代谢酶(UGT等)是影响黄酮肠吸收的主要因素.综述近年来外排转运体和代谢酶对黄酮类化合物肠吸收影响的研究概况,包括ATP-依赖性外排转运体与代谢酶的协同作用,黄酮类化合物对二者功能的调节作用等,以期为提高黄酮的生物利用度和临床合理利用提供理论依据.     

氟伐他汀对冠心病患者单核细胞ABCA1表达的影响

目的:以冠心病患者外周血单核细胞为研究对象,观察氟伐他汀对体外培养的冠心病患者外周血单核细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法:于冠脉造影时无菌采集血液标本,肝素抗凝,密度梯度离心法分离患者外周血单核细胞,按作用时间与浓度分组,分别与10.0μmol/L氟伐他汀作用0h、6h、12h、24h,以及0、1.0、10、100μmol/L浓度的氟伐他汀作用24h。提取各组细胞总RNA,逆转录多聚酶链反应检测ABCA1 mRNA的表达。结果:与对照组比较,10.0μmol/L氟伐他汀作用于单核细胞6h、12h、24h以及不同浓度的氟伐他汀与单核细胞孵育24h均不能增强单核细胞ABCA1 mRNA(P>0.05)。结论:氟伐他汀不能增强冠心病患者单核细胞ABCA1的表达。     

金钗石斛细粉与超微粉对大鼠肠道转运体影响的比较

目的:比较金钗石斛细粉和超微粉中生物碱类成分在大鼠体内的血药浓度,考察不同粒径金钗石斛对肠道转运体基因表达的影响。方法:将36只大鼠随机分为空白组、金钗石斛细粉组(0.25 g·kg~(-1))和金钗石斛超微粉组(0.25 g·kg~(-1)),每6 h灌胃1次,连续灌胃5 d,收集大鼠血浆和小肠样本。血浆样本分析采用UPLC-MS,Hypersil Gold C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;电喷雾离子源(ESI)正离子模式检测。采用实时荧光定量聚合酶链式反应分析肠道转运体多药耐药蛋白1(MDR1),寡肽转运蛋白1(PEPT1),有机阳离子转运蛋白2(OCT2),乳腺癌耐药蛋白1(BCRP1),单羧酸转运蛋白1(MCT1)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)的基因表达情况。结果:灌胃给予金钗石斛细粉和超微粉后,在大鼠血浆中能检测出石斛碱、石斛氨碱和mubironine B。金钗石斛超微粉组血浆中石斛碱和石斛氨碱的质量浓度比金钗石斛细粉组显著增加(P0.05)。与空白组比较,金钗石斛细粉和超微粉均能显著抑制BCRP1的基因表达(P0.05),且金钗石斛超微粉组较细粉组表达更低(P0.05);金钗石斛细粉还能显著上调MDR1的基因表达(P0.05),而金钗石斛超微粉则对MDR1基因表达的影响不显著。结论:与金钗石斛细粉相比,金钗石斛超微粉灌胃后在大鼠体内石斛碱和石斛氨碱的血药浓度升高,这可能与肠道转运体MDR1和BCRP1有关,为金钗石斛药材粒径的选择提供了实验依据。     

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??Multidrug resistance of tumor cells is a material cause of chemotherapy failure, and the overexpression of adenosine triphosphate-binding cassette(ABC) membrane transporters is an important factor in multidrug resistance. Significant progress has been made in reversing multidrug resistance by reducing the expression of drug transporters on tumor cells; inspired by the mechanism of multidrug resistance,speeding up the efflux of poisons by increasing the expression of drug transporters is attracting more and more attention. In this review, We summarized the research progress on mechanism of membrane transp-orters in drug resistance in recent years, and new mechanism of detoxification based on these theories.     

常见药物肠道吸收的转运蛋白

口服药物在肠道中的吸收是决定药物生物利用度的重要因素。肠道中有许多介导药物转运的蛋白，在药物的吸收、分布和相互作用方面起关键的作用。本文通过介绍一些常见的肠道膜转运蛋白及其转运机制，提出利用转运蛋白的特性和转运蛋白底物之间的相互作用，提高药物的生物利用度。并对中药成分中的一些转运蛋白底物及中药-西药之间的相互作用进行了阐述。     

黄酮类化合物相关的转运蛋白研究现状

 目的 综述与黄酮类化合物相关的转运蛋白的研究现状。方法 以国内外研究文献为基础,对文献资料进行分析、归纳和总结。结果 黄酮类化合物具有广泛的生物学作用,有多种转运蛋白参与其中,笔者综述了Na⁺依赖葡萄糖转运载体、P-糖蛋白、有机阴离子转运体、葡萄糖转运蛋白、有机阴离子转运多肽、单羧酸转运体、Bilitranslocas七类与黄酮类化合物相关的转运蛋白。 结论 与黄酮类化合物相关的转运蛋白尚未完全明确,随着对其研究的深入,将有助于进一步阐明黄酮类化合物的作用,同时也为提高黄酮类化合物药物疗效、增加黄酮类化合物的靶向组织转运提供新契机,为疾病新靶点治疗提供重要依据。
     

转运蛋白在药物传递中的重要作用

 目的介绍转运蛋白在药物传递中的重要作用。方法根据文献对转运蛋白在药物传递中的重要作用进行综述。结果转运蛋白能有效地参与药物的肠吸收、分布和排泄等过程,以其为靶点可大大提高药物传递的效率,减少不良反应的发生。结论可深入地解析药物体内动态和更有效地调控药物体内行为,从而设计出安全、有效的药物及其传递系统。     

Multiple ABC Transporters Efflux Baicalin

Baicalein, the aglycone formed by hydrolysis of baicalin in the intestine, is well absorbed by passive diffusion but subjected to extensive intestinal glucuronidation. Efflux of baicalin, the low passive permeability glucuronide of baicalein from enterocytes, likely depends on a carrier‐mediated transport. The present study was designed to explore potential drug–herb interaction by investigating the inhibitory effect of baicalin on the transport of reporter substrates by transporters and to identify the transporters responsible for the efflux of baicalin from enterocytes and hepatocytes. The interaction of baicalin with specific ABC transporters was studied using membranes from cells overexpressing human BCRP, MDR1, MRP2, MRP3 and MRP4. Baicalin was tested for its potential to inhibit vesicular transport by these transporters. The transport of baicalin by the selected transporters was also investigated. Transport by BCRP, MRP3 and MRP4 was inhibited by baicalin with an IC₅₀ of 3.41 ± 1.83 μM, 14.01 ± 2.51 μM and 14.39 ± 5.69 μM respectively. Inhibition of MDR1 (IC₅₀ = 94.84 ± 31.10 μM) and MRP2 (IC₅₀ = 210.13 ± 110.49 μM) was less potent. MRP2 and BCRP are the apical transporters of baicalin that may mediate luminal efflux in enterocytes and biliary efflux in hepatocytes. The basolateral efflux of baicalin is likely mediated by MRP3 and MRP4 both in enterocytes and hepatocytes. Via inhibition of transport by ABC transporters, baicalin could interfere with the absorption and disposition of drugs. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

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??Quercetin could affect both the in vivo and in vitro transport of a variety of commonly used drugs by modulating the uptake transporter organic anion transporter polypeptides (OATPs), organic anion transporters (OATs), efflux transporter P-glycoprotein (P-gp), multidrug resistance-related protein (MRP) and breast cancer resistance protein (BCRP), respectively. Quercetin can regulate various drug transporters, thereby affecting other drugs in vivo process.     

神经性疾病相关的谷氨酸转运体研究进展

谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统中最重要的神经递质之一。谷氨酸转运体可分为兴奋性氨基酸转运体(excitatory amino acid transporters,EAATs),即高亲和力转运体和囊泡谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporters,VGLUTs),即低亲和力转运体2种类型。其中,EAATs为维持正常的兴奋性突触的转运及受体激活所必需,人类已发现有5个胞浆膜谷氨酸转运体亚型(EAAT1-EAAT5);VGLUTs的功能是特异地将突触囊泡外的谷氨酸转运至突触囊泡内,主要由3个成员组成,分别为VGLUT1,VGLUT2和VGLUT3。近年研究发现:很多神经系统疾病都伴随着谷氨酸转运体功能的异常,且其病理特征与谷氨酸转运体亚型、分布、结构以及功能相关。有报道认为,中药中某些成分如麝香酮抗脑缺血损伤与其调节谷氨酸转运体有关。     

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??With the continuously clinical study of capsaicin, capsaicin-drug interaction has become increasingly prominent. In recent years, the studies indicate that capsaicin shows a significant inducing or inhibitory effect on a variety of drug metabolism enzymes and transporters, thereby leading to the occurrence of complex drug interactions and affecting the other drugs in vivo process. In this paper, the modulation effect of capsaicin on drug metabolizing enzymes and transporters by reviewing the relevant research at home and abroad in recent years were summarized, and the drug-drug interactions associated with capsaicin in order to provide theoretical guidance for clinical rational drug use were explored . Furthermore, complex drug-drug interaction studies can be provided with prior examples.