磷脂对高密度脂蛋白3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的影响

为了研究卵磷脂和鞘磷脂对高密度脂蛋白 3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的影响 ,测定了细胞内胆固醇含量、磷脂含量及游离胆固醇 -胆固醇酯平衡的变化。结果发现 ,各组细胞内胆固醇含量从 79.75 μg/皿变为 42 .79、37.16、31.5 3μg/皿 ;高密度脂蛋白 3组和卵磷脂组中卵磷脂磷含量分别为 13.95和 16 .2 8μg/皿 ;高密度脂蛋白和鞘磷脂组中鞘磷脂磷含量分别为 5 .0 3和 7.0 1μg 皿。细胞与BSA、卵磷脂、鞘磷脂单独孵育后 ,细胞内胆固醇含量分别为 75 .30、74.6 5和 73.0 9μg/皿 ,游离胆固醇 /总胆固醇比值分别为 5 9.42 %、5 6 .95 %和 6 4.77%。结果提示卵磷脂和鞘磷脂均能促进高密度脂蛋白 3介导细胞内胆固醇流出 ,后者强于前者 ,而卵磷脂和鞘磷脂单独不能促进细胞内胆固醇的流出。鞘磷脂促进细胞内胆固醇酯向游离胆固醇转化 ,卵磷脂促进细胞内游离胆固醇向胆固醇酯转化     

高密度脂蛋白3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出

为了研究高密度脂蛋白３介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的机理,用Ｎ－乙酰咪唑修饰高密度脂蛋白３,阻断其与细胞表面受体的结合,观察细胞内胆固醇流出。用异硫氰酸荧光素酯标记高密度脂蛋白３,示踪其在细胞内的代谢。结果发现牛血清白蛋白（对照组）介导２．８７％细胞内胆固醇流出,高密度脂蛋白３和Ｎ－乙酰咪唑－高密度脂蛋白３组分别为４０．６８％和８．６９％。异硫氰酸荧光素酯－高密度脂蛋白３与细胞在３７℃共育３ｈ     

溶血卵磷脂对载脂蛋白E基因缺陷小鼠腹腔巨噬细胞源泡沫细胞胆固醇外流的影响

以载脂蛋白E基因缺陷小鼠腹腔巨噬细胞源泡沫细胞为研究对象，观察溶血卵磷脂对泡沫细胞胆固醇外流的影响以及初步探讨其机制。分离正常及载脂蛋白E基因缺陷小鼠腹腔巨噬细胞，以乙酰化低密度脂蛋白负载形成巨噬细胞源泡沫细胞，分别以溶血卵磷脂及载脂蛋白AI作为诱导物，观察其胆固醇外流情况。结果发现，溶血卵磷脂能引起正常组小鼠腹腔巨噬细胞源泡沫细胞胆固醇外流，且呈剂量效应关系，但载脂蛋白E基因缺陷小鼠组未明显胆固醇外流；载脂蛋白AI能引起两组胆固醇外流，且外流量显著高于溶血卵磷脂。结果提示，溶血卵磷脂能促进巨噬细胞源泡沫细胞胆固醇外流，可能主要是通过载脂蛋白E途径来进行。     

冠心病患者巨噬细胞胆固醇流出的变化

目的研究冠心病患者血液中单核细胞分化为巨噬细胞并荷脂后胆固醇流出的影响机制。方法分离冠心病患者(试验组)和正常人群(对照组)外周静脉血中单核细胞,并用佛波酯诱导为巨噬细胞,收集分离血清,检测各项血脂指标并备用。细胞用[3H]胆固醇处理24 h使其荷脂,然后分为四组:对照组+正常血清、对照组+高脂血清、试验组+正常血清及试验组+高脂血清。分别检测ABCA1、ABCG1表达及胆固醇流出率。结果与对照组比较,试验组单核/巨噬细胞胆固醇流出能力受损,油红O染色显示细胞内脂质蓄积增加,细胞内胆固醇流出减少,但ABCA1和ABCG1的表达改变不明显。与正常血清比较,试验组及对照组中高脂血清明显影响胆固醇流出能力,细胞内脂质蓄积增加,细胞内胆固醇流出减少,但不影响ABCA1和ABCG1的表达。结论冠心病患者巨噬细胞胆固醇流出能力受损,可能与动脉粥样硬化性血管疾病的发生相关。     

氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响及可能机制

研究氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响 ,并探讨其与组织蛋白酶活性之间的关系。用 10 0mg/L的乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白处理小鼠腹腔巨噬细胞 2 4h ,分别测定巨噬细胞胞浆和溶酶体中胆固醇的含量以及溶酶体中组织蛋白酶的活性。结果发现 ,乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白均可引起细胞胆固醇含量增加 (分别为 2 2 .2± 0 .4 μg和 2 2 .5 5± 0 .15 μg比对照组的 7.0± 0 .4 μg ,P <0 .0 1) ,但蓄积部位和形式完全不同 ,前者蓄积部位主要在胞浆并以胆固醇酯为主 (胞浆与溶酶体分别为 18.9± 0 .4 μg和3.3± 0 .2 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 0 .73± 0 .0 5 μg和 18.1± 0 .4 μg) ,后者主要在溶酶体并以游离胆固醇为主 (胞浆与溶酶体分别为 3.6 5± 0 .14 μg和 18.90± 0 .15 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 14 .13± 0 .14 μg和 4 .77±0 .33μg) ;前者不引起溶酶体组织蛋白酶的活性改变和蛋白含量增加 (组织蛋白酶L和D分别为 99.5± 3.4和 2 8.0± 2 .4 ,对照组分别为 10 2 .3± 8.2和 2 7.3± 1.6 ,P >0 .0 5 ;蛋白含量为 8.8± 0 .4 μg ,对照组为 9.0± 0 .3μg,P >0 .0 5 ) ;后者则造成溶酶体组织蛋白酶活性的明显降低和蛋白蓄积 (组织     

普罗布考干预后小鼠血清对巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的 观察普罗布考处理后小鼠血清及不同浓度普罗布考体外干预对巨噬细胞胆固醇流出的影响,探讨普罗布考调节细胞胆固醇流出的可能机制.方法 16只健康雄性C57 BL/6J小鼠随机分为两组,分别给予普通饮食或添加普罗布考饲料饲养4周后,收集血清,酶法测定血清脂质;以乙酰化低密度脂蛋白和3H-胆固醇标记巨噬细胞,并以不同浓度普罗布考干预细胞,然后以上述血清介导,测定细胞胆固醇流出;收集干预后的细胞,提取mRNA及膜蛋白,分别检测ATP结合盒转运子A1和G1、B族Ⅰ型清道夫受体的表达.结果 普罗布考干预4周后小鼠血清较对照组介导更多的胆固醇从巨噬细胞流出,普罗布考呈剂量依赖性地增加巨噬细胞ATP结合盒转运子G1基因和蛋白的表达,并加速血清诱导的胆固醇流出率,而对B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1基因和蛋白表达无明显影响.结论 普罗布考干预后的小鼠血清显著促进巨噬细胞胆固醇流出,其机制可能是通过增加ATP结合盒转运子G1的表达,而与细胞膜B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1的表达无关.     

载脂蛋白AI结构中个别氨基酸置换或缺失对促细胞内胆固醇流出能力的影响

载脂蛋白ＡＩ促进胆固醇从外周细胞流出，在高密度脂蛋白对胆固醇的逆向运输中起关键作用。为探讨载脂蛋白ＡＩ介导胆固醇流出功能的结构特征，观察了天然存在的氨基酸置换：载脂蛋白ＡＩ结构中第１５６位上的缬氨酸由谷氨酸置换，和氨基酸缺失；第２３５位上的谷氨酸缺失对载脂蛋白ＡＩ促胆固醇从鼠腹腔巨噬细胞流出能力的影响。以体外培养的鼠腹腔巨噬细胞为对象，用氚标油酸酯标记的乙酰化低密度脂蛋白作泡沫细胞诱导物，巨噬细胞     

紫杉醇对大鼠腹腔内巨噬细胞的影响

目的 研究紫杉醇对大鼠腹腔巨噬细胞影响的研究.方法 用 Griess法测定巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成量,测定巨噬细胞内乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶的活性,采用流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 紫杉醇在 6～10 μg/ml浓度范围可显著促进正常巨噬细胞的 NO生成,在 10～20 μg/ml浓度范围可抑制脂多糖激活的巨噬细胞的NO生成.结论 紫杉醇对大鼠腹腔巨噬细胞NO的生成具有激活和抑制的双重作用.     

激活巨噬细胞抑制载脂蛋白AI促细胞胆固醇流出能力

为探讨巨噬细胞活化对载脂蛋白ＡＩ促胆固醇外流能力的影响,用炎症诱发剂活化鼠腹腔巨噬细胞,３Ｈ标记乙酰低密度脂蛋白作泡沫细胞诱导物,巨噬细胞衍化的泡沫细胞与载脂蛋白ＡＩ孵育一段时间后,测定由细胞释放入培养基中的３Ｈ标记胆固醇量。结果发现,载脂蛋白ＡＩ浓度为２０ｍｇ／Ｌ时,从被活化的细胞释放至基质中的３Ｈ标记胆固醇量［（４．１５±０．４１）×１０－１ｄｐｍ／ｇ细胞蛋白］显著低于未被活化的细胞［（５．６９±０．１２）×１０－１ｄｐｍ／ｇ细胞蛋白］（Ｐ＜０．０１）,但高密度脂蛋白清除细胞胆固醇能力两组细胞无显著差异。提示巨噬细胞活化可显著抑制载脂蛋白ＡＩ促细胞胆固醇外流能力。     

地塞米松对大鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫作用的影响

目的研究地塞米松(Dexamethasone,DXM)对大鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫感染的影响。方法采用瑞-姬染色观察弓形虫在与DXM共孵育大鼠腹腔巨噬细胞内的增殖;以半定量RT-PCR法检测与DXM共孵育大鼠腹腔巨噬细胞IFN-γ、TNF-α和IL-2mRNA的表达,以ELISA法检测细胞培养上清中IFN-γ、TNF-α和IL-2的含量。结果弓形虫在DXM孵育的腹腔巨噬细胞内大量增殖,其弓形虫密度0h为(37±7)个/100个细胞,而24h时为(173±32)个/100个细胞(P<0.01);与DXM共孵育大鼠腹腔巨噬细胞24h时的IL-2、IFN-γ和TNF-αmRNA及其蛋白的表达与对照组相比均明显降低(P<0.01),如:DXM孵育组的TNF-α(187.52±39.41pg/ml)与对照组(115.43±22.46pg/ml)相比差异显著(P<0.01)。结论 DXM可诱发腹腔巨噬细胞易感弓形虫,其机制可能与细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2表达下调有关。     

过氧化体增殖物激活型受体γ和δ在高密度脂蛋白介导细胞胆固醇流出中的作用

为探讨过氧化体增殖物激活型受体γ和δ在高密度脂蛋白介导的细胞胆固醇流出中的作用。取新鲜抗凝血浆 ,用超速离心机进行密度梯度离心 ,收集密度为 1 .0 6 3～ 1 .2 1 0组分。U937细胞用 5 0～ 4 0 0nmol L反义过氧化体增殖物激活型受体γ和δ预处理细胞 1 2h。培养U937细胞与 0 .2 8mCi L [3H] 胆固醇乙醇液共孵育 2 4h ,15 0 0r min离心 1 0min ,收集细胞 ,PBS漂洗 2次 ,RPMI 1 6 4 0重悬细胞 ,加HDL继续培养 0～ 4 8h。液体闪烁计数仪测细胞相对放射活性。Westernblot检测过氧化体增殖物激活型受体γ和δ蛋白表达水平。不同浓度HDL处理后细胞胆固醇流出具有明显差异 ,呈剂量 -效应关系。用 1 0 0nmol L反义过氧化体增殖物激活型受体γ处理 2 4h后 ,HDL介导的细胞胆固醇流出减少 (4 5 78± 2 0 6 ) ,与对照组 (4 0 2 4± 385 )比较差别有显著性。过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂ciglitizone预处理后 ,HDL介导的细胞胆固醇流出增加 ,用 0、2 5、5 0、1 0 0、2 0 0 μmol Lciglitizone处理的放射活性分别为 4 371± 2 4 3、386 9± 2 1 2、346 9± 2 0 9、31 5 6± 31 5和 30 2 0± 2 96。反义过氧化体增殖物激活型受体δ处理后 ,HDL介导的细胞胆固醇流出略有增加 ,处理浓度达 4 0 0nmol L时的放射活     

miRNA-638对巨噬细胞内胆固醇外流的影响及其发生机制研究

背景流行病学研究表明生活方式、饮食结构等外部因素的改变与遗传因素相互作用导致人体脂代谢紊乱,而胆固醇逆转运过程能够维持体内胆固醇稳态。目的探讨miRNA-638对巨噬细胞内胆固醇外流的影响及其发生机制。方法实验于2016年9月-2017年9月完成。采用100 ng/ml佛波酯诱导人髓系白血病单核细胞(THP-1)贴壁并分化为巨噬细胞,根据预实验结果选取浓度为20 nmol/L的miRNA-638模拟物及其阴性对照物进行转染。采用NBD-胆固醇分别检测转染miRNA-638模拟物及其阴性对照物巨噬细胞经载脂蛋白AI(ApoAI)、高密度脂蛋白(HDL)及标准血清外流液介导的胆固醇外流率;采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测转染miRNA-638模拟物及其阴性对照物巨噬细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)和极低密度脂蛋白受体(VLDLR)mRNA及其相对表达量。结果转染miRNA-638模拟物巨噬细胞经ApoAI外流液介导的NBD-胆固醇外流率低于转染阴性对照物巨噬细胞(P<0.05);转染miRNA-638模拟物巨噬细胞与转染阴性对照物巨噬细胞经HDL、标准血清外流液介导的NBD-胆固醇外流率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。转染miRNA-638模拟物巨噬细胞的ABCA1、ABCG1、VLDLR mRNA相对表达量低于转染阴性对照物巨噬细胞(P<0.05)。转染miRNA-638模拟物巨噬细胞中ABCA1、ABCG1相对表达量低于转染阴性对照物巨噬细胞(P<0.05);转染miRNA-638模拟物巨噬细胞与转染阴性对照物巨噬细胞中VLDLR相对表达量比较,差异无统计意义(P>0.05)。结论miRNA-638可减少由ApoAI介导的巨噬细胞内胆固醇外流,该作用可能是通过调控ABCA1/ABCG1的表达实现的。     

烟酸对3T3-L1脂肪细胞胆固醇流出的影响

目的观察烟酸对分化成熟的3T3-L1脂肪细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法3T3-L1细胞促分化成熟后,给与不同浓度的烟酸(0～1.0mmol/L)干预24h后,收集细胞,逆转录聚合酶链反应测定脂肪细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1、B族Ⅰ型清道夫受体和过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达,采用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。结果烟酸呈剂量依赖性增加脂肪细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1mRNA的表达,并促进载脂蛋白AⅠ介导的胆固醇流出,但对B族Ⅰ型清道夫受体表达无影响。过氧化体增殖物激活型受体γ在分化成熟的3T3-L1脂肪细胞有较高水平的表达,与空白组(0.38±0.29)比较,在1.0mmol/L浓度的烟酸干预时过氧化体增殖物激活型受体γ表达明显升高(3.15±0.96),为空白组的8.3倍。结论烟酸可通过上调过氧化体增殖物激活型受体γ表达,促进脂肪细胞载脂蛋白AⅠ—三磷酸腺苷结合盒转运体A1通路,加速细胞内胆固醇流出。这可能为解释烟酸升高高密度脂蛋白胆固醇的机制提供有用的线索。     

亲环素A在巨噬细胞荷脂过程中的影响

目的观察胆固醇转运复合物中关键蛋白亲环素A在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积的关系,进而分析亲环素A在巨噬源性泡沫细胞形成过程中的作用。方法采用75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育,建立巨噬细胞荷脂化模型;Western-blot、免疫荧光法检测亲环素A蛋白的表达水平;高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化。结果75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育48 h后,亲环素A的蛋白表达逐渐减弱,48 h、72 h分别较未处理组下降了54.5%±6.3%、59.8%±5.9%(P<0.05)。间接免疫荧光定位检测发现氧化型低密度脂蛋白显著抑制RAW264.7细胞中亲环素A在胞膜、胞浆中的表达,且随着处理时间的延长作用更明显。细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值由未处理组的28.3%±1.2%上升至48 h的42.3%±5.9%(P均<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化过程中,亲环素A的表达下调与细胞胆固醇蓄积密切相关。     

钙离子信使通路在溶血卵磷脂促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流中的作用

探讨溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流影响及第二信使细胞内钙在这一效应中所起的作用 ,为动脉粥样硬化的有效防治提供理论依据。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞 ,用乙酰化低密度脂蛋白负载使之形成巨噬泡沫细胞 ;酶学荧光法检测细胞胆固醇外流 ,荧光分光光度法检测细胞内钙 ,分别螯合细胞外钙和抑制蛋白激酶C活性后检测溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响。结果发现 ,在 10～ 80 μmol/L浓度范围内 ,各剂量溶血卵磷脂组培养基中游离胆固醇浓度明显高于对照组。各剂量溶血卵磷脂引起胞内钙离子浓度升高 ,当用EGTA螯合细胞外钙后 ,溶血卵磷脂不引起胞内钙离子浓度升高 ,以及不再促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流。当蛋白激酶C活性受抑制后 ,溶血卵磷脂不再促进细胞胆固醇外流。溶血卵磷脂在 10～ 80 μmol/L浓度范围内能够促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流 ,这一效应与胞内第二信使细胞内钙浓度升高有关 ,而且钙离子 -蛋白激酶C这一信使通路介导了溶血卵磷脂促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流效应。     

高密度脂蛋白对炎症状态下脂肪细胞胆固醇流出的影响

目的:探讨高密度脂蛋白(High-density lipoprotein,HDL)对体外模拟脂肪细胞炎症状态下胆固醇流出的保护作用及其机制.方法:将前脂肪细胞株3T3-LI(3T3-L1)诱导分化成为成熟的脂肪细胞后,作为空白对照组,脂肪细胞以脂多糖(LPS,100 ng/ml)刺激6小时,为LPS组;脂肪细胞经LPS( 100ng/ml)刺激6小时后,分别用不同浓度HDL孵育16小时,为10 μg/ml HDL+LPS组、50μg/ml HDL+LPS组、100 μg/ml HDL+LPS组.采用液体闪烁计数器检测不同浓度的HDL对LPS刺激的脂肪细胞胆固醇流出的影响,并检测细胞内B族I型清道夫受体(SR-BI)信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平.结果:LPS组的胆固醇流出率(2.5±0.6)％较空白对照组(4.1±0.4)％减少,3种不同浓度的HDL+LPS组干预后细胞胆固醇流出率较LPS组增加;LPS组SR-BI mRNA和蛋白表达较空白对照组降低,与LPS组相比较,3种不同浓度的HDL+LPS组SR-BI mRNA和蛋白表达随HDL浓度的增加而递增,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:炎症状态下脂肪细胞的胆固醇流出减少,通过上调SR-BI表达能促进炎性脂肪细胞内胆固醇的流出,减少胆固醇在脂肪细胞内的蓄积.该作用可能与其促进脂肪细胞表达SR-BI有关.