改良TT增菌液对沙门菌属和志贺菌属的分离效果研究

目的探讨改良硫代硫酸钠碳酸钙(TT)增菌液对肠道感染菌种沙门菌属和志贺菌属的分离效果。方法收集2015年3月-2016年9月288例因急性腹泻住院患者的粪便作为研究样本,对照组和观察组各144例,采用常规接种法接种于麦康凯琼脂培养基(MAC)和沙门氏菌-志贺氏菌琼脂培养基(SS),另外加种改良TT增菌液进行增菌培养,同时使用改良TT增菌液、革兰阴性(GN)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液分别对外购的沙门菌属和志贺菌属进行培养,比较不同增菌液对肠道感染菌种沙门菌属和志贺菌属的分离效果。结果对照组采用直接接种培养基的方法检测出沙门菌属15株,志贺菌属4株,检出率分别为10.42%和2.78%;观察组采用改良TT增菌液培养后接种方法检测出沙门菌属43株,志贺菌属12株,检出率分别为29.86%和8.33%;观察组沙门菌属与志贺菌属的检出率明显高于对照组(P<0.05);改良TT增菌液对沙门菌属的增菌效力与SC增菌液相当,其中对鼠伤寒沙门菌属增菌效果最高达到10-8,优于SC增菌液10-7,改良TT增菌液对志贺菌属的增菌效力与GN增菌液相似,两种志贺菌属的最大增菌效果均达到10-7。结论改良TT增菌液对沙门菌属和志贺菌属的增菌效果与SC、GN增菌液相当,不仅可以有效促进沙门菌属和志贺菌属的增殖,提高病原菌分离效果,还能简化工作流程,提高实验室工作效率。     

市售GN增菌液增菌效果观察

GN增菌液主要用于肠道带菌者与食品标本中志贺菌的增菌。我们对市售3种GN增菌液增菌效果进行了观察，发现按常规法测试GN增菌液增菌效果不明显，但纯菌种增菌后随着增菌时间的延长，增菌效果良好。     

沙门菌、志贺菌和金葡菌复合增菌培养基研制

目的 研制用于沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌同时增菌的培养基.方法 根据微生物营养素需求,筛选可添加成分进行单因素比较试验,确定出培养基合适的组分,采用平板菌落计数法和多重PCR法验证培养基增菌效果.结果 成功研制出能够用于沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基(3S),当接种量约为1 CFU/mL,37 ℃培养12 h后,3种目标菌以相对一致的速度增殖,可达到107～108CFU/mL;应用多重PCR可同时扩增出目的 条带.结论 3S可用于沙门菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌复合增殖培养,配制方便、增菌快速、节约成本和时间,具有良好的市场前景.     

多重PCR检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7方法的研究

[目的]建立12h内快速检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157︰H7的多重PCR方法。[方法]探讨已报道的多重PCR体系检测粪便中3种目的菌的可行性,根据沙门菌invA基因、志贺菌ipaH基因及大肠杆菌O157︰H7rfbE基因筛选设计新引物,优化反应条件,测定方法灵敏度和特异性。8h短时增菌后,对24份模拟粪便样品进行检测。[结果]已报道的多重PCR体系不适用于粪便中3种目的菌的检测;新建立的体系适用于粪便样品的检测,能在12h内同时检测3种目的菌。通过短时增菌,该体系对粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157︰H7的灵敏度分别为:8.5cfu/10ml增菌液,27cfu/10ml增菌液,5cfu/10ml增菌液。对28株目的菌和13株非目的菌的检测结果表明该方法具有良好特异性。[结论]成功建立能在12h内同时检测粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157︰H7的多重PCR检测方法,该方法特别适用于健康带菌者3种目的菌的快速筛查,为卫生检验检疫、食品微生物安全的监测和监督提供一有用的工具。     

多重PCR检测食品中的金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌

目的建立一种能同时检测食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的多重PCR检测方法。方法采用7.5%NaCl肉汤对食品样品中的金黄色葡萄球菌进行增菌,同时采用GN增菌剂对食品样品中的志贺菌和沙门菌进行增菌。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、志贺菌的ipaH基因、沙门菌的invA基因设计引物,通过多重聚合酶链反应(PCR)反应对食品样品中上述三种病原菌的目标基因进行扩增,同时对反应体系进行优化。结果特异性实验表明本方法的特异性良好。对污染金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的牛奶样品进行检测,检出限为1cfu/ml。结论本实验建立的多重PCR检测方法适用于食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的快速检测,具有快速、简便、灵敏的特点。     

双温分段增菌法检测沙门菌初步观察

目的 探讨沙门菌检测的更佳效果,提高阳性检出率.方法 选择孔雀绿氯化镁肉汤(MM)为增菌液,采用双温分段增菌(36±1℃培养6～8h再转42±1℃培养12～14h)法,对肛拭子标本作增菌后进行沙门菌分离培养检测,并与以往常规法(单纯36℃或42℃培养18～24h)做比较.结果 双温分段增菌法阳性检出率1.46%,较之单纯36℃(0.95%)、42℃(0.75%)增菌有较高的检出率(X2=7.48、X2=6.72,P<0.01).结论 本方法简便可行,不需增加太多实验步骤及成本,可取得更好的效果.     

食品中沙门菌检验方法的优化与应用

目的选择最适合食品中沙门菌生长的增菌培养基和分离培养基，促进沙门菌生长，提高沙门菌的检出率。方法在市场上购买一批生的禽、畜类肉制品，分别通过均质器混匀，各分成两份，分别用常规培养基和本实验培养基同时增菌培养，应用改良分子信标荧光PCR检测试剂盒和mini-VIDAS全自动荧光免疫分析仪对两种增菌液进行初筛，对结果阳性者划线分离，阳性菌株经VITEK2 COMPACT生化鉴定仪鉴定。结果样品经本实验增菌液增菌后，分离平板上的可疑菌落明显增多，检出沙门菌的几率也有很大提高。结论改用本实验培养基后，能有效提高沙门菌的检出率。     

多重实时PCR快速同时检测沙门菌和志贺菌

目的 建立改良分子信标，多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法，应用于食源性致病菌的快速诊断。方法 根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因，分别设计一对引物和改良分子信标探针，用同色荧光标记，用于同体系检测沙门菌。志贺菌根据ipaH基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，加入沙门菌检测体系中，建立三重实时PCR一改良分子信标检测体系，应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果 改良分子信标一多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69～93fg/μl。菌液灵敏度为32～64CFU／ml或1～2CFu／PCR反应体系，无交叉反应。该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌，均出现特异的荧光信号，两种细菌检测互不干扰。对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测，569份沙门菌实时PCR阳性，其中551份沙门菌培养阳性；42份志贺菌实时PCR阳性，其中41份志贺菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需时间2h至1d。结论 改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断，伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

沙门菌增菌培养基增菌效果的探讨与分析研究

〔目的〕选择好的商品增菌培养基 ,以提高沙门菌的检出率。〔方法〕用一定数量的大肠埃希菌与不同数量种类的沙门菌混合培养 ,观察不同增菌液的增菌效果。〔结果〕目前市售的沙门增菌培养基的增菌效果差距很大 ,差的只有在 1:10状况下沙门菌呈优势生长 ,好的可达 1:1× 10 8或以上状况下仍呈优势生长。〔结论〕自配的SC和TTB增菌液增菌效果最好。     

外环境中甲型副伤寒沙门菌分离培养方法的比较研究

〔目的〕选择最佳增菌液、增菌时间、分离平板 ,提高外环境甲型副伤寒沙门菌检出率。〔方法〕11种不同种类不同产地沙门菌增菌液用不同来源不同菌量的甲型副伤寒沙门菌作增菌效果比较 ;制备贝壳类海产品、大便、水模拟标本作不同增菌液不同菌量甲型副伤寒沙门菌增菌效果比较 ;不同菌量模拟标本三种平板分离甲型副伤寒沙门菌效果比较 ;模拟标本不同增菌时间甲型副伤寒沙门菌检出率比较。〔结果〕11种增菌液 ,其中一种甲型副伤寒沙门菌菌不生长 ,二种较差 ,八种较好 ;在模拟标本甲型副伤寒沙门菌增菌效果比较中 ,亚硒酸盐增菌液对海产品、大便标本增菌效果较好 ,氯化镁孔雀绿增菌液对水样中甲型副伤寒沙门菌增菌效果较好 ;甲型副伤寒沙门菌在沙门菌显色平板上菌落特征明显 ,分离效果优于SS平板 ;贝壳类海产品甲型副伤寒沙门菌模拟标本 37℃增菌 6h甲型副伤寒沙门菌菌量最多。〔结论〕贝壳类海产品用亚硒酸盐增菌液 37℃增菌 6h ,水样用氯化镁孔雀绿增菌液 4 2℃增菌 12～ 18h,用沙门菌显色平板分离甲型副伤寒沙门菌效果最好。