姜黄素对人舌鳞癌Tca8113细胞形态学的影响

目的 探讨姜黄素对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的形态学影响.方法 以30、40、50 μmol/L的姜黄素溶液处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,倒置显微镜下观察细胞生长状态,吖啶橙荧光染色和透射电镜观察细胞形态学变化.结果 倒置显微镜下可观察到细胞皱缩成圆形,核染色质浓集呈球形;激光共聚焦显微镜(吖啶橙染色)可见凋亡细胞的多种形态学改变;透射电镜见核染色质浓缩并沿核膜排列,可见凋亡小体.结论 姜黄素作用于人舌鳞癌Tca8113细胞后可出现细胞凋亡的形态学改变.     

姜黄素对舌鳞状细胞癌Tca8113侵袭和迁移影响的实验研究

目的 研究姜黄素对舌鳞状细胞癌明胶酶分泌的影响,探讨舌鳞癌侵袭和转移的机制.方法 收集不同浓度(0～100μmol/L)姜黄素作用Tca8ll3 24 h后的细胞上清液,采用明胶酶谱法(gelatin zymography)检测上清液中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9活性的变化;同时采用Transwell小室建立细胞体外侵袭迁移模型,检测不同浓度姜黄素对Tca8113细胞侵袭和迁移能力的影响.结果 25 μmol/L姜黄素作用24 h后,MMP-9活性降低86.8%,50～100μmol/L姜黄素作用24 h后,则检测不到MMP-9的活性,抑制率接近100%;25μmol/L和50μmol/L姜黄素作用24 h后,MMP-2活性降低40%左右,在75 μmol/L和100μmol/L时,抑制率达90%.姜黄素可显著降低细胞的侵袭迁移能力,经分析,以上结果具有统计学意义(P＜0.01).结论 姜黄素可以通过抑制明胶酶的分泌抑制Tca8113细胞的侵袭和迁移.     

VEGF靶向RNA干扰质粒构建及其对人舌鳞癌Tca8113细胞的影响

目的：用RNA干扰技术阻断人舌鳞癌系Tca8113细胞中VEGF基因的表达,观察细胞增殖及凋亡特征。方法：检测人舌鳞癌系Tca8113细胞中血管内皮生长因子VEGF表达水平;采用真核转录质粒pRNA-U6.1/Neo构建针对VEGF基因的重组转染质粒。将4种不同序列的VEGF-shRNAV1、VEGF-shRNAV2、VEGF-shRNAV3、VEGF-shRNAV4质粒以及含与VEGF无关序列的VEGF-shRNAVc和空白质粒VEGF-shRNAU6分别转染Tca8113细胞,48h后检测其VEGF表达水平,筛选稳定转染RNAi-VEGF的细胞;CCK8检测其增殖能力;流式细胞仪检测其细胞周期;Anexin-V-PI检测其凋亡特征。结果：RT-PCR和Western blot检测：Tca8113细胞阳性表达VEGF;用Lipofectamine 2000成功将不同VEGF片段的质粒转染入Tca8113细胞;RT-PCR发现,VEGF-shR-NAV2组细胞VEGF表达被显著抑制,用400ng/mLG418压力筛选获得VEGF稳定被抑制的细胞系;CCK8检测各组Tca8113细胞增殖见VEGF-shRNAV2组增殖能力小于VEGF-shRNAVc组和VEGF-shRNAU6组;转染VEGF-shRNAV2的Tca8113细胞G0-G1期细胞较VEGF-shRNAVc组和VEGF-shRNAU6组高,且细胞凋亡多。结论：用RNA靶向干扰能明显降低人舌鳞癌Tca8113细胞内VEGF的表达并抑制肿瘤细胞增殖及促进凋亡。     

尼美舒利对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞ang-2基因表达的影响

目的 探讨环加氧酶(COX) -2抑制剂尼美舒利(NIM)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中ang-2基冈表达的影响及其意义.方法 以25、50、100和200 μmol·L-1浓度的NIM处理Tca8113细胞48 h,半定量RTPCR检测其ang-2 mRNA的表达.结果 Tca8113细胞中ang-2 mRNA...     

半导体量子点对舌鳞状细胞癌Tca8113系生物学行为影响的研究

目的：研究新型发光纳米材料半导体量子点（semiconductor quantumdots，QD）对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113生物学行为的影响。方法：用不同浓度最大发射波长为605nm的QD与Tca8113共培养，观察QD对Tca8113细胞生长的影响。用QD标记Tca8113细胞（Tca8113-QD），利用transwell小室法和冲刷实验，观察Tca8113-QD细胞侵袭、黏附和趋化运动能力的变化。结果：Tca8113细胞与不同浓度QD共培养后，其细胞的生长曲线基本一致，差异无统计学意义。Tca8113-QD细胞和Tca8113细胞的侵袭、黏附和趋化运动能力差异无统计学意义。结论：用QD标记Tca8113细胞后，不影响肿瘤细胞生长、侵袭和转移能力，为半导体量子点在活体生理条件下用于肿瘤细胞和细胞内分子成像及示踪研究提供了科学依据。     

三氧化二砷诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的实验研究

目的：观察三氧化二砷对舌癌细胞系Tca8113的诱导凋亡作用。方法：以人舌鳞癌细胞Tca8113为研究对象，使用荧光染色光镜、透射电镜观察三氧化二砷不同浓度、不同时间作用后的肿瘤细胞的形态学变化，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：一定浓度的三氧化二砷作用Tca8113细胞24h、48h后，细胞形态学观察可见有明显的细胞凋亡发生；流工细胞仪检测Tca8113细胞的基础凋亡率为0．5％－1．2％，三氧化二砷作用后肿瘤细胞的凋亡率可提高到15％－20％。结论：三氧化二砷可诱导人舌鳞癌细胞系细胞凋亡。     

百安对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系作用的初步研究

目的:研究中药提取物百安(活血化瘀抗肿瘤药)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的抑制作用。方法：采用细胞形态观察法、MTT法及活细胞计数法观察百安对Tca8113细胞的作用，同时以常用化疗药物顺铂为对照。结果：1：50稀释的百安对Tca8113细胞的抑制率1d为50％，且随时间增加而增加，百安联合顺铂对Tca8113细胞的协同作用不明显。结论：中药提取物百安对人舌鳞状细胞癌Tca8113有直接杀伤作用，且有时间依赖性，在人舌鳞状细胞癌的治疗方面有一定意义。     

丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及p27Kip1蛋白表达的影响

目的 通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖影响及p27Kip1蛋白表达改变,探讨丁酸钠调控人口腔癌细胞增殖的分子机制.方法 人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞经不同浓度丁酸钠[0 mmol/L(空白对照组),2、4、6、8 mmol/L(4个实验组)]作用后,甲基噻唑基四唑(MTT)法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,免疫组化检测p27Kip1蛋白的表达.结果 丁酸钠能够呈时间剂量依赖性抑制Tca8113细胞的增殖,丁酸钠处理后的Tca8113细胞出现了凋亡形态变化;细胞周期阻滞于G0～G1期,丁酸钠2 mmol/L组G0～G1期达(63.2±2.4)%,4 mmol/L组G0～G1期达(77.2±3.8)%,空白对照组G0～G1期达(48.1±2.4)%,P＜0.05;p27Kip1蛋白表达水平明显上调.结论 丁酸钠能够抑制人口腔癌细胞的增殖,该作用可能与p27KiP1蛋白表达上调及G0～G1期细胞周期阻滞有关.     

RhoA小干扰RNA对舌癌细胞Tca8113增殖、侵袭影响的体外实验

目的 体外实验研究Ras基因家族同源物A(ras homolog gene family,member A,RhoA)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在舌癌转移中的作用.方法 登录Genebank确定人RhoA基因序列,利用RNA干扰技术针对RhoA的基因序列设计4条短链RNA,构建干扰表达载体,利用LipofectamineTM2000介导法将RhoA siRNA转染至舌癌细胞系Tca8113.转染细胞后48 h检测瞬时表达效率,经杀稻瘟菌素筛选及克隆化培养获得稳定抗性克隆转染株后,蛋白质印迹法检测RhoAsiRNA转染后的抑制效应,细胞计数绘制细胞生长曲线以观察RhoA siRNA转染前后细胞株的生长速度;划痕实验和Millicell小室实验检测转染细胞株的迁移力与侵袭力.结果 舌癌细胞转染RhoA siRNA后:RhoA蛋白表达下降;细胞倍增时间从38.0 h延长至45.7 h;细胞克隆形成率由35.2%降低至15.8%;细胞迁移能力减弱;细胞侵袭能力由100%降至58.9%,显著减弱.结论 RhoA siRNA能有效抑制舌癌Tca8113细胞中RhoA的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力,表明RhoA siRNA具有抑制舌癌细胞生物学特性的能力,提示RhoA在舌癌转移中可能发挥重要作用.     

高温联合平阳霉素对人舌鳞状细胞癌Tca8113系细胞协同作用的研究

本文选用细胞的生长曲线、集落形成实验、~3H-TdR 掺入试验并结合光镜下细胞受损程度的形态学观察等方法,用国产平阳霉素联合高温(43℃)对建株的人舌鳞状细胞癌 Tca8113系细胞进行体外实验,观察加温与平阳霉素是否具有协同杀伤作用。实验结果对口腔颌面部肿瘤的高温治疗,以及制定综合治疗方案有一定的指导意义。     

RNA干扰双泛素对舌鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的 应用RNA干扰技术抑制人舌鳞状细胞癌细胞株Tca8113中双泛素(diubiquitin)的表达,探讨双泛素表达下调对舌鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响.方法 构建针对双泛素特异性小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA)真核表达载体pU-双泛素-siRNA,将其转染至Tca8113细胞,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法检测转染后的Tca8113细胞中双泛素的表达.通过流式细胞仪分析siRNA对舌鳞状细胞癌细胞周期的影响,并通过细胞侵袭能力实验观察siRNA对Tca8113细胞恶性生物学行为的变化.结果 siRNA干扰Tca8113细胞后,双泛素的表达无论是在mRNA水平还是在蛋白质水平均显著下降[mRNA:实验组(0.36±0.03)、空白对照组(0.92±0.07)、空载体组(0.95±0.05);蛋白:实验组(0.39±0.04)、空白对照组(0.64±0.05)、空载体组(0.69±0.05)](P＜0.05),细胞周期被阻滞在G1期,细胞生长缓慢,体外侵袭能力下降(P＜0.05).结论 通过RNAi技术阻断双泛素的表达,可抑制Tca8113细胞的生长、增殖、侵袭,提示双泛素在舌鳞状细胞癌的发生、发展过程中起重要作用.     

神经钙黏素表达下调对舌鳞状细胞癌细胞生物学能力的影响

目的 研究神经钙黏素(N-cadherin)表达下调对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、细胞周期、凋亡以及迁移的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 利用LipofectamineTM2000将神经钙黏素siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,将细胞分为3组:①未处理组;②对照siRNA组;③神经钙黏素siRNA组.分别收集转染后48 h的细胞,采用新型的细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)8试剂分析转染神经钙黏素siRNA后对细胞增殖能力的影响;运用流式细胞术检测下调神经钙黏素表达对Tca8113细胞周期及细胞凋亡的影响;采用Boyden 小室实验分析下调神经钙黏素对舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞迁移能力的影响;进一步采用蛋白质印迹法检测神经钙黏素表达下调对细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移相关基因表达的影响.结果 神经钙黏素siRNA能明显下调舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中神经钙黏素蛋白的表达,并显著抑制Tca8113细胞的增殖(P<0.05).细胞周期结果显示,神经钙黏素siRNA组中在G0/G1的细胞比率[(65.41±0.92)%]明显高于未处理组[(41.59±1.43)%]和对照siRNA组[(43.70±2.08)%],差异有统计学意义(F=216.839,P＝0.000).神经钙黏素siRNA组中细胞凋亡的比率[(25.66±1.36)%]明显高于未处理组[(2.38±0.14)%]和对照siRNA组[(2.81±0.12)%],差异有统计学意义(F=850.364,P=0.000).Boyden 小室体外侵袭实验结果表明,与未处理组和对照siRNA组相比,神经钙黏素siRNA组中Tca8113细胞的迁移能力显著下降,差异有统计学意义(F=140.858,P=0.000).蛋白质印迹法结果表明,与未处理组和对照siRNA组相比,神经钙黏素siRNA组中的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)2和MMP-9明显下调,而p21明显上调,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 神经钙黏素在舌鳞状细胞癌的发生发展中可能具有重要的作用.

Abstract：

Objective To investigate the effect of downregulation of N-cadherin expression on cell proliferation, cell cycle, cell apoptosis and cell migration in tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 cells. Methods N-cadherin siRNA was transfected into tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 cells and Tca8113 cells were divided into three groups: untreated group, control siRNA group and N-cadherin siRNA group. The cells were harvested 48 h after transfection with N-cadherin siRNA. Cell proliferation of Tca8113 cells was examined by cell counting kit(CCK)-8 after transfection with N-cadherin, and the effects of downregulation of N-cadherin on cell cycle and cell apoptosis of Tca8113 cells were investigated by flow cytometry.The effect of downregulation of N-cadherin expression on cell migration of Tca8113 cells was observed by Boyden chamber experiment, and further expression changes of gene-related cell proliferation, cell cycle and cell migration were detected by Western blotting. Results N-cadherin siRNA downregulated the N-cadherin expression and significantly inhibited cell proliferation of Tca8113 cells (P<0.05). The results of cell cycle revealed that the percentage of G0/G1 phase in N-cadherin group [(65.41±0.92) %] was significantly higher than that in untreated group [(41.59±1.43)%] or control siRNA group [(43.70±2.08)%], and there was significant difference among the three groups (F=216.839,P＝0.000).The percentage of cell apoptosis in N-cadherin group [(25.66±1.36)%] was significantly higher than that in untreated group [(2.38±0.14)%] or control siRNA group [(2.81±0.12)%], and there was significant difference among the three groups (F=850.364,P=0.000). The cell number migrated into memebrane in N-cadherin group was significantly lower than that in untreated group and control siRNA group, and there was significant difference among the three groups (F=140.858,P=0.000). Further, compared with untreated group and control siRNA group, the expressions of matrix metalloproteinase(MMP)-2 and MMP-9 proteins were significantly downregulated and expression of p21 protein was significantly upregulated (P<0.05). Conclusions N-cadherin may play a role in occurrence and development of tongue squamous cell carcinoma.     

塞来昔布增强博来霉素对人舌鳞状细胞癌Tca8113杀伤作用的研究

目的 研究环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)增强博来霉素(bleomycin)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法 用含不同浓度的塞来昔布和博来霉素培养液培养Tca8113细胞24、48、72 h后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率,并采用金正钧法判断药物合用的相互作用;流式细胞术检测Tca8113细胞周期进程和诱导细胞凋亡的作用.结果 小剂量的塞来昔布(10 μmol/L)可增强博来霉素对Tca8113细胞的生长抑制作用,增强博来霉素阻滞Tca8113细胞周期进程的作用,其阻滞G1期细胞进入S期的作用最为明显,导致G0、G1细胞的数量增加[(60.93±0.32)%],S期[(30.57±0.78)%]、G2及M期[(8.50±0.50)%]细胞减少,同时,细胞凋亡率[(1.87±0.11)%]显著提高.结论 小剂量的塞来昔布可增强博来霉素对Tca8113细胞的毒性作用,阻滞细胞周期进程并诱导细胞凋亡.     

磁导向甲氨蝶呤缓释药物杀伤舌癌细胞的内在化过程

目的:探讨磁导向甲氨蝶呤缓释药物(FM-MTX)对舌癌细胞凋亡的诱导作用,了解新药FM-MTX治疗舌癌的作用机理。方法:选用不同剂量的FM-MTX与人舌鳞癌Tca8113细胞系共同培养。按不同时间收集细胞悬液,并在透射电镜下观察细胞超微结构的变化。结果:细胞经FM-MTX药物处理组,1h后,透射电镜下即可看到瘤细胞溶酶体大量增生,4h后瘤细胞胞浆溶酶体开始吞噬磁性微粒,24h吞噬颗粒明显增多,溶酶体膜开始裂解,颗粒释放到胞浆内。72h后其内质网及线粒体内也可见颗粒沉积,溶酶体膜有消失现象,呈现胞浆空泡结构。96h后部分瘤细胞出现凋亡。结论:甲氨蝶呤缓释药物(FM-MTX)对舌癌细胞凋亡起诱导作用,进入瘤细胞的细胞器,对肿瘤细胞有明显的杀伤作用     

茶多酚对舌鳞状细胞癌细胞增殖和端粒酶催化亚基的抑制作用

目的观察茶多酚对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶催化亚基(hTERT)的影响。方法实验分0.025、0.050、0.100、0.200g/L茶多酚组和空白培养基组。采用噻唑蓝比色法检测茶多酚对Tca8113细胞增殖的影响,逆转录PCR法检测hTERT基因表达,Western-blot法测定细胞中hTERT蛋白表达量。所有数据采用ANOVA单因素方差分析和Student-Newman-Keuls检验进行统计学检验。结果茶多酚能明显抑制Tca8113细胞增殖,并存在时间和浓度依赖性。72h时,0.200、0.100、0.050和0.025g/L茶多酚组细胞增殖抑制率分别为69.75%±3.24%、63.17%±3.19%、50.35%±4.21%和34.75%±3.71%。72h时,0.100、0.050g/L组hTERT mRNA和蛋白表达均低于空白对照组(P<0.05)。结论茶多酚能够抑制人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株的增殖及端粒酶催化亚基的转录和表达,抑制端粒酶催化亚基可能是茶多酚抗舌癌的机制之一。     

生存素基因沉默增强人舌鳞状细胞癌Tca8113对顺铂敏感性的实验

目的探讨靶向生存素短发夹状RNA（short hairpin RNA，shRNA）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株生存素基因表达、凋亡及其对顺铂、5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的影响。方法脂质体介导的生存素shRNA表达载体转染Tea8113细胞，未转染、转染脂质体及错配shRNA载体的细胞作为对照。采用RT-PCR和Western blot分别检测生存素mRNA和蛋白的表达，流式细胞仪分析细胞的凋亡率，MTT法测定抗癌药物的敏感性。结果生存素shRNA表达质粒转染后，与3个对照组相比较，生存素mRNA和蛋白表达水平明显下降，细胞凋亡率的上升呈时间依赖性，48h可达37．9％。生存素shRNA能显著增加顺铂的敏感性，与未转染组比较其IC50值下降约4／5（P〈0．01），但对5-Fu的作用不明显。结论靶向生存素的shRNA可有效抑制Tea8113细胞生存素mRNA和蛋白的表达，同时增加了顺铂的化疗敏感性。     

人信号素基因semaphorin-3F瞬时转染对舌鳞癌细胞增殖作用的影响

目的探讨人信号素家族中最具代表性成员信号素3F（semaphorin-3F，SEMA-3F）基因瞬时转染对舌鳞状细胞癌细胞生长的影响。方法将Tea8113细胞分为4组，即转染组：转染pEGFP-N1-SEMA-3F-cDNA的Tca8113细胞；空载体组：转染pEGFP-N1质粒的Tca8113细胞；未转染组：无转染细胞；对照组：仅加转染试剂。构建和纯化SEMA-3F的真核表达载体pEGFP-N1-SEMA-3F，用阳离子脂质体转染试剂介导转染Tca8113细胞。观察外源目的基因在靶细胞中的表达及细胞的生长情况。结果基因转染后48h成功检测到高表达SEMA-3F基因。转染后24、48、72、96h，甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测转染组的各时期平均A值，均低于其余3组。转染后48h，流式细胞仪检测G1期细胞比例降低，S期比例增高。结论SEMA-3F基因瞬时转染可使其在Tca8113细胞中高表达，并使细胞增殖受到抑制。本实验结果将SEMA-3F作为目的基因，为治疗舌癌进一步提供了实验依据。     

RNA干扰内源性一氧化氮合酶基因对舌鳞状细胞癌细胞增殖活性影响的实验研究

目的研究内源性一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）对肿瘤细胞凋亡和增殖活性的影响。方法采用RNA干扰技术，将含有iNOS基因的特异性短发夹状RNA（short hairpin RNA，shRNA）片断的质粒载体转染人Tca8113细胞，免疫组化检测细胞中iNOS的蛋白表达改变情况；流式细胞仪及甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测细胞凋亡率和生长曲线的变化情况。结果质粒转染人Tca8113细胞后，实验组细胞中iNOS蛋白表达显著低于两对照组（P〈0．01）；而凋亡率明显高于两对照组（P〈0．01）；生长曲线显示实验组细胞增殖活性受到一定抑制。结论RNA干扰技术沉默iNOS基因可提高Tca8113细胞的凋亡，并降低细胞的增殖活性。     

血管内皮生长因子C 对舌鳞癌癌周淋巴管的促增殖作用

目的研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)对舌鳞癌癌周淋巴管的促增殖作用.方法将VEGF-C高表达的舌鳞癌细胞株(A组)接种于发育至第6～8天的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM),设立空白质粒转染组(B组)和空白对照组(C组),5′-核苷酸酶(5′-Nase)染色观察瘤周淋巴管,淋巴管形态学测量统计分析淋巴管数密度(LVD)、截面面积以及周长的变化.结果 3组在CAM上均能成瘤,肿瘤组织对周围CAM的侵袭较弱,瘤体组织内未见淋巴管的生成;瘤周淋巴管形态学测量分析发现A组癌周淋巴管的LVD、截面面积和周长均高于B、C组,差异有统计学意义(P<0.01);B、C组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 CAM是研究淋巴管的较理想的模型;VEGF-C能够诱导癌周淋巴管扩张,这可能是VEGF-C增加舌鳞癌颈淋巴转移的机制之一.