组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidine对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及机制研究

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidine对宫颈癌细胞的杀伤作用和机制。方法:用不同浓度的Apicidine作用于体外培养的宫颈癌细胞株HeLa和正常呼吸道上皮细胞REC;用MTT法检测细胞生长存活率;用流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR法和Western blot法分析Apicidine作用后宫颈癌细胞中p21WAF1和p53表达的变化。结果:Apicidine纳摩尔级浓度即能有效地抑制宫颈癌细胞增殖,对正常细胞无明显抑制效应。FCM结果表明,Apicidine能显著诱导宫颈癌细胞发生凋亡,对正常细胞无明显促凋亡作用;加入2μmol/L Apicidine作用24h和48h后宫颈癌细胞HeLa凋亡率分别为(10.11±0.63)%和(23.28±0.34)%,差异有显著性(P<0.05),正常呼吸道上皮细胞REC凋亡率分别为(5.81±0.92)%和(6.8±0.55)%,差异无显著性(P>0.05);FCM结果亦表明,Apicidine主要引起G0/G1期细胞周期阻滞,1μmol/L Apicidine处理24h后HeLa细胞G0/G1期细胞显著增多,由(46.8±3.2)%增至(69.5±6.1)%,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,Apici-dine能显著诱导p21WAF1RNA和蛋白水平表达,对p53表达无明显影响。上述结果都呈现明显的量-效与时-效关系。结论:Apicidine在体外能有效地抑制人宫颈癌细胞生长,对人正常细胞无明显影响,其抗肿瘤生长机制之一可能是通过上调p21WAF1蛋白水平和引起G0/G1期细胞周期阻滞实现的。     

子宫颈癌HeLa细胞中Bcrp1+细胞的生物学特性

目的 探讨宫颈癌HeLa细胞中Bcrp1+细胞的生物学特性.方法 采用细胞免疫荧光标记及流式细胞仪分选HeLa细胞中Bcrp1+及Bcrp1-细胞,透射电镜观察两种表型细胞的形态,倒置显微镜观察两种表型细胞培养不同时间(24、48、72 h)后的生长情况;采用流式细胞仪检测两种表型细胞的细胞周期及细胞凋亡情况;采用蛋白印迹法检测两种表型细胞中增殖周期相关蛋白--增殖细胞核抗原(PCNA)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达情况(结果均以"表达丰度"表示).结果 (1)分选结果显示,宫颈癌HeLa细胞中,Bcrp1+细胞占7.1%,Bcrp1-细胞占92.9%.透射电镜观察,与Bcrp1-细胞相比较,Bcrp1+细胞核大、核仁明显、胞质内线粒体丰富、粗面内质网增多.倒置显微镜观察,分选后的Bcrp1+细胞迅速进入分裂状态,培养24 h即贴壁生长,而Bcrp1-细胞培养48 h方有少量贴壁生长;培养24、48、72 h时,Bcrp1+贴壁细胞分别占72.8%、81.1%、80.4%,Bcrp1-贴壁细胞分别占3.3%、18.7%、12.6%,各个时间点两种表型细胞的贴壁细胞所占百分比分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)流式细胞仪检测显示,Bcrp1+细胞中S期细胞比例(54.1%)和增殖指数(55.6%)均高于Bcrp1-细胞中S期细胞比例(21.1%)和增殖指数(47.0%),差异均有统计学意义(P<0.05);而Bcrp1-细胞中G0/G1及G2/M期细胞比例(分别为53.0%、25.9%)均高于Bcrp1+细胞(分别为44.4%、1.5%),差异均有统计学意义(P<0.05).Bcrp1+细胞的凋亡率为0.2%,Bcrp1-细胞为5.3%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)蛋白印迹法检测显示,在Bcrp1+细胞中PCNA蛋白的表达水平(表达丰度为3140)高于Bcrp1-细胞(表达丰度为2255),而caspase-3蛋白的表达水平(表达丰度为1970)低于Bcrp1-细胞(表达丰度为3551),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 宫颈癌HeLa细胞中Bcrp1+细胞具有较强的抗凋亡能力及旺盛的生命力,高表达PCNA蛋白、低表达caspase-3蛋白,是一群具有肿瘤干细胞特征的细胞.Bcrp1+的HeLa细胞中可能含有宫颈癌干细胞.     

自噬基因beclin1对子宫颈癌HeLa细胞生长的作用及其机制

目的 研究自噬基因beclin 1对宫颈癌细胞株HeLa细胞生长的抑制作用,并探讨其可能的机制.方法 实验分为5组:(1)pcDNA3.1(+)-beclin 1组:转染重组载体pcDNA3.1(+)-beclin 1质粒(过度表达beclin 1基因)的HeLa细胞;(2)pSUPER-beclin 1组:转染重组载体pSUPER-beclin 1质粒的HeLa细胞(抑制Beclin 1基因表达);(3)pcDNA3.1(+)组:转染空载体pcDNA3.1(+)质粒的HeLa细胞;(4)pSUPER组:转染空载体pSUPER质粒的HeLa细胞;(5)空白对照组:未转染质粒的HeLa细胞.采用逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法检测各组细胞中beclin 1 mRNA和蛋白的表达以及凋亡因子--半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase-9)mRNA及蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞的生长情况;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;电镜观察和流式细胞仪检测各组细胞的自噬情况.将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,观察各组裸鼠体内的成瘤性及肿瘤生长情况.结果 (1)各组细胞中beclin 1、caspase-9 mRNA和蛋白的表达:pcDNA3.1(+)-beclin 1组beclin 1和caspase-9 mRNA的表达水平分别为994.72±468.76和12.88±2.71,pSUPER-beclin 1组分别为0.18±0.63和0.11±0.08,pcDNA3.1(+)组分别为0.57±0.12和4.28±3.25,pSUPER组分别为0.67±0.29和2.77±1.27,空白对照组分别为0.74±0.25和3.67±3.78,pcDNA3.1(+)-beclin 1组均明显高于pcDNA3.1(+)组、pSUPER组和空白对照组,pSUPER-beclin 1组均明显低于pcDNA3.1(+)组、pSUPER组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).各组细胞中beclin 1和caspase-9蛋白的表达情况与mRNA相似.(2)各组细胞的生长情况:pcDNA3.1(+)-beclin 1组细胞的生长明显慢于空白对照组及pcDNA3.1(+)组,而pSUPER-beclin 1组细胞的生长明显快于空白对照组及pSUPER组,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)各组细胞的凋亡率:pcDNA3.1(+)-beclin 1组为(28.2±2.3)%,pcDNA3.1(+)组为(14.6±4.6)%,pSUPER-beclin 1组为(5.7±2.0)%,pSUPER组为(16.2±3.1)%,空白对照组为(11.2±3.0)%,pcDNA3.1(+)-beclin 1组和pSUPER-beclin 1组分别与另外3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(4)各组细胞的自噬情况:pcDNA3.1(+)-beclin 1组细胞内可见自噬体的形成,而其余各组自噬体形成不明显.pcDNA3.1(+)-beclin 1组自噬率为(10.3±1.5)%,pcDNA3.1(+)组为(3.6±0.8)%,pSUPER-beclin 1组为(1.2±0.3)%,pSUPER组为(3.2±1.2)%,空白对照组为(2.2±1.1)%,pcDNA3.1(+)-beclin 1组和pSUPER-beclin 1组分别与另外3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)各组裸鼠的成瘤情况:pcDNA3.1(+)-beclin 1组裸鼠成瘤时间长于空白对照组、pcDNA3.1(+)组和pSUPER组.pSUPER-beclin 1组裸鼠肿瘤体积第7天开始明显大于空白对照组、pcDNA3.1(+)组和pSUPER组(P＜0.05);pcDNA3.1(+)-beclin 1组第21天开始明显小于空白对照组、pcDNA3.1(+)组和pSUPER组(P＜0.05).接种第28天,pSUPER-beclin 1组肿瘤质量为(0.52±0.08)g,明显高于空白对照组的(0.37±0.12)g和pSUPER组的(0.34±0.24)g(P＜0.05);pcDNA3.1(+)-beclin 1组肿瘤质量为(0.18±0.12)g,明显低于空白对照组和pcDNA3.1(+)组的(0.34±0.18)g(P＜0.05).结论 自噬基因beclin 1可以抑制宫颈癌HeLa细胞体内、外的生长,这种作用不仅与自噬调控通路有关,而且可能通过调控caspse-9基因的表达参与内源性细胞凋亡通路的调节,为宫颈癌基因治疗提供了新途径.

Abstract：

Objective To investigate the inhibitory effects and the mechanism of autophagy gene beclin 1 on cervical cancer HeLa cells. Methods The eukaryotic expression vector and short hairpin RNA (shRNA) expression vector of beclin 1 were transfected via lipofectamine into HeLa cells. Experimental cells were classified into 5 groups: pcDNA3. 1 ( + )-beclin 1 group, pSUPER-beclin 1 group, pcDNA3.1 ( + )group, pSUPER group and HeLa group. Real time-PCR and western blot were used for detecting expression of mRNA and protein of beclin 1 and caspase-9 in transfected cells. Flow cytometry was employed to observe the effect of transfection on the apoptosis, and autophagy of HeLa, while proliferation was analyzed by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. The ultrastructural analysis of autophagic vacuoles was under the electron microscope. Five groups cells were seeded subcutaneously on nude mice. The carcinogenic and growth activities of cancer cells in vivo were observed, and immunohistochemistry was used to detect the protein expression of beclin 1 in tumor tissue. Results ( 1 ) The mRNA expression of beclin 1 and caspase-9: pcDNA3. 1 ( + )-beclin 1 group were 994.72 ±468.76 and 12. 88 ±2. 71, pSUPER-beclin 1 group were 0. 18 ± 0. 63 and 0. 11 ± 0. 08, pcDNA3. 1 ( + ) group were 0. 57 ± 0. 12 and 4. 28 ± 3. 25,pSUPER group were 0. 67 ± 0. 29 and 2. 77 ± 1.27, and HeLa group were 0. 74 ± 0. 25 and 3.67 ± 3.78,respectively. The eukaryotic expression vector pcDNA3. 1 ( + ) -beclin 1 significantly improved the expression of mRNA of beclin 1 and caspase-9 in HeLa cells( P ＜0. 05 ), and the shRNA expression vector inhibited the expression of mRNA of beclin 1 and caspase-9 ( P ＜ 0.05 ). (2) The cell proliferations: pcDNA3.1 ( + ) -beclin 1 vector significantly inhibited the growth of HeLa cells, while pSUPER-beclin 1 vector significantly improved the growth of HeLa cells(P ＜0. 05). (3) The rate of apoptosis: pcDNA3.1 ( + )-beclin 1 group was (28.2 ±2.3)%, pcDNA3. 1( + ) group was(14.6 ±4.6)%,pSUPER-beclin 1 group was(5.7 ±2. 0) %, pSUPER group was( 16. 2 ± 3.1 ) %, and HeLa group was( 11.2 ± 3. 0) %. The pcDNA3. 1 ( + ) -beclin 1 vector significantly increased the apoptosis rate, while the pSUPER-beclin 1 vector significantly decreased the apoptosis rate(P ＜0. 05 ). (4)The activity of autophagy: more autophagy cells were identified in pcDNA3.1( + )-beclin 1 group; the rate of autophagy of five group were( 10. 3 ± 1.5)% in pcDNA3. 1 ( + ) -beclin 1 group, ( 3.6 ± 0. 8 ) % in pcDNA3. 1 ( + ) group, ( 1.2 ± 0. 3 ) % in pSUPER-beclin 1 group, (3.2 ± 1.2)% in pSUPER group and (2.2 ± 1. 1)% in HeLa group, there was statistical significances between test groups and control groups( P ＜ . 05 ). (5)Carcinogenic activity of HeLa cells in nude mice: the duration of tumorigenesis was the longest in pcDNA3.1 ( + )-beclin 1 group and the shortest in pSUPER-beclin 1 group among all groups. The tumor size began to grow larger from 7th day after injection in pSUPER-beclin 1 group than in control groups( P ＜ 0. 05 ). The tumor size was smaller from 21st day after injection in pcDNA3.1( + )-beclin 1 group than in control groups(P ＜0. 05). From 28th day after injection,the tumor weigh was (0. 52 ± 0. 08 )g in pSUPER-beclin 1 group, apparently more than HeLa group (0. 37 ±0. 12) g and pSUPER group (0. 34 ± 0. 24 ) g ( P ＜ 0. 05 ). While in pcDNA3. 1 ( + )-beclin 1 group the tumor weighed (0. 18 ±0. 12) g, which was lower than HeLa group and pcDNA3. 1 ( + ) group (0. 34 ± 0. 18 ) g ( P ＜ 0. 05 ) . Conclusions Autophagy gene beclin 1 overexpression can inhibit proliferation and growth of HeLa cells in vitro and in vivo. Beclin 1 not noly participate in the regulation of autophagy signaling, but also play an important role in the regulation of endogenous apoptosis signaling through caspase-9. So it might be one of the new strategies for gene therapy of cervical carcinoma.     

Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞功能的影响

目的:研究Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:利用蛋白质印迹法检测Netrin-1在HeLa细胞的表达,并通过MTT、侵袭实验和流式细胞仪分别检测10,50和100ng/mlNetrin-1对HeLa细胞增殖能力、侵袭能力和凋亡的影响。结果:(1)Netrin-1在HeLa细胞有表达,其相对表达量为0.389±0.026;(2)MTT实验结果显示,Netrin-1可以促进HeLa细胞增值,表现为时间和剂量依赖性,与对照组有显著差异(P<0.05或P≤0.01);(3)Netrin-1处理组细胞迁移数分别为314±16,487±15和553±19,均明显多于对照组180±10(P均<0.05);(4)在Netrin-1干预下,HeLa细胞凋亡率呈递减趋势,与对照组比较有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论:HeLa细胞表达的Netrin-1与宫颈癌的侵袭转移有关,Netrin-1促进HeLa细胞增殖和侵袭能力,并抑制HeLa细胞凋亡,可能为未来宫颈癌的治疗提供依据。     

重组腺病毒载体介导的基因治疗及其与放射治疗联合应用对子宫颈癌HeLa细胞的作用

目的　观察重组腺病毒载体 (Ad)介导的野生型p5 3基因 (Ad p5 3)单独及与放射治疗(放疗 )联合应用 (联用 )对宫颈癌HeLa细胞的体内、外作用效果。方法　将Ad p5 3单独或与放疗联用 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术证实转染的成功性 ;通过细胞生长和存活的抑制实验、流式细胞仪分析、梯状DNA(DNAladder)实验 ,以及裸鼠皮下移植瘤的治疗实验 ,观察Ad p5 3对宫颈癌HeLa细胞的体内、外作用及可能作用机制。结果　RT PCR技术检测结果显示 ,加入Ad p5 3后 ,p5 3mRNA表达明显增加。在体外实验中 ,Ad p5 3对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制率为 6 1 8% ,单独放疗的抑制率为 4 4 6 % ,而Ad p5 3与放疗联用的抑制率为 85 5 % ,后者分别与前两者比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 )。在体内实验中 ,单独Ad p5 3与放疗对HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑瘤率分别为5 4 8%和 5 8 4 % ,而Ad p5 3与放疗联用的抑瘤率达到 77 4 % ,后者分别与前两者比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 )。结论　Ad p5 3在体内、外对宫颈癌HeLa细胞生长均有明显的抑制作用 ,而将其与放疗联用则抑制作用更明显。作用机理可能与Ad p5 3诱导细胞凋亡和引起细胞G2 ～M期的阻滞作用有关     

野生型p53抑制宫颈癌HeLa细胞的研究

目的:研究外源性野生型p53(wtp53)基因对宫颈癌HeLa细胞中的致癌基因环氧合酶-2(COX-2)的影响,以及抑制HeLa细胞生长的作用。方法:用脂质体介导的转染技术将野生型p53基因转染到HeLa细胞。实验分为2组,p53转染组(p53-HeLa组)和空白对照组(HeLa组),wtp53表达用逆转录-多聚酶链反应鉴定,并检测p53mR-NA和COX-2mRNA瞬时转染及稳定转染前后表达的变化。CCK-8染色法绘制细胞生长曲线。结果:野生型p53基因转染后HeLa细胞中的p53mRNA表达增加,COX-2mRNA表达减少。通过对细胞生长曲线的分析,转染后与转染前相比,生长明显减慢(P<0.01),wtp53对HeLa细胞有抑制作用。结论:外源性wtp53基因表达可抑制宫颈癌He-La细胞中COX-2mRNA的表达;wtp53可能通过抑制COX-2对宫颈癌HeLa细胞产生抑制作用,进而阻碍肿瘤的生长。     

MTT比色法测定药物对HeLa细胞作用的实验研究

目的 :观察顺铂、5-FU、甲氨蝶呤在体外对人宫颈肿瘤细胞的作用。方法 :用MTT测定法观察以上 3种化疗药物单用及合用对HeLa细胞的影响 ,用流式细胞仪观察凋亡及细胞周期的变化。结果 :顺铂和 5-FU单独应用及合用时 ,随着药物剂量增加抑制效应增加。结论 :顺铂和 5-FU能有效抑制HeLa细胞的生长 ,甲氨蝶呤在本实验条件下无此作用。     

格尔德霉素对宫颈癌HeLa细胞中bcl-2表达的影响

目的:观察格尔德霉素(geldanamycin,GA)在体外对宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2和mRNA转录、蛋白表达水平的影响。方法:分别给予宫颈癌HeLa细胞0,0.02,0.2,2,10μmol/L浓度GA处理24h,用annexin V方法检测细胞凋亡,半定量PCR检测bcl-2、Hsp90 mRNA转录水平,用10μmol/L的GA处理HeLa细胞3、12、24、48h后,Western blot检测bcl-2、Hsp90蛋白表达水平的变化。结果:宫颈癌HeLa细胞经不同浓度的GA作用24h,细胞凋亡指数呈剂量依赖性增加,bcl-2 mRNA表达呈剂量依赖性降低,bcl-2蛋白表达水平呈时间依赖性降低,处理组与对照组之间的差异有统计学意义;但GA对Hsp90 mRNA和蛋白表达水平无明显影响。结论:GA可抑制宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2的转录和表达,促进凋亡。     

丙基戊酸钠对宫颈癌细胞HeLa增殖的影响机制

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)丙基戊酸钠(sodium valproate,VPA)影响宫颈癌细胞HeLa增殖的机制。方法:用MTT法检测不同浓度VPA对HeLa细胞增殖的影响;倒置相差显微镜观察药物作用后细胞形态的变化;流式细胞仪(FCM)分析不同浓度VPA对HeLa细胞凋亡及细胞周期的影响;Western blot观察不同浓度VPA处理后caspase-3、bcl-2蛋白的表达变化。结果:VPA能明显抑制HeLa细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖关系;经4mmol/L VPA处理48h后,HeLa细胞缩小变形成长梭状、胞膜皱缩、贴壁不良;VPA诱导HeLa凋亡、阻滞细胞于G2/M期,同时抑制细胞增殖;随浓度增加,VPA能明显增加caspase-3蛋白表达,并可见到蛋白裂解产物,表明VPA可以促进caspase-3活化,但下调bcl-2蛋白的表达。结论:VPA有抗宫颈癌作用,其重要作用机制之一是诱导HeLa细胞凋亡、直接抑制细胞增殖,有望成为新的抗宫颈癌药物。     

迷迭香酸对宫颈癌HeLa细胞凋亡、迁移的影响及与自噬的关系

目的:探讨迷迭香酸对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法:以不同浓度迷迭香酸(0、20、40、80μmol/L)处理HeLa细胞48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移,蛋白质印迹(Western blotting)法检测细胞自噬标志蛋白LC3及Beclin-1的表达。收集宫颈癌组织及正常宫颈组织标本,免疫组织化学法检测组织中LC3及Beclin-1的表达。结果:不同浓度迷迭香酸可诱导HeLa细胞凋亡(F=241.70,P<0.05),抑制细胞迁移(F=77.63,P<0.05),并上调LC3及Beclin-1的蛋白表达(LC3:F=240.83,P<0.05;Beclin-1:F=154.72,P<0.05),且以上作用随迷迭香酸浓度的增加而增强。宫颈癌组织中LC3及Beclin-1的表达明显低于正常组织,差异有统计学意义(LC3:t=28.00,P<0.05;Beclin-1:t=19.99,P<0.05)。结论:自噬失调与宫颈癌的发生有关,迷迭香酸可上调宫颈癌HeLa细胞自噬,并诱导细胞凋亡、抑制细胞迁移,提示迷迭香酸对HeLa细胞的效应可能与其调节自噬有关。     

黄芩素诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:探讨黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:MTT法测定黄芩素作用后人子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率;Hoechst 33258荧光染色法和Annexin-V/PI双染流式细胞术检测黄芩素诱导HeLa细胞凋亡的作用;Westernblot观察黄芩素对HeLa细胞bcl-2、Bax、caspase 3及p53表达的影响。结果:(1)不同浓度黄芩素作用24h后均可抑制HeLa细胞生长(P<0.05);(2)黄芩素作用24h后,HeLa细胞呈典型的凋亡形态学改变,凋亡率亦显著增加(P<0.01);(3)细胞内Bax、p53和caspase 3表达显著上调,bcl-2表达明显下调(P<0.05)。结论:黄芩素通过调控凋亡相关基因的表达,诱导HeLa细胞凋亡。     

四甲基偶氮唑蓝法测定植酸酮对HeLa细胞的作用

目的:分析植酸酮妇科清洗装置(商品名:美福康)Ⅱ型1号及2号对体外培养的HeLa细胞生长的抑制作用,为后期实验提供实验依据。方法:体外培养HeLa细胞,分为实验组和对照组,实验组从8个浓度水平上给药,分别经过24,48,72 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物对HeLa细胞增殖的影响。结果:与对照组相比,经2种型号的药物作用后的HeLa细胞存活率降低,凋亡增加,作用呈时间-剂量依赖关系。结论:植酸酮妇科清洗装置Ⅱ型1号及2号均能有效抑制宫颈癌HeLa细胞的生长。     

槲皮素对子宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制

的凋亡.     

下调骨桥蛋白对宫颈癌Hela细胞生长和侵袭的影响

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)特异性短发卡RNA(shRNA)对宫颈癌细胞体外增殖、凋亡及侵袭的影响。方法:OPN shRNA真核表达质粒PGCsi3.0在脂质体介导下转染Hela细胞(OPN特异性转染组),转染空载质粒(空白质粒转染组)和未转染的Hela细胞(未转染组)作为对照。RT-PCR和Western blot检测OPN mRNA和OPN蛋白表达;MTT、流式细胞仪和Transwell实验分别检测Hela细胞的增殖、细胞凋亡、侵袭和迁移能力。结果:OPN特异性转染组与对照组比较,OPN mRNA和OPN蛋白表达明显下调,Hela细胞的增殖、侵袭能力下降,凋亡率增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制OPN的表达能降低宫颈癌细胞的增殖及侵袭能力,促进细胞的凋亡。提示OPN有可能成为宫颈癌新的治疗靶点。     

HeLa细胞照射后存活后代生长特性及放射敏感性的变化

目的 :探讨HeLa细胞照射后存活后代生长特性及放射敏感性的变化。方法 :培养人HeLa细胞株和照射后存活的后代 ,测定其群体倍增时间、放射敏感性和细胞周期变化。结果 :HeLa细胞的群体倍增时间为 10 6 .0± 6 .8h ,HeLa细胞经 6MV X线DT 6Gy照射后存活后代群体倍增时间为 132 .8± 12 .2h(P <0 .0 5 )。照射前克隆形成率为 (12 .0±0 .5 ) % ,照射后克隆形成率为 (4.0± 0 .6 ) % (P <0 .0 5 )。照射前 2Gy生存分割指数 (SF2 )为 0 .5 2± 0 .0 5 ,照射后SF2为 0 .72± 0 .0 8(P <0 .0 5 )。HeLa细胞经照射后S期明显减少 ,G2 /M期阻滞 ,且呈剂量依赖性。结论 :HeLa细胞照射后存活后代生长延缓 ,放射敏感性增高。     

外源性人乳头状瘤病毒16型E7基因对子宫颈癌细胞周期的影响

目的了解外源性人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7基因对子宫颈癌细胞周期的影响。方法从宫颈癌标本中经 PCR 扩增回收 HPV16 E7基因片段,将正确的 E7基因片段插入到穿梭质粒 pAdrTrack-CMV 中,与骨架质粒 pAdEasy-1在大肠埃希菌 Bj5183中同源重组,重组腺病毒质粒转染人胚肾细胞株 HEK-293细胞,包装表达 E7基因的腺病毒,然后转染 HPV18阳性的宫颈癌细胞株HeLa 细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染后 HeLa 细胞的增殖情况,以吸光度(A)值表示;流式细胞仪检测转染前后 HeLa 细胞的细胞周期和细胞周期蛋白 D1表达的变化。结果在 HEK-293细胞中,可以收获高转染效率的腺病毒。在荧光显微镜下,可以观察到 HEK-293细胞和 HeLa 细胞中均有绿色荧光蛋白的表达。提取 HEK-293细胞 RNA,RT-PCR 技术可以检测到 E7基因的表达。MTT 比色法检测结果显示,转染后 HeLa 细胞的 A 值最低为0.38±0.02,最高为0.96±0.01,分别与转染前的0.27±0.03比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,转染12h后,S 期细胞占(36.0±2.0)%,转染24h 后为(49.9±4.2)%,分别与转染前的(26.0±0.4)%比较,差异均有统计学意义(P<0.05);转染前、后细胞周期蛋白 D1阳性表达率分别为22.4%、55.2%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论携带 HPV16 E7基因的腺病毒可转染子宫颈癌 HeLa细胞,并在 HeLa 细胞内表达,HPV16 E7基因的表达进一步影响 HeLa 细胞的细胞周期蛋白的表达,促进 HeLa 细胞增殖,可望用于治疗宫颈癌。