锰对大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-9和凋亡抑制蛋白表达的影响

为研究锰对大鼠睾丸生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-9(caspase-9)、凋亡抑制蛋白(livin)表达的影响,将24只健康雄性清洁级SD大鼠随机分为3组,分别为对照(生理盐水)组和15、30 mg/kg氯化锰染毒组,每组8只。采用腹腔注射方式进行染毒,每天1次,每周5 d,连续染毒6周。采用免疫组化SP法检测睾丸生精细胞caspase-9、livin蛋白的表达情况。结果显示,与对照组比较,15、30 mg/kg氯化锰染毒组大鼠睾丸生精细胞caspase-9的阳性细胞率均升高,livin的阳性细胞率均下降,差异有统计学意义(P0.05)。且随着氯化锰染毒剂量的升高,大鼠睾丸生精细胞caspase-9的阳性细胞率呈上升趋势,livin的阳性细胞率呈下降趋势。提示锰可通过上调大鼠生精细胞caspase-9表达和下调livin表达诱导生精细胞凋亡。     

锰对大鼠生精细胞半胱氨酰天冬氨酸酶-3和细胞色素C表达的影响

目的研究锰对大鼠生精细胞中半胱氨酰天冬氨酸酶-3(caspase-3)和细胞色素C(cytochrome-c)表达的影响。方法将健康雄性清洁级SD大鼠48只随机分为高(30mg/kg)、低剂量(15mg/kg)MnCl2染毒组和空白对照组(生理盐水),每组16只。采用腹腔注射方式染毒,每天1次,每周5天,连续染毒6周。分别于染毒第4、6周末称重,处死大鼠,分离睾丸,采用免疫组化法检测睾丸生精细胞中caspase-3与cytochrome-c的阳性细胞率。并进行病理学观察。结果与空白对照组比较,高、低剂量MnCl2染毒组大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低,差异有统计学意义(P<0.01);且随着锰染毒剂量的升高,大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率呈上升趋势,cytochrome-c阳性细胞率呈下降趋势。与染锰第4周比较,高、低剂量MnCl2染毒组第6周大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。直线相关分析发现,各组大鼠生精细胞caspase-3阳性细胞率与cytoc...     

砷染毒大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力的变化

目的观察不同剂量的染砷(As2O3)大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力表达的变化。方法将40只健康雄性清洁级SD大鼠随机分成4组,分别为低、中、高剂量(0.375、0.75、1.5 mg/kg)砷染毒组和对照组,以灌胃法连续染毒16周后计算各组大鼠精子头计数,并计算睾丸脏器系数、每日精子生成量(DSP)。采用TUNEL原位细胞杂交方法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞端粒酶活力的表达。结果与对照组比较,中剂量组(0.75 mg/kg)和高剂量组(1.5 mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均显著降低(P<0.01),生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P<0.01),生精细胞端粒酶活力表达明显降低(P<0.01);每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01);生精细胞凋亡与端粒酶活力呈负相关(r=-0.896,P<0.01)。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞端粒酶活力,促进生精细胞凋亡而导致精子生成量减少,产生雄性生殖毒性。     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 研究双酚A (bisphenol A,BPA)对离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及相关凋亡基因表达的影响.方法 将睾丸支持细胞分别暴露于0(溶剂对照)、30、50、70 μmol/L的BPA.采用MTT法检测离体培养细胞活力,采用RT-PCR的方法检测p38 MAPK、caspase-3、FasL、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α) mRNA的相对表达情况,采用western-blotting的方法检测细胞中P38 MAPK、磷酸化P38 MAPK和caspase-3酶原蛋白的表达情况.结果 与溶剂对照组相比,30 μmol/L BPA组支持细胞p38 MAPK mRNA的相对表达量升高,而50 μmol/L BPA组p38 MAPK的表达明显降低(P＜0.05);各浓度BPA染毒组caspase-3mRNA的相对表达量均较高(P＜0.05);仅50 μmol/L BPA组TNF-α mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);50、70 μmol/LBPA组FasL mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);各剂量BPA染毒组总P38MAPK蛋白的相对表达量无显著变化;50和70 μmol/LBPA组磷酸化P38 MAPK蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05);仅70 μmol/L BPA组caspase-3酶原蛋白的相对表达量下降(P＜0.05).结论 BPA可激活离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞p38 MAPK,并诱发caspase-3活化,导致细胞凋亡,这可能是通过FasL凋亡途径介导的.     

亚慢性砷染毒对大鼠肾小球细胞半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)对砷中毒肾小球细胞凋亡的影响。方法将清洁级SD大鼠随机分为高、低剂量组和对照组(自来水),每组10只,雌雄各半,将As2O3溶于饮水中进行染毒。高、低剂量组砷染毒剂量分别为10、0.4mg/(kg·d),对照组可自由饮水,连续染毒4个月,每周称体重。染毒结束后,测定尿砷、血砷的含量,免疫组化SABC方法检测肾小球细胞caspase-3的表达,并进行图像分析、计数。结果与对照组比较,高、低剂量组尿砷、血砷含量均较高,肾小球细胞caspase-3阳性细胞数均较多,灰度值均较低;与低剂量组比较,高剂量组尿砷、血砷含量均较高,肾小球细胞caspase-3阳性细胞数较多,灰度值较低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论慢性砷中毒所致肾小球细胞凋亡可能与肾小球细胞caspase-3的表达明显增加有关。     

锰对大鼠生精细胞凋亡及caspase-3表达的影响

[目的]研究染锰大鼠睾丸生精细胞凋亡和caspase-3表达的变化。[方法]雄性SD大鼠48只随机分为6组:空白对照组,15mg/kg、30mg/kgMnCl2组。8只/组。15mg/kg、30mg/kgMnCl2组分别染锰(MnCl2·4H2O)4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水(NS),给锰及生理盐水途径均为腹腔注射,5d/周,1次/d,大鼠分别于第4周末和第6周末处死,取睾丸和附睾作以下检测:①检测精子数量;②应用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(terminal deoxynucleotidy transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);③免疫组组织化学链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(streptavidin-biotin-peroxidase complex,SABC)法检测生精细胞caspase-3表达。[结果]①与空白对照组比较,各染锰组精子数量均显著降低(P﹤0.05),生精细胞AI均升高(P﹤0.05),caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。②染锰剂量相同,染锰6周组与染锰4周组比较,精子数量均显著降低,生精细胞AI与caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。③染锰时间相同,30mg/kgMnCl2组与15mg/kgMnCl2组比较,精子数量均显著降低(P﹤0.05),生精细胞AI和caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。④各组大鼠精子数量和生精细胞AI呈负相关(r=-0.700,P﹤0.05),和生精细胞caspase-3阳性细胞率呈负相关(r=-0.870,P﹤0.05),生精细胞AI和caspase-3阳性细胞率呈正相关(r=0.855,P﹤0.05)。[结论]过量锰诱发大鼠生精细胞caspase-3高表达,从而导致凋亡增加,精子数量减少,这可能是大鼠生精障碍的主要机制。     

过量酒精对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的　研究酒精致生精细胞凋亡发生的机制及酒精凋亡相关基因Bcl- 2、Bax在睾丸及生精细胞表达的影响。方法　利用人类饮用白酒制备大鼠的酒精毒性模型 ,采用组织学技术和免疫组织化学技术检测酒精对生精细胞凋亡及其相关基因Bcl- 2、Bax表达的影响。用 2种剂量的酒精作用于大鼠的 2个生精周期 ,检测睾丸生精小管中Bcl- 2、Bax蛋白表达的阳性细胞数和表达强度。结果　每个生精小管中Bcl- 2蛋白表达的阳性细胞数在高剂量组为 96± 3 3 74,低剂量组为 15 6 6± 2 8 5 2 ,均显著低于正常对照组 (2 2 2 6± 5 6 86) (P <0 0 1) ;每个细胞中Bcl- 2蛋白表达强度 (OD值 )在高剂量组 (0 142± 0 0 3 5 )、低剂量组 (0 15 1± 0 0 2 6) ,都明显低于对照组 (0 196± 0 0 3 2 ) (P <0 0 1) ;Bax蛋白表达的阳性细胞数在高剂量组为 (412 4± 96 75 ) ,低剂量组为 (3 3 7 5± 94 3 9) ,均明显高于对照组(2 14± 82 5 7) (P <0 0 1) ,Bax蛋白的表达强度 (OD值 )也有同样的变化 ,高剂量组 (0 113± 0 0 3 6)和低剂量组 (0 0 82± 0 0 17) ,均明显高于对照组 (0 0 5± 0 0 2 4) (P <0 0 1)。凋亡细胞增多 ,平均每个生精小管中的凋亡细胞数目在高剂量组为 15 5 3± 3 75 ,显著高于正常对照组 (2 2     

乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

为探讨乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,将处于对数生长期人星形胶质细胞(细胞密度约5×103个/ml)分别暴露于0(对照)、10、20μmol/L乙酸铅,培养24 h后,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化,采用透射电镜观察细胞超微结构的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用细胞免疫化学法检测Caspase-3的表达,采用Western blot法检测细胞中Caspase-3表达量。结果显示,显微镜下观察发现,乙酸铅染毒人星形胶质细胞变小、变圆,细胞间隙变大,细胞部分脱落。透射电镜观察发现,乙酸铅染毒细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,线粒体数目减少、空泡化。流式细胞仪检测结果表明,乙酸铅染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。细胞免疫化学法和Western Blot法检测结果显示,乙酸铅染毒人星形胶质细胞Caspase-3表达量均高于对照组,并且表达量随着染铅剂量增加而升高。提示乙酸铅可诱发人星形胶质细胞凋亡,其机制可能与Capase-3的活化有关。     

大鼠生精细胞分离方法的研究

目的:建立一种简单、有效的哺乳动物睾丸生精细胞分离方法。方法:采用研磨-Percoll法、单一酶-研磨-Percoll法、组合酶法制备成熟期前大鼠睾丸生精细胞,分析比较其细胞总数、分离所需时间和细胞纯度,以及检测细胞培养前后的存活率。结果:组合酶法得到的睾丸生精细胞总数最多、分离所需时间最短;获得的细胞含杂质最少、细胞存活率最高;细胞培养48h后的存活率高,与其他两种分离方法比较有显著性差异(P<0.05)。结论:用组合酶法能在较短时间内获得数量较多的、比较纯化和存活率较高的生精细胞。     

染锰大鼠生精细胞天冬氨酸特异性的半胱氨酸酶-3和增殖细胞核抗原表达及锌的拮抗作用

目的研究Mn Cl2对生精细胞天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨Mn诱发大鼠生精细胞caspase-3和PCNA表达的机制及Zn的拮抗作用。方法雄性SD大鼠80只随机分为空白对照组,Zn Cl2对照组,15和30 mg/kg Mn Cl2组;15和30 mg/kg Mn Cl2+Zn Cl2组。Mn Cl2组染Mn 4和6周,Zn Cl2对照组和Mn+Zn组始终或染Mn 4周后给予100 mg Zn2+/kg饲料2周。采用免疫组织化学法检测睾丸caspase-3和PCNA表达。结果各染Mn组、Mn+Zn组及染Mn剂量相同的6周组,染Mn时间相同的30 mg/kg Mn Cl2组caspase-3阳性细胞率均显著升高,Mn+Zn组显著降低。染Mn 4周PCNA阳性细胞率显著降低,染Mn 6周组和Mn+Zn组由于残存细胞数量减少反而升高。结论染Mn15 mg/kg 4周可诱发大鼠生精细胞caspase-3表达且抑制PCNA表达,且随染Mn时间和剂量的增加而增加,两者分别存在一定时间-效应和剂量-效应关系;摄入含Zn100 mg/kg的食物可拮抗Mn诱发生精细胞caspase-3表达。     

半胱氨酸天冬氨酸特异性酶-1诱导的Pyroptosis及其在感染性疾病中的作用

半胱氨酸天冬氨酸特异性酶-1 (Caspase-1)的激活可诱导细胞通过一种称为Pyroptosis的方式死亡.Pyroptosis是一种程序性细胞死亡方式,其形态学特征有别于细胞凋亡或坏死,主要表现为包膜破裂,胞内容物外流.在许多感染性疾病中,Caspase-1诱导产生的细胞因子和细胞死亡可促进机体清除病原体;但在一些病原体感染中,Caspase-1活化引起的炎症反应和细胞死亡可能和病原体的致病机制有关.此文就细胞Pyroptosis时的形态学特征、机制及其在感染性疾病中的作用进行综述.     

砷对大鼠生精细胞DNA损伤及XRCC1表达影响

目的观察不同剂量三氧化二砷(As₂O₃)对成年大鼠生精细胞DNA损伤及其X射线修复交叉互补基因1(XRCC1)基因表达影响。方法40只健康雄性SD大鼠随机分为4组,对照组、低、中、高剂量As₂O₃组(0.375、0.75、1.5 mg/kg),灌胃法连续给药16周处死大鼠,应用单细胞凝胶电泳试验检测大鼠生精细胞DNA损伤,免疫组化法检测大鼠生精细胞XRCC1蛋白表达。结果对照组生精细胞平均尾长(1.04±0.61)μm,中、高剂量As₂O₃组可见部分细胞拖尾,平均尾长分别为(3.11±1.16)、(3.62±2.46)μm,明显长于对照组(P<0.01),细胞尾部DNA含量比及尾矩也明显增加(P<0.01);中、高剂量As₂O₃组XRCC1阳性细胞百分比分别为(11.13±7.06)%和(9.63±6.32)%,均较对照组的(15.49±8.23)%明显降低(P<0.05),XRCC1表达量随着染毒剂量增高而降低;DNA损伤与XRCC1表达呈负相关(r=-0.778,P<0.01)。结论一定剂量As₂O₃可通过抑制生精细胞XRCC1表达,诱导大鼠生精细胞DNA损伤,产生雄性生殖毒性。     

染锰大鼠生精细胞Caspaes-3和Ki-67表达

目的 研究氯化锰对大鼠生精细胞半胱天冬酶(Caspase-3)和抗霍奇金淋巴瘤细胞核抗体(Ki-67)表达的影响及意义。方法 48只雄性SD大鼠随机分为6组:空白对照组,15和30mg/kgMnCl₂组,锰与生理盐水均为腹腔注射,1次/d,5d/周,分别染锰4和6周。用免疫组化法检测睾丸生精细胞Caspase-3与Ki-67表达。结果 与空白对照组比较,各染锰组Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01);染锰剂量相同,染锰6周组与4周组比较,Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01);染锰时间相同,30mg/kgMnCl₂与15mg/kgMnCl₂组比较,Caspase-3阳性细胞率均显著升高(P<0.01)。与空白对照组比较,染锰15mg/kgMnCl₂4周组Ki-67阳性细胞率降低(P<0.05);染锰30mg/kgMnCl₂4周组,15mg/kgMnCl₂6周组,30mg/kgMnCl₂6周组Ki-67阳性细胞率均显著降低(P<0.01);染锰时间相同,30mg/kgMnCl₂组与15mg/kgMnCl₂组比较,Ki-67阳性细胞率显著降低(P<0.01)。各组大鼠生精细胞Caspase-3阳性细胞率与Ki-67阳性细胞率呈明显负相关(r=-0.798,P<0.01)。结论 染锰15mg/kg4周即可促进大鼠生精细胞Caspase-3表达和抑制大鼠生精细胞Ki-67表达,且存在一定的剂量-效应和时间-效应关系,锰的这种双重作用可能是导致大鼠生精障碍的主要机制。     

输精管结扎对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的:研究输精管结扎对大鼠曲细精管生精细胞凋亡的影响及其机制。方法:将大鼠输精管结扎,1～10周后利用免疫组化法检测曲细精管生精细胞Bax和Bcl-2的表达情况,并应用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测生精细胞的凋亡数目。结果:免疫组化法显示结扎后大鼠生精细胞Bcl-2的表达同假手术组比较无明显差异,而Bax的表达明显升高。结扎后不同时期组与同期假手术组比较,TUNEL法显示生精细胞凋亡数前者均高于后者(P<0.05)。结论:输精管结扎会导致大鼠曲细精管生精细胞凋亡数增加。     

镉诱导HL-7702细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达

镉是一种有毒的重金属元素，易在体内蓄积，镉对机体毒性效应十分复杂。肝脏是镉损伤的主要靶器官之一，目前对镉致肝细胞损伤机制尚不十分清楚。镉可诱导多种细胞发生凋亡，如大鼠肝细胞、人肝癌细胞株和原代培养的鼠肺上皮细胞等。我们就镉诱导人正常肝细胞系HL-7702细胞凋亡作用进行研究，并对其凋亡机制进行了初步探讨。     

氟对雄性大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响的研究

目的探讨氟对大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响。方法将30只4～5周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低剂量组、高剂量组。分别按0、10和20mg/kg染毒剂量隔日灌胃氟化钠(NaF)染毒39天,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,用放射免疫法测定大鼠血清睾酮含量,用免疫组化(ICH)检测睾丸中Fas蛋白表达情况,同时镜检成熟精子质量。结果各染氟组大鼠睾丸氟含量均高于对照组(P0.05)且随染毒剂量的增加而逐渐升高;各染氟组大鼠血清睾酮含量低于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,睾酮含量逐渐降低;各染氟组大鼠生精细胞Fas蛋白阳性表达率高于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,Fas蛋白阳性表达率逐渐升高;各染毒组大鼠精子数量和精子活动率低于对照组(P0.05);精子畸形率高于对照组(P0.05)。结论染氟雄性大鼠血清睾酮水平降低,激活了生精细胞Fas/FasL系统,从而导致生精细胞损伤。     

镉对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用

为探讨对镉对睾丸结构和功能损害及锌对其保护作用的分子机制,研究镉对生精细胞凋亡的影响和锌的保护作用,选用２月龄Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠２４只,均分为染镉组、镉加锌组和对照组,分别自腹腔注射氯化镉（２ｍｇ／ｋｇＢＷ）,注射氯化镉同时及其前后２ｈ各注射醋酸锌一次和等量生理盐水,７ｄ后采用原位缺口平移技术（ＩＮＳＴ）检测各组睾丸生精细胞凋亡数目的变化。结果显示与对照组相比,染镉组大鼠睾丸生精细胞凋亡数目明显     

极低频电磁场对大鼠生精细胞Fas／FasL表达的影响

性腺的正常生长发育是以大量生殖细胞减少为特征,在这种细胞减少中凋亡起关键作用,凋亡基因（Fas）／Fas配体（fasligand,FasL）系统参与这一过程的调节,并起关键作用。大鼠睾丸组织极低频电磁场暴露后可引起凋亡,为了解Fas／FasL是否参与,我们进行了如下研究。     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性的影响。方法醋酸铅染毒人股动脉内皮细胞后,用Hochest 33258染色法检测细胞形态学变化,用细胞免疫化学法检测caspase-3、P53、Bax、Bc l-2的表达;用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后,Hochest 33258-PI染色显示醋酸铅组细胞呈凋亡形态学改变。动脉内皮细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的caspase-3、P53和Bax阳性表达升高,而Bc l-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0.05）。结论醋酸铅可促进动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与capase-3的活化有关。