以Pin1为靶点的肿瘤反义基因治疗研究进展

 肽基脯氨酰顺反式异构酶 1（peptidyl-prolyl cis/trans isomerase 1，Pin1）是进化上非常保守的肽基脯氨酰异构酶（peptidyl-prolyl isomerase，PPIase）家族的成员，属微小菌素蛋白^[1]，最初报道于 1996 年，在分离与 NIMA（never in mitosis gene A）相互作用的蛋白时得到^[2]。一些研究发现，Pin1 的作用靶点可以是参与细胞增殖、细胞凋亡和转录的蛋白，如细胞周期蛋白 E（cyclin E）、cyclin D1、β-连环蛋白（β-catenin）等，其中多数蛋白在肿瘤形成过程中会失调^[3-5]；并且 Pin1 在多种肿瘤中过表达（如宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌等）^[6-14]，因此认为 Pin1 与肿瘤发生有关。有学者已经对 Pin1 在肿瘤治疗方面的应用进行了研究，包括靶向 Pin1 的小分子化合物和反义基因。本文主要就靶向 Pin1 的肿瘤反义基因治疗方面的研究进展做简要综述。 ......     

免疫酶技术在修饰的安卡拉痘苗病毒感染性滴度检测中的应用

 修饰的安卡拉痘苗（modified vaccinia Ankara，MVA）是MVA病毒在原代鸡胚成纤维细胞（CEF）中经过一系列的传代得到^[1]，在人体内可以表达 MVA 病毒蛋白及其携带的外源基因蛋白，但却不形成完整的病毒颗粒，为人体内复制缺陷性病毒^[2]，安全性好，即使在免疫功能缺陷病人和免疫抑制的恒河猴体内也未显示出明显的副作用^[3]。近年来，重组 MVA 病毒广泛地用于预防性疫苗和感染性疾病、癌症治疗的基础与临床研究^[4]，其中以 MVA 病毒作为载体的疫苗是最有希望用于预防人类艾滋病的活载体疫苗之一^[5]。由于 MVA 病毒本身的繁殖特点，其滴度的检测不适合采用常规的蚀斑法进行^[6]；而常规微量细胞病变（cytopathic effect，CPE）法相对耗时，对细胞培养要求高，往往受到主观因素的影响，因而不稳定且精确度降低^[7]，给检测工作带来不便。上世纪 90 年代初 Usuba 等^[8]建立了免疫酶技术测定流感病毒感染性滴度的方法，较常规方法省时、结果准确﹑重复性好。我们就免疫酶技术在 MVA 病毒感染性滴度检测中的适用性进行了探讨，旨在建立一种准确、快速的 MVA 病毒感染性滴度检测方法。......     

转基因动物育种研究的现状与趋势

 20 世纪 80 年代以来发展的转基因动物技术是指将已知的外源基因导入动物细胞并稳定整合到基因组中,使其得以表达的技术。转基因动物育种是指通过转基因的手段,从分子水平对动物进行改良,以期得到目标性状。1997 年,克隆羊 Dolly 的诞生^[1],开创了哺乳动物体细胞核移植技术的先河,随后,乳腺中表达人凝血因子 IX 的转基因克隆羊 Polly 培育成功^[2]。2005 年抗乳房炎转基因牛的诞生^[3],2006 年多不饱和脂肪酸转基因克隆猪的培育成功^[4],标志着转基因动物育种进入了新的发展历程。2009 年生产高比例的抗原特异性人源抗体的转染色体牛的出生^[5],是转基因动物生产药用蛋白的又一个里程碑。转基因动物技术自从诞生以来就在改良家畜生产性状、提高家畜抗病力以及生产非常规畜牧产品（如人药用蛋白和工业用酶）等方面显示了广阔的应用前景。随着基因工程技术的不断发展,转基因动物技术将会不断得到完善,从而在未来的动物育种中将发挥巨大的作用。......     

促凋亡基因 puma 的研究进展

 p53 上调节的细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis，PUMA）是 2001 年由 Yu 等^[1]和 Nakano 等^[2] 2 个独立研究小组同时发现的，是 Bcl-2 蛋白家族的促凋亡成员之一，具有强大的促凋亡作用，可被内、外源性 p53 快速诱导活化。PUMA 基因定位于 19q，cDNA 全长 1.9 kb，转录本由 4 个外显子（1a、2、3、4）组成，编码 1 个由 193 个氨基酸组成的蛋白，该蛋白定位于线粒体膜上。Bcl-2 蛋白家族中促凋亡蛋白的共同点是都含有 1 个由 9 个氨基酸（LRRMADDLN）组成的 BH3 保守结构域。其中 PUMA 与 Bik、Bad、Bid、Bim、Hrk/DP5 及线虫 Eg-1 等促凋亡蛋白，都只存在 1 个 BH3（Bcl-2 homology3）结构域，统称为 BH3 仅有蛋白。从秀丽隐杆线虫到小鼠的程序性细胞死亡的遗传学研究显示，BH3 仅有蛋白是程序性细胞死亡的重要启动因子，BH3 仅有蛋白通过其 BH3 结构域与 Bcl-2 蛋白家族中的抑凋亡蛋白表面的沟槽相互作用从而启动凋亡，提示 BH3 结构域对 BH3 仅有蛋白与 Bcl-2 等抑凋亡蛋白结合并启动凋亡起着至关重要的作用^[3]。PUMA 的 BH3 结构域位于其氨基酸序列的第 141 ~ 149 位，缺少此结构域的 puma 突变体也将丧失诱导凋亡的功能^[4]。近年来，PUMA 的诱导凋亡作用与肿瘤的相关性研究成为热点，本文仅就 PUMA 的促凋亡作用在肿瘤研究中的应用进行综述。......     

急性白血病患者bcrp、mdr-1、mrp-1和lrp耐药基因表达的临床意义

目的：定量检测急性白血病(AL) 患者乳腺癌耐药相关蛋白基因（bcrp）、多药耐药基因（mdr-1）、多药耐药相关蛋白基因（mrp-1）及肺耐药相关蛋白基因（lrp）表达及其与临床的关系。方法：应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应RT-PCR （real time fluorescent quantitative RT-PCR，FQ RT-PCR）检测105例AL 患者bcrp、mdr-1、mrp-1、lrp等基因的拷贝数,分析其与临床预后的关系。结果： AL组bcrp基因拷贝数（2.8×10³)±(8.4×10³）明显高于正常对照组（7.6×10²)±(2.3×10³）,P<0.05；mdr-1基因拷贝数（1.3×10⁵)±(2.2×10⁵）及lrp基因拷贝数（8.3×10⁵)±(1.0×10⁶）显著高于正常对照组（P<0.01）。复发组AL患者的mdr-1拷贝数（3.7×10⁴)±(1.1×10⁵）明显高于初治组患者（1.1×10⁴)±(3.6×10⁴）,P<0.05。在AL耐药组mdr-1拷贝数（2.1×10⁴)±(9.1×10⁴）明显高于敏感组（1.0×10⁴)±(3.8×10⁴）,P<0.05）。经直线相关分析显示mdr-1和mrp-1，mdr-1和lrp，mrp-1和lrp之间呈显著正相关，经等级相关分析显示mdr-1和lrp的表达与耐药性密切相关。结论：急性白血病多药耐药的出现与bcrp、mdr-1、mrp-1、lrp中一项或几项过度表达有关，mdr-1较其它基因更具有预测临床预后的意义。     

大肠癌环氧化酶-2调控的研究进展

环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是环氧化酶的同工酶之一(哺乳动物的COX至少有COX-1和COX-2 两种同工酶)。[STBX]COX-1[STBZ]为结构型基因,在正常组织和细胞内表达,参与维持其正常的生理功能。[STBX]COX-2[STBZ]为诱导型基因,静息时不表达,当细胞受到各种诱导因子刺激时表达上调,迅速合成,参与肿瘤的发生及发展。COX-2与恶性肿瘤的关系首先在大肠癌中证实,其促癌作用包括抑制肿瘤细胞凋亡、增加细胞黏附和肿瘤侵袭、促进血管生长等^[1],80%-90%的大肠癌有环氧化酶-2的过度表达^[2,3]。本综述回顾了大肠癌环氧化酶-2表达调控的相关研究进展。     

氯沙坦对大鼠慢性心力衰竭的干预作用

目的 通过氯沙坦对慢性心力衰竭(慢性心衰)干预,研究慢性心衰时心肌细胞凋亡变化的原因及其机制,为慢性心衰的治疗提供理论依据。 方法 采用阿霉素制作慢性心衰大鼠模型,以氯沙坦为干预剂,采用透射电镜、免疫组织化学、RT-PCR及原位缺口末端标记法(TUNEL)对心肌细胞凋亡的形态和凋亡蛋白Bax、Bcl-2及通路蛋白细胞外信号调节激酶（ERK1）、氨基末端激酶（JNK1）和促分裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）的mRNA表达变化进行研究。 结果 氯沙坦治疗后,与心衰组动物相比,心肌细胞的超微结构明显好转;凋亡指数明显降低（P <0.01）;Bcl-2的含量明显升高而Bax的含量显著下降（Bcl-2 χ² =6.81、P =0.0074;Bax χ² =66149、P =0.0078,均P <0.01）;ERK1mRNA表达明显增加而JNK1mRNA表达则显著下降（ｑ =15.3514,P <0.01;ｑ =22.0156,P <0.01）。 结论 氯沙坦对慢性心衰的干预作用与ERK1和JNK1途径密切相关,而p38MAPK途径与此过程相关性不大。     

基于白蛋白的纳米递送系统在肿瘤诊断治疗领域中的研究进展

 间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）是一群存在于骨髓、脂肪、骨实质、胎盘及骨骼肌等多种组织中的干细胞，具有向骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化的功能^[1]。也有资料表明，MSC分化能力接近于胚胎干细胞，可分化为肌细胞、内皮细胞、上皮细胞、神经元样细胞和肝细胞^[2-5]。体外实验证实，MSC本身并不引起异体淋巴细胞活化，但可抑制由丝裂原或异体淋巴细胞激活的T、B淋巴细胞和自然杀伤（NK）细胞的增殖^[6-8]，抑制树突状细胞的发育与成熟^[9]。因此，MSC在造血干细胞移植、器官移植、骨和软骨组织修复、心肌梗死和肝脏损伤的治疗中具有潜在的应用价值，某些治疗措施已经进入临床试验阶段。目前，美国FDA已经批准的有关MSC治疗的临床试验包括：⑴异体MSC静脉输注治疗异基因骨髓移植中的移植物抗宿主病（graft-versus-host disease，GVHD）；⑵自体MSC静脉输注治疗Crohn病；⑶自体MSC局部应用治疗牙周疾病；⑷异体MSC静脉输注治疗心肌梗死；⑸异体MSC修复半月板；⑹粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员MSC治疗心肌梗死等。在国内，多家单位已经将自体或异体MSC试用于临床，以预防或治疗GVHD、心肌梗死、骨或软骨缺损和股骨头坏死等^[10-13]。然而，有关MSC临床应用的一些基本问题尚不清楚，盲目开展临床试验是不妥当的。本文就相关问题进行综述和讨论。...     

胸苷激酶1在乳腺癌诊断和预后判断中的应用研究进展

 乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，全世界每年约有 130 万妇女患乳腺癌，约有 50 万妇女死于乳腺癌。我国虽属低发国家，但据北京、上海、天津等大城市的统计，乳腺癌发病率以每年约 3% 的速度增长，发病年龄也从 50 ~ 55 岁提前了 10 岁左右，逐渐成为城市女性的第一杀手^[1]。胸苷激酶（thymidine kinase，TK）是嘧啶代谢循环中的关键酶之一，它能够催化脱氧胸苷转变为脱氧-1-磷酸胸苷酸，为 DNA 的合成提供原料，是衡量细胞增殖活性的重要指标^[2]。TK 在人类细胞中以 2 种同工酶的形式存在，即细胞质 TK（TK1）和线粒体 TK（TK2）。TK1 与细胞增殖密切相关，在非增殖细胞和健康人血清中浓度极微或者检测不到，但在恶性肿瘤细胞和恶性肿瘤患者血液中升高，其浓度与肿瘤细胞的增殖速度成正比，并与疾病的轻重程度有关^[3]，因此被认为是一种较好的血清学细胞增殖标志。本文主要就 TK1 在乳腺癌辅助诊断、疗效监控和预后评估等方面的作用做简要综述。......     

水杨酸钠对豚鼠螺旋神经节NGB mRNA和蛋白表达的影响

目的： 观察水杨酸钠对豚鼠螺旋神经节NGB mRNA和蛋白表达的影响。方法: 48只成年健康豚鼠分4组进行，每组12只。A组：对照组；B组：水杨酸钠组Ⅰ（200 mg·kg^-1·d^-1）；C组：水杨酸钠组Ⅱ（300 mg·kg^-1·d^-1）；D组：水杨酸钠组Ⅲ（450 mg·kg^-1·d^-1）。各组均经腹腔注射给药，给药15d后处死检测；采用RT-PCR检测实验豚鼠螺旋神经节区NGB mRNA的表达；采用免疫组织化学染色分析NGB蛋白表达。结果: ①对照组豚鼠螺旋神经节区NGB mRNA表达明显高于3个水杨酸钠组（P<0.01）；3个水杨酸钠组NGB mRNA表达比较以D组表达最低，B组表达最高，C组与D组比较差异显著（P<0.05）。②免疫组织化学染色检测结果显示实验各组均表达NGB蛋白。A组NGB蛋白表达明显高于其它各组；3个水杨酸钠组以B组表达最高、D组表达最低。结论: 水杨酸钠可显著降低螺旋神经节神经元NGB mRNA和蛋白表达；水杨酸钠对螺旋神经节神经元NGB mRNA和蛋白表达是剂量依赖性的。