缺氧诱导因子-1α与碳酸酐酶Ⅸ在鼻息肉组织中的表达及相关性分析

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、碳酸酐酶Ⅸ(CA Ⅸ)在鼻息肉组织中的表达及其相关性,探讨HIF-1α、CA Ⅸ在鼻息肉发病过程中的作用.方法:收集28例鼻息肉组织(鼻息肉组)和12例正常下鼻甲组织(对照组),用免疫组织化学法检测鼻息肉组与对照组中HIF-1α与CA Ⅸ的表达,观察比较2组之间表达的差异.结果:免疫组织化学染色显示鼻息肉组HIF-1α、CA Ⅸ免疫阳性细胞数及着色强度均明显高于对照组.图像分析显示,鼻息肉组HIF-1α、CA Ⅸ的积分吸收度值(103/HP)分别为21.76±3.52、26.87±4.60,与对照组3.37±1.65、3.25±1.20相比差异有统计学意义(P<0.05);Spearman等级相关分析显示,鼻息肉组中HIF-1α表达与CA Ⅸ表达密切相关(r=0.820,P<0.01).结论:鼻息肉组中HIF-1α、CA Ⅸ表达均上调,且二者有协同表达关系,说明鼻息肉组织中存在缺氧现象,再加上感染、炎症等作用使氧耗增多,能量代谢失调,加重局部缺氧,HIF-1α表达升高,并且能够激活、上调CAⅨ的表达,从而在缺氧状况下维持细胞的正常pH值,使细胞适应缺氧微环境,从而保证缺氧区域细胞的持续生长和增殖,最终形成恶性循环,导致鼻息肉的形成.     

人鼻黏膜上皮细胞HIF-1α和VEGF的表达及意义

目的:在感染件因子、炎性因子及缺氧条件下观察人鼻黏膜上皮细胞缺氧诱导因子-1(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况及意义.方法:无血清原代培养人鼻息肉及下鼻甲黏膜上皮细胞,以脂多糖10、100、1000μg/L,IL-1β20μg/L以及缺氧作用于对数生长期的上皮细胞3、6、9 h后,采用免疫细胞化学方法和原位杂交方法检测HIF-1α、VEGF蛋白及mRNA的表达情况.结果:①缺氧条件下,促红细胞生成素在鼻息肉和下鼻甲黏膜上皮细胞中明显表达,且两者无明显差异,表明促红细胞生成素可作为组织缺氧标志;②鼻黏膜上皮细胞在感染性因子、炎性因子及缺氧作用下,HIF-1α、VEGF表达增加且具有时间和剂量依赖性,其中缺氧组表达最明显(P＜0.05);③各组因素作用下鼻息肉组HIF-1α、VEGF的表达明显高于下鼻甲黏膜组(P＜0.05);④HIF-1α、VEGF在鼻息肉黏膜上皮细胞中的表达呈明显正相关(r=0.870,P＜0.05).结论:感染性因子、炎性因子及缺氧作用下鼻黏膜上皮细胞表达HIF-1α增加,进而诱导VEGF大量表达,是鼻息肉发生、发展的重要原因之一.     

缺氧诱导因子和血管生成素在喉癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨缺氧诱导因子-IX(HIF-1α)及血管生成素-2(Ang-2)在喉癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法:采用免疫组织化学法检测52例喉癌组织和10例正常喉组织中HIF-1α、Ang-2蛋白的表达.结果:HIF-1α和Ang-2蛋白在喉癌组织和正常喉组织中的表达差异有统计学意义(均P<0.05);HIF-1α蛋白在喉癌组织中的表达与临床分期和淋巴结转移有关(均P<0.05),而与患者的性别、年龄、分化程度无关(均P>0.05);Ang-2蛋白在喉癌组织中的表达与临床分期、淋巴结转移、分化程度有关(P<0.01或P<0.05),而患者的性别、年龄对其表达无明显影响(均P>0.05);HIF-1α和Ang-2蛋白在喉癌组织中的表达呈正相关(r=0.607,P<0.01).结论;HIF-1α和Ang-2蛋白在喉癌组织中的高表达,可能与肿瘤的生长、浸润及转移有密切关系.     

沉默HIF-1α基因对鼻黏膜上皮细胞生长因子表达的影响

目的 采用短发夹 RNA(shRNA)特异性沉默人鼻黏膜上皮细胞(HNEC)缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)基因,观察对其表达血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)β1、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 的影响。方法 体外培养原代鼻黏膜细胞,设计合成以腺病毒为载体GFP标记的shRNA,将HNEC分为空白对照组、阴性对照组(ad-HIF shRNA-neg)、ad-HIF shRNA干扰组。采用RT-PCR和Western blotting技术检测转染后相应因子蛋白和mRNA的表达情况。结果 成功合成ad-HIF shRNA并转染入HNEC中。转染ad-HIF shRNA后,HIF-1α蛋白及mRNA表达分别下降40%和39%(q=31.469,16.590);同时VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表达也随之下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HIF-1α mRNA的shRNA能有效地使HNEC的HIF-1α基因沉默,进而有效地抑制VEGF、TGF-β1和bFGF的表达, 提示HNEC中HIF-1α可能通过直接或间接途径调控着VEGF、bFGF和TGF-β1的表达。     

伴或不伴变应性鼻炎的鼻息肉组织中水通道蛋白5的表达及意义

目的:证实水通道蛋白5(AQP5)在鼻息肉组织中的表达及分布。方法:挑选行鼻内镜手术的鼻息肉患者36例,分为变应组16例和非变应组20例。变应组为伴有变应性鼻炎症状患者;非变应组为不存在变应症状患者。取所有患者术后鼻息肉组织,用免疫组织化学技术检测AQP5的表达及分布,并测定阳性细胞的积分吸收度和灰度值。结果:①2组鼻息肉常规苏木精-伊红染色表现为明显的腺体增生、炎症反应和嗜酸粒细胞浸润,但变应组较非变应组更为明显;②免疫组化染色显示AQP5在变应组和非变应组鼻息肉中的分布基本一致,主要表达在腺上皮细胞、导管上皮细胞及纤毛上皮细胞的细胞膜和细胞质中;③对切片的积分吸收度进行统计学分析显示,变应组AQP5在鼻息肉细胞中的量(0.1675±0.006536)明显高于非变应组(0.09343±0.001816),2组间差异有统计学意义(P<0.01)。④对切片的灰度值进行统计学分析显示,变应组AQP5在鼻息肉细胞中的表达(175.6±2.471)明显低于非变应组(206.2±0.965),2组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:AQP5存在于鼻息肉组织中,在伴有变应性症状患者的鼻息肉组织中,AQP5的表达量要比非变应症状患者的鼻息肉中AQP5表达量多,推测与鼻腔分泌物的增多及其性质有关,而不同症状的鼻息肉患者可能存在不同的发病机制。     

地塞米松和组胺对人鼻息肉组织黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究地塞米松和组胺对培养的人鼻息肉组织黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表达的影响。方法:实验分为对照组、组胺刺激组和地塞米松干预组,采用RT-PCR和免疫组织化学技术分别检测鼻息肉组织中MUC5AC mRNA和蛋白的表达。结果:组胺刺激组鼻息肉组织MUC5AC mRNA和蛋白表达分别为0.6389±0.0526和0.1934±0.0137,均较对照组(分别为0.3495±0.0357和0.1172±0.0173)明显增加(均P<0.01),地塞米松抑制后两者均明显降低(分别为0.4988±0.0603和0.1444±0.0075)(均P<0.05)。结论:炎性递质组胺可上调黏蛋白表达;地塞米松可下调黏蛋白表达,这可能是它抑制鼻息肉黏液过度分泌的途径之一。     

地塞米松对人鼻黏膜上皮细胞前炎性因子表达的抑制作用

目的观察地塞米松对脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)诱导的人鼻黏膜上皮细胞缺氧诱导因子-1(hypoxic inducible factor-1,HIF-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达抑制情况及意义。方法无血清原代培养人鼻息肉和下鼻甲黏膜上皮细胞,以LPS100ng/ml,白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)20ng/ml,LPS100ng/ml加地塞米松13ng/ml,IL-1β20ng/ml加地塞米松13ng/ml作用于对数生长期的上皮细胞3、6、9小时后,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA的表达情况。结果①LPS和IL-1β作用于上皮细胞时,HIF-1α及VEGF表达增加具有时间依赖性,以LPS100ng/ml6小时组最明显(P<0.05),且鼻息肉中的表达明显高于下鼻甲(P<0.05);②LPS100ng/ml加地塞米松13ng/ml组和IL-1β20ng/ml加地塞米松13ng/ml组表达强度分别较LPS100ng/ml组和IL-1β20ng/ml组弱(P<0.05)。两抑制组间表达无显著性差异。结论炎性因子及感染性因子可以诱导人鼻黏膜上皮细胞大量表达HIF-1α及VEGF,而地塞米松对其表达有很强的抑制作用。     

喉癌肿瘤组织HIF-1α与COX-2蛋白和mRNA的表达及意义

目的:探讨喉鳞状细胞癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白质和mRNA的表达,以期有助于喉鳞状细胞癌发生、发展和转移机制的进一步阐明。方法:用免疫组织化学和RT-PCR方法检测76例喉鳞状细胞癌组织和9例癌旁正常组织中HIF-1α、COX-2蛋白和mRNA的表达,并按T分期、病理分级分别探讨HIF-1α、COX-2蛋白和mRNA的表达与各临床病理参数的关系。结果:①HIF-1α、COX-2蛋白表达在喉癌标本的表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.05),随T分期的增加而增高;中、低分化的喉癌组织中HIF-1α表达显著高于高分化喉癌;COX-2蛋白表达与病理分级无关。②HIF-1α与COX-2mRNA在喉癌组织中的阳性表达率分别是67.11%和75.00%,明显高于癌旁正常组织(P<0.05),癌旁正常组织未检测到COX-2mRNA表达。HIF-1α与COX-2mRNA在喉癌组织中的阳性表达率与T分期有关(P<0.05),标本的表达量随T分期的增加而增高,但是与病理分级无关(P>0.05)。③HIF-1α蛋白表达阳性病例中,COX-2的阳性率为78.72%。结论:HIF-1α与COX-2在喉鳞状细胞癌组织的表达增高并密切相关,可能是喉癌发生发展的原因之一。     

类固醇药物对人鼻息肉组织中水通道蛋白-5表达的影响

目的 :观察鼻腔局部应用丙酸氟替卡松 (FP)对鼻息肉组织中水通道蛋白 5 (AQP 5 )表达的影响 ,探讨AQP 5在鼻息肉发病中的作用。方法 :将 2 0例鼻息肉患者随机分为治疗组 (10例 )与对照组 (10例 ) ,治疗组术前给予FP喷鼻 7～ 10d ,对照组术前鼻腔未行处理。采用免疫组织化学技术检测两组鼻息肉组织AQP 5的表达情况。结果 :治疗组鼻息肉组织血管内皮AQP 5阳性细胞表达数显著降低 ,与对照组比较 ,差异有统计学意义(P <0 .0 5 ) ;而治疗组鼻息肉组织上皮细胞层及黏膜固有层腺体的AQP 5阳性细胞表达数增加 ,但与对照组比较 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :①AQP 5可能参与鼻息肉组织水肿的形成 ;②鼻腔局部应用FP可以缩小鼻息肉体积 ,可能与AQP 5的表达改变有关 ;③研究水通道蛋白的表达与调控有助于阐明鼻息肉的发病机制和类固醇激素治疗鼻息肉的作用机制。     

局部应用糖皮质激素对鼻息肉组织中水通道蛋白8表达的影响

目的观察鼻腔局部应用布地奈德喷雾剂(budesonide,BUD)对鼻息肉组织中水通道蛋白8(aquaporin8,AQP8)表达的影响,探讨AQP8在鼻息肉发病中的作用及了解糖皮质激素治疗鼻息肉的作用机制。方法40例鼻息肉患者随机分为治疗组20例,对照组20例。治疗组术前2周给予BUD喷鼻;对照组术前未予处理。术后采用免疫组织化学技术检测两组鼻息肉组织标本AQP8的表达情况,分析组间差异。结果治疗组鼻息肉组织中血管内皮和腺体中的AQP8阳性细胞数显著低于对照组(P0.01),而上皮细胞中的AQP8阳性细胞数增加,但与对照组的差异无统计学意义(P0.05)。结论鼻腔局部应用BUD可以减轻水肿程度,缩小鼻息肉体积,可能与AQP8的表达改变有关。     

鼻息肉黏膜上皮钠通道蛋白表达的研究

目的 比较鼻息肉与正常中鼻甲黏膜上皮钠通道(epithelial sodium channels,ENaC)蛋白的表达,探讨鼻黏膜ENaC蛋白依赖的Na+吸收机制及液体转运机制.方法 12例Ⅱ型2期慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)患者为鼻息肉(nasal polyp,NP)组,5例行鼻中隔矫正术和上颌窦囊肿摘除术患者的中鼻甲黏膜(ethmoid cornu mucosa,ECM)为对照组,内镜下取新鲜组织制成冰冻切片后行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜下记录荧光相对表达量;反转录-实时聚合酶链反应(Rtreal-time PCR)法检测两组ENaC-α、β、γ mRNA的表达.结果 NP组ENaC蛋白免疫荧光相对表达量(x±s)为35.79±5.47,高于ECM组(22.17±5.43),差异具有统计学意义(t=4.69,P<0.01);NP组ENaC-α、β、γ mRNA表达(分别为2.06±0.42、1.97±0.32、1.96±0.54)均大于ECM组(分别为1.01±0.10、0.98±0.08、0.97±0.06),差异具有统计学意义(t值分别为5.482、6.659、4.036,P值均<0.01);ENaC三个亚基mRNA的表达在NP组与ECM组均为α>β>γ;NP组ENaC蛋白的相对表达量与ENaC-α、β、γ mRNA的表达呈止相关(r值分别为0.907、0.948、0.919,P值均<0.01).结论 ENaC蛋白及ENaC-α、β、γ mRNA在鼻息肉黏膜中的表达上调,且二者具有同步性,ENaC蛋白表达上调可能足造成黏膜下水肿,最终导致鼻息肉形成的重要原因之一.     

荧光定量RT-PCR检测糖皮质激素受体-α mRNA 在鼻息肉组织中的表达

目的:定量检测糖皮质激素受体-α(GR-α)mRNA在鼻息肉和鼻腔正常黏膜中的表达,并探讨其在鼻息肉发生发展中的意义。方法:采用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)检测36例鼻息肉(息肉组)和31例鼻腔正常黏膜(对照组)中GR-αmRNA定量表达。结果:GR-α在对照组[(135.4±5.2)×1010copy/g]中比息肉组[(25.5±5.0)×1010copy/g]中表达高,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:GR-α在息肉组织中的低表达,可能是促进鼻息肉发生发展的一个重要因素。     

喉癌组织中HIF-1α和COX-2及VEGF与微血管密度的关系及临床意义

目的:探讨喉癌患者中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧合酶-2(COX-2)与血管内皮生长因子(VEGF )表达水平与喉癌血管生成的关系及临床意义.方法:通过免疫组织化学SP法对 64例喉癌标本中HIF-1α、COX-2与VEGF及微血管密度(MVD)进行了检测.结果:喉癌中HIF-1α、COX-2蛋白及VEGF的阳性表达率分别为65.63 %(42/64)、68.75%(44/64)和71.88(46/64),MVD为35.79±9.49.喉癌HIF-1α、COX-2和VEGF与MVD表达均呈正相关(P<0.05).喉癌中HIF-1α和COX-2与VEGF之间存在正相关性(P<0.05).在有淋巴结转移的肿瘤中HIF-1α、COX-2和VEGF阳性表达及MVD明显高于非转移组(P<0.05).结论:HIF-1α、COX-2和VEGF参与喉癌的血管生成,HIF-1α通过调节下游基因的表达(COX-2及VEGF),在喉癌血管生成中发挥重要作用,共同参与喉癌颈淋巴结转移过程.     

磷酸化信号转导与转录活化因子3和血管内皮生长因子及微血管密度在鼻息肉中的表达及意义

目的:检测磷酸化信号转导与转录活化因子3(p-STAT3)及血管内皮生长因子(VEGF)在鼻息肉组织中的表达和微血管密度(MVD)值,并探讨3者之间在鼻息肉发病过程中的相互关系.方法:选取符合纳入标准的鼻息肉患者手术切除标本30例(鼻息肉组),选取同期单纯行鼻中隔偏曲矫正术中切除的下鼻甲组织10例(对照组).采用免疫组织化学SP法检测鼻息肉组和对照组p-STAT3、VEGF及MVD值.结果:p-STAT3在鼻息肉中黏膜上皮及腺体表达的阳性率为60%,鼻息肉组p-STAT3表达明显高于对照组(P<0.01).VEGF在鼻息肉中黏膜上皮及腺体表达的阳性率为70%,鼻息肉组VEGF表达明显高于对照组(P<0.01).鼻息肉组、对照组中MVD值分别为22.78±7.89、7.12±2.84.p-STAT3在鼻息肉中的表达与VEGF、MVD密切相关,随着p-STAT3强度的增加,VEGF分级及MVD值亦增加.结论:鼻息肉组织中p-STAT3、VEGF与MVD的表达明显增加,且3者之间呈正相关;p-STAT3与鼻息肉的血管生成密切相关,阻断STAT3通路即可阻断血管生成,阻止鼻息肉的形成、发生、发展及复发.     

钙激活氯通道和黏蛋白在变应性鼻炎中的表达与意义

目的:探讨人钙激活氯通道1(hCLCA1)和黏蛋白MUC5AC在变应性鼻炎黏液高分泌中的表达水平及临床意义。方法:采用RT-PCR技术和免疫组织化学法,检测20例变应性鼻炎患者(变应性鼻炎组)和7例正常人(对照组)hCLCA1和MUC5AC在下鼻甲黏膜的表达水平。结果:变应性鼻炎组鼻黏膜hCLCA1mRNA表达阳性,而对照组未出现hCLCA1mRNA的表达,两者比较差异有统计学意义(P<0.01);变应性鼻炎组MUC5ACmRNA表达和MUC5AC蛋白表达均较对照组明显增多(均P<0.01);变应性鼻炎组鼻黏膜hCLCA1mRNA表达与MUC5ACmRNA和蛋白表达均呈直线正相关(r=0.752、0.694,均P<0.05)。结论:hCLCA1mRNA表达的上调可能在变应性鼻炎黏液高分泌中起着关键作用,抑制hCLCA1的表达将为变应性鼻炎的治疗提供新的策略。     

IGF-ⅠR在鼻息肉组织中的表达与变应性因素的关系

目的:探讨胰岛素样生长因子-1受体(IGF-ⅠR)在鼻息肉组织中的表达及其与变应性因素的关系。方法:使用荧光定量PCR技术和免疫组织化学技术分别检测40例伴鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎患者的鼻息肉组织(CRSWNP组)和20例鼻中隔偏曲患者的中鼻甲组织(对照组)中IGF-ⅠR mRNA及其蛋白的表达并进行统计学分析。结果:IGF-ⅠR蛋白在CRSWNP组及对照组的阳性率分别为70.8%和12.3%,IGF-ⅠR mRNA在2组的表达分别为0.748±0.111和0.107±0.208,CRSWNP组IGF-ⅠR蛋白和IGF-ⅠR mRNA的表达均显著高于对照组(均P<0.01);CRSWNP组中,有、无鼻内镜手术史和有、无合并变应性因素组间的IGF-ⅠR mRNA表达均差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:IGF-ⅠR在CRSWNP的发病机制中发挥作用,变应性因素不是IGF-ⅠR的表达的直接影响因素。     

表面活性物质A在慢性鼻窦炎鼻息肉组织中的表达及意义

目的:检测表面活性物质A(SP-A)在鼻息肉组织及鼻黏膜组织中的表达情况,探讨其在慢性鼻窦炎发病中的作用及意义.方法:对20例鼻息肉组织(鼻息肉组)和20例F鼻甲黏膜组织(对照组)进行SP-A的免疫组织化学检测和半定量RT-PCR检测.结果:SP-A主要表达在鼻息肉组织上皮细胞内和浆细胞细胞质内;在浆液性腺体细胞内有表达,在黏液性腺体细胞内无表达.SP-A在对照组中的表达与在鼻息肉组中的表达位置相同,但二者之间的表达差异有统计学意义(P<0.05).SP-A mRNA在鼻息肉组和对照对照组均表达,在鼻息肉组中SP-A/β-actin表达强度比率强于其在对照组中的表达(P<0.05).结论:SP-A mRNA和蛋白均在鼻息肉和鼻黏膜组织中表达,但在对照组中的表达上调.SP-A在天然免疫中的作用可能是慢性鼻窦炎发病机制中的重要因素,为慢性鼻窦炎的治疗提供了新的治疗靶点.     

尼古丁对人RPE细胞及HUVEC的影响

目的 探讨尼古丁对人视网膜色素上皮(RPE)细胞和血管内皮细胞(HUVECs)中血管内皮生长因子(VEGF)表达及形成新生血管能力的影响。方法 MTT法检测尼古丁对两种细胞增殖的影响;划痕及成管实验检测其对HUVECs迁移、成管的影响;RT-PCR和Western blotting法检测两种细胞经尼古丁处理后VEGF、PEDF mRNA及蛋白的表达。结果 尼古丁促进HUVECs增殖、迁移、成管(P<0.05), 但对ARPE-19细胞增殖无影响(P>0.05), 且高浓度(100 μmol/L)时抑制细胞增殖(P<0.01)。尼古丁以剂量和时间依赖方式促进两种细胞VEGF mRNA及蛋白的表达, 抑制PEDF mRNA及蛋白的表达, 上调VEGF/PEDF基因表达的比率(P<0.05)。结论 尼古丁可上调ARPE-19细胞和HUVECs中VEGF/PEDF基因表达的比率, 促进HUVECs增殖、迁移、成管。     

微小RNA通过SIRT1调控小鼠耳蜗老化HEI-OC1细胞凋亡的研究

目的 构建小鼠耳蜗毛细胞株HEI-OC1(house ear institute-organ of Corti 1)老化模型,探索微小RNA-96(miR-96)可否通过SIRT1调控老化HEI-OC1凋亡。方法 CCK-8筛选D-半乳糖浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测p53、p38、caspase-3蛋白表达。q RT-PCR检测miR-96、SIRT1 mRNA表达,Western blot检测SIRT1蛋白表达。miR-96模拟物转染HEI-OC1细胞,qRT-PCR检测miR-96、SIRT1 mRNA表达,Western blot检测SIRT1、caspase-3蛋白表达。结果 HEI-OC1细胞在15 mg/ml D-半乳糖条件下培养72 h后,凋亡较对照组显著增加（P<0.01）,且p53、p38(P<0.05)及caspase-3(P<0.0001)蛋白表达明显增加。老化组miR-96与SIRT1 mRNA和蛋白表达均明显减低（P<0.05）。miR-96过表达后,SIRT1 mRNA及蛋白较对照组表达升高,caspas...