新生鼠呼吸道感染CVB3致气道炎症的病理学观察

目的：观察病毒感染对气道炎症、肺炎形态学的影响以及持续的气道反应性增高,探讨病毒感染与呼喘的关系。方法：建立新生儿大鼠病毒感染模型,出生5d新生鼠超声雾化吸入柯萨奇病毒B3（CVB3）,接种后10d取血查CVB3－IgM;接种后10d,30d分别观察湿肺质量与鼠体质量比值（LW／BW）、气道肺病理学改变。结果：病毒组新生鼠血清中CVB3－IgM的D值均在对照组-/x 2s以上接种后10dLW/BW比值病毒组明显高于对照组（P＜0．01）。病理学检查：急性期炎症改变显;接种后30d仍有持续的形态学及细胞学改变。结论：新生鼠吸入CVB3模型成立,并有持续的气道炎症及肺形态学改变。     

柯萨奇B3m病毒感染新生乳鼠致急性病毒性心肌炎模型的研究

目的 探讨制备柯萨奇B3m病毒感染Balb/C新生乳鼠急性病毒性心肌炎模型的实验途径。方法 地柯萨奇B3m亲心肌株病毒进行增毒，滴定TCID50后感染Balb/C新生乳鼠。CVB3m病毒感染组3窝共21只，对照组3窝共20只。感染组每只乳鼠腹腔内接种1000TCID50CVB3m病毒液0.04ml，对照组每只乳鼠腹腔内接种1640维持液0.04ml。观察感染乳鼠的发病及心肌病理变化。结果 感染组乳鼠在感染CVB3m后48～72h发病，心肌病理变化以多形核细胞、单核细胞和巨噬细胞浸润为主要特征，心肌小血管壁内皮细胞受损，心肌细胞变性、肿胀；对照组乳鼠未见发病。结论 柯萨奇B3m病毒是急性心肌炎的重要病原体，其毒力及接种量与发病密切相关，本模型为研究急性病毒性心肌炎的发病机制及抗病毒药物的筛选奠定了基础。     

定量RT-PCR法对"苦参"在心肌炎模型中药效学研究

目的用定量RT-PCR法检测"苦参"中抗柯萨奇B病毒有效成份"抗柯注射液",在Balb/c小鼠病毒性心肌炎模型病毒血症时,对抗"柯萨奇B病毒"的药效.方法取48只雄性18～22g8周龄的Balb/c小鼠,随机分成A～H共8组,每组6只.1.各治疗组(A～F组),每只小鼠从腹腔接种0.1ml104TCID50CVB3m病毒2h后,每天从尾静脉分别注射抗柯注射液,5、10、15、20、25、30mg/kg,2次/d,连续用药3d.2.病毒组(G组),注射病毒同上法,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d.3.空白对照组(H组),腹腔内注射无小牛血清的RPMI-1640培养液,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d.结果空白组CVB-RNA(-)对接种CVB3m感染后用不同剂量"抗柯注射液"治疗的各小组血液中CVB3m-RNA含量与病毒组相比明显下降,其抑制率(%)与所用抗柯注射液的剂量呈正比,即"抗柯"剂量增加,CVB3m-RNA含量下降的幅度亦增加,每天5～30mg/kg中的各剂量都有明显抑制病毒增殖的作用.结论用定量RT-PCR法检测到"抗柯注射液"对Balb/c小鼠病毒性心肌炎病毒血症时效果明显,最小有效剂量为5mg@kg-1@d-1.     

病毒感染与小儿短暂性滑膜炎关系的研究

探讨小儿短暂性滑膜炎与病毒感染 ,特别是柯萨奇B组病毒 (CVB)感染的关系。方法 :采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)对 16 2例小儿髋关节短暂性滑膜炎患儿静脉血和其中的 2 1例关节腔液进行病毒IgM抗体检测 ,柯萨奇病毒B组 (CVB)阳性者进行血清学分型及病毒分离。结果 :在 16 2例静脉血样本中病毒IgM阳性 6 2例 ,占总检数的 38.2 7% ,CVB -IgM2 6例占 16 .0 5 % ,AdV -IgM 19例占 11.73% ,CMV -IgM 10例占 6 .17% ,RSV -IgM 4例占 2 .4 7% ;在关节腔液中检出 9例CVB阳性 ,血清学分型 8例为CVB3,1例为CVB4 ,并分离出 1例CVB3。结论 :CVB和腺病毒 (AdV)是小儿髋关节短暂性滑膜炎感染的主要病毒 ,而且以CVB3为主。     

CVB3感染对Hela细胞凋亡的影响

目的:观察CVB3感染对Hela细胞形态及凋亡变化的影响。方法:以CVB3感染Hela细胞建立病毒性感染细胞模型,观察细胞形态学变化,并以FITC-Annexin V联合PI双染色定量检测凋亡细胞。结果:CVB3感染Hela细胞后,可引起细胞病变效应;CVB3感染Hela细胞后,在一定时间段内凋亡程度随时间延长而增高。病毒组各时间点Hela细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论:CVB3感染Hela细胞后可使Hela细胞发生凋亡,并随着病毒感染时间的延长,细胞凋亡增多。     

P27KiP-1蛋白对支气管哮喘大鼠气道平滑肌增生的影响

目的 探讨P27Kip-1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增生及气道重塑的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠30只,随机分成对照组(C)、哮喘4周组(A1)、哮喘6周组(A2)每组10只.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型,末次激发后24h内测气道反应性和观察气道壁炎性细胞的浸润情况,图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度;免疫组化法检测增生细胞核抗原(PCNA)及P27Kip-1表达.结果 哮喘4周和6周组P27Kip-1蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05),且6周组低于4周组(P＜0.05);哮喘4周和6周组PCNA表达、支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度和气道反应性均显著高于对照组(P＜0.01),且6周组高于4周组(P＜0.01).结论 P27Kip-1可抑制气道平滑肌细胞增生进而影响气道重构与气道高反应性.     

反复吸入牛奶对家兔气道反应性的影响

据Pediatr Pulmonol(2000，29：113)载，美国Colombo等报告，家兔反复吸入少量牛奶可导致气道持久炎症及气道反应性升高，并伴有支气管灌洗液中性粒细胞或嗜酸粒细胞增多。 有资料表明，哮喘与胃食管反流(GER)有关，约50％～60％哮喘息儿存在异常GER。其可能机制之一是吸入微量胃内容物通过刺激上气道受体或引起支气管炎导致支气管痉挛。为此，Colombo等利用家兔，研究了反复少量吸入牛奶对乙酰甲胆碱气道反应性的影响以及这种影响和细胞学检查结果的关系。 Colombo将15只新西兰/加利福尼亚杂交家兔分成两组：牛奶吸入组(8只)和生理盐水吸入对照组(7只)。每周在麻醉后给家兔气道内滴注牛奶或生理盐水1次，每次0.25ml/kg，共5 周。分别于滴注前、滴注开始后2、5周及最后一次滴注后3周测定麻醉家兔的跨肺压、流速、潮气量、中心气道阻力和动态肺顺应性。 结果显示，每组家兔灌注前及灌注后各观察点的气道反应性无显著差异。但与对照组相比，牛奶吸入组最后一次滴注前的乙酰甲胆碱反应性显著升高(P=0.03)。同时牛奶吸入组第5周的支气管灌洗液中性粒细胞百分比显著升高(P=0.01)，恢复期支气管灌洗液的嗜酸粒细胞百分比显著升高(P=0.05)。 这些发现支持微量吸入可能是GER患儿气道反应性升高的原因。 摘自《中国医学论坛报》2000年8月31日9版     

小鼠呼吸道合胞病毒感染肺TLR4表达与气道高反应性

目的:研究小鼠呼吸道合胞病毒(RSV)感染对肺TLR4表达与气道高反应性的影响。方法:生后6周16只清洁级BALB/c小鼠被同等分成RSV感染组和对照组,感染后1周两组经吸入相同递增浓度乙酰甲胆碱检测气道高反应性,使用RT-PCR方法测定肺组织TLR4mRNA表达,并对二者的相关性进行了分析。结果:在吸入乙酰甲胆碱浓度为3.2g/L时两组气道阻力差异有显著性(P<0.01)。TLR4/β-actin的值分别为对照组0.239±0.055,RSV感染组0.361±0.102,两组间有显著性差异(P<0.05);TLR4 mRNA表达与吸入3.2g/L乙酰甲胆碱时的气道反应性呈正相关,相关系数为0.721(P<0.05)。结论:小鼠RSV感染后肺TLR4表达增强并呈气道高反应性,二者之间有显著正相关。     

白三烯拮抗剂联合吸入糖皮质激素治疗慢性中度持续支气管哮喘的疗效

目的 观察白三烯拮抗剂联合吸入糖皮质激素对慢性中度持续支气管哮喘患者的临床疗效、对肺功能(FEV1)、晨晚间PEF值、气道反应性(PC20FEV1)和治疗有效率等的影响,评价其在哮喘治疗中的作用和地位.方法 162例患者随机分为观察组和对照组,观察组:丙酸倍氯米松气雾剂(必可酮)吸入250 μg,3次/d,加孟鲁司特(顺尔宁)10 mg,口服,1次/d;对照组:丙酸倍氯米松(必可酮)吸入250μg,3次/d.两组患者均可根据病情需要吸入沙丁胺醇气雾剂(万托林).疗程均为4周.两组治疗前后测定肺功能(FEV1),晨晚间PEF值,气道反应性(PC20FEV1),同时记录日间哮喘症状评分、夜间憋喘次数、每周吸入沙丁胺醇气雾剂次数剂量等,治疗结束后作出临床症状评价及疗效判断.结果 两组治疗后日间哮喘症状评分、夜间憋喘次数、每周吸入沙丁胺醇气雾剂次数剂量较治疗前均有显著减少(P＜0.05),两组治疗后肺功能(FEV1)、晨晚间PEF值、气道反应性(PC20FEV1)较治疗前均显著改善(P＜0.05),但观察组与对照组上述指标治疗后组间比较差异有显著性(P＜0.05).结论 白三烯拮抗剂联合吸入糖皮质激素治疗慢性中度持续支气管哮喘患者,能显著减轻哮喘气道阻塞和气道高反应性,减少哮喘发作次数、改善哮喘症状、减少吸入沙丁胺醇气雾剂次数剂量,值得临床推广应用.     

定量RT-PCR法对"苦参"在心肌炎模型中药效学研究

目的用定量RT-PCR法检测“苦参”中抗柯萨奇B病毒有效成份“抗柯注射液”,在Balb/c小鼠病毒性心肌炎模型病毒血症时,对抗“柯萨奇B病毒”的药效。 方法取48只雄性18-22g 8周龄的Balb/c小鼠,随机分成A-H共8组,每组6只。1.各治疗组(A-F组),每只小鼠从腹腔接种0.1ml l04TCID50 CVB3m病毒2h后,每天从尾静脉分别注射抗柯注射液,5、10、15、20、25、30mg/kg,2次/d,连续用药3d。2.病毒组(G组),注射病毒同上法,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d。3.空白对照组(H组),腹腔内注射无小牛血清的RPMI-1640培养液,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d。 结果 空白组CVB-RNA(-)对接种CVB3m感染后用不同剂量“抗柯注射液”治疗的各小组血液中CVB3m-RNA含量与病毒组相比明显下降,其抑制率(％)与所用抗柯注射液的剂量呈正比,即“抗柯”剂量增加,CVB3m-RNA含量下降的幅度亦增加,每天5-30mg,/kg中的各剂量都有明显抑制病毒增殖的作用。 结论用定量RT-PCR法检测到“抗柯注射液”对Balb/c小鼠病毒性心肌炎病毒血症时效果明显,最小有效剂量为5mg·kg-1·d-1。     

柯萨奇B组病毒感染的血清流行病学分析

目的：探讨柯萨奇病毒Ｂ组１至６型和青少年病毒性心肌炎的血清流行病学关系。方法：采用间接ＥＬＩＳＡ法检测３１例病毒性心肌炎患者和４７名义务献血员血清。结果：病毒性心肌炎患者血清中ＣＶＢ－ＩｇＭ抗体阳性率明显高于义务献血人员,ＣＶＢ１—６的ＩｇＭ抗体阳性率依次为：ＣＶＢ３、ＣＶＢ４、ＣＶＢ１、ＣＶＢ２、ＣＶＢ５、ＣＶＢ６。结论：从血清学诊断上提示了ＣＶＢ（尤其是ＣＶＢ３）是病毒性心肌炎的重要病原体。     

大蒜多糖对小鼠病毒性心肌炎的治疗作用

目的 :探讨大蒜多糖对实验性小鼠病毒性心肌炎的治疗作用。方法 :采用BALB C小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立实验性小鼠病毒性心肌炎模型。小鼠随机分为正常对照组、模型组、大蒜多糖组、黄芪组。注射病毒 1h后给药 ,连续 7d ,于第 8d处死存活鼠取材。观察小鼠存活率及心肌病理变化 ,测定血清心肌酶、丙二醛(MDA)、一氧化氮 (NO)含量和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活力、心肌组织中病毒滴度及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果 :大蒜多糖治疗组与模型组相比小鼠存活率明显增高 ,心肌组织病理损伤减轻 ,血清心肌酶、MDA、NO含量显著降低 ,GSH Px活力升高 ,心肌组织中病毒滴度及iNOS表达降低。结论 :大蒜多糖对实验性小鼠病毒性心肌炎具有治疗作用     

茱萸颗粒对大鼠心肌细胞抗柯萨奇病毒感染的实验研究

目的　观察茱萸颗粒对大鼠心肌细胞抗CVB3病毒感染的作用。方法　用CVB3病毒感染大鼠心肌细胞 ,观察正常心肌对照组、病毒感染组、茱萸颗粒给药组心肌细胞病理变化和心肌酶谱变化。结果　茱萸颗粒可明显降低CVB3病毒感染后心肌细胞的病理改变和心肌细胞酶的释放 ,茱萸颗粒浓度 4 .0mg/mL的给药组与病毒对照组有非常显著差别。结论　茱萸颗粒具有较强的保护心肌细胞和助心肌细胞抗CVB3病毒感染的作用      

白芍总苷对柯萨奇B3病毒感染大鼠原代心肌细胞的血清药理学干预

目的探讨白芍总苷（TGP）对柯萨奇B3病毒（CVB3）感染大鼠原代心肌细胞有无保护作用。方法取SD乳鼠心室肌制备大鼠原代心肌细胞,培养72h后,用不同剂量的TGP含药血清干预100 TCID50 CVB3感染心肌细胞,对比分析干扰素组、双黄连组、正常对照组。观察细胞病变,24h后测定细胞上清液中的cTnⅠ、CK、LDH以及用MTT法检测细胞存活率。结果TGP高剂量组可减轻心肌细胞病变,减少cTnⅠ、CK、LDH的释放。结论TGP对CVB3感染大鼠原代心肌细胞有保护作用。     

穿孔素介导的细胞毒效应在病毒性心肌炎小鼠发病中的作用

目的探讨穿孔素（ＰＦＰ）介导的细胞毒效应在病毒性心肌炎（ＶＭＣ）发病中的作用。方法４０只小鼠等分为ＣＶＢ３感染组及非感染组;所有小鼠于感染后第１０天处死并取其心脏;采用免疫组化技术检测心肌浸润细胞中ＰＦＰ的表达,原位杂交方法检测心肌中ＣＶＢ３ＲＮＡ;半定量分析ＰＦＰ抗原及ＣＶＢ３ＲＮＡ水平,并分析ＰＦＰ抗原水平与ＣＶＢ３复制及心肌病变程度的关系。结果ＰＦＰ抗原阳性信号指数与ＣＶＢ３ＲＮＡ杂交阳性信号指数呈显著负相关（ｒ＝－０．８２,Ｐ＜０．０５）,与心肌病变积分呈显著正相关（ｒ＝０．９１,Ｐ＜０．０５）。结论ＰＦＰ介导的细胞毒效应在ＶＭＣ发病中可能具有抗病毒及致心肌损害双重作用。     

呼吸道合胞病毒感染对豚鼠肺组织M受体变化的影响

目的:研究豚鼠感染呼吸道合胞病毒(RSV)后不同时间内肺组织M胆碱能受体数量和功能的改变。方法:建立RSV感染豚鼠的动物模型,用放射配基结合分析法测定肺组织M胆碱能受体的数量和亲和力。结果:鼻内滴入RSV3天后,豚鼠肺组织就出现炎症改变,5～7天达高峰,14天基本恢复正常。肺组织病毒分离及免疫荧光检查均证实为RSV感染。放射配基结合分析表明肺组织M受体在感染RSV后3天就出现受体最大结合容量(Bmax)增高,平衡解离常数(Kd)值降低,第5、7天时,Bmax达高峰,Kd值达最低值,第21天仍与对照组差异显著(P<0.05)。结论:鼻内滴入RSV可形成豚鼠RSV感染模型。RSV感染后引起肺组织M受体数量的增加,亲和力上升,这种改变持续时间较长,是引起气道高反应性的主要原因之一。     

硒对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制

目的: 探讨硒对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,阐明其对PI3K-Akt信号传导通路中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)及其下游靶基因编码的Bax和Bcl-2蛋白的作用机制。 方法: 60只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组和硒干预组(n=20)。正常对照组小鼠连续3 d腹腔注射不含病毒的培养液200 μL;病毒对照组小鼠腹腔注射100半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)柯萨奇病毒B组病毒(CVB3)液200μL,连续3d;硒干预组小鼠在病毒对照组同样的处理后灌胃给予100 μg·kg^-1亚硒酸钠,每日1次,连续处理14d。接种CVB3的第15天处死小鼠,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况,光镜下观察心肌病理变化,Western blotting法检测心肌细胞中Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。 结果: 与病毒对照组比较,硒干预组小鼠生存率明显升高(P<0.01)。硒干预组小鼠的心肌病理改变较病毒对照组减轻。硒干预组小鼠心肌细胞凋亡率低于病毒对照组(P<0.01)。与病毒对照组比较,硒干预组小鼠心肌细胞中p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平增加,Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低,Bax/Bcl-2蛋白比值下降(均P<0.01)。 结论: 硒对CVB3感染导致的VMC小鼠心肌细胞有保护作用,其作用机制与硒通过活化心肌细胞的PI3K-Akt信号通路、调控其下游Bcl-2和Bax蛋白表达和抑制心肌细胞凋亡有关。     

黄芪对柯萨奇病毒B3感染小鼠心肌线粒体结构及离子泵活性的影响

目的 :观察柯萨奇病毒B3 (CVB3 )感染小鼠心肌线粒体结构和离子泵活性的变化 ,以及黄芪的治疗作用。方法 :雄性Balb/c小鼠随机分为CVB3 感染组、CVB3 感染加黄芪治疗组和对照组 ,比较线粒体超微结构及线粒体Na+ K+ ATP酶、Ca2 + ATP酶活性。结果 :感染组线粒体结构破坏 ,Na+ K+ ATP酶、Ca2 + ATP酶活性下降。黄芪治疗组线粒体结构破坏较轻 ,Na+ K+ ATP酶、Ca2 + ATP酶活性较感染组高。结论 :CVB3 感染早期即可见心肌线粒体结构破坏 ,离子泵活性下降。黄芪可提高离子泵活性 ,稳定心肌线粒体膜     

C3d对分泌型柯萨奇病毒B组3型VP1 DNA疫苗的免疫增强作用

目的 构建分泌型柯萨奇病毒B组3型（CVB3）衣壳蛋白1（sVPl）与三拷贝补体3片段（C3d3）融合基因疫苗,并观察其免疫效果。方法 将C3d3 cDNA与带有白细胞介素2（IL-2）信号肽的CVB3VPl基因拼接,构建真核表达质粒pcDNA3／sVP1-C3d3。BALB／c小鼠随机分为3组,分别肌肉注射pcDNA3／sVP1-C3d3、pcDNA3／sVP1和pcDNA3质粒,于不同时间检测小鼠血清中和抗体滴度、特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性、血中病毒滴度,并观察疫苗的免疫保护作用。结果 小鼠的中和抗体滴度随免疫次数增加而提高,第3次免疫后pcDNA3／sVP1-C3d3组中和抗体滴度（33．6±1．7）和特异性CTL杀伤率（66．1％±2．9％）均明显高于pcDNA3／sVP1组（28．3±1．7,52．8％±3．3％,均P〈0．05）;以致死量CVB3感染小鼠后,经融合基因免疫的小鼠血中病毒滴度显著降低,生存率达50％,而pcDNA3／sVP1组仅为25％,pcDNA3组无存活。结论 C3d可以显著增强sVPI基因免疫诱导的特异性免疫应答。