4'-去甲基表鬼臼毒素芳香酰胺类衍生物的设计、合成及其抗肿瘤活性

目的为寻找高效低毒且作用谱广的鬼臼脂素类抗肿瘤药物,合成了20个4'-去甲基表鬼臼毒素芳香酰胺类化合物。方法以4'-去甲基表鬼臼毒素为原料,首先与氯乙腈进行取代反应,再与硫脲反应,最后与不同的取代芳香羧酸成酰胺制得目标化合物。采用MTT法测定目标化合物体外对人肺腺癌细胞A549、人肝肿瘤细胞株HepG2、人口腔癌KB细胞、L1210白血病细胞的抑制活性。结果与结论合成了20个未见文献报道的新化合物,目标化合物的结构均经~1H-NMR和MS谱确证,活性测试结果表明,大部分目标化合物均具有一定的肿瘤细胞增殖抑制活性。     

4-O-卤代酰基-4′-去甲基表鬼臼毒素类似物的合成与抗肿瘤活性

为考察4′-去甲表鬼臼毒素C₄位上联结含卤素原子的酯化侧链时对化合物抗肿瘤活性的影响,设计并采用选择性酯化方法合成了9个新的4′-去甲基表鬼臼毒素酯化产物。其中标题化合物在L₁₂₁₀白血病肿瘤细胞与KB细胞的体外生长抑制试验中普遍表现出显著的抑制活性,大部分化合物活性超过依托泊甙。而普通脂酸酯的活性较弱。     

4-O-卤代酰基-4′-去甲基表鬼臼毒素类似物的合成与抗肿瘤活性

为考察4′-去甲表鬼臼毒素C_4位上联结含卤素原子的酯化侧链时对化合物抗肿瘤活性的影响,设计并采用选择性酯化方法合成了9个新的4′-去甲基表鬼臼毒素酯化产物。其中标题化合物在L_(1210)白血病肿瘤细胞与KB细胞的体外生长抑制试验中普遍表现出显著的抑制活性,大部分化合物活性超过依托泊甙。而普通脂酸酯的活性较弱。     

高效液相色谱法测定窝儿七中鬼臼毒素和4'-去甲基鬼臼毒素的含量

目的建立高效液相色谱法测定窝儿七中鬼臼毒素和4'-去甲基鬼臼毒素的含量。方法色谱柱为COSMOSIL-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温25℃;以甲醇为流动相A,0.4%磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱;流速1 m L·min-1;检测波长330 nm。结果 4'-去甲基鬼臼毒素、鬼臼毒素的线性范围分别为4.5~224.0μg·m L-1(r=0.999 2)和20.0~1 000.0μg·m L-1(r=0.999 4),平均回收率分别为99.8%(RSD=1.5%)和99.8%(RSD=1.7%)。结论本方法灵敏、准确、重复性好,为窝儿七的质量控制提供参考依据。     

4-(2-氨基-2-环戊氧羰基)乙硫基-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素及其酰化衍生物的合成与抗肿瘤活性

为了考察鬼臼毒素 C_4位侧链取代基变化对活性的影响,合成28个标题化合物。体外 L1210白血病细胞及 KB 细胞生长抑制试验结果,表明所有化合物均具不同程度的抗肿瘤活性,其中化合物(1)、(5)和(8)～(10)的活性超过临床用药依托泊甙。     

去甲基脱氧鬼臼毒素衍生物DPPC诱导A549细胞凋亡的研究

目的 探讨鬼臼毒素衍生物L-N-甲酰-4′-去甲基脱氧鬼臼-甲硫-4-N-哌嗪酰胺(DPPC)抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖作用,阐述DPPC诱导A549细胞凋亡的相关分子机制.方法 体外培养A549细胞,Ho-chest33258检测DPPC处理A549细胞后细胞凋亡现象;Annexin V-FITC/PI双染定量检测DPPC处理后细胞凋亡数量;蛋白免疫印迹实验检测凋亡基因p53、caspase-3、Bax的表达.并与依托泊苷(阳性对照组)和未给予任何药物处理的A549细胞做对照.结果 DPPC组A549细胞中γ-H2AX的表达量较阴性对照组和阳性对照组都有明显的增加.荧光显微镜下见DPPC处理后的A549细胞核呈现萎缩,并出现细胞凋亡小体.与阴性对照组比较,不同浓度DPPC处理A549细胞后,抑制肿瘤发生发展的p53基因表达增加,并呈剂量依赖性,其下游的凋亡相关蛋白caspase-3以及Bax表达增加(P<0.05,P<0.01).相同浓度的DPPC和依托泊苷抑制凋亡相关蛋白有明显的差异(P<0.05).结论 DPPC能够引起A549细胞DNA损伤,并诱导细胞凋亡,DPPC能够使细胞内凋亡相关蛋白表达异常,抑制A549细胞增殖;此外,DPPC体外表现出优越的抗肿瘤细胞增殖作用.     

4－（取代氨基酸酰胺基）－4－脱氧－4′－去甲基表鬼臼毒素的合成及其抗肿瘤活性

合成了１８个Ｎ－苄氧羰基保护的４－取代氨基酸酰胺基－４－脱氧－４′－去甲基表鬼臼毒素衍生物。它们在体外试验中显示出良好的抗Ｌ１２１０白血病细胞（ＩＣ５０２．７×１０－１～４．０×１０－４ｍｇ／Ｌ）和ＫＢ细胞的活性，部分新化合物的抗Ｌ１２１０和ＫＢ细胞的活性超过依托泊甙［Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ，ＩＣ５０（Ｌ１２１０）１．０×１０－１ｍｇ／Ｌ］。     

红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的探讨红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及其作用机制。方法以MTT法检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L分别在24、48、72 h对人宫颈癌HeLa细胞增殖作用的影响,并在倒置显微镜下观察HeLa细胞形态学改变。流式细胞仪检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L对HeLa细胞凋亡的影响。实时荧光定量PCR仪检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L对HeLa细胞凋亡中调节基因Bax、Bcl-2表达水平的影响。结果红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,表现为时间、浓度的相关性。红三叶异黄酮对HeLa细胞的形态学改变,表现为随药物浓度增加细胞固缩变小,并出现凋亡小体。流式细胞仪检测分析显示红三叶异黄酮能引起HeLa细胞凋亡,并随药物浓度的增加而明显,当红三叶异黄酮达到一定有效浓度时,诱导其细胞凋亡。通过调节Bax mRNA与Bcl-2 mRNA的表达,促进抑制HeLa细胞增殖,能使Bax表达上升、Bcl-2表达下降,且呈剂量相关性。结论红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有抑制作用,并呈一定的剂量和时间相关性,提示通过调节Bax mRNA与Bcl-2 mRNA的表达,促进抑制HeLa细胞增殖。     

激活AKT和ERK可拮抗N-去甲基克拉霉素对HeLa细胞的凋亡诱导作用

目的研究Akt和ERK的激活在N-去甲基克拉霉素诱导HeLa细胞凋亡中作用。方法MTT法测定N-去甲基克拉霉素对HeLa细胞的细胞毒作用;荧光染色观察细胞形态学变化;用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化;用Western blot法分析药物对蛋白质表达的影响。结果N-去甲基克拉霉素明显诱导HeLa细胞凋亡,其作用呈明显的时间依赖性。Akt抑制剂和ERK抑制剂(PD98059)能促进N-去甲基克拉霉素诱导HeLa细胞凋亡,形态学观察可见凋亡小体的形成,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA条带。Western blot结果显示,N-去甲基克拉霉素作用HeLa细胞24h后,Akt和磷酸化Akt蛋白表达减少,同时ERK和磷酸化ERK蛋白表达也减少。结论N-去甲基克拉霉素通过激活Akt和ERK对其诱导HeLa细胞凋亡起拮抗作用。     

HPLC-DAD法测定脑血栓片中苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮ⅡA

目的建立测定脑血栓片中苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮ⅡA的HPLC-DAD法。方法采用HPLC-DAD法,Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.7μm);流动相:甲醇–0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长分别为210 nm(苦杏仁苷)、403 nm(羟基红花黄色素A)、230 nm(芍药苷)、321 nm(阿魏酸)、286 nm(丹酚酸B)、270 nm(丹参酮ⅡA);体积流量:0.7 m L/min;柱温:30℃;进样量3~5μL。结果苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮ⅡA 6个成分的线性范围分别为11.90~1 158.90、9.14~91.39、11.70~1 173.50、4.04~1 011.00、3.97~992.20、4.40~551.00 ng;平均回收率分别为96.47%、96.92%、99.96%、97.20%、97.57%、96.50%,RSD值分别为1.3%、1.6%、1.3%、1.7%、1.9%、0.7%。结论所建立的方法可同时测定脑血栓片中苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮ⅡA。     

四嗪二甲酰胺对肺癌细胞株A549的体内外作用

为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肺癌细胞株A549增殖、诱导细胞凋亡和体内抗肿瘤活性的作用及其机制，将不同浓度的ZGDHu-1与A549细胞在体外培养，用台盼蓝染色、SRB法、5′-溴-2′脱氧尿苷-ELISA法，观察ZGDHu-1对A549细胞增殖的作用；用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin V/PI双标记、Hoechst 33258荧光染色等技术检测细胞凋亡。腹腔注射ZGDHu-1后观察其对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。用RT-PCR和流式细胞术观察A549细胞bcl-2，bax，p53基因和蛋白质的表达改变。结果表明，ZGDHu-1能抑制A549细胞的增殖和活力，呈现作用时间和剂量的依赖关系。A549细胞经ZGDHu-1作用后，大部分细胞阻滞于G₂-M期；出现DNA片段化，亚G₁峰显著增加，Annexin V+/PI-表达升高，Hoechst 33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等。ZGDHu-1以10，20及40 mg·kg^-1剂量给裸鼠体内用药14 d后，移植瘤生长抑制率分别为43.7%，56.9%和60.0%。A549细胞经ZGDHu-1作用后，bcl-2基因和蛋白有所下调，但主要是上调bax基因和蛋白，导致bax/bcl-2比值明显增高，p53基因和蛋白表达也上调，均呈现剂量依赖性。ZGDHu-1在体内能明显抑制移植瘤的生长，体外通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞增殖，其机制可能与上调bax和p53基因的表达有关。     

藤苦参素的体外抗肿瘤活性及其对癌细胞凋亡的作用

藤苦参（Streptocaulon griffithii Hook．f．）系萝摩科（Asclepiadaceae）马连鞍属（Streptocaulon Wight et Arn．）植物马连鞍的干燥根，又名古羊藤、南苦参、有毛老鸦嘴、虎阴藤、红藤、地苦参、小暗消、哈骂醒合（傣语）、哈骂不果（哈语）等，产于我国广西、贵州、云南等地。藤苦参为傣药经方雅叫哈顿散中的主治药之一，雅叫哈顿散已被中国药典2005版（一部）收载。张琳等研究了藤苦参的化学成分，未见有关藤苦参药理作用的研究报道。文献资料表明，藤苦参的同属植物多具有抗肿瘤作用。本实验对从藤苦参中分离得到的藤苦参素的体外抗肿瘤活性及其对癌细胞凋亡的作用进行研究。     

Antrodia camphorata inhibits proliferation of human breast cancer cells in vitro and in vivo

Antrodia camphorata (A. camphorata) has been shown to induce apoptosis in cultured human breast cancer cells (MDA-MB-231). In this study, we report the effectiveness of the fermented culture broth of A. camphorata in terms of tumor regression as determined using both in vitro cell culture and in vivo athymic nude mice models of breast cancer. We found that the A. camphorata treatment decreased the proliferation of MDA-MB-231 cells by arresting progression through the G1 phase of the cell cycle. This cell cycle blockade was associated with reductions in cyclin D1, cyclin E, CDK4, cyclin A, and proliferating cell nuclear antigen (PCNA), and increased CDK inhibitor p27/KIP and p21/WAF1 in a dose and time-dependent manner. Furthermore, the A. camphorata treatment was effective in delaying tumor incidence in the nude mice inoculated with MDA-MB-231 cells as well as reducing the tumor burden when compared to controls. A. camphorata treatment also inhibited proliferation (cyclin D1 and PCNA) and induced apoptosis (Bcl-2 and TUNEL) when the tumor tissue sections were examined histologically and immunohistochemically. These results suggest that the A. camphorata treatment induced cell cycle arrest and apoptosis of human breast cancer cells both in vitro and in vivo.     

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组蛋白诱导肿瘤细胞体内外凋亡及其分子机制

目的 探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂（snake venom cystatin,sv-cystatin）重组蛋白对肿瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 将sv-cystatin重组蛋白（10,25,50,100,200 mg·L^–1）作用于B16F10和MHCC97H细胞,C57BL/6小鼠尾静脉注射B16F10细胞建立黑色素细胞荷瘤模型并给予25,50 mg·kg^–1的sv-cystatin重组蛋白干预,建立MHCC97H细胞BALB/c–nude裸鼠腋下皮内成瘤模型并给予25,50,100 mg·kg^–1的sv-cystatin重组蛋白干预,分别检测体内外细胞凋亡,检测重组蛋白体外作用后肿瘤细胞Bcl-2、Bcl-w和Bax的基因与蛋白表达,检测Cyto C蛋白表达和caspase-2、caspase-3酶活性。结果 与对照组相比,25,50,100,200 mg·L^–1的sv-cystatin重组蛋白能够增强2种肿瘤细胞的体外凋亡能力（P<0.05）;C57BL/6小鼠肺转移结节中B16F10细胞（50 mg·kg^–1）和BALB/c-nude腋下皮内肿瘤组织中MHCC97H细胞（100 mg·kg^–1）的凋亡增强（P<0.05）;体外处理B16F10和MHCC97H细胞后Bcl-2和Bcl-w的基因与蛋白表达均下降,Bax表达则增强（P<0.05）,Cyto C蛋白表达增强（P<0.05）,caspase-2和caspase-3的活性上调（P<0.05）。结论 Sv-cystatin重组蛋白能够促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。     

基于拟胚体面积的体外胚胎毒性模型的建立和验证

目的 利用小鼠胚胎干细胞,以拟胚体面积为分化抑制终点,构建体外胚胎毒性模型。方法 模型建立：分别用训练集10个化合物青霉素G、异烟肼、5-氟尿嘧啶、羟基脲、阿司匹林、氟康唑、地塞米松、丙戊酸钠、洛伐他汀、苯海拉明处理小鼠胚胎干细胞ES-D3和小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3 5 d,用细胞活力检测试剂盒检测细胞活性,得到相应的半数抑制浓度（IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}）;同时用10种化合物处理ES-D3细胞,用悬浮-悬滴培养的途径制备拟胚体,于第5天对拟胚体进行拍照,用 Image J 软件测量拟胚体的横截面积,并计算半数抑制细胞分化的浓度（ID₅₀）。根据得到的 IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀,用Python软件采用线性判别分析（LDA）拟合得到线性二分类判别式。模型验证：以上述同样的方法测定测试集3个化合物维生素C、布洛芬、顺铂的IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀,将其代入得到的判别式,并预测化合物的胚胎毒性。结果 通过训练集 10个化合物拟合出线性预测判别式为：判别值＝21.550 926 58×lg IC_{50 3T3}－7.600 241 83×lg IC_{50 D3}－14.007 571 16×lg ID₅₀＋6.675 517 2,判别值＜0,归为无胚胎毒性;判别值≥0,归为胚胎毒性。将测试集化合物的 IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀代入判别式,得到维生素C判别值＜0,为无胚胎毒性药物;顺铂和布洛芬判别值＞0,为胚胎毒性药物,均与文献中体内试验结果一致,预测正确。结论 基于拟胚体面积成功建立体外胚胎毒性模型。     

染料木素MePEG-PLGA共聚物胶束体内外抗肿瘤作用

目的 探讨染料木素MePEG-PLGA共聚物胶束对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抗肿瘤作用。方法 采用MTT法、Annexin V-FITC/PI染法分别考察染料木素MePEG-PLGA共聚物胶束对人肝癌SMMC-7721细胞的细胞毒性、细胞凋亡、细胞周期的影响;通过荷肝SMMC-7721瘤裸鼠体内抗肿瘤试验,考察染料木素胶束的体内抗肿瘤效应。结果 染料木素胶束对肝癌SMMC-7721细胞的抑制率均高于染料木素,最高抑制率分别可达83.26%,78.25%。流式细胞仪检测结果显示,染料木素胶束组能够提高染料木素对SMMC-7721细胞凋亡的诱导能力,并且呈浓度依赖性。5,10,20 μg·mL^-1的染料木素组和染料木素胶束组药物作用于SMMC-7721细胞48 h时,染料木素胶束能够明显提高染料木素对细胞G₂/M期细胞的阻滞作用,并且呈现浓度依赖性。体内抗肿瘤试验结果表明,相同浓度的染料木素胶束组的抑瘤效果显著强于染料木素乳剂组,呈浓度依赖性,最高抑瘤率可达55.41%。结论 染料木素MePEG-PLGA共聚物胶束在体内和体外均有显著的抗肝癌作用。     

整合素靶向性病毒载体对肿瘤细胞基因转导的促进作用

在进行基因导入研究及临床试验中，目前采用的载体通常包括了病毒及非病毒两大类。对于非病毒载体用于基因转染有许多报道。而腺病毒作为基因载体，因其具有的高效转导能力及对分裂或非分裂细胞均能转导等优点而被广泛应用于针对疾病的基因治疗中。对腺病毒进入细胞机制进行的深入研究结果发现，腺病毒与细胞结合的第一步是与细胞表面的柯萨奇腺病毒受体（coxsackie adenovirus receptor，CAR）结合，第二步是利用其在五角体基（pentonbase）中的RGD序列和细胞表面的整合素结合，     

Celecoxib in combination with retinoid CD437 inhibits melanoma A375 cell in vitro

This study aimed to investigate the effects of celecoxib, synthetic retinoid 6-[3-(1-adamantyl)-4-hydroxyphenyl]-2-naphthalenecarboxylicacid (CD437) and the combination of the two on cell proliferation, apoptosis, and cycle arrest of human malignant melanoma A375 cells. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide assay (MTT assay) was applied to determine the anti-proliferative effects of the drugs on human malignant melanoma A375 cells. Flow cytometry was performed to investigate the influence of the drugs on cell cycle and cell apoptosis. Both celecoxib and CD437 could inhibit the growth of human malignant melanoma A375 cells in a dose-dependent manner. Celecoxib at 80 μmol/L inhibited proliferation, induced apoptosis and G₂/M cell cycle arrest of human malignant melanoma A375 cells after treatment for 24 h [proliferation inhibiting rate: (50.2 ± 2.51)%, apoptosis rate: (35.91 ± 1.80)%]. CD437 at 10 μmol/L inhibited proliferation, induced apoptosis and G₀/G₁ cell cycle arrest of human malignant melanoma A375 cells after treatment for 24 h [proliferation inhibiting rate: (58.6 ± 2.38)%, apoptosis rate: (28.03 ± 0.77)%]. Celecoxib in combination with CD437 could significantly enhance the effects of inhibiting proliferation and inducing apoptosis of human malignant melanoma A375 cells 24 h after treatment compared with the drug alone [proliferation inhibiting rate: (68.92 ± 1.72)%, apoptosis rate: (42.09 ± 1.05)%, both P<0.05] and decrease the proportion of the S phase in the cell cycle. Celecoxib could inhibit the growth of human malignant melanoma A375 cells by inducing apoptosis and G₂/M cycle arrest. CD437 could inhibit the growth of human malignant melanoma A375 cells by inducing apoptosis and G₀/G₁ cycle arrest. Celecoxib exhibited additive effects with CD437 on retarding the growth and inducing apoptosis of human malignant melanoma A375 cells. Celecoxib in combination with CD437 may become an effective method for prevention and treatment of human melanoma.     

和厚朴酚脂质体的制备及其体内外抗乳腺癌作用研究

目的 制备和厚朴酚脂质体（HK-Lipsomes）,探讨其对小鼠乳腺癌细胞（4T1细胞）的体内外生长抑制作用。方法 将蛋黄卵磷脂、胆固醇、mPEG2000-DSPE2000、和厚朴酚按照质量比3：1：1：1,以注入法制备成和厚朴酚脂质体。通过Zetasizer nano ZS测定和厚朴酚脂质体的粒径,透射电镜观察和厚朴酚脂质体的形态。用噻唑蓝（MTT）比色法评价和厚朴酚脂质体对4T1细胞的细胞毒性。建立小鼠4T1乳腺癌肿瘤模型,以紫杉醇注射液为阳性对照,考察腹腔给药后和厚朴酚脂质体对肿瘤的抑制作用。结果 制备得到的和厚朴酚脂质体的平均粒径为（113.8±0.2）nm,多分散指数（0.209±0.005）,电位为（-30.7±2.4）mV,透射电镜观察和厚朴酚脂质体为球型。和厚朴酚溶液和脂质体对4T1细胞的IC₅₀值分别为（43.74±2.38）μg/mL和（12.52±2.24）μg/mL。和厚朴酚脂质体高（60 mg/kg）、中（40 mg/kg）、低（20 mg/kg）剂量组的抑瘤率分别为85.19%、60.95%和37.83%,呈剂量相关性。结论 实验使用较为简便的制备方法成功制备粒径较小、包封率高的和厚朴酚脂质体。荷瘤小鼠体内实验显示抑瘤效果良好。