TNF-α基因修饰口腔鳞癌DNL抗肿瘤的实验研究

本研究通过逆转录病毒介导TNF-α基因对口腔鳞癌引流区淋巴结淋巴细胞(DNL)进行了转导,利用PCR技术、TNF-α活性检测技术、G418培养基筛选试验,对其转导成功与否进行了分析;通过MTT比色法及基因修饰DNL杀伤Tca8113细胞的形态学观察,比较了转导及未转TNF-α基因DNL在含rIL-2培养基中的生长情况;应用流式细胞仪对转导及未转导TNF-αDNL的DNA指数、细胞周期时相分布及免疫表型进行了分析;应用转导TNF-α基因DNL试验治疗1例病人,初步观察了其对机体免疫功能的影响、对机体的毒副作用及抗肿瘤效果,通过对上述实验结果的分析,得出如下结论:1)应用缺陷型逆转录病毒载体能够将TNF-α基因导人口腔鳞癌DNL中,带TNF-α基因的DNL可作为基因转移的运载细胞,用于口腔癌的细胞因子基因治疗,2)     

人TNF-α基因修饰成纤维细胞的抗肿瘤研究

近年来,白细胞介素4(IL-4)基因治疗的研究取得了很大进展并已试用于临床治疗晚期肿瘤.我们的实验也曾表明,IL-4基因转染的肿瘤细胞所制备的瘤苗对于实验性肺转移荷瘤小鼠具有一定疗效,该作用可能与IL-4基因的转染与表达对肿瘤细胞免疫原性的增强及IL-4对机体抗肿瘤免疫功能尤其是T细胞功能的激发有关;关于肿瘤     

TNF-α诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及调控Bcl-2蛋白的表达

细胞有增殖、分化和凋亡3方面的特性.在维持正常组织的生长平衡过程中,细胞增殖、分化与凋亡3者相互协调,共同调节,其中细胞周亡(apoptosis)对细胞衰老与更新、保持细胞数目的相对恒定方面起着重要作用.肿瘤不仅是增殖和分化异常的疾病,同时也是凋亡异常的疾病,治疗肿瘤就是杀伤和清除肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的一条有效途径,临床上用的化疗、放疗和热疗等方法的作用机制之一就是引发肿瘤细胞凋亡.肿瘤坏死因子(TNF)是一种由活化的巨噬细胞或单核细胞分泌的具有多种生物学效     

GM—CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

目的研究GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的可行性.方法通过逆转录病毒载体,将小鼠GM-CSF基因导入EL-4淋巴瘤细胞中,研究EL-4/GM-CSF在同系C57BL/6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果.结果EL-4/GM-CSF细胞在小鼠中的成瘤性下降,50%小鼠无瘤生存.射线灭活的EL-4/GM-CSF瘤苗能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗,能延长荷瘤宿主的存活时间(33.1±1.8)与对照组EL-4/Wt(23.2±1.5天)比差异有显著性(P＜0.01).基因修饰的瘤苗作用明显增强.结论GM-CSF基因修饰的肿瘤疫苗可诱导较强的抗肿瘤免疫反应,导致肿瘤的部分根除,本实验为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提出了一定的实验依据.     

阿片类药物对肝癌小鼠细胞免疫功能及IL-2和TNF-α的影响

目的 探讨不同的阿片类药物对肝癌小鼠细胞免疫功能及IL-2和TNF-α的影响.方法 采用细胞接种的方法建立H22肝癌小鼠动物模型,随机分成5组,每组10只,流式细胞仪技术检测肝癌小鼠T淋巴细胞亚群中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ /CD8+数值,双抗体夹心法(ELISA)检测小鼠血清IL-2和TNF-α数值.结果 与0.9％氯化钠溶液组相比哌替啶组中肝癌小鼠T淋巴细胞亚群中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+没有明显变化(P＞0.05),吗啡组、芬太尼组和舒芬太尼组均明显降低(P＜0.05);与0.9％氯化钠溶液组比较哌替啶组小鼠血清IL-2含量明显升高(P＜0.05),血清TNF-α含量无明显差别(P＞0.05),与0.9％氯化钠溶液组比较吗啡组、芬太尼组、舒芬太尼组血清IL-2和TNF-α均明显降低(P＜(0.05).结论 吗啡、芬太尼、舒芬太尼对肝癌小鼠T淋巴细胞亚群和IL-2、TNF-α明显抑制.哌替啶对肝癌小鼠T淋巴细胞亚群抑制不明显,能提高血中IL-2含量,对TNF-α水平无明显抑制.     

细胞融合大鼠肝癌疫苗体内治疗和预防作用研究

目的 :观察大鼠 BERH - 2肝癌细胞与激活 B细胞的细胞融合大鼠肝癌疫苗对肿瘤的预防和治疗作用。方法 :应用 PEG将大鼠 BERH- 2肝癌细胞与激活 B细胞融合 ,制备细胞融合大鼠肝癌疫苗 ;部分肝癌疫苗免疫动物前经 6 0 Co照射 ;大鼠被肝癌疫苗免疫之前或之后 ,接种肝癌 BERH- 2细胞或组织块 ,观察疫苗对肝癌的预防和治疗作用。结果 :经细胞融合疫苗保护的大鼠可获 10 0 %无瘤生存 (8/8) ,而 HERH- 2或照射后 BERH- 2对照组大鼠均生长肿瘤死亡 (0 /8)。经皮下接种细胞融合肝癌疫苗治疗大鼠 ,肝内注射肝癌细胞的大鼠可获 85 %以上无瘤存活。照射后细胞融合肝癌疫苗与未照射的获得同样治疗效果。不经筛选的细胞融合疫苗也获相同治疗效果 ,而对照组大鼠均生长肿瘤后死亡。结论 :细胞融合肝癌疫苗对大鼠有预防和治疗作用 ,照射的细胞融合大鼠肝癌疫苗和不经筛选的融合细胞同样具有较好的治疗作用。     

TNF-α基因多态性与广西肝癌家族聚集性的相关性研究

目的研究肿瘤坏死因子基因TNF-α-308、TNF-α-238与广西肝癌家族聚集性的关系。方法在广西肝癌高发区选取12个肝癌高发家族(124例)及与之相对应的12个非肿瘤对照家族(129例)为研究对象,采用SNP芯片技术检测两组中TNF-α-308、TNF-α-238的基因型及等位基因频率。结果肝癌高发家族组TNF-α-308G/A基因型分布频率高于对照家族组,差异有统计学意义(22.6%vs11.6%,χ2=5.376,P=0.020);肝癌高发家族组TNF-α-308A等位基因分布频率亦高于对照家族组,差异有统计学意义(11.3%vs5.8%,χ2=4.877,P=0.024)。两组TNF-α-238基因型频率及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 TNF-α-308基因多态性可能与广西肝癌家族聚集性相关,携带TNF-α-308A等位基因可能会增加肝癌高发家族成员患肝癌的风险;TNF-α-238基因多态性与广西肝癌家族聚集无统计学关联。     

野生基因p53联合TNF-α对Hep3B凋亡作用的研究

  目的 研究补充外源性的野生型p53（wt-p53）基因联合应用小剂量TNF-α对人肝癌Hep3B细胞的凋亡作用。方法 采用lipofectAMINE 和Plus介导的脂质体转染技术将人wt-p53质粒pCEP4wtp53和空载体pCEP4导入人肝癌细胞系Hep3B内, 于转染p53 基因12 h后，在培养基中加入肿瘤坏死因子-α（20 μg／ml）。免疫荧光法检测p53蛋白定位表达。DNA片断分析法、原位末端标记（TUNEL）法观察细胞的凋亡情况。结果 TNF-α可导致细胞凋亡，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；wt-p53组及wt-p53+TNF-α组的Hep3B细胞内有p53表达，并且能促进凋亡；TNF-α与wt-p53二者联用凋亡作用更加显著。结论 wt-p53与小剂量TNF-α联用对Hep3B肿瘤细胞有协同促进凋亡的作用。     

GM-CSF及B7-1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的研究

目的：研究ＧＭ－ＣＳＦ及Ｂ７－１基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的有效性。方法：我们将小鼠ＧＭ－ＣＳＦ及ＣＤ８０基因通过逆转录病毒载体分别导入ＥＬ－４淋巴瘤细胞中,进而研究了ＥＬ－４／ＧＭ－ＣＳＦ及ＥＬ－４／Ｂ７－１在同系Ｃ５７Ｂ习中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果：转Ｂ７－１基因的肿瘤细胞诱发了ＣＤ８０的高表达。转基因的肿瘤细胞在同源小鼠中的成瘤性下降,免疫原笥增强。在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤     

广西地区人群TNF-α基因启动子区多态性与肝癌的易感性研究

背景与目的:原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种高度恶性的肿瘤,TNF-α参与了HCC的病理发生、发展过程。本研究探讨广西地区人群TNF-α基因启动子区-1031C/T(rs1799964)和-308A/G(rs1800629)的单核苷酸多态性及其与环境因素的交互作用与HCC遗传易感性的关系。方法:采用以医院为基础的病例对照研究,选择来自于广西地区的新发HCC患者620例,相同地区年龄、性别和民族频数匹配的非肿瘤患者625例。采用TaqMan MGB实时荧光定量PCR方法对TNF-α基因-1031位点和-308位点进行基因分型,比较不同基因型与HCC患病风险的关系,并探讨基因-环境的交互作用对患病风险的影响。结果:TNF-a基因-1031位点3种基因型TT、TC、CC在病例组和对照组中分布差异无统计学意义(P>0.05),与TT基因型患者相比,TC或CC基因型者患HCC的风险并无显著增加(P>0.05)。TNF-α基因-308位点GG、GA、AA基因型在病例组和对照组中分布差异无统计学意义(P>0.05),与GG基因型患者相比,GA或AA基因型者患HCC的风险并无显著增加(P>0.05)。叉生分析结果表明,TNF-α基因-1031位点单核苷酸多态性与吸烟、饮酒及HBV感染等环境因素在HCC发生中存在交互作用,OR分别为3.367、4.709和25.433;-308位点与吸烟、饮酒、食鱼生及HBV感染等环境因素在HCC发生中存在交互作用,OR分别为3.720、5.316、24.975和19.822。结论:TNF-α基因-1031位点和-308位点单核苷酸多态性在HCC发生过程中,可能无独立的危险作用,但与吸烟、饮酒、食鱼生及HBsAg阳性等环境因素交互作用能增加HCC的发病风险。     

THANK基因修饰的肝癌细胞的体内外抗肿瘤作用研究

Objective THANK, known as a member of TNF superfamily,is a petent costimulator of both B and T lymphocytes and can promote a strong immune response.To investigate its role in liver immunotherapy,the anti-tumor effects of the THAND-transduced hepatoma cell line SMMU-7721 in vitro and in vivo studied. Methods THANK full-elngth cDNA was transfected into SMMU-7721 cell line .The transfectant with stable expression of THAND was obtained by clone selection and THANK‘s effects on hepatoma cells were analyzed,further the tumorigenicity of THANK -transduced 7721 cells was examined in nude mice.Results THANK‘s expression in 7721 cells inhibited the growth of hepatoma cells and induced a strong CTL response in vitro.The cell cycle analysis showed that THANK transfected 7721 cells were arrested in the S phase.The expression of THANK in SMMU-7721 cell line not only inhibited the tumorigenicity of 7721 cells,but also induced a systemic immune response against re-chalenge of parental 7721 tumors. Conclusion THANK transduction in SMMU-7721 cells can induce an effective immune response in nude mice and may be useful for the immunotherapy of hepatomas.     

半枝莲多糖的抗肝癌作用及其机制的研究

目的探讨半枝莲多糖（SPS）的抗肝癌作用及其机制。方法建立小鼠移植瘤模型,采用荷瘤小鼠抑瘤率检测SPS对H22肝癌小鼠的抗肿瘤作用;制备荷瘤小鼠脾细胞悬液,检测SPS对脾淋巴细胞增殖和脾细胞分泌IL-2和TNF-α的影响。结果SPS在50-200mg／（kg-d）范围内可抑制小鼠H22肝癌的生长,促进荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖,提高脾细胞分泌IL-2和TNF-α的水平。结论SPS可能是通过增强机体免疫功能达到治疗肿瘤的功效。     

人TNF—α基因修饰成纤维细胞的抗肿瘤研究

为了探讨人TNF-α基因修饰的成纤维细胞在体内的抗肿瘤作用,本文应用含脑心肌炎病毒(EMCV)内核糖体进入位点(IRES)的双顺反子逆转录病毒载体pGCEN/TNF-α来转导TNF-α基因至小鼠成纤维细胞NIH3T3.人TNF-α基因修饰的成纤维细胞NIH3T3/TNF-α能持续高水平表达TNF-α,在小鼠肝癌H22细胞皮下植入后第3天或第7天,肿瘤部位直接注射2.5×10~5NIH3T3/TNF-α.或1×10~6NIH3T3/TNF-α能明显抑制肿瘤生长(P<0.05),增加小鼠存活率(P<0.025).可见人INF-α基因修饰的成纤维细胞有望成为一种安全、简便且有效的肿瘤生物治疗新途径.     

TNF-α调节鼻咽癌凋亡抑制蛋白表达的体外研究

[目的]研究TNF-α对鼻咽癌中c-IAP1和c-IAP2表达水平的影响,探索鼻咽癌抗凋亡的机制.[方法]培养鼻咽癌5-8F细胞,经不同浓度(0、1、5、10、20、30ng/ml)的TNF-α处理细胞16h、24h之后,半定量RT-PCR检测c-IAP1和c-IAP2基因表达水平的变化,用Western Blot检测c-IAP1和c-IAP2蛋白表达水平的变化.[结果]低浓度TNF-α上调鼻咽癌中c-IAP1表达,而高浓度TNF-α下调c-IAP1表达.随着TNF-α浓度增高,c-IAP2表达量不断上调.[结论] TNF-α通过上调鼻咽癌细胞中c-IAP2的表达而使肿瘤细胞抗凋亡,可能成为抗癌靶点.     

TNF-α基因修饰瘤苗的抗肿瘤作用研究

血管生成与肿瘤的发生、发展和转移有密切关系,控制血管的生成是抑制肿瘤生长和治疗的重要途径之一.本文就新生血管的定义与发生诱因,新生血管的正负调节因子,新生血管的特征,以血管为靶的肿瘤治疗策略等方面进行评述.     

开放式磁共振引导肝癌的冷冻消融治疗疗效分析

目的 探讨在开放式磁共振(MRI)监视下、采用经皮穿刺方法 进行肝癌的冷冻消融治疗的疗效.方法 对60例HCC的肝肿瘤进行了冷冻消融治疗.采用新奥博为0.3-T开放式MRI系统,冷冻探针通过实时监视被置于消融病灶中.评估其临床体征、症状和实验室检验结果 ,并对冷冻消融治疗的疗效进行分析.结果 MRI引导下经皮穿刺冷冻消融治疗能精确到达肿瘤、彻底消融的目的 ,有血清肝酶水平临床上的改变,没有引起严重的并发症.结论 MRI引导下经皮穿刺的肝脏肿瘤冷冻消融治疗是可行和安全的.MRI能够在手术期间引导冷冻消融治疗,以及用于评估冷冻消融治疗的效果.     

肝动脉化疗栓塞联合经皮氩氦冷冻及无水乙醇注射治疗肝癌的临床研究

目的联合肝动脉栓塞化疗 (transarterial chemoembolization, TACE)、经皮局部氩氦刀消融（percutaneous local cryotherapy,PLCT）和经皮瘤内无水乙醇注射治疗(percutaneous ethanol injection therapy, PEIT）三种微创方法综合治疗失去手术机会的肝癌,并与TACE单纯联合PEIT治疗相比较,观察其疗效和安全性。方法132例巨块型或结节型原发性肝癌入选,76例接受TACE、PLCT、PEIT三种微创治疗（三联组）,56例接受TACE及PEIT两种微创方法治疗（两联组）。结果三联组和两联组之间的有效率(42.1%和17.9%)、临床获益率(85.5％和69.6％)、中位疾病进展时间(12周和10周)比较有统计学差异（P<0.05）,1年生存率(75.0％和60.7％)比较无统计学差异（P>0.05）。结论TACE联合PLCT及PEIT比单纯联合PEIT治疗,明显提高了有效率和临床获益率,并延长了中位疾病进展时间,是一种合理、安全、有效的综合治疗模式。     

三氧化二砷联合羟基喜树碱抗肝癌作用的实验研究

目的：通过对三氧化二砷（As2O3）与羟基喜树碱（HCPT）联合作用抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长的实验研究,探讨两药合用的效果。方法：一定浓度梯度As2O3和HCPT分别及联合与人肝癌细胞株SMMC-7721孵育后,采用MTT法检测细胞生长变化,并采用两药相互作用系数（CDI）来评价两药相互作用性质。结果：0.5μg/mlAs2O3与0.5μg/mlHCPT联合应用对肝癌细胞的生长抑制作用明显高于各自的单药应用（P〈0.01）,且具有协同效应。结论：As2O3与HCPT联用可以增强互补,减少各自用药剂量,达到减毒增效的目的。     

灵芝复康宝对荷瘤鼠IL-2及TNF-α的诱生作用

目的：探讨灵芝复康宝抗肿瘤作用的免疫学机理。方法：采用ＥＬＩＳＡ法测定不同剂量芝复康宝对Ｓ８１０荷瘤小鼠血清ＩＬ－２,ＴＮＦ－α含量的影响。结果：小剂量组（０．５ｍｇ／ｋｇ体重）血清ＩＬ－２和ＴＮＦ－α水平明显高于对照组。结论：小剂量的灵芝复康宝对荷瘤鼠ＩＬ－２和ＴＮＦ－α均有一定的诱生作用,提示小剂量的灵芝复康宝可能通过调节宿主ＢＲＭ系统而发挥其抑制肿瘤的作用。     

TNF-α对人肺癌细胞系的生长抑制作用和对细胞周期的影响

为探讨TNF-α对肺癌细胞的毒性作用及其作用机制,本研究利用MTT法检测了TNF-α对人肺癌细胞系A549的细胞毒作用.TNF-α对A549细胞的生长抑制作用有时相(24、48、72、96小时)及剂量依赖关系.采用流式细胞分析仪观察了TNF-α对A549细胞周期的影响,结果发现,TNF-α与A549细胞作用24小时后,G2 M,S期的比例由22.05%下降为14.00%,G0 G1期的比例由77.95%增加到86.00%.推测TNA-α对A549细胞的作用是通过仰制细胞DNA的合成及有丝分裂,促使细胞由G2 M、S期转至G0 G1期.