低剂量辐射联合环磷酰胺对肿瘤细胞凋亡、细胞周期以及骨髓增殖的影响

目的　探讨低剂量辐射联合环磷酰胺对小鼠移植肿瘤细胞的凋亡、细胞周期以及骨髓增殖的影响。方法　昆明种雄性小鼠随机分为空白对照组、荷瘤对照组 (假照组 )、低剂量照射组(LDR组 )、CTX化疗组 (CTX组 )和低剂量照射联合化疗组 (LDR CTX组 ) ,左后肢腹股沟皮下接种S180肉瘤细胞 ,接种后第 5 ,8天γ射线全身照射 75mGy ,照射后 36h采用环磷酰胺 (CTX)化疗 ,测量肿瘤大小变化 ,并取肿瘤组织经流式细胞仪分析细胞凋亡、细胞周期 ,取冲洗骨髓组织分析骨髓增殖情况。结果　与假照组相比 ,各处理组肿瘤生长缓慢。LDR组肿瘤细胞凋亡增加 ,CTX组、LDR CTX组G1 期细胞比例明显增加 ,S期细胞比例明显减少 (P <0 0 5 )。与空白对照组相比 ,假照组、低剂量照射组骨髓细胞浓度未见明显变化 ,化疗组 (CTX组、LDR CTX组 )明显减少 (P <0 0 0 1) ;增殖指数 (PI)CTX组、LDR CTX组明显增加 ,LDR CTX组比CTX组高。结论　低剂量辐射联合环磷酰胺可使机体肿瘤细胞G1 期阻滞加剧 ,对肿瘤增殖细胞杀伤作用增强 ,明显提高机体抗肿瘤的作用 ,同时保护机体的骨髓造血机能 ,具有辅助肿瘤化疗的实际临床意义。     

低剂量辐射对肿瘤细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白bcl-2的影响

目的　探讨低剂量辐射对小鼠移植肿瘤细胞的凋亡、细胞周期以及相关蛋白bcl 2表达的影响。方法　昆明种雄性小鼠左后肢腹股沟皮下接种S1 80肉瘤细胞 ,接种后 7dγ射线全身照射 75mGy,照射后 2 4 ,48h分别处死 ,直接测量肿瘤大小变化 ,并取肿瘤组织分别进行流式细胞仪分析凋亡、细胞周期 ,以免疫组化染色半定量分析凋亡相关蛋白bcl 2表达的变化。结果　与直接荷瘤组相比 ,低剂量照射组肿瘤生长缓慢 (P <0 0 5) ,2 4h后肿瘤细胞阻滞于G1 期 ,bcl 2蛋白表达下降 ,48h后肿瘤细胞凋亡增加 (P <0 0 0 1 )。结论　低剂量辐射可使机体肿瘤细胞阻滞于G1 期 ,并通过凋亡相关蛋白表达变化导致肿瘤细胞凋亡增加 ,明显提高机体抗肿瘤的作用 ,具有肿瘤治疗和辅助放化疗的实际临床意义     

回转器模拟失重对人胃癌SGC-7901细胞形态和生物学特征的影响

目的 探讨模拟失重对人胃癌SGC-7901细胞形态、增殖、周期和凋亡的影响.方法采用回转器模拟失重,用图像分析系统软件分析HE染色后SGC-7901细胞形态的改变,用免疫组化法观察细胞增殖细胞核抗原（PCNA）表达的变化,用流式细胞仪测定细胞周期,并用TUNEL法检测细胞凋亡.结果 回转器模拟失重后,回转组SGC-7901细胞12 h、24 h、36 h、48 h及72 h各时间段的细胞面积均较对照组缩小（P＜0.01）;在36 h时,其长短径之比较对照组增大（P＜0.01）,其余时间段无明显差异.12 h、24 h和36 h回转组SGC-7901细胞PCNA抗体阳性细胞比率与对照组相比无明显差异,48 h、72 h回转组的PCNA抗体阳性细胞明显减少（P＜0.05或P＜0.01）.12 h、24 h和36 h回转组SGC-7901细胞的细胞周期与对照组相比无明显差异,48 h、72 h回转后G0＋G1期细胞显著增多（P＜0.01或P＜0.05）,S＋G2＋M期细胞则显著减少（P＜0.01或P＜0.05）.12 h、24 h、36 h和48 h回转组SGC-7901细胞凋亡比例与对照组相比无明显差异,72h回转组细胞凋亡比例较对照组明显增多（P＜0.01）.结论 回转器模拟失重使胃癌SGC-7901细胞的形态发生了变化,48 h、72 h时出现细胞周期阻滞、增殖抑制,72 h时凋亡增加.     

低剂量X射线全身照射对小鼠IL-12和CD2、CD48表达的影响

目的　检测低剂量辐射 (LDR)对小鼠腹腔巨噬细胞IL 12的影响 ,同时观察胸腺细胞CD2及腹腔巨噬细胞表面分子CD48的变化并分析其与IL 12变化的关系。方法　分别采用Northernblot和ELISA检测了 0 0 75GyX射线全身照射后IL 12转录水平、蛋白水平的变化 ;采用荧光免疫流式细胞术检测CD2、CD48蛋白表达的变化。结果　 (1)IL 12的改变 :0 0 75GyX射线全身照射后 1h巨噬细胞中IL 12、p3 5及p40亚基mRNA水平均迅速升高 ,分别达到假照组的 13 1%和 192 %(P <0 0 5) ,而后开始回降直至照后 16～ 48h恢复正常 ;巨噬细胞分泌IL 12在照后 4～ 8h明显增高(P <0 0 5)。 (2 )CD2、CD48表达变化 :0 0 75GyX射线照射后 4h胸腺细胞CD2表达即开始升高 ,至8h达峰值 (P <0 0 5～ 0 0 1) ;巨噬细胞CD48表达在照射后 2h开始升高 ,至 48h仍明显高于假照水平 (P <0 0 5～ 0 0 1) ;4h量效结果显示 ,50 ,75,10 0和 2 0 0mGy均使CD2、CD48表达上调 (P <0 0 5)。结论　LDR可引起IL 12表达上调 ,CD2、CD48分子与IL 12的变化具有一致性 ,提示两者可能参与IL 12的免疫调控     

低剂量电离辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的时间效应

目的：观察低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的基本规律。方法：实验用X射线照射昆明雄性小鼠,其诱导剂量（D1）及其后攻击剂量（D2）分别是75mGy和1．5Gy。D1和D2间隔时间分别是3、6、12、24和60h。通过流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的变化。结果：当D1和D2间隔3、6和12h ,D1 D2组胸腺细胞凋亡百发数明显低于D2组（P＜0．05）,G0／G1和G2＋M期细胞百分数也不同程度地低于D2组,而S期是分数却明显高于D2组（P＜0．0．5或P＜0．01）。结论上述结果指出,D1在75mGy,吸收剂量率为12．5mGy／min,D2在1．5Gy,吸收剂量率为0．287Gy／min;D1和D2间隔3－12h,可在全身照射条件下诱导小鼠胸腺细胞凋亡和细胞周期进程的适应性反应。     

低剂量照射对慢性髓细胞白血病干细胞p16基因mRNA表达水平的影响及其意义

目的 探讨低剂量辐射(LDR)对慢性髓细胞白血病干细胞(LSCs)中P16基因转录表达的影响及其临床意义。 方法 取20例健康产妇脐血100 ml,免疫磁株法分离纯化CD34+、CD38-的正常造血干细胞(HSCs)作为对照组;取20例初诊慢性髓细胞白血病(CML)慢性期患者骨髓液5~10 ml,免疫磁株法分离纯化CD34+、CD38-、CD123+的LSCs作为实验组。将HSCs及LSCs依据LDR剂量(0、12.5和50 cGy)辐照后收集细胞行RT-PCR和荧光实时定量PCR检测两种干细胞中p16基因的变化;另辐照后分别于24、48和72 h收集细胞,流式细胞仪检测两种干细胞的细胞周期和凋亡率。结果 CML-LSCs经12.5 cGy剂量照射后P16 mRNA表达略上调,50 cGy照射后明显增高(Z=-3.39,P＜0.01),而HSCs经各剂量点LDR处理后p16基因转录水平无明显变化。CML-LSCs经12.5 cGy剂量处理后48 h出现G₀/G₁期阻滞,50 cGy剂量点照射后72 h出现了G₀/G₁期阻滞现象。CML-LSCs经LDR处理后,细胞的早期凋亡率随时间推移逐渐增加,50 cGy剂量照射后72 h处达到(17.75±11.76) %,与未照射组 (6.13±4.71)%相比差异有统计学意义(Z=-2.37,P＜0.05)。 结论 LDR可诱导CML-LSCs中P16基因转录水平的表达上调,使得CML-LSCs阻滞在G₀/G₁期,促进LSCs的凋亡,为P16基因作为CML中治疗的靶点及LDR在白血病中的应用提供理论依据。     

低剂量辐射对恶性肿瘤患者自体CIK细胞免疫功能影响的实验研究

目的 观察低剂量辐射对恶性肿瘤患者自体CIK细胞增殖、表型和杀伤活性的影响,为临床应用CIK细胞过继免疫治疗提供依据。方法 取10例恶性肿瘤患者外周血,常规分离出单个核细胞,用不同细胞因子培养诱导CIK细胞。培养10 d后,以30、50、80、100和200 mGy X射线照射,24 h后采用³H-TdR掺入法检测对CIK细胞增殖的影响;流式细胞术检测对CD3+CD56+表型CIK细胞百分率的影响;³H-TdR释放法检测对其杀伤活性的影响。采用³H-TdR释放法检测80 mGy X射线照射对自体CIK细胞在12、24、48和72 h杀伤活性的影响,及80 mGy连续照射3 d对CIK细胞杀伤活性的影响。结果 CIK细胞增殖活性与对照组(0 mGy)相比均有明显增高(t =2.2、3.5、3.3和2.2, P ＜0.05)。50、80和100 mGy组的CD3+CD56+细胞的百分率均有显著性增高(t =2.3、4.2和2.4, P ＜0.05)。CIK细胞接受LDI,80 mGy组和100 mGy组与对照组(0 mGy)相比,CIK细胞杀伤活性均有显著性增高(t =3.3和2.3, P ＜0.05)。80 mGy照射后24 h,CIK细胞的杀伤活性出现高峰,为(54.2±5.0)%(t =3.2, P ＜0.01),48和72 h下降到正常水平。80 mGy连续照射3 d,24和48 h CIK细胞杀伤活性分别为(55.2±5.3)%和(61.9±4.4)%,72 h达到最高水平为(67.2±5.7)%(t =2.6、4.7和5.7, P ＜0.05)。结论 低剂量辐射对肿瘤患者CIK细胞显示兴奋效应,具有临床应用前景。     

电离辐射对小鼠脾淋巴细胞IL-10表达的影响

目的 观察75mGy、2GyX射线全身照射对小鼠脾淋巴细胞中IL－10的影响。方法 采用Northern blot检测IL－10转录水平的变化，并同时通过流式细胞术检测其蛋白合成的变化。结果 ①蛋白合成结果表明，75mGy X射线全身照射后脾淋巴细胞IL－10合成在照后2h开始即呈时间依赖性降低，至48h仍无恢复迹象（P＜0．01），而2Gy照射后则出现IL－10合成升高，于照射后8h达到峰值（P＜0．05）。②Northern blot结果表明，75mGy照射后脾细胞IL－10 mRNA转录水平从照后1h即降低，并维持较低水平一直到48h开始恢复，达到假照射组的88．35％；2GyX射线全身照射后早期mRNA水平即有所升高，2h达到假照组的134．06％，4h略有下降，随后逐渐恢复至假照射组水平。结论 不同剂量X射线全身照射可引起不同的辐射效应，IL－10在其中起着重要的作用。     

端粒酶反义寡核苷酸对恶性脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

为观察端粒酶反义寡核苷酸(ODN)对恶性脑胶质瘤细胞的生长抑制作用，采用手术切除的端粒酶活性呈阳性奉达的Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤标本16例，提取细胞进行原代培养后，以5μmol/L端粒酶反义寡核苷酸与恶性胶质瘤细胞进行孵育，每隔24h取样，以流式细胞仪检测PCNA、TUNEL阳性细胞百分率及细胞周期时相。结果显示，反义寡核苷酸对端粒酶活性于48h出现抑制，72h完全抑制，72h后对胶质瘤细胞增殖出现显著抑制并对细胞凋亡有显著促进作用，96h后细胞多滞留于G2／M期，此期凋亡细胞百分率随时间延长而增加。提示端粒酶反义寡核苷酸对端粒酶活性具有抑制作用，并可引起细胞周期阻滞，抑制脑胶质瘤细胞增殖而促进其凋亡。     

AT细胞系辐射敏感性与细胞凋亡的相关研究

目的 探讨AT细胞高辐射敏感性与细胞凋亡之间的联系。方法 以液体闪烁测量法测3H-TdR掺入百分率来观察^60Co γ射线照射对AT5BIVA（AT）和GM0639（GM）细胞增殖的影响;实验于照射后0、24、48和72 h,用细胞流式术动态检测AT和GM细胞的自发凋亡率及^60Co γ射线照射诱发的凋亡率。结果 ^60Co γ射线0～6 Gy照射后,AT和GM两种细胞3H-TdR掺入百分率均呈剂量依赖性降低,且AT细胞降低得比GM细胞快,两种细胞3H-TdR掺入百分率与受照射剂量间可拟合成指数方程：SAT=0.9718e^-0.6855D（R^2=0.9950）、SGM=1.0928e^-0.3731D（R^2=0.9777）;AT细胞的自发凋亡率高于GM细胞;2～6 Gy照后24 h,两种细胞由辐射诱发的凋亡率均随照射剂量增大而升高,且在同一剂量点,前者凋亡率高于后者;2 Gy照射后0～72 h,AT和GM细胞的凋亡率均呈时间依赖性增加,且随照后时间延长两者间差异逐步增大,在72 h达到显著水平。结论 AT细胞高辐射敏感性与其较高的自发及辐射诱发的凋亡密切相关。     

多次低剂量照射对雄性糖尿病大鼠脾细胞凋亡和免疫因子的影响

目的 观察多次低剂量辐射(LDR)对糖尿病(DM)大鼠脾细胞凋亡和免疫因子的影响。方法 大鼠随机分为对照组、DM组和DM+LDR组;剂量分别为25、50和75 mGy,共照射15次;照射后4周,采用流式细胞术检测脾细胞凋亡和TCRα β百分数的变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和脾细胞培养上清IL-2含量的变化。结果 与对照组相比,DM和DM + LDR两组大鼠体重均下降,尤以DM组明显。DM+LDR组大鼠血糖水平虽明显高于对照组(t₂₅=23.321、 t₅₀=18.329、 t₇₅=9.23,P<0.01),但显著低于DM组(t₂₅=3.574、 t₅₀=4.593、 t₇₅=5.577,P< 0.01)。同时发现:与对照组相比,DM+LDR各组脾细胞凋亡增加,其中DM+50 mGy组增加明显(t₅₀=4.102,P<0.01)。血清IL-2含量也增加,但是差异均无统计学意义。脾细胞培养上清IL-2含量明显下降(t₂₅=7.778、 t₅₀=7.411、 t₇₅=8.325,P<0.01)。与DM组相比,DM+LDR各组脾细胞凋亡和TCRα β百分数均明显降低(凋亡:t₂₅=4.772、 t₅₀=3.346、 t₇₅=6.778;TCRα β:t₂₅=3.381、 t₅₀=5.807、 t₇₅=2.356,P<0.05～P<0.01)。血清IL-2含量呈下降趋势;脾细胞培养上清IL-2含量均有升高趋势。结论 多次LDR能够削弱糖尿病造成的大鼠体重减轻和血糖升高,降低糖尿病所致的脾细胞凋亡,并能调节脾脏免疫因子,改善其失衡状态。     

不同剂量X射线全身照射后胸腺细胞游离钙浓度的变化时程

目的研究Ｘ射线全身照射后胸腺细胞游离钙浓度的变化时程，以揭示低剂量辐射免疫增强效应的分子机理。方法应用Ｆｕｒａ－２ＡＭ荧光探针，采用荧光分光光度法检测了小鼠胸腺细胞内游离钙浓度。结果７５ｍＧｙ全身照射后可使细胞内游离钙浓度增高，２４小时达峰值，７２小时回降至对照水平。结论低剂量辐射可促进Ｔ淋巴细胞信号传递     

Low-dose radiation induces renal SOD1 expression and activity in type 1 diabetic mice

Abstract

Purpose: Oxidative stress plays a critical role in the pathogenesis of diabetic nephropathy (DN). As an antioxidant, superoxide dismutase (SOD)-1 deficiency exacerbates but SOD1 supplementation prevents diabetes-induced renal damage. Previously, we have demonstrated that repetitive exposure to low-dose radiation (LDR) at 25 mGy significantly prevents DN. Whether this prevention is related to SOD1 expression and activity remains unknown. The aim of the present study was to explore the effects of different methods of LDR treatment on SOD1 expression and activity in the kidneys of diabetic mice.

Materials and methods: C57BL/6J mice were induced with type 1 diabetes using streptozotocin (STZ). Diabetic mice were irradiated with whole-body X-rays at either a single dose of 25 mGy or 75 mGy, or three doses of 25 mGy and then sacrificed at different times. Body weight, blood glucose level, and renal SOD1 expression and activity were measured.

Results: LDR had no impact on the body weights or blood glucose levels of the mice in either the normal or diabetic groups. A single exposure of LDR at 25 mGy did not preserve renal SOD1 expression and activity in diabetic mice, but a single exposure of LDR at 75 mGy or three exposures of LDR at 25 mGy could preserve them.

Conclusion: The stimulation of renal SOD1 expression and activity by a single or cumulative LDR of 75 mGy may be one of the preventive mechanisms of DN observed in the previous study.     

低剂量全身照射抑制小鼠癌细胞播散

小鼠受５０，７５，１００和１５０ｍＧｙＸ射线全身照射后２４小时经球后静脉注入Ｌｅｗｉｓ肺癌或Ｂ１６黑色素瘤细胞。注后１４天以计数肺肿瘤结节数为指标，发现受照小鼠癌细胞播散明显低于假照射对照小鼠。Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞注入前２４小时接受７５ｍＧｙ全身照射小鼠与注入相同癌细胞数的假照射小鼠比较，发现照后２～６天脾脏ＮＫ细胞活性和ＩＬ－２分泌均增高。提示低剂量辐射可能通过增强免疫反应抑制癌细胞播散。     

Influence of dose-rate, post-irradiation incubation time and growth factors on interphase cell death by apoptosis and clonogenic survival of human peripheral lymphocytes.

PURPOSE: To investigate the effects of dose-rate, post-irradiation incubation time and growth factors on radiation-induced interphase cell death by apoptosis and reproductive cell death in human peripheral lymphocytes. MATERIALS AND METHODS: Lymphocytes in G0-phase were exposed in vitro to 1-3Gy 137Cs gamma-radiation at a high- (HDR, 45Gy/h) or a low dose-rate (LDR, 0.024Gy/h). HDR exposures were performed either on day 1 (HDR1) simultaneously with the start of the 3 Gy LDR exposure, or on day 6 (HDR6) when the LDR exposures ended. Apoptosis was studied at different times after irradiation by measuring (1) cellular membrane integrity, (2) morphological changes and (3) cell size reduction. Clonogenic survival was analysed for cells plated directly after irradiation (LDR, HDR6, HDR1 day 1) or after 5 days post-irradiation incubation (HDR1 day 6). RESULTS: A significant decrease in reproductive cell death was observed after 3 Gy LDR exposure as compared with the HDR1 exposure for cells plated day 6. For the lower doses applied, the dose-rate effect could not be statistically verified. A decrease in apoptosis for all three doses applied (i.e. 1, 2 and 3Gy) was observed when the LDR exposures were compared with the HDRI analysed day 6, although not of statistical significance. Radiation-induced apoptosis was efficiently counteracted by growth factors up to 24-48 h after 3 Gy HDR exposure. The prevention of radiation-induced cell death by growth factors was dependent on dose and post-irradiation time in G0. When the growth factors were added after a prolonged post-irradiation incubation in G0 (HDR 1 cells plated day 6), a significant increase in reproductive cell death was found (3 Gy) as compared with HDR protocols where the growth factors were added directly after irradiation (HDR 1 plated day 1 and HDR6). CONCLUSIONS: A dose-rate effect on radiation-induced apoptosis was indicated but not statistically verified. A significant dose-rate effect on reproductive cell death was observed. This dose-rate effect was, however, inverted when growth factors were added directly after the HDR irradiations.     

低剂量辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应

目的：研究低剂量辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应。方法：应用原位末端标记（TUNEL）和常规HE染色法分别结合光镜定量地观察75mGyX射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞在生精周期中凋亡的适应性反应。结果：当1．0、2．0或3．0Gy（攻击剂量，D2）X射线照射前6h给予75mGy（诱导剂量，D1）预照射时明显减轻D2对睾丸精原细胞和精母细胞的凋亡损伤作用，而对精子细胞影响不明显，当1．0、1．5、2．0、2．5、3．0Gy（D2）X射线照射前3、6、12、24h给予75mGy（D1）预照射时，发现当D2剂量较小（1．0、1．5、2．0Gy）时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少出现较早，较明显，而且持续时间较长；反之，当D2剂量较大（2．5和3．0Gy）时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少只有照后6h）出现，而且不显著。结论：低剂量电离辐射可以诱导精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应，并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关。