基于HPLC-MS/MS技术快速鉴定灵芝化学成分

〔目的〕采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC?MS/MS)对灵芝的化学成分进行快速鉴定.〔方法〕采用色谱柱Hypersil GOLD aQ(100 mm×2.1 mm,1.9μm),流动相为含0.1％甲酸的水溶液(A液)和含0.1％甲酸的乙腈溶液(B液).采用梯度洗脱方式,流速0.3 mL/min,柱温40℃,进样量为5μL.质谱分析采用电喷雾离子源(ESI)正负离子检测模式,质量扫描范围m/z 150～1500μ.使用Compound Discoverer 3.1(Thermo Fisher Scientific,USA)软件进行HPLC?MS/MS数据处理.〔结果〕从灵芝中鉴定了85个化合物,主要包括黄酮类、有机酸类、核苷类、氨基酸类、脂肪酸类、糖苷类、萜类、甾类、酚类、苯丙素类和生物碱类等.〔结论〕本研究方法快速鉴定了灵芝醇提物化学成分,为进一步研究灵芝的药效基础和作用机制提供理论基础.     

HPLC法测定千针万线草中牡荆素的含量

测定不同产地千针万线草中牡荆素的含量。方法：用HPLC法测定,以乙腈-0．5％甲酸（20：80）为流动相,340nm为检测波长。结果：千针万线草中牡荆素与其他成分得到很好的分离,不同产地的千针万线草中牡荆素的含量差异较大。牡荆素在0．00375mg／mL～0．12mg／mL范围内呈良好的线性关系（r=0．9999）,平均回收率为100．66％;RSD=1．91％．结论：用高效液相色谱法测定牡荆素的含量,具有灵敏、准确、专属性强、重现性好的特点。     

牡荆素在大鼠体内的药代动力学

目的:研究牡荆素在大鼠体内的药代动力学。方法:大鼠静注牡荆素后,采用HPLC法测定大鼠血浆、组织、粪便、胆汁及尿液中的牡荆素。色谱系统:C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-10mmol/L磷酸氢二钾溶液(22∶78,含10mmol/L四丁基溴化铵,pH7.8),检测波长340nm。结果:血浆样品中,牡荆素的线性范围为0.2～25.0μg/mL(r=0.9996);各浓度的提取回收率均大于80%;最低定量限为0.2μg/mL。牡荆素在大鼠体内的平均t1/2约为25min。AUC与给药剂量呈现良好的线性相关性。静脉注射给药后牡荆素广泛分布于各组织,其中肝和肾组织中浓度最高。牡荆素主要通过肝脏和肾脏代谢排泄,在大鼠尿、粪和胆汁中的总排泄量约为给药量的30%。牡荆素平均血浆蛋白结合率为64.8%。结论:静注给药后,牡荆素迅速从大鼠体内消除,并可在体内广泛分布,有约30%的以原型形式从胆汁和尿液排泄。     

高效液相色谱法测定不同厂家益心酮片中6种成分的含量

目的:采用高效液相色谱法测定不同厂家益心酮片中牡荆素葡萄糖苷等6种成分的含量.方法:采用HPLC法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:0.1％甲酸溶液-乙腈-四氢呋喃梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长350nm;柱温30℃;进样量10μl.结果:绿原酸、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、芦丁和金丝桃苷的线性范围分别是12.5-400、25-800、31.25-1000、9.38-300、2.50-80和9.38-300 μg/ml,加样回收率为99.3％-100.6％(RSD＜2.0％).结论:不同厂家益心酮片中6种成分的含量差异较大(RSD:36.90-71.43％),提高中药的质量控制具有重要意义.     

基于网络药理学解析紫花牡荆素治疗结直肠癌的分子机制

目的 基于网络药理学解析紫花牡荆素治疗结直肠癌的分子机制,为紫花牡荆素治疗结直肠癌提供潜在作用靶点和新思路。方法 在Pubchem数据库以及药物靶点预测数据库SwissTarget Prediction获取紫花牡荆素相关潜在作用靶点,借助人类孟德尔遗传病数据库(OMIM)平台检索结直肠癌相关靶点,并将其与紫花牡荆素相关潜在作用靶点在Venny数据库相互映射获得共同靶点;运用STRING数据库构建紫花牡荆素-结直肠癌共同靶点蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图;利用DAVID数据库对紫花牡荆素治疗结直肠癌靶点进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路富集分析,并使用Cytoscape 3.8.2软件构建紫花牡荆素通路网络图;利用微生信在线网站绘制KEGG气泡图;通过对紫花牡荆素和关键靶点进行分子对接验证。结果 预测结果显示紫花牡荆素和结直肠癌中的靶点取交集后获得6个共同靶点,其中关键靶点2个,分别是络氨酸蛋白激酶(SRC)和丝氨酸蛋白激酶(ATK1)。GO富集分析涉及生物过程35个、细胞组分2个、分子功能8个。KEGG通路富集筛选得到28个相关通路,主要作用于...     

反相高效液相色谱法测定不同厂家心安胶囊中6种成分的含量

目的:采用反相高效液相色谱法测定不同厂家心安胶囊中绿原酸、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、芦丁和金丝桃苷的含量.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈-四氢呋喃,梯度洗脱;检测波长350hm,柱温30℃,流速1.0ml/min,进样量10μl.结栗:绿原酸、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、芦丁和金丝桃苷的浓度在12.5-400、25-800、31.25-1000、9.38-300、2.50-80和9.38-300μg/ml范围内有良好的线性关系,该方法加样回收率平均为98.3％-100.3％.不同厂家心安胶囊6种指标成分的含量差异较大(RSD 11.0％-47.0％).结论:该方法准确可靠、重现性好,可用于心安胶囊的质量控制.     

HPLC法和UV-VIS法测定灵芝孢子粉中灵芝三萜及灵芝多糖的含量

目的建立测定灵芝孢子粉中的两个有效成分灵芝三萜及灵芝多糖含量的方法,为进一步开发和应用灵芝孢子粉提供依据。方法以灵芝酸C2为标准品,通过HPLC法对灵芝孢子粉中灵芝酸C2的含量进行测定。色谱条件为：检测波长254nm;流动相为甲醇：水=55∶45,各加1%冰醋酸;柱温40℃;流速0.7mL/min。以葡萄糖为标准品,采用硫酸-蒽酮比色法,通过UV-VIS法对灵芝孢子粉中灵芝多糖的含量进行测定。结果HPLC法测得三批灵芝孢子粉中灵芝酸C2含量约为0.129‰,0.108‰和0.094‰,灵芝酸C2在7.35～147μg/mL范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,回收率为95.9%,95.6%和96.4%。UV-VIS法测得三批灵芝孢子粉中灵芝多糖的含量约为1.152%,1.129%和1.007%,葡萄糖在14.9～119.1μg/mL的范围内,浓度和吸光度呈线性关系,r=0.9991,回收率为95.0%,95.1%和95.2%。结论方法简便、准确,可用于灵芝孢子粉中灵芝三萜和灵芝多糖的含量测定。     

HPLC法测定不同采收期承德产山里红叶牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量

目的：采用高效液相色谱(HPLC）法测定承德地区不同采收期山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量。方法：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm）;流动相：0.1%甲酸水溶液-乙腈-四氢呋喃溶液,梯度洗脱;检测波长：340nm;流速1.0ml/min;柱温30℃。结果：牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的线性范围是0.001-0.16mg/ml;平均加样回收率为100.2%(RSD=2.8%）;5-10月承德不同产地山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量均值分别为滦平县3.00mg/g,双桥区4.00mg/g,承德县2.84mg/g。结论：承德地区山里红叶中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷的含量在8月份达到最高,为最佳采收期,以承德市双桥区产的山里红叶含量最高,为最佳产地。     

HPLC法同时测定承德产山楂叶4种成分的含量

目的：：建立高效液相色谱法同时测定承德产山楂叶中牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷和槲皮素含量的方法。方法：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相为0.5%甲酸水-乙腈-甲醇-四氢呋喃溶液,梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长370nm;柱温30℃。结果：牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷和槲皮素的线性范围分别为9.38-300μg/ml、15.9-510μg/ml、4.51-144μg/ml、0.28-9.0μg/ml;平均加样回收率分别为100.2%(RSD=1.8%)、99.6%(RSD=1.5%)、99.4%(RSD=2.0%)、100.8%(RSD=1.5%)。结论：含量测定结果显示不同产地山楂叶中四种黄酮类成分含量的差异较大(RSD为9.98-31.39%）。     

灵芝孢子油化学成分研究

[目的]研究灵芝孢子油的化学成分.[方法]采用硅胶色谱技术、制备液相色谱技术和Sephadex LH-20色谱技术分离化学成分,核磁共振扫描(NMR)、质谱分析法(MS)、甲酯化气相色谱法等方法鉴定化合物.[结果]得到6个化合物,分别为1-0-十八碳烷酰-2-0-(9Z-十八碳烯酰)-3-0-(9Z-十八碳烯酰)甘油酯(1)、1-0-十六碳烷酰-2-0-(9Z-十八碳烯酰)-3-0-(9,12Z-十八碳二烯酰)甘油酯(2)、1-0-(9Z-十八碳烯酰)-2-0-(9Z-十八碳烯酰)-3-0-(9,12Z-十八碳二烯酰)甘油酯(3)、1-0-(11Z-十八碳烯酰)-2-0-(9Z-十八碳烯酰)-3-0-(9Z-十八碳烯酰)甘油酯(4)、1-0-(11Z-十八碳烯酰)-2-0-(9Z-十八碳烯酰)-3-0-(9,12Z-十八碳二烯酰)甘油酯(5)、十八碳烷酸(6).[结论]化合物1～5为首次从该属中分离得到,化合物6为首次从灵芝孢子油中分离得到.     

灵芝抗肿瘤研究进展

灵芝是一类真菌,隶属担子菌纲(Basidionycetes)、多孔菌科(Polyproraceae)、灵芝属(ganoderma),目前研究较多的有赤芝(G·Lucidum)、紫芝(G·japonicium)、树舌(平盖灵芝G·applanatum)、薄盖灵芝(G·capease)和南方灵芝(G·australe)等五种。灵芝俗称灵芝草,古称瑞草,性味淡、温、无毒,是珍贵的中草药。早在东汉时期的《神农本草经》就将灵芝列为上等药物,明代李时珍的《本草纲目》记载了六芝(赤芝、青芝、黄芝、白芝、黑芝、紫芝)的药物和主治的病症。历代医学家均认为灵芝能治疗多种疾病,是滋补强壮、扶正固本的珍贵药     

HPLC 法测定竹叶提取物中荭草苷、异荭草素、牡荆素和异牡荆素的含量

目的：建立竹叶提取物中荭草苷、异荭草素、牡荆素和异牡荆素含量的HPLC测定方法。方法：色谱柱：Agilent HC-C18（250mm ＆#215;4．6mm,5μm）;流动相：乙腈-2％冰醋酸（14∶86）;流速：1mL/min;检测波长350nm;柱温：40℃。结果：线性范围为荭草苷在2．0760～12．4560μg（r＝0．9999）;异荭草素在3．9400～23．6400μg（r＝0．9997）;牡荆素在0．2740～1．6440μg（r＝0.9999）;异牡荆素在0．7690～4．6140μg（r＝0．9999）。荭草苷平均回收率为99．36％,RSD为2．39％;异荭草素平均回收率为99.69％,RSD为1．89％;牡荆素平均回收率为100．04％,RSD为1．49％;异牡荆素平均回收率为100．64％,RSD为1．61％。结论：该方法准确可靠、简单易行,适用于竹叶提取物中荭草苷、异荭草素、牡荆素和异牡荆素的含量测定。     

HPLC法测定灵芝子实体和孢子粉中灵芝酸C2、灵芝酸G和灵芝酸A

目的 建立灵芝子实体和孢子粉中3种灵芝酸类成分的HPLC测定方法,为全面评价灵芝药材和孢子粉的质量提供依据。方法 采用HPLC方法测定,Diamonsil（钻石）C8色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相乙腈–0.03%磷酸（28∶72）,体积流量1.2 mL/min,检测波长250 nm;柱温35 ℃。结果 灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝酸A分别在0.40～10.06 μg（r=0.999 99）、0.40～10.00 μg（r=0.999 99）、0.40～10.00 μg（r=0.999 99）线性关系良好,平均回收率分别为101.04%、99.39%、101.22%,RSD值分别为1.64%、1.86%、2.20%（n=6）;灵芝子实体中3种灵芝酸的质量分数分别在0.06～0.29 mg/g、0.12～0.37 mg/g、0.19～0.41 mg/g,灵芝孢子粉供试品中3种灵芝酸的质量分数分别在0～0.01 mg/g、0、0～0.03 mg/g。结论 本方法简便,稳定,可用于灵芝三萜类成分C2、灵芝酸G、灵芝酸A的定量分析。     

HPLC法同时测定朝药肾炎草中4种黄酮碳苷成分的含量

[目的]建立可同时测定朝药肾炎草中芹菜素-8-C-阿拉伯呋喃糖、异牡荆素、金圣草素-8-C-阿拉伯呋喃糖和异金雀花素4种黄酮碳苷成分含量的HPLC方法 .[方法]采用SunFire C₁₈ (5μm, 4.6 mm×250 mm)色谱柱，流动相为0.1%(体积分数)冰乙酸的乙腈溶液(B)-0.1%(体积分数)乙酸水溶液(A)，梯度洗脱，流动速度为1.0 mL/min，检测波长为335 nm，柱温为50℃，进样量为10μL.[结果]芹菜素-8-C-阿拉伯呋喃糖、异牡荆素、金圣草素-8-C-阿拉伯呋喃糖和异金雀花素分别在0.42～28.00、0.30～20.00、0.90～20.00、0.83～25.14μg/mL的质量浓度范围内与峰面积的线性关系良好，r²>0.999 5.精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD<2.0%;平均加样回收率在94.7%～107.9%之间，RSD<2.0%.[结论]所建立的方法简便快捷，准确有效，可为朝药肾炎草中黄酮碳苷类成分含量的测定提供参考.     

金莲花中药效成分荭草苷和牡荆苷的色谱鉴定

目的建立金莲花中药效成分荭草苷和牡荆苷的色谱鉴定方法。方法采用 TLC 和 HPLC 法分别进行定性和定量分析。结果①TLC 鉴定方法的最佳条件:聚酰胺薄膜,用氯仿-丙酮-冰醋酸-无水乙醇(4:1:3:2)展开,喷1%三氯化铝乙醇试液显色后在紫外(365 nm)灯下检视。在此条件下,荭草苷的 Rf 值为0.46,牡荆苷的 Rf 值为0.62,2个斑点形状及分离效果均很好。②HPLC 定量分析的最佳条件:色谱柱为 C_(18)ODS_2,流动相为0.35%磷酸溶液-乙腈(82:18),检测波长为345 nm。在此条件下,牡荆苷色谱峰的分离度>1.5,保留时间<10 min,而且各项方法学试验均得到良好结果。结论建立的此项鉴定方法可行。     

PR-HPLC法测定甘肃蚤缀中苜蓿素、苜蓿素-4′-O-β-愈创木基甘油基酯、异牡荆素、异金雀花素和苜蓿素-7-O-β-D-葡萄糖苷

目的 建立HPLC法对甘肃蚤缀中苜蓿素、苜蓿素-4′-O-β-愈创木甘油基酯、异牡荆素、异金雀花素和苜蓿素-7-O-β-D-葡萄糖苷同时定量的方法。方法 采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil TM C18(250 mm×4。6 mm,5 μm),流动相为乙腈0.5%磷酸梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;柱温为30 ℃;检测波长为350 nm;进样量为10μL。结果 苜蓿素、苜蓿素-4′-O-β-愈创木甘油基酯、异牡荆素、异金雀花素和苜蓿素-7-O-β-D-葡萄糖苷5个化合物达到基线分离且线性关系良好,线性范围分别为5.44～97.92 μg/mL(r=0.999 2)、4.76～85.68 μg/mL(r=0.999 2)、6.52～117.36 μg/mL(r=0.999 6)、4.92～88.56 μg/mL(r=0.999 8)、1.60～29.34 μg/mL(r=0.999 1),平均加样回收率分别为100.21%(RSD=1.94%)、97.50%(RSD=2.50%)、100.38%(RSD=2.46%)、98.54%(RSD=2.40%)、97.45%(RSD=3.14%)。结论 测定了4种来源的甘肃蚤缀样品中5个化合物的量,该方法分离度好、快速、简便,重现性佳。     

HPLC法测定复方灵芝颗粒中五味子甲素的含量

目的建立复方灵芝颗粒中五味子甲素含量测定的方法。方法用高效液相色谱法测定,色谱条件为:C18柱,(5μm,250×4.6mm),流动相为甲醇-水(体积比75∶25),检测波长为254 nm。结果五味子甲素在0.1608~6.432μg范围内呈现良好的线性关系(R=0.9996),平均加样回收率为99.27%,RSD=1.02%(n=6)。结论该法操作简便、准确,重复性好,建立的定量方法可用于复方灵芝颗粒质量的控制。     

山楂叶总黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制研究进展

山楂叶总黄酮(Total Flavone of Hawthorn Leaf,TFHL)为中药材山楂叶[1]提取物中黄酮类化合物的总称,主要成分为芦丁、牡荆素、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、槲皮素和金丝桃苷等[2].TFHL制剂(益心酮)在心血管疾病方面疗效肯定[3],临床已得到广泛应用.近年来,TFHL对缺血性脑血管疾病的药理作用研究成为热点.     

凋亡信号调节激酶1在紫花牡荆素诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的:研究紫花牡荆素诱导人结肠癌细胞凋亡作用及其作用机制。方法:体外培养人结肠癌HT-29细胞。碘化丙啶(P)I染色流式细胞术(FCM)和细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡。荧光探针二氯荧光素(DCFH-DA)标记FCM测定细胞内活性氧的含量。Western blot和小干扰RNA转染用于探索其分子机制。结果:紫花牡荆素以浓度依赖性的方式诱导结肠癌HT-29细胞系细胞凋亡。紫花牡荆素引起活性氧(ROS)的产生,并激活HT-29细胞的凋亡信号调节激酶1(ASK1)。N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HT-29细胞有效地抑制ASK1活性,减弱紫花牡荆素处理引起的细胞凋亡。ASK1特异小干扰RNA能显著减弱紫花牡荆素诱导HT-29细胞凋亡作用。结论:紫花牡荆素通过刺激活性氧形成活化ASK1诱导结肠癌HT-29细胞凋亡。     

远志中β-咔啉系生物碱的HPLC测定

利用HPLC定量测定远志样品中的β-咔啉系生物碱:降哈尔满、哈尔满、perlolyrine、1-甲氧羰基—咔啉、1-乙氧羰基—咔啉、N_9-甲酰基哈尔满及1-丁氧羰基-咔啉。