VEGF-ASODN转染对胃癌细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）-反义寡核苷酸（ASODN）转染胃癌细胞SGC-7901对其VEGF表达和生长的抑制作用。方法人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901,24h后实时荧光定量RT-PCR检测细胞VEGF mRNA起始拷贝数,ELISA法检测细胞及培养液上清中VEGF蛋白含量,Western blot法检测细胞生存素（survivin）蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响。结果VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA水平、降低胃癌细胞及其培养液中VEGF蛋白含量、降低survivin蛋白含量、增加细胞凋亡、抑制细胞活性及生长（P〈0.05）。结论VEGF-ASODN转染胃癌细胞SGC-7901能显著抑制VEGF和survivin蛋白表达、增加细胞凋亡、抑制细胞生长。     

自然流产小鼠蜕膜组织中PCNA、Ki-67和survivin表达水平的研究

目的比较正常妊娠和自然流产小鼠模型蜕膜组织中增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞增殖标记物Ki-67和凋亡蛋白抑制因子suvivin的表达情况,探讨自然流产的发病机制。方法建立正常妊娠模型CBAXBALB／c和自然流产模型CBAXDBA／2。采用免疫组化SP法测定两组模型孕13d蜕膜细胞PCNA、Ki-67和suvivin的表达。结果与正常妊娠模型相比,自然流产模型蜕膜细胞PCNA的表达显著降低（P〈0．05）;Ki-67和survivin表达降低非常显著（P〈0．01）。结论自然流产小鼠蜕膜细胞PCNA、Ki-67和survivin表达水平低下可能与自然流产的发生有关。     

整合素αvβ3和VEGF在前列腺癌的表达及临床意义

目的 探讨整合素αvβ3和血管内皮生长因子（VEGF）在前列腺癌（PCa）中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法（SP法）检测整合素αvβ3和VEGF在41例前列腺癌中的表达,20例正常前列腺组织作对照.结果 前列腺癌组织中整合素αvβ3和VEGF的表达上调,与正常组织比较差异具有统计学意义（P〈0.01）.整合素αvβ3和VEGF的表达均随着PCa的病理分级、临床分期增加其表达上调（P〈0.05）,与PCa的病理分化程度呈负相关（P〈0.01）.在各术前血清PSA值组中,整合素αvβ3及VEGF表达无统计学差异（P〉0.05）.整合素αvβ3与VEGF表达呈正相关（rs=0.220）,相关有显著性（P〈0.05）.结论 整合素αvβ3和VEGF可能在前列腺癌的发生、发展及恶性进展过程中起重要作用.将二者结合分析,有助于判断PCa的恶性程度、转移潜能和预后.     

神经元型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子与自然流产关系的观察

目的探讨神经元型一氧化氮合酶（nNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）与自然流产的关系。方法应用免疫组织化学法和图像分析（NIS—DR）软件检测孕40～90d自然流产和正常人工流产患者胎盘组织nNOS和VEGF的表达规律，数据的组间比较采用单因素方差分析。结果妊娠第40～90d的正常人工流产患者的绒毛组织内均有nNOS和VEGF的阳性表达，自然流产患者的绒毛组织内VEGF呈弱阳性或阴性表达，nNOS阳性表达的积分光密度（IOD）值呈先降低再增高趋势，两两比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论nNOS和VEGF的正常表达可以维持妊娠，异常表达可能会引发自然流产。     

survivin和环氧化酶-2在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其相关性

目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中凋亡抑制蛋白survivin和环氧化酶-2（cox-2）的表达与肿瘤生物学行为之间的关系及其二者的相关性。方法应用免疫组化Envision法，检测42例膀胱移行细胞癌组织标本和10例非肿瘤正常膀胱组织（正常对照组）中survivin和cox-2的表达。结杲42例膀胱移行细胞癌组织中survivin和COX-2表达的阳性率分别为78．6％和81．0％，正常对照组中均未见表达；survivin表达强度与肿瘤分期及复发呈正相关关系（P〈O．05），而与肿瘤分级无关（P〉O．05）；cox-2表达强度与肿瘤分级和分期呈正相关关系（P〈0．05），而与肿瘤复发无关（P〉0．05）；survivin和cox-2在膀胱移行细胞癌中的表达密切相关（rs=0．327，P〈0．05）。二者的表达与患者的性别、年龄、术时肿瘤的大小、数目及部位无关（P〉0．05）。结论Survivin和cox-2在膀胱移行细胞癌组织中普遍表达，且表达密切相关，二者可能在膀胱癌的发生、发展过程中起重要作用，并与浸润关系密切。     

早期自然流产患者绒毛、蜕膜组织中血红素氧合酶-一氧化碳的表达

目的 探讨血红素氧合酶(HO)和内源性一氧化碳(CO)在早期自然流产患者绒毛和蜕膜组织中的表达情况及其相关性.方法 应用免疫组化法检测20例正常早孕和30例早期自然流产(SA)患者绒毛和蜕膜组织HO-1、HO-2的表达,双波长定量的方法测定两组碳氧血红蛋白(COHb)水平.结果 HO-1蛋白主要定位于蜕膜上皮细胞、蜕膜细胞、绒毛滋养层细胞和绒毛间质,HO-2蛋白主要定位于蜕膜上皮细胞、蜕膜细胞、绒毛滋养层细胞、绒毛间质和血管内皮细胞.SA组绒毛滋养细胞、绒毛间质HO-1、HO-2表达的水平均明显低于正常早孕组(P<0.01);SA组绒毛血管内皮细胞及蜕膜细胞、蜕膜血管内皮细胞HO-2表达的水平均明显低于正常早孕组(P<0.05);两组蜕膜腺上皮细胞HO-2的表达及HO-1在蜕膜组织的表达均无显著差异(P>0.05);SA组绒毛和蜕膜组织中的COHb含量明显低于正常早孕组(P<0.01,P<0.05).结论 HO-CO在母胎界面表达水平降低可能与早期自然流产的发病有关.     

缺氧对肝癌细胞系HepG2表达VEGF的影响

目的研究缺氧条件下肝癌细胞系HepG2表达血管内皮生长因子（VEGF）的变化。方法分别在缺氧（缺氧组）和有氧（对照组）条件下培养HepG2细胞．采用免疫组织化学染色、MTT比色、细胞计数和ELISA方法．检测2组VEGF表达、HepG2细胞生长情况和培养上清液中VEGF含量。结果缺氧培养可抑制HepG2细胞的生长．缺氧培养48和72h后．HepG2细胞的生长速度明显低于对照组相应时相（P〈0．05．P〈0．01）；缺氧培养24和48h后．HepG2细胞上清液中VEGF含量明显高于对照组相应时相（P〈0．05。P〈0．01）。结论缺氧可以促进肝癌细胞HepG2表达分泌VEGF．这可能是经导管肝动脉化疗栓塞术后VEGF高表达的原因。     

Notch1/DLL4信号通路与VEGF在胃癌浸润和转移中的作用及其相关性

目的：探讨Notch1和其配体DLL4蛋白在胃癌组织中的表达及其与肿瘤血管转移之间的关系。
方法：采用免疫组织化学SP法检测45例胃癌及25例癌旁正常组织中Notch1,DLL4,VEGF的表达情况,并分析它们与各临床病理参数的关系。
结果：Notch1,DLL4,VEGF蛋白在胃癌中表达的阳性率均明显高于正常胃黏膜组织,差异均有统计学意义（P＜0.01）。Notch1蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移（P＜0.01）及远处转移（P＜0.05）有关;DLL4蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度（P＜0.01）,淋巴结转移及临床分期（P＜0.05）有关;VEGF蛋白在胃癌中表达与浸润深度（P＜0.01）、淋巴结转移、远处转移及TNM分期（P＜0.05）有关,上述各因素分组间差异有统计学意义。Notch1,DLL4,VEGF蛋白的表达三者两两间均呈正相关关系（rs=0.355,rs=0.367,rs=0.334;均P＜0.05）。
结论：Notch1/DLL4受体通路在胃癌组织中的表达上调与血管内皮生长因子有关,它们可能共同调控肿瘤新生血管形成,参与胃癌的侵袭和转移。     

埃兹蛋白在早孕自然流产患者蜕膜、绒毛的表达

目的探讨埃兹蛋白在胎盘形成过程中是否有作用及其与自然流产的关系。方法采用免疫组织化学方法检测自然流产组及正常妊娠组蜕膜和绒毛中埃兹蛋白的表达。结果在蜕膜及绒毛组织的蜕膜细胞以及滋养层细胞的胞膜和胞浆内均可见深浅不一的棕黄色颗粒沉着。与正常妊娠组相比,自然流产组蜕膜组织中埃兹蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与正常妊娠组相比,自然流产组绒毛组织中埃兹蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论自然流产组较正常妊娠组蜕膜及绒毛组织中埃兹蛋白的表达减弱,推测埃兹蛋白低表达可能与胚泡植入过程中胚泡不易黏附、滋养层细胞侵袭力下降、胎盘形成不良有关,提示埃兹蛋白可能在胎盘形成及妊娠的维持过程中起作用。     

MiR-30d在稽留流产胎盘绒毛组织中表达的研究

目的通过研究miR-30d在人稽留流产胎盘绒毛组织中的表达模式,探讨miR-30d与稽留流产的关系。方法收集2013年1月至2014年12月于石家庄第六医院治疗的稽留流产患者及同期该院1∶1匹配的正常人工流产孕妇为研究对象,分别为稽留流产组(80例)和对照组(80例);将稽留流产组按照年龄不同分为4个亚组:年龄≤25岁组(Y≤25)、26～30岁组(Y 26～30)、31～35岁组(Y 31～35)、≥36岁组(Y≥36)。收集各组绒毛组织,利用qRT-PCR技术和原位杂交技术检测miR-30d在胎盘绒毛组织中的表达及定位。结果两组比较发现miR-30d在稽留流产组绒毛组织中的表达有上调趋势,但尚无显著性差异(P0.05)。与对照组比较,miR-30d在Y≤25组患者胎盘绒毛组织中表达显著下调(P0.01),在Y26～30组患者胎盘绒毛组织中表达极显著降低(P0.01),在Y 31～35组患者胎盘绒毛组织中表达上调(P0.05),在Y≥36组患者胎盘绒毛组织中表达没有显著变化(P0.05)。进一步分析发现在Y≤25组中,70%稽留流产患者胎盘绒毛组织中miR-30d表达显著下调(P0.01);在Y 26～30组,100%稽留流产患者胎盘绒毛组织中miR-30d表达显著下调(P0.01);而在Y 31～35组和Y≥36组,miR-30d的表达没有明显规律。原位杂交结果显示miR-30d表达主要定位于胎盘绒毛合体滋养层细胞。结论对于小于30岁的稽留流产患者,miR-30d在胎盘合体滋养层中表达下调,可能是引起稽留流产的原因之一。     

乳腺浸润性导管癌组织中COX-2和Ki-67的表达及相关性分析

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）和Ki-67在乳腺浸润性导管癌组织中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学sP方法检测82例乳腺浸润性导管癌组织和相应癌旁正常组织中COX．2和Ki．67蛋白表达,并分析二者表达的相关性以及其表达与乳腺浸润性导管癌患者临床病理特征的关系。结果①在82例乳腺浸润性导管癌组织中COX-2和Ki．67蛋白表达阳性率均分别明显高于其在相应癌旁正常组织中的表达阳性率[COX．2：71．95％（59／82）比8．54％（7／82）,z。=68．56,P〈0．001;Ki-67：64．63％（53／82）比13．42％（11／82）。X2=45．20,P〈0．001]。②COX．2和Ki．67蛋白阳性表达与肿瘤TNM分期（cox．2：rs=O．349,P〈0．05;Ki．67：rs=0．305,P〈0．05）、淋巴结转移（cOx-2：rs=0．336,P〈0．05;Ki-67：rs=0．419,P〈0．01）、脉管侵犯（cOx-2：rs=0．235,P〈0．05 ki-67：rs=0．461,P〈0．01）及组织学分级（cox-2：rs=0．434,P〈0．01;Ki-67：rs=0．378,P〈0．05）均呈正相关;Ki．67蛋白阳性表达与肿瘤直径呈正相关（rs=0．365,P〈0．01）,而COX．2蛋白阳性表达与此无关（rs=0．135,P〉0．05）;COX-2和Ki-67蛋白阳性表达皆与患者是否绝经无关（cox-2：rs=O．172,P〉0．05;Ki．67：rs=0．163,P〉0．05）。③在浸润性导管癌组织中COX．2和幻．67蛋白阳性表达呈正相关性（rs=0．475,P〈0．01）。结论在乳腺浸润性导管癌组织中COX．2和Ki．67的表达均增高,两者与乳腺浸润性导管癌临床病理特征密切相关,对两者进行联合检测可反映乳腺浸润性导管癌的生物学行为,COX-2有可能成为乳腺癌治疗的一个新靶点。     

EGFL7和VEGF在肾透明细胞癌血管生成及转移中的相关性研究及临床意义

目的：探讨表皮生长因子样结构域7（EGF_1ikedomain7,EGFL7）、血管表皮生长因子（vascularen—dothelialgrowthfactor,VEGF）在肾透明细胞癌中的表达及其与肾癌血管生成和转移的关系。方法：选取87例行根治性肾切除的肾透明细胞癌患者癌及癌旁组织标本,采用免疫化学SP法检测EGFL7、VEGF的表达,并计数血管内皮细胞表面抗原（CD34）标记的血管密度（MVD）;同时选取46例癌及癌旁组织标本,采用RT—PCR检测EGFL7mRNA的表达。结果：EGFL7和VEGF阳性表达率及MVD值在癌组明显高于癌旁组（P〈O．05）,且EGFL7、VEGF与MVD在肾透明细胞癌组织中的表达呈正相关,并与肿瘤分级、分期显著相关（P〈0．05）;EG—FL7mRNA阳性表达率明显高于癌旁组织（P〈O．05）,并与肿瘤分级、分期相关（P〈O．05）。结论：肾透明细胞癌组织中EGFL7、VEGF的表达与肾癌血管生成有关,两者可能协同肿瘤新生血管的生成。     

稽留流产的临床病因学及局部血流动力学研究

目的探讨稽留流产的临床病因学及局部血流动力学改变。方法稽留流产患者20例（稽留流产组）,要求人工终止妊娠的正常妊娠妇女20例（正常妊娠组）,记录两组吸烟、阴道流血及TORCH试验阳性患者比例,均经阴道彩色多普勒检测双侧子宫动脉及绒毛间的血流动力学变化。结果稽留流产组孕妇的年龄与正常妊娠组差异无统计学意义（P〉0.05） 稽留流产组孕妇的吸烟比例以及TORCH病毒感染率虽高于正常妊娠组,但组间比较无统计学差异（P〉0.05） 怀孕时稽留流产组出现阴道流血的比例高于正常妊娠组,组间比较差异有统计学意义（P〈0.01）。两组子宫动脉的收缩期峰值血流速度（PSV）、舒张末期血流速度（EDV）比较无统计学差异（P〉0.05）,但稽留流产组子宫动脉阻力指数（RI）和PSV/EDV明显高于正常妊娠组（P〈0.05）。两组绒毛间血流动力学指标无显著性差异（P〉0.05）。结论稽留流产的临床病因学较为复杂,稽留流产时子宫动脉的高阻力状态可能引起胎儿血供减少,从而进一步导致流产的发生。     

解偶联蛋白2在蜕膜巨噬细胞活性调控中的作用及与复发性流产的关系

目的探讨蜕膜巨噬细胞解偶联蛋白2(UCP2)表达、细胞内活性氧(ROS)、吞噬活性之间的关系及其在原因不明复发性流产发病中的作用。方法采用免疫磁珠法分离11例原因不明复发性流产患者和12例正常早孕妇女蜕膜巨噬细胞,流式细胞技术检测两组蜕膜巨噬细胞UCP2的表达、细胞内ROS水平;同时检测巨噬细胞吞噬活性。结果蜕膜巨噬细胞UCP2表达与细胞内ROS水平负相关(r=-0.572,P0.01),与巨噬细胞吞噬活性负相关(r=-0.462,P0.05)。与正常早孕妇女比较,原因不明复发性流产患者蜕膜巨噬细胞UCP2表达明显下降,细胞内ROS水平升高,其吞噬活性增强。结论UCP2通过控制巨噬细胞内ROS水平,调节细胞活性,在维持正常妊娠免疫耐受和原因不明复发性流产发病中起重要作用。     

乳腺癌组织中survivin及其剪接体与VEGF的表达及临床意义

目的 研讨抗凋亡蛋白survivin及其剪接体survivin—△Ex3、survivin-2B与血管内皮生长因子（VEGF）在乳腺癌组织中表达情况及其与临床病理学指标的关系。方法以RT—PCR法检测100例乳腺癌及癌旁5cm正常乳腺组织标本中survivin及其剪接体survivin—△Ex3、survivin-2B与VEGF基因的mRNA表达,半定量分析电泳结果。以免疫组化法检测乳腺癌石蜡标本中的雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和HER-2基因状态。结果Survivin及其剪接体survivin—△Ex3、survivin-2BmRNA在乳腺癌组织中均有较高表达,在癌旁5cm正常乳腺组织中均低表达,差异有统计学意义（P〈0．05）;VEGFmRNA在乳腺癌组织中均有较高表达,在正常乳腺组织中均低表达,差异有统计学意义（P〈0．05）;淋巴结转移与survivin-△Ex3、survivin-2B的表达相关（P〈0．05）。结论Survivin及其剪接体survivin—△Ex3、sur-vivin-2B与VEGF的表达与乳腺癌发生、发展有关,与其他预后指标ER、PR、HER-2等的联合检测可望对患者的预后作出更准确的预测。     

SURVIVIN、VEGF、CASPASE-3在血管瘤不同时期的表达及其相关性研究

目的研究不同时期的血管瘤组织中,Survivin、VEGF、活化Caspase-3的变化,并对其表达进行相关性分析,探讨其变化对血管瘤病程演化的影响。方法采用免疫组织化学检测Survivin、VEGF、活化Caspase-3在45例血管瘤(增生期30例,消退期15例)和15例正常皮肤组织中的表达。结果①Survivin主要表达在血管瘤内皮细胞胞核中,在增生期、消退期的阳性表达率分别为80%(24/30)和60%(9/15),正常组织中不表达;其表达在血管瘤的增生期、消退期及正常组织的两两比较均有统计学意义。②VEGF主要在血管瘤内皮细胞的胞浆和胞膜中表达,增生期、消退期的阳性表达率分别为90%(27/30)和46.7%(7/15),正常组织不表达;其表达在血管瘤的增生期、消退期及正常组织的两两比较均有统计学意义。③活化Caspase-3主要在血管瘤内皮细胞胞核中表达,在血管瘤增生期、消退期阳性表达率分别为60.0%(18/30)和86.7%(13/15),正常组织中不表达;其表达在血管瘤的增生期、消退期及正常组织的两两比较均有统计学意义。④血管瘤中VEGF的表达与Survivin的表达呈显著正相关(r=0.54,P<0.01);血管瘤中Survivin与活化Caspase-3的表达呈显著负相关(r=-0.51,P<0.01)。结论 VEGF、Survivin抑制Caspase-3的途径可能在血管瘤增生、消退过程中起关键作用,靶向处理该途径有望为血管瘤和各种血管形成性疾病提供新的治疗靶点。     

淋巴细胞主动免疫联合地屈孕酮治疗封闭抗体阴性所致复发性流产的临床观察

目的观察淋巴细胞主动免疫联合地屈孕酮在封闭抗体阴性所致复发性流产治疗中的疗效。方法 55例封闭抗体阴性所致的复发性流产,随机分为2组。治疗组30例,采用淋巴细胞主动免疫联合地屈孕酮常规保胎治疗;对照组25例,未行淋巴细胞主动免疫治疗,仅采用地屈孕酮常规保胎治疗。观察妊娠结局及不良反应。结果治疗组妊娠成功率为83.3%(25/30),显著高于对照组的妊娠成功率44.0%(11/25)(P0.05)。免疫治疗后,封闭抗体阳性组妊娠成功率91.7%(22/24)显著高于封闭抗体阴性组[50.0%(3/6)](P0.05)。结论淋巴细胞主动免疫联合地屈孕酮治疗封闭抗体阴性所致复发性流产患者妊娠成功率较高;主动免疫治疗后封闭抗体阳性组较阴性组妊娠率高。