幽门螺杆菌经ROS通路激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18

目的:研究幽门螺杆菌(H.pylori)对NLRP3炎症复合体活化的影响及活性氧(ROS)在其中的作用。方法:将THP-1细胞与H.pylori SS1共孵育,于不同时间点收集细胞及上清,ELISA检测细胞上清中IL-1β和IL-18的含量;流式细胞术(FCM)检测胞内ROS的产生;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中caspase-1活性亚单位p10的表达;检测ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)及NLRP3特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)预处理细胞后相关信号分子的表达。结果:H.pylori SS1能以时间依赖性和剂量依赖性方式诱导THP-1细胞产生IL-1β、IL-18和胞内ROS;H.pylori SS1刺激能使THP-1细胞NLRP3和caspase-1 mRNA转录水平显著升高;NAC及NLRP3-siRNA预处理THP-1细胞能显著降低H.pylori SS1诱导的NLRP3炎症复合体相关成份的表达及细胞因子的分泌。结论:H.pylori SS1株通过ROS途径激活NLRP3炎症复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18,这可能与机体的先天免疫防御及细菌的致病作用相关。     

IL-1β和IL-18在鼠巨细胞病毒播散性感染中的表达及意义

目的:在整体水平观察鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus,MCMV)播散性感染时脏器病毒载量、caspase-1的活化及其下游因子IL-1β和IL-18的表达状况。方法:建立MCMV播散性感染模型,MCMV Smith株接种后第0、3、7和14天各处死4只小鼠;同时设模拟感染小鼠作为对照。标准空斑试验检测唾液腺、肺和肝组织病毒滴度;Western blot法检测脾细胞中procaspase-1及其活化形式caspase-1的表达强度;双抗体夹心ELISA法检测血清IL-1β和IL-18水平;免疫组化法检测唾液腺、肺和肝组织中IL-1β和IL-18表达状况。结果:肝组织病毒滴度于MCMV感染后3天升高,其后迅速减低,感染2周内肺组织中未检测到病毒,而唾液腺组织病毒滴度呈逐渐增高趋势;与模拟感染对照组比较,播散性感染组感染后3天脾细胞中procaspase-1和caspase-1的表达明显升高(相对吸光值均P<0.01);同时,血清IL-1β和IL-18水平升高达峰值(均P<0.01)。结论:MCMV感染后炎性体活化,caspase-1表达升高;其下游信号IL-1β和IL-18成熟释放增加,并呈组织差异性表达。     

野百合碱诱导大鼠肺动脉高压模型的建立

背景：目前尚缺乏简单易行、实用、操作性强的肺动脉高压动物模型。 目的：建立一种实用的注射野百合碱诱导的肺动脉高压动物模型。 方法：采用一次性皮下注射野百合碱60 mg/kg的方法制备SD大鼠肺动脉高压模型。 结果与结论：野百合碱注射后第1,2,3,4周,大鼠平均肺动脉压明显升高,右心室肥厚明显。光镜下可见肺小血管肌化程度增强,相对中膜厚度增加,肺血管密度减少,以上症状均随野百合碱注射时间的延长逐渐加重。证实此方法建立的大鼠肺动脉高压模型造模成功。     

ROCK I及TGF-β1在慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠肺小动脉的表达

目的：观察Rho激酶（ROCK I）及转化生长因子β1（TGF—β1）在慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠肺小动脉表达的动态变化。方法：雄性Wistar大鼠64只，随机分为8组，每组8只：初始对照组、栓塞3d组、1周组、2周组、4周组、8周组、12周组、终末对照组。采血制备血栓，颈静脉注入，2周后第2次栓塞，全程腹腔注射氨甲环酸。达实验设定日期后，测各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、肺动脉相对中膜厚度（PAMT）、管壁面积／管总面积（WA／TA）、右室肥厚指数（RVHI），原位杂交检测ROCK I mRNA表达，免疫组化检测TGF—β1蛋白表达。结果：栓塞4周组至12周组大鼠随时间延长mPAP明显增高（均P〈0．01）；PAMT、WA／TA在4周后随时间延长显著增高（4周组P〈0．05，8周、12周组P〈0．01）；8周后RVHI较对照组明显增高（8周组P〈0．05，12周组P〈0．01）；栓塞后ROCK I mRNA原位杂交染色强度随时间延长出现增高趋势（3d组至2周组P〈0．05，4周组至12周组P〈0．01），TGF—β1蛋白免疫组化染色强度随时间延长出现增高趋势（1周组、2周组P〈0．05，4周组至12周组P〈0．01）。相关分析表明，ROCK I mRNA及TGF—β1蛋白与mPAP、RVHI及血管重构指标均呈正相关（均P〈0．01）；ROCKImRNA与TGF—β1蛋白表达呈正相关（r=0．612，P〈0．01）。结论：ROCKI和TGF—β1均可能参与慢性血栓栓塞性肺动脉高压、肺血管重构的病理生理过程，此过程中Rho／Rho激酶信号通路可能是TGF—β1发挥生物学效应的重要途径之一。     

贝前列素促进野百合碱诱导肺动脉高压大鼠肺动脉细胞凋亡

目的 探讨前列环素对肺动脉细胞凋亡的影响.方法 30只大鼠,随机分为对照组、野百合碱(MCT)组及贝前列素组.MCT组及贝前列素组腹腔注射60 mg/kg MCT,对照组腹腔注射等体积0.9％氯化钠注射液;第2天起,贝前列素组每天200μg/kg贝前列素灌胃.所有大鼠饲养21 d后,观察肺动脉血流动力学及右心肥厚、肺组织HE和TUNEL染色分别观察肺动脉重塑和肺动脉细胞凋亡,实时定量PCR及Western blot观察肺动脉内BAX、BCL-2和PDK mRNA和蛋白水平的改变.结果 贝前列素组大鼠的平均肺动脉压力,右心肥厚指数及肺动脉管壁厚度均明显低于MCT组(P＜0.05).贝前列素组大鼠肺动脉细胞凋亡较MCT组增加,肺动脉组织中BAX mRNA和蛋白水平均高于MCT组,而BCL-2与PDK mRNA和蛋白水平均显著降低.结论 贝前列素可以通过促进肺动脉细胞凋亡改善野百合碱诱导肺动脉高压大鼠的肺动脉重塑.     

过表达miRNA-29a对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压的作用

目的:检测微小RNA(miRNA)-29a在野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉血管壁组织中的表达,研究过表达miRNA-29a对肺动脉高压大鼠的影响,并探讨其初步机制。方法:在野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠模型上,用实时荧光定量PCR测定肺组织miRNA-29a的表达水平;尾静脉注射miRNA-29a-mimic后,记录大鼠肺动脉压和体循环动脉压,苏木素-伊红染色观察肺动脉组织的形态,Western blot检测肺动脉组织中p-Akt与peNOS的蛋白水平。结果:野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉血管壁组织中miRNA-29a呈低表达;过表达miRNA-29a后,大鼠肺动脉压明显下降,体循环血压无显著变化,肺动脉中膜增厚程度显著减弱,肺血管重构现象不明显,p-Akt与p-eNOS的蛋白水平上调。结论:过表达miRNA-29a对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压具有改善作用,可能与激活PI3k/Akt-eNOS信号通路有关。     

NLRP3炎症小体及其下游分子在幽门螺杆菌感染小鼠的表达

目的 研究NLRP3炎症小体信号通路相关分子在幽门螺杆菌(H.pylori)感染C57BL/6小鼠胃组织和血清中的表达情况,初步探讨NLRP3炎症小体信号通路在H.pylori致病中的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为H.pylori感染组和PBS对照组,于感染后不同时间点处死小鼠,RT-PCR检测小鼠胃组织中NLRP3炎症小体和下游信号通路分子mRNA表达,Western blot法检测小鼠胃组织中caspase-1蛋白表达,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-18和IL-33含量.结果 与对照组相比,H.pylori感染组小鼠胃黏膜均呈慢性炎症改变,且随时间延长,炎症程度逐渐加重.NLRP3炎症小体信号通路相关分子mRNA及caspase-1蛋白表达水平显著升高,血清中IL-1β、IL-18、IL-33的含量均显著增高.结论 H.pyori感染可以激活NLRP3炎症小体信号通路.     

野百合碱诱导大鼠肺动脉高压时对肺血管壁Jagged2/Notch3信号分子表达的影响

目的:观察野百合碱诱导大鼠肺动脉高压时肺血管壁Jagged2/Notch3信号分子表达的变化,探讨Jagged2/Notch3信号在肺动脉高压发生中的作用和意义。方法:45只SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、溶剂对照组(S组)和野百合碱模型组(M组),每组15只,通过一次性腹腔注射野百合碱50 mg/kg建立肺动脉高压模型,溶剂对照组注射相同剂量的溶媒。4周时通过HE染色观察肺血管重构,通过右心导管测定平均肺动脉压(m PAP)和右心室收缩压(RVSP)。采用免疫组化和实时荧光定量PCR等方法检测肺血管壁Jagged2/Notch3/Hes5蛋白和mRNA表达的变化。结果:与正常对照和溶剂对照组相比,4周时野百合碱模型组的血管壁显著增厚,中膜厚度百分比增加(P0.01);此外野百合碱模型组的m PAP和RVSP显著高于正常对照和溶剂对照组(P0.01);免疫组化和实时荧光定量PCR结果提示Jagged2主要表达于肺小动脉内膜,Notch3、Hes5主要表达于肺小动脉中层平滑肌,与溶剂对照组以及正常对照组相比,野百合碱模型组肺小动脉的Jagged2、Notch3和Hes5表达显著增高。结论:Jagged2/Notch3信号分子的激活可能在野百合碱诱导肺动脉高压发生中起重要作用。     

大鼠原代肾小管上皮细胞上IL-18Rα、β链的表达

目的:检测培养的大鼠原代肾小管上皮细胞(renal tubularepithelialcells,RTECs)是否表达IL-18Rα和IL-18RβmRNA。方法:以肾小管节段贴块法进行原代RTECs的培养。用免疫细胞化学染色法鉴定细胞的类型,用RT-PCR检测RTECs中IL-18RαmRNA及IL-18RβmRNA的表达。结果:免疫细胞化学染色法证实,原代培养的细胞均为RTECs,并表达IL-18RαmRNA和IL18RβmRNA。结论:在RTECs中有IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA的表达,为探讨IL-18R在肾间质纤维化中提供了实验依据的作用。     

肺动脉高压患者肺组织S1PR1/2/3的表达

目的探讨肺动脉高压患者肺组织1-磷酸鞘氨醇受体1/2/3(sphingosine-1-phosphate receptor1/2/3,S1PR1/2/3)的表达变化,为肺动脉高压发病机制的深入研究奠定基础。方法人的肺组织来源于黑龙江省医院,其中对照组取自右下肺叶球形性变实施肺叶切除患者的肺组织,病变组取自患有特发性肺动脉高压尸检患者的肺组织,应用免疫印迹及实时定量PCR技术检测S1PR1/2/3的表达变化。结果原发性肺动脉高压患者肺组织S1PR1/2/3蛋白的光密度值分别为2.00±0.03,0.86±0.13,0.94±0.03,m RNA的绝对定量值分别为3.90±0.42,2.50±0.37,92.08±11.26,较对照组蛋白的光密度值(0.88±0.29,0.27±0.07,0.54±0.06)及m RNA的绝对定量值(1.44±0.33,1.12±0.15,1.63±0.56)明显增高(P0.01)。结论原发性肺动脉高压患者肺组织S1PR1/2/3的表达上调,提示S1PR1/2/3在肺动脉高压发病过程中可能发挥了重要的作用。     

幽门螺杆菌空泡毒素VacA促进胃上皮细胞NLRP3炎性小体激活

目的探究H. pylori空泡毒素VacA对胃上皮细胞NLRP3炎性小体激活的影响。方法采用WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695感染AGS细胞,Western blotting、q RT-PCR、ELISA检测NLRP3、Pro-Caspase-1、Caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β的表达。siRNA-NC、siRNA-NLRP3转染AGS后,分别用PBS、WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695刺激,qRT-PCR和细胞因子ELISA检测试剂盒分别检测pro-IL-1β的mRNA表达水平和IL-1β的蛋白表达水平。收集慢性胃炎患者标本,鉴别出H. pylori阳性患者的VacA基因型(s1m1型和s1m2型),通过q RT-PCR检测NLRP3、caspase-1、pro-IL-1β的mRNA表达水平及采用细胞因子ELISA试剂盒检测IL-1β蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射DMSO或者DMSO+Mcc950,H. pylori菌液灌胃,qRT-PCR和ELISA检测胃组织IL-1β的表达。结果 H.pylori感染AGS细胞,与对照组相比,WT H. pylori26695组IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P0.01);△VacA H. pylori26695组与WT H. pylori26695组相比,IL-1β的m RNA和蛋白表达水平均明显下降(P0.01)。与siRNA-NC组相比,采用WT H. pylori26695和△VacA H. pylori 26695刺激转染siRNA-NLRP3的AGS细胞pro-IL-1β的m RNA水平和IL-1β蛋白表达水平均明显下调(P0.01)。H. pylori阳性患者较阴性患者NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平明显升高(P0.01);与VacA s1m2型患者相比,VacA s1m1型患者NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平显著升高(P0.01),同时IL-1β成熟分泌增加。H. pylori慢性胃炎小鼠动物模型中,与对照组相比,Mcc950组中在WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695灌胃后,pro-IL-1β的mRNA水平和IL-1β蛋白水平表达均明显下调(P0.01)。结论H. pylori空泡毒素VacA能够激活胃上皮细胞NLRP3炎性小体,促进IL-1β的成熟分泌。     

野百合碱所致肺动脉高压大鼠模型中碱性成纤维细胞生长因子、内皮素-1及其受体的表达和外源性NO的作用

目的:探讨野百合碱(MCT)肺动脉高压模型大鼠肺组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、内皮素-1(ET-1)和内皮素A受体(ET_AR)的表达, 并观察吸入外源性NO的作用。方法:通过腹腔注射MCT建立肺动脉高压大鼠模型;使用NO吸入装置给予大鼠外源性NO;采用免疫组织化学方法定量检测不同组间肺组织中bFGF、ET-1及ET_A受体的表达。结果:模型组肺动脉压、右心室肥厚程度、bFGF、ET-1及ET_A受体的表达明显高于对照组, 外源性NO吸入能明显减低肺动脉压、右室肥厚程度、bFGF、ET-1及ET_A受体的表达。结论:bFGF、ET-1及ET_A受体可能参与了MCT所致肺动脉高压的发生发展, 外源性NO吸入可能通过ET-1及ET_A受体途径阻止或逆转肺动脉高压的发展, 但如何通过bFGF起作用还有待探讨。     

支气管哮喘伴发抑郁大鼠血液及肺组织IL-1β、IL-6含量的变化

目的:建立支气管哮喘伴发抑郁的动物模型,探讨支气管哮喘伴发抑郁时机体免疫功能的变化。方法:选择Wistar大鼠,随机分为对照组、哮喘组、哮喘伴发抑郁组,采用经典的卵蛋白(ovalbumin,OVA)激发法略加改进建立哮喘模型,在此基础上给予慢性轻度不可预见性应激刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)28d复制抑郁模型,综合评价动物模型是否成功,酶联免疫技术测定各组大鼠血液及肺部组织IL-1β、IL-6的含量。结果:支气管哮喘伴发抑郁大鼠模型建立成功;哮喘伴发抑郁组大鼠血液及肺部组织IL-1β含量,与对照组比较明显升高(P0.05),与哮喘组比较亦有增高趋势;哮喘伴发抑郁组大鼠血液及肺部组织IL-6含量,与对照组比较明显升高(P0.05),与哮喘组比较亦有增高趋势。结论:OVA激发加CUMS可成功制备支气管哮喘伴发抑郁大鼠模型,该模型血液及肺部组织IL-1β、IL-6的含量明显升高。     

树莓酮对NASH大鼠血液中TNF-α、IL-1和IL-18表达的影响

目的观察树莓酮对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠血液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-18(IL-18)的影响。方法 SD大鼠50只,分为5组:正常对照组(NC),模型组(M)树莓酮低剂量组(RKL)树莓酮中剂量组(RKM)和树莓酮高剂量组(RKH)。采用高脂饲料喂养复制NASH大鼠模型。在RKL组、RKM组和RKH组饲喂高脂饲料4周后,分别以浓度为5g/L,10g/L,20g/L的树莓酮溶液进行干预。给药4周后,处死大鼠,采集肝脏标本,HE染色作肝脏病理组织学检查;醋酸双氧铀柠檬酸铅染色,透射电镜观察肝脏组织超微结构变化;酶联免疫法(ELISA)测量血液中TNF-α、IL-1和IL-18的水平。结果与NC组比较,M组肝细胞出现明显脂肪变性,肿大,胞浆内充满脂肪空泡或脂滴,线粒体嵴消失等结构异常改变明显并且血液中TNF-α、IL-1和IL-18的水平显著升高(P<0.05)。与M组比较,RKL、RKM、RKH三个剂量组肝细胞异常结构均有不同程度的改善并且三个剂量组血液中的TNF-α、IL-1和IL-18水平均有不同程度降低(P<0.05)。结论树酶酮改善NASH的作用,可能与降低大鼠血液中炎症因子TNF-α、IL-1和IL-18的水平相关。     

脂肪间充质干细胞对野百合碱诱发的肺动脉高压大鼠肺动脉钙离子通道的影响

 目的：探讨脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)移植对野百合碱（monocrotaline,MCT）诱发的肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）大鼠肺动脉钙离子通道的影响。方法：胶原酶消化法分离培养ADMSCs。雄性SD大鼠24只,分为正常对照组（Ctr组）、PAH组和ADMSCs组,每组8只。右心导管法测定大鼠的平均肺动脉压(MPAP);称重法测右心室肥厚指数（RVHI）;分别用RT-PCR及Western blotting法测定大鼠肺动脉干电压门控性钙离子通道α1c亚基（CaVα1c）肌浆/内质网Ca2+ ATP酶2a（SERCA-2a）、三磷酸肌醇受体1（IP3R-1）、瞬时受体电位通道1（TRPC1）和TRPC6 mRNA和蛋白的表达水平。结果：（1）MCT注射4周后,与Ctr组相比, PAH组大鼠MPAP和RVHI均显著升高（P<0.05）;ADMSCs移植2周后,与PAH组相比,ADMSCs组MPAP和RVHI均明显降低（P<0.05）。（2）与Ctr组相比,PAH组大鼠肺动脉CaVα1c、TRPC1和TRPC6 mRNA及蛋白表达水平均明显增强（P<0.05）,SERCA-2a 和IP3R-1 mRNA及蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）;与PAH组相比,ADMSCs组CaVα1c、TRPC1和TRPC6的表达均明显降低（P<0.05）,SERCA-2a 和IP3R-1的表达均明显增强（P<0.05）。结论：ADMSCs能有效地降低MCT诱发的PAH大鼠的肺动脉压力,减轻右心室肥厚。ADMSCs降低肺动脉压力可能与钙离子通道变化有关。     

卒中后抑郁大鼠外周血及海马中IL-1β的表达

目的观察卒中后抑郁(post-stroke depression, PSD)大鼠外周血及海马中IL-1β的表达,探讨IL-1β在PSD发病中的作用。方法 250-300g雄性SD大鼠,分为对照组、PSD组。PSD组分三个阶段连续监测:缺血性脑卒中(Ischemic stroke,IS)再灌注24h后、PSD造模2周末、PSD造模4周末。预饲养一周后线栓法制备IS模型,恢复一周后给予大鼠温和不可预知性刺激,持续4周,制备PSD模型。分别用ELISA法和免疫组化法检测血清和海马中IL-1β的表达。结果与对照组相比,IS大鼠血清中IL-1β表达增高,PSD组造模2周末、PSD组造模4周末时持续增高。与对照组相比,IS大鼠海马中IL-1β显著升高,24h达高峰,在PSD造模2周末和PSD造模4周末时,海马内IL-1β的表达相对于IS降低,但依然高于正常对照组。结论 IL-1β可能参与PSD发病的病理过程。     

慢性肺动脉高压大鼠肺小动脉内HIF-1α的表达增强并与NO有关

慢性低氧引起肺血管收缩、肺血管重建而致肺血管阻力持续升高,最终可导致肺动脉高压和右心室肥大,其发病机制至今尚不十分清楚。低氧诱导因子-1α(H IF-1α)作为一种转录因子,是一种重要的肺动脉对低氧反应的中介物。本实验采用慢性低氧伴高二氧化碳性肺动脉高压大鼠模型,观察H     

IL-1β对大鼠腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响

目的:研究白介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)对原代培养大鼠腹膜间皮细胞(PMCs)葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响,为防治腹透失超滤提供理论依据及方法。方法:胰蛋白酶消化法进行雄性Wistar大鼠PMCs的原代培养及传代,不同浓度IL-1β(0、1、10、50 ng/ml)作用不同时间(0、1、12、24、48小时),逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测GLUT1的mRNA表达,Western blot检测GLUT1蛋白的表达,生化分析仪检测培养液内葡萄糖浓度的变化,以培养液内葡萄糖的减少量作为细胞对葡萄糖的净利用。结果:IL-1β以浓度及时间依赖方式促进GLUT1 mRNA及蛋白的表达(P<0.05),同时伴有葡萄糖向细胞内转运的增加,50 ng/ml IL-1刺激48小时后GLUT1 mRNA表达与对照组相比增加了近4倍(P<0.01)。结论:IL-1β可以使PMCs细胞GLUT-1表达和葡萄糖摄取增加,这为防治腹透相关腹膜纤维化及腹透失超滤提供了线索。     

抑制TRAF6的E3泛素连接酶活性减轻野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重构

目的：探讨抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的E3泛素连接酶活性对野百合碱（MCT）诱导的肺动脉高压（PH）大鼠肺血管重构以及相关信号通路的影响。方法：采用随机数字表法将42只SPF级健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠分为4组：对照组（n=6）、MCT模型组（n=15）、C25-140(TRAF6特异性E3泛素连接酶活性抑制剂)组（n=6）和MCT+C25-140组（n=15）。MCT及MCT+C25-140组大鼠于实验开始时颈后皮下单次注射MCT60 mg/kg,建立PH模型,其他2组大鼠皮下注射5%DMSO作为对照。C25-140组及MCT+C25-140组大鼠于第14天、21天和28天腹腔注射9.8 mg/kg C25-140。第28天行超声心动图检测评估大鼠肺动脉压力和心室收缩力变化,之后对大鼠进行安乐死并取肺组织。通过HE染色和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色评估大鼠肺血管形态;采用免疫共沉淀检测大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中信号转导及转录激活因子3(STAT3)的K63泛素化水平;Western blot检测大鼠肺组织中TRAF6、S...     

血管紧张素-（1-7）对野百合碱诱导的肺动脉高压和肺血管重构的影响

目的： 探讨血管紧张素-（1-7）［Ang-(1-7)］对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压(PAH)模型中肺动脉压力和肺小动脉重构的影响。方法: 雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为:对照组、PAH组、PAH +Ang-(1-7)组。PAH 组和PAH+Ang-(1-7)组一次性颈部注射MCT60 mg/kg,24 h后经微泵持续泵入生理盐水或Ang-(1-7)(24 μg·kg-1·h-1)共4周。对照组一次性颈部注射相同体积的生理盐水,24 h后泵入生理盐水。4周后,测定大鼠的右室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),并运用图像分析软件,测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT %)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%)。通过放射免疫方法检测肺组织中一氧化氮(NO)浓度。 Western blotting分析肺组织内皮一氧化氮合酶(eNOS)和eNOS Ser1177-phosphorylation 的表达。 结果: PAH组与对照组相比,RVSP、RVHI、WT%、WA%明显升高（P<0.01）,肺组织中NO浓度、eNOS、eNOS Ser1177-phosphorylation 的表达水平显著降低（P<0.01）;Ang-(1-7)干预后RVSP、RVHI、WT%、WA %明显降低（P<0.01）,肺组织NO浓度、eNOS、eNOS Ser1177-phosphorylation 的表达明显升高（P<0.01）。结论: 在MCT诱导的肺动脉高压模型中,Ang-(1-7)可预防肺动脉高压的发生,同时抑制肺血管的重构,其机制可能与Ang-(1-7)升高肺组织NO浓度,上调eNOS的表达以及eNOS Ser1177-phosphorylation 水平有关。