miR-483-5p通过上调IGF2基因转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭

目的:探讨miR-483-5p对人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因P3启动子驱动的m RNA(P3 m RNA)表达的影响及其在肝细胞癌发生发展中的作用。方法:(1)采用real-time PCR检测人肝癌细胞株Huh7、Hep3B、Bel-7402、Hep G2和SMMC-7721,人正常肝细胞株HL-7702,83例人肝细胞癌组织和配对的癌旁组织,22例正常肝组织中miR-483-5p和P3 m RNA的表达水平,并应用Pearson相关分析评估P3 m RNA与miR-483-5p表达水平之间的关系。(2)将IGF2基因P3 m RNA的5’端非翻译区(5’UTR)克隆入p GL3启动子载体,构建P3 m RNA 5’UTR野生型(p GL3-P3-5’UTR-WT)及P3 m RNA 5’UTR突变型(p GL3-P3-5’UTR-MUT)重组萤光素酶报告质粒,将其分别与miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control共转染He La、293T及Huh7细胞,采用双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性。(3)分别将miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control转染Huh7及Hep3B肝癌细胞,应用real-time PCR检测这2种肝癌细胞P3 m RNA表达水平的变化。(4)应用real-time PCR检测肝癌细胞Huh7及Hep3B的细胞核和细胞质中miR-483-5p的表达水平;应用核连缀实验(nuclear run-on assay)分析miR-483-5p对P3 m RNA转录的影响;应用RNA稳定性实验分析miR-483-5p对P3 m RNA稳定性影响。(5)应用体外细胞功能实验研究miR-483-5p对Huh7肝癌细胞生长、凋亡、迁移与侵袭能力的影响。结果:(1)5种肝癌细胞株miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于正常肝细胞株HL-7702(P0.01),肝细胞癌组织中miR-483-5p及P3 m RNA表达水平均明显高于配对的癌旁组织及正常肝组织(P0.01);线性相关分析显示,在5种肝癌细胞株及肝细胞癌组织中,P3 m RNA表达水平均与miR-483-5p水平呈正相关。(2)萤光素酶实验显示,miR-483-5p与P3m RNA 5’UTR的同源位点互补结合可促进P3 m RNA的表达。(3)瞬时转染实验显示,过表达miR-483-5p呈剂量依赖性促进Hep3B和Huh7肝癌细胞P3 m RNA表达水平的增高。(4)miR-483-5p表达实验显示,成熟miR-483-5p存在于肝癌细胞Hep3B和Huh7的细胞质和细胞核中;核连缀实验显示,miR-483-5p诱导Huh7肝癌细胞核中新生P3 m RNA转录;RNA稳定性实验表明,miR-483-5p不改变Huh7肝癌细胞P3 m RNA稳定性。(5)体外细胞功能实验显示,miR-483-5p促进Huh7肝癌细胞增殖,抑制其凋亡,并增强迁移与侵袭能力。结论:miR-483-5p高表达可部分通过上调IGF2基因P3 m RNA转录促进肝癌细胞生长、迁移与侵袭,进而参与肝细胞癌发生。     

MicroRNA-539靶向调控E2F转录因子3抑制肝癌的发生与发展

目的 探讨肝癌组织中microRNA-539（miR-539）表达水平及其抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法 收集90例肝癌患者术后肝癌组织及癌旁组织标本,用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测组织中miR-539表达量。在PCL/PRF5、Huh7和QGY-7701肝癌细胞中转染miR-539 模拟物（mimics）,用Real-time PCR检测miR-539表达量。用MTT法检测miR-539对肝癌细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测miR-539对肝癌细胞凋亡的影响;用免疫印迹法检测miR-539对肝癌细胞中E2F转录因子3（E2F3）蛋白表达的影响。结果 肝癌组织中miR-539表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）;miR-539表达量与肝癌患者性别、年龄及肝癌组织分化程度无关（P>0.05）;与肿瘤直径和淋巴结转移相关（P<0.05）。转染miR-539 mimics组肝癌细胞中miR-539表达量显著高于空白组和miR-539 NC组（P<0.05）。在QGY-7701细胞中,过表达miR-539能显著抑制细胞增殖（P<0.05）,降低E2F3蛋白的表达（P<0.05）,对细胞凋亡无明显作用（P>0.05）。结论 miR-539是肝癌发生中的抑癌因子,可能是通过靶向下调E2F3蛋白水平达到抑制癌细胞的增殖。     

miR-133a-3p 通过抑制氧化还原因子1 抑制肝癌细胞恶性生物学行为

目的:通过多种实验途径探讨miR-133a-3p通过调节氧化还原因子1(Ref-1)对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:收集2017年2月～2018年12月来本院就诊的肝癌手术患者的癌组织和癌旁相邻正常组织标本,用qRT-PCR检测miR-133a-3p在癌组织和癌旁相邻正常组织中以及在肝癌细胞系HepG2、Huh-7、SK-Hep1、SMMC-7721和肝正常细胞Hep-3B中的表达;构建miR-133a-3p-mimics(miR-mimics组、miR-NC转染质粒组和正常对照组(Control),qRT-PCR检测转染前后miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验检测HepG2细胞转染前后增殖能力变化;细胞划痕和Transwell实验分别检测转染前后HepG2细胞的迁移和侵袭能力变化;RNA转录组测序检测HepG2细胞转染前后转录组RNA表达差异并作通路富集分析;qRT-PCR检测筛选RNA-seq中RNA表达差异较大的基因;qRT-PCR和Western blot检测Ref-1在HepG2细胞转染前后中的表达。免疫组化和qRT-PCR分别检测Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中表达;最后HepG2细胞同时转染了miR-mimics和Ref-1 miR-inhibitors,进行联合干预,随后CCK-8、细胞划痕和Transwell分别检测了联合干预后细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。结果:miR-133a-3p在肝癌患者癌组织中的表达显著低于癌旁组织,同时其在肝癌细胞HepG2中的表达最低;qRT-PCR结果表明miR-mimics可有效促进miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示miR-133a-3p过表达后可以显著抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为;RNA-seq结果显示HepG2转染前后Ref-1的表达差异最大;qRT-PCR和Western blot结果显示HepG2转染成功后,Ref-1表达随miR-133a-3p的过表达而降低。免疫组化和qRT-PCR结果显示Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达均显著高于阴性对照组;联合干预后HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学抑制作用更加强烈。结论:miR-133a-3p可能通过抑制Ref-1表达从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。     

巨噬细胞迁移抑制因子介导缺氧诱导的保护性自噬对肝癌细胞化疗敏感性的影响及机制研究北大核心CSCD

目的:在体内外探究巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对肝癌(HCC)细胞化疗敏感性的影响及机制。方法:在低氧(HXP)条件下体外培养HCC细胞系Huh7和HepG2,Western blot检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与MIF蛋白表达;siRNA转染技术将靶向沉默MIF的si-MIF转染至Huh7与HepG2细胞,Western blot进行验证,将转染后的Huh7、HepG2细胞分为4组:正常对照组(Control)、低氧处理组(HYP)和低氧处理的转染si-NC组(HYP+si-NC)与低氧处理的转染si-MIF组(HYP+si-MIF);CCK-8检测各组细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性;Western blot检测各组细胞HIF-1α、MIF及自噬标志蛋白LC3B与Atg5表达;在裸鼠体内进一步验证5-FU对敲低MIF表达的Huh7细胞的生长抑制作用及对肿瘤组织自噬水平的影响。结果:与常氧条件相比,HXP能够以时间依赖的方式促进Huh7与HepG2细胞HIF-1α与MIF蛋白表达(P<0.05);转染si-MIF能够显著下调Huh7与HepG2细胞MIF表达;与Control组相比,HYP组和HYP+si-NC组细胞对5-FU的化疗敏感性显著降低(P<0.05),HIF-1α和Atg5蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高(P<0.05),而HYP+si-MIF组则相反(P<0.05);前两组差异无统计学意义(P>0.05);裸鼠体内实验结果表明,敲低Huh7细胞中MIF表达能够促进5-FU对HCC的生长抑制作用,并抑制肿瘤组织中细胞增殖与自噬,促进细胞凋亡。结论:HCC的低氧环境能够上调MIF表达,而敲低MIF表达可能通过抑制肿瘤细胞及组织中HIF-1α介导的保护性自噬增强HCC的化疗敏感性。     

过表达miR-451a通过靶向巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)抑制HepG2细胞的增殖

目的探讨miR-451a对巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)的调控及对HepG2肝癌细胞增殖的影响。方法实时定量PCR检测临床肝癌组织中miR-451a及MIF mRNA的表达,荧光素酶报告系统验证miR-451a对MIF的靶向调控关系。包装miR-451a慢病毒过表达载体,感染HepG2细胞,实时定量PCR检测miR-451a和MIF mRNA表达量变化,Western blot法检测MIF蛋白水平,噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成率。结果 miR-451a在肝癌组织中呈现低表达,MIF mRNA在肝癌样本中呈现高表达;荧光素酶报告系统显示,MIF 3'UTR野生型联合miR-451a模拟物共转染细胞的荧光信号强度明显弱于其他转染组,miR-451a慢病毒感染HepG2细胞,miR-451a表达显著升高,MIF表达显著降低,细胞增殖能力减弱,克隆形成能力减弱。结论 HepG2细胞过表达miR-451a通过抑制MIF的表达,抑制HepG2细胞的增殖和克隆形成。     

长链非编码RNA TINCR 通过miR-7调控肝癌细胞系Huh7侵袭和迁移

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)组织分化诱导非蛋白质编码RNA(TINCR)通过miR-7调控肝癌Huh7细胞侵袭和迁移的机制。方法 Real-time PCR测定Huh7细胞中TINCR表达。Huh7细胞中转染TINCR shRNA,CCK-8法测定增殖;Transwell小室法测定侵袭和迁移;Western blot测定MMP-2和MMP-9蛋白表达。生物信息学软件预测发现TINCR和miR-7有结合位点,荧光素酶报告系统鉴定二者靶向关系。Huh7细胞中共转染miR-7 inhibitor和TINCR shRNA,利用上述方法测定细胞增殖、迁移和侵袭变化。结果肝癌细胞中TINCR表达水平明显高于正常肝细胞(P0.05)。转染TINCR shRNA后的Huh7细胞中TINCR水平降低(P0.05),细胞增殖、迁移以及侵袭能力均下降(P0.05),细胞中MMP-2和MMP-9蛋白水平也降低(P0.05)。TINCR靶向负调控miR-7表达。miR-7 inhibitor可以提高下调TINCR后的肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力以及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平(P0.05)。结论下调TINCR可以通过靶向促进miR-7表达抑制肝癌细胞Huh7侵袭和迁移。     

食管癌相关基因4在肝细胞肝癌中的表达和功能

目的了解人食管癌相关基因4（ ECRG4）在人肝细胞肝癌组织和肝癌细胞系中的表达情况,探讨ECRG4对肝癌细胞增殖、凋亡以及迁移能力的影响。方法提取24例配对肝细胞肝癌组织和癌旁肝组织的总RNA以及正常肝细胞系QSG7701和肝癌细胞系HepG2的总RNA和总蛋白,分别利用即时荧光定量PCR（ RT-qPCR）和Western blot法检测ECRG4的表达;构建ECRG4的真核表达质粒ECRG4-pcDNA3.1,转染肝癌细胞系HepG2,进行体外的细胞增殖、凋亡以及迁移实验。结果与癌旁肝组织相比,在肝细胞肝癌组织中ECRG4 mRNA表达下调或缺失（98.5％,23／24,P＜0.01）;和正常肝细胞系QSG7701相比,ECRG4 mRNA在肝癌细胞系HepG2中的表达明显下调（ P＜0.05）并且其蛋白表达水平也明显降低。转染ECRG4表达质粒后HepG2细胞的增殖和迁移能力明显低于对照组（P＜0.05）,细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）。结论 ECRG4在肝细胞肝癌中表达下调,在体外肝癌细胞系中过表达ECRG4可抑制细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,ECRG4可能是肝细胞肝癌潜在的抑癌基因,有望为肝细胞肝癌分子靶向治疗提供新策略。     

miRNA-1297通过靶向BH3结构域凋亡诱导蛋白促进肝细胞癌的进展

目的该研究旨在探讨miR-1297在肝细胞癌中的表达水平,及其对肝细胞癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法分析109对肝癌组织和配对的癌旁组织中mi R-1297的表达情况。从上述队列患者的生存资料中分析mi R-1297的表达与肝癌患者预后的关系。应用qRT-PCR技术检测肝细胞癌中miR-1297上调表达的机制。应用CCK8试验测定miR-1297在肝细胞癌发生发展中的作用。用AnnexinV/丙碘化物染色检测HCC细胞凋亡。用蛋白质免疫印迹分析法研究与BH3结构域凋亡诱导蛋白(BID)的表达。结果相对癌旁正常组织和人正常肝细胞,mi R-1297在肝癌组织和肝癌细胞中表达上升。Kaplan-Meier分析提示癌组织中高表达miR-1297的肝癌患者预后较差。在SMMC-7721和HepG2转染miR-1297表达抑制剂可抑制肝癌细胞增殖,促进其凋亡。生物信息学分析提示BID为miR-1297直接调控靶基因;荧光素酶报告基因检测提示mi R-1297可与BIDm RNA3'UTR结合;蛋白质印迹分析证实miR-1297可抑制肝癌细胞BID蛋白的表达。进一步研究提示,抑制miR-1297表达显著提高线粒体中tBID和细胞色素C的表达水平。拯救实验证实在肝癌细胞中mi R-1297通过靶向BID蛋白抑制肝癌细胞凋亡。结论证实miR-1297通过靶向BID促进肝癌的进展,提示其可能是肝细胞癌患者潜在的预测预后的临床标志物和治疗靶点。     

MicroRNA-449b-5p通过靶向KLF4促进肝细胞癌的增殖和转移

目的旨在探讨miR-449b-5p在肝细胞癌发病机制中的作用。方法用miR-449b-5p模拟物或miR-449b-5p抑制剂转染肝细胞癌细胞系。通过CCK-8和Transwell实验鉴定mi R-449b-5p对肝细胞癌细胞增殖和迁移能力的影响。Westernblot和qRT-PCR检测miR-449b-5p和KLF4m RNA的表达水平。采用双荧光素酶法验证miR-449b-5p与KLF4的关系。结果研究结果显示miR-449b-5p在人肝癌组织和细胞系中的表达上调。此外,降低miR-449b-5p的表达抑制了肝癌细胞的增殖和迁移能力。机制方面,实验数据证明KLF4是miR-449b-5p在肝癌细胞中的直接作用靶点。同时,拯救实验证实过表达KLF4可以抵消miR-449b-5p促进肝癌细胞增殖和转移的能力。与此同时,研究结果表明细胞周期抑制剂p21在HCC细胞中异常下调,而降低mi R-449b-5p表达后这种抑制作用被逆转。结论研究结果表明miR-449b-5p可通过靶向KLF4促进肝癌细胞的增殖和转移。     

人肝癌细胞系HepG2和Huh7中的基因组拷贝数变异分析

目的 利用人肝细胞癌拷贝数变异和转录组实验，结合临床公共数据，探索肝细胞癌的拷贝数变异对肝癌发生发展的影响。方法 用光学基因组图谱技术识别肝癌细胞系HepG2和Huh7中的拷贝数变异，随后分析两种细胞系拷贝数变异基因的功能，并根据富集通路绘制蛋白质相互作用网络。选取两个细胞系核心网络中的关键基因，分析肝细胞癌拷贝数变异与基因表达之间的关系。GEPIA数据库分析基因表达与患者临床生存的关系。用RNA-seq实验和公共数据验证基因的表达水平。结果 HepG2细胞主要存在拷贝数增加，相关基因富集在雌激素信号通路、金黄色葡萄球菌感染等通路；Huh7细胞系中既有拷贝数增加又有减少，相关基因主要富集嗅觉传导、细胞因子-细胞因子受体相互作用等通路。关键基因SRC、MAPK3和MAP3K7拷贝数与基因表达成正比，并且高表达这些基因的患者生存期显著降低(P<0.05)。相比于HEK293T细胞系，SRC、MAP3K7基因在两个肝癌细胞系的表达显著升高(P<0.001),提示了肝细胞癌的特异性变异，MAPK3无差异。结论 肝细胞癌拷贝数变异基因SRC、MAP3K7的表达与患者的预后显著相关，可...     

miR-449b介导5-氟尿嘧啶/顺铂抑制肝癌细胞的迁移

目的研究化疗药5-氟尿嘧啶和顺铂对miR-449b在肝癌细胞中表达的影响及其抑制肝癌细胞迁移能力的分子机制。方法收集肝癌患者的组织样本,提取总RNA,用real-time PCR法检测肝癌组织样本中miR-449b的表达;5-氟尿嘧啶和顺铂处理肝癌细胞,检测miR-449b的表达;在肝癌细胞中过表达miR-449b或用5-氟尿嘧啶和顺铂分别处理肝癌细胞,利用细胞划痕实验检测肝癌细胞的迁移能力变化;设计拯救实验,探究化疗药5-氟尿嘧啶和顺铂通过诱导miR-449b表达,参与肝癌细胞迁移能力调控;软件预测结合Western blot实验,鉴定miR-449b的功能靶基因。结果 miR-449b在肝癌患者组织中表达下调(P0.001);5-氟尿嘧啶和顺铂诱导肝癌细胞内源性miR-449b的表达上调(P0.001);过表达miR-449b可以抑制肝癌细胞的迁移(P0.001);敲低miR-449b的表达可以抑制5-氟尿嘧啶和顺铂对肝癌细胞迁移能力的抑制作用(P0.05);catenin-δ是miR-449b的直接靶基因。结论5-氟尿嘧啶和顺铂通过诱导miR-449b的表达抑制肝癌细胞的迁移。     

miR-455-5p suppresses hepatocellular carcinoma cell growth and invasion via IGF-1R/AKT/GLUT1 pathway by targeting IGF-1R

Hepatocellular carcinoma (HCC) is among the most frequently observed forms of cancer. MicroRNAs (miRNAs) are increasingly thought to play a key role in regulating the onset and progression of a wide range of cancer types. In the present report, we found that miR-455-5p expression was significantly decreased in both HCC patient tumor tissues and cell lines, and that this reduction in expression was linked to poorer patient outcomes. When we overexpressed miR-455-5p in HCC cell lines (Huh7 and HepG2), this was linked with impaired proliferation, colony formation, migration, and invasion. We further found that this miRNA was able to directly bind the insulin growth factor receptor (IGF-1R) 3′-untranslated region, thereby suppressing IGF-1R expression in HCC cells. Consistent with this, miR-455-5p overexpression was associated with reduced glucose transporter (GLUT) 1 expression, which in turn inhibited HCC cell uptake of glucose, production of lactate, and generation of ATP. Together these results thus indicate that mIR-455-5p is able to suppress tumor functionality via impairing glycolysis in HCC cells, highlighting this miRNA as a potential target for anti-cancer therapeutic interventions.     

miR-634 在肝癌中的表达及对肝癌细胞生物学行为的影响

目的:检测microRNA-634(miR-634)在肝癌中的表达水平及其对肝癌细胞常见生物学行为的调控作用。方法:采用实时荧光定量PCR(RT鄄qPCR)法检测肝癌细胞系(HepG2、SMMC7721、Bel7402、Bel7404、SNU739)、69 例肝癌组织及匹配癌旁组织中miR-634 的相对定量,分析miR-634 表达与肝癌患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、Child-Pugh 分级、BCLC 分期、门静脉癌栓及肝外转移的关系,同时构建miR-634 的真核表达载体并转染肝癌细胞系,采用活细胞计数试剂盒CCK-8、流式细胞仪Annexin V/ PI 双染法和Transwell 侵袭实验检测转染miR鄄634 对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果:与正常人肝细胞系L-02 相比,肝癌细胞的miR-634 水平均降低(P <0.05),表达量依次为HepG2 >SNU739 >Bel7402 > Bel7404 >SMMC7721;69 例肝癌组织的miR鄄634 水平为(0.253±0.019),低于匹配癌旁组织(P<0.05),且与肿瘤直径、分化程度、BCLC分期、门静脉癌栓及肝外转移均有关(P<0.05)。过表达组转染24 ~96 h 后的miR鄄634 水平持续升高,与对照组和空转染组的差异有统计学意义(P<0.05);与对照组和空转染组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率均升高,但穿膜细胞数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-634 在肝癌组织和细胞中均为低表达,且与临床病理参数有关,上调其水平可抑制肝癌细胞增殖及侵袭并诱导凋亡,对于肝癌防治有重要借鉴价值。     

miR-34c-3p inhibits cell proliferation,migration and invasion of hepatocellular carcinoma by targeting MARCKS

Recent studies have shown that microRNA-34c-3p (miR-34c-3p) is down-regulated in various types of cancers and involved in tumor growth, invasion and metastasis. However, the roles of miR-34c-3p in hepatocellular carcinoma (HCC) are poorly understood. In this study, the expression profile of miR-34c-3pin HCC tissues and cell lines were examined by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). The correlations of miR-34c-3p expression and clinicopathological characteristics were analyzed. The biological role of MiR-34c-3pin cell proliferation, migration and invasion was examined. In addition, the targets of miR-34c-3p were identified. The results showed that miR-34c-3p expression was significantly down-regulated in HCC tissues and cell lines; low expression level of miR-34c-3p was correlated with vascular invasion and advanced TNM stage. In vitro functional assays showed that overexpression of miR-34c-3pin HepG2 and Huh7 cells significantly reduced cell proliferation, migration and invasion. Furthermore, target analysis and luciferase assay identified myristoylated alanine-rich protein kinase c substrate (MARCKS) as a specific target of miR-34c-3p. Knockdown of MARCKS in HepG2 cells reduced cell migration and invasion, but not cell proliferation. Taken together, our findings implicate the potential application of miR-34c-3p as a tumor suppressor in cancer therapy.     

Shc3高表达抑制人肝癌细胞系凋亡并参与肝癌耐药

目的探讨Shc3对人肝细胞癌HCC细胞凋亡及耐药机制。方法选取稳定下调Shc3的人肝细胞癌系HCCLM3和HepG2细胞及其对照组scramble细胞,稳定上调Huh7和HepG2细胞及其对照组pCDH细胞。Western blot检测Shc3、MEK、p-MEK、ERK和p-ERK蛋白表达;real-time PCR检测Shc3 mRNA表达;凋亡实验检测细胞凋亡;CCK-8法检测细胞增殖。结果成功验证Shc3降表达及过表达细胞系;与scramble组比较,Shc3降表达组细胞MEK/ERK通路激活程度明显降低(P<0.05),细胞凋亡比例增加(P<0.05);与pCDH组比较,Shc3表达上调增加细胞对索拉菲尼耐受性(P<0.05),并且MEK/ERK通路激活程度明显增强(P<0.05)。结论Shc3可通过干扰HCC细胞凋亡,激活MEK/ERK通路,增加HCC细胞对索拉菲尼的耐药性,本研究结果为靶向Shc3治疗肝细胞癌提供了理论依据和实验室基础。     

miR-107 promotes hepatocellular carcinoma cell proliferation by targeting Axin2

Background: A large number of studies demonstrated that microRNAs play important roles in the progression and development of human cancers. However, the expression level of miR-107 and its biological function in hepatocellular carcinoma (HCC) remains unclear. Method: Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) was used to evaluate the expression level of miR-107 in HCC tissues and cell lines. Then, we explored the function of miR-107 to determine its potential roles on HCC cell proliferation in vitro. Luciferase reporter assay was used to confirm the target gene of miR-107, and the results were validated in cell lines. Results: miR-107 was significantly up-regulated in HCC tissues and cell lines. The enforced expression of miR-107 was able to promote cell proliferation in HepG2 cells. At the molecular level, our results suggested that expression of Axin2 was negatively regulated by miR-107. Conclusion: Our observations suggested that miR-107 could promote HCC cells proliferation via targeting Axin2 and might represent a potential therapeutic target for HCC.     

miR-140在人胃癌组织中的表达及对SGC-7901胃癌细胞功能的影响

 目的: 研究microRNA-140(miR-140)在人胃癌和正常胃组织中的表达水平,以及调控miR-140表达后对SGC-7901胃癌细胞功能的影响。方法: 采用实时荧光定量PCR检测miR-140在人胃癌和正常胃组织中的表达水平;将miR-140 mimics(miR-140上调表达)和miR-140 inhibitors(miR-140下调表达)分别通过脂质体转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置未转染对照组(control组)和miRNA无义序列转染对照组(NC组)。实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-140的表达变化;MTT方法检测各组细胞的生长活力和顺铂(DDP)作用下的生长抑制率;流式细胞术检测各组的细胞周期和凋亡率;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞中组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)蛋白表达。结果: miR-140在人胃癌组织中表达水平显著低于正常胃组织(P<0.05)。与control和NC组相比,miR-140 mimics组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力下降,细胞周期被阻滞,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率上升,且HDAC4蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);而miR-140 inhibitors组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力上升,细胞周期被促进,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率下降,且HDAC4蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-140在胃癌组织中低表达,可作为抑癌因子调控胃癌细胞活力、细胞周期变化、凋亡、侵袭并通过下调HDAC4发挥作用。miR-140可能作为胃癌诊断和治疗的新靶点。     

MicroRNA-194 acts as a prognostic marker and inhibits proliferation in hepatocellular carcinoma by targeting MAP4K4

MicroRNAs (miRNAs) play a crucial role in cancer development and progression of hepatocellular carcinoma (HCC). In this study, we aimed to analyze the role of microRNA-194 (miR-194) in HCC. We found that miR-194 expression was significantly reduced in HCC and its expression was an independent poor prognostic factor for HCC patient overall and disease-free survival rate. A significant correlation was observed between miR-194 reduction and unfavourable variables including tumor size (P = 0.0315), histologic grade (P = 0.0038), TNM stage (P = 0.0083), intrahepatic metastasis (P = 0.0184). Overexpression of miR-194 in HCC cell lines HepG2 and Hep3B inhibited cell proliferation by blocking G1-S transition and inducing apoptosis. Mitogen-activated protein kinase 4 (MAP4K4), a potential target gene of miR-194, was inversely correlated with miR-194 expression in HCC tissues and cell lines. Further studies demonstrated that miR-194 regulated the progression of HCC through directly inhibiting the expression of MAP4K4 and the restoration of MAP4K4 expression reversed the inhibitory effects of miR-194 on HCC cell proliferation. Together, our findings indicate that miR-194 may serve as a valuable prognostic marker and promising interventional therapeutic target for HCC.     

索拉非尼对敏感人肝癌细胞株MAPK信号通路基因表达的影响

 目的：筛选对索拉非尼敏感的人肝癌细胞株,检测索拉非尼作用于敏感细胞株后MAPK信号通路基因表达谱的变化。方法：索拉非尼作用于人肝癌细胞株Huh7、 MHCC97H、 HepG2 、SMCC7721、 HepG2.2.15和PLC,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡,CCK-8测定细胞增殖的抑制率,筛选敏感肝癌细胞株;采用实时定量PCR基因芯片,观察索拉非尼作用于敏感细胞株前后MAPK信号通路基因的表达。结果：索拉非尼作用后,流式细胞术的结果显示,凋亡较明显的细胞株为PLC和HepG2.2.15,相对不明显的细胞株为SMCC7721和MHCC97H;CCK-8测定索拉非尼对PLC、HepG2.2.15、Huh7、HepG2、MHCC97H和SMCC7721细胞的IC50值分别为5.25 μmol/L、5.30 μmol/L、6.80 μmol/L、7.01 μmol/L、11.7 μmol/L和15.0 μmol/L。对索拉非尼相对敏感细胞株和不敏感细胞株分别为PLC和SMCC7721。索拉非尼作用敏感细胞株PLC后,MAPK信号通路表达 >2.0倍的有2个,≤0.5倍的有6个。结论：PLC为对索拉非尼相对敏感的人肝癌细胞株;索拉非尼主要导致MAPK信号通路中与调控细胞周期和活化转录因子相关的基因表达发生变化。