急性缺血性脑卒中大鼠脑组织中Th17/Treg的变化

目的:免疫炎症反应在急性缺血性脑卒中的病理生理过程中发挥着重要的作用。具有促炎作用的辅助性T细胞17(Th17)及维持免疫耐受的调节性T细胞(Treg)是体内重要的2种免疫细胞。Th17/Treg细胞平衡是机体维持正常免疫的基础。本研究探讨急性缺血性脑卒中大鼠脑组织中Th17/Treg的变化。方法:采用线栓法制备SD大鼠急性大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,以假手术组作为对照组。在MCAO术后3 d利用TTC染色观察各组大鼠脑梗死体积;采用ELISA测定脑组织中白细胞介素17A(IL-17A)和IL-10蛋白的含量;采用RT-qPCR测定脑组织中IL-17、IL-10、Foxp3和RORγt的mRNA表达水平;采用流式细胞术测定脑组织中Th17细胞和Treg细胞的比例变化。结果:与假手术组相比,MCAO组大鼠脑组织中IL-17A的含量增加,IL-10的含量减少(P0.05);RORγt和IL-17的mRNA表达水平上调(P0.05),Foxp3和IL-10的mRNA表达水平下调(P0.05);脑组织Th17细胞增多,Treg细胞明显减少(P0.05),Th17/Treg比值升高(P0.05)。结论:急性缺血性脑卒中大鼠脑组织Th17细胞增多,Treg细胞减少,表明脑梗死后大鼠脑组织中Th17/Treg的平衡被破坏,免疫炎症反应被激活。     

原发性肾病综合征患儿外周血Th17与CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的水平

目的:观察原发性肾病综合征(PNS)患儿外周血Th17细胞和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)及其相关因子的水平和功能,初步探讨其在儿童PNS发病中的作用。方法:PNS患儿分为单纯型肾病(SNS)20例、肾炎性肾病(NNS)15例;同时以20例健康体检儿童作为对照组。采用流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞和Treg细胞比例;Real-time PCR法检测PBMC中RORC、IL-23p19和Foxp3 mRNA的表达;ELISA分别检测血清中IL-1β、IL-6、TGF-β1的水平。结果:SNS、NNS组患儿Th17细胞及RORC、IL-23p19 mRNA、IL-1β、IL-6的水平均明显高于正常组(P0.05),且NNS组患儿以上指标明显高于SNS组(P0.05);SNS、NNS组患儿Treg细胞、Foxp3 mRNA和TGF-β1水平的表达明显低于正常组(P0.05),其中两组疾病患儿血清TGF-β1的水平无统计学意义(P0.05),其余指标NNS患儿均明显低于SNS组(P0.05)。结论:Th17/Treg细胞功能失衡可能在儿童PNS的发病中起到重要作用,其失调程度可能与PNS的临床表现、对激素的敏感性、病理类型、及预后有关。     

茯苓多糖对系统性红斑狼疮患者Th17/Treg平衡的影响

目的:研究茯苓多糖对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的免疫调节作用。方法:选取45例SLE患者和35例健康对照者,应用磁珠分选法分离外周血CD4~+ T细胞,流式细胞术检测CD4~+ T细胞中Th17和Treg细胞的比例。用茯苓多糖分别处理健康对照者及患者的CD4~+ T细胞,MTT法检测细胞活力以测定茯苓多糖毒性,ELISA检测细胞中白细胞介素17(IL-17)、IL-6、IL-10及转化生长因子β(TGF-β)的含量,RT-q PCR和Western blot法分别测定维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与叉头框蛋白P3(Foxp3)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与健康对照组相比,SLE患者的Th17细胞比例显著升高,Treg细胞比例明显降低(P0.05)。用100μg/L的茯苓多糖处理SLE患者CD4~+ T细胞,与空白对照组相比,IL-17和IL-6的含量显著降低,IL-10和TGF-β的含量明显上升(P0.05);RORγt的mRNA和蛋白表达显著下降,同时Foxp3的表达在mRNA和蛋白水平上明显增加(P0.05);并且Th17/Treg的比值降低(P0.05)。结论:茯苓多糖可以通过升高Treg并降低Th17细胞的比例,对SLE起到一定的治疗作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞/调节性T细胞比值变化的意义

目的测定慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)和CD4+IL-17+T细胞(Th17细胞)频率及其相关细胞因子的变化,并探讨Th17/Treg平衡在CHB发病过程中的作用。方法选取CHB住院患者(CHB组)60例,其中35例轻中度CHB患者(CHB-LM),25例慢性重型肝炎患者(CSHB),同时选取21位健康体检者作为正常对照组(HC)。流式细胞术检测外周血中Th17和Treg的细胞频数,双抗体夹心ELISA检测血清中IL-17、IL-23、IL-10及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平。结果与HC组相比,CHB患者外周血Th17细胞频率及其相关细胞因子IL-17、IL-23浓度明显增高,差异有统计学意义(P0.05);Treg频率及其相关细胞因子IL-10及TGF-β1浓度明显增高。Th17/Treg比值变化显示,与HC组相比,在CHB组中该比例明显升高,具有显著性差异,且与CHSB组相比,在CHB-LM组中该比值明显降低。结论 Th17细胞/Treg的失衡是造成慢性乙型肝炎病程演变的重要因素,检测Th17细胞/Treg比值变化对疾病发展的早期预测有一定价值。     

大鼠肝损伤模型中Th17/Treg失衡的研究

目的探究Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在急、慢性大鼠免疫性肝损伤模型中的意义和作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为3组。尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)分别建立急性肝损伤模型组(AC)和慢性肝损伤模型组(CC),尾静脉注射PBS作为健康对照组(HC)。流式细胞分析术(FCM)检测Th17细胞和Treg细胞频率变化,并计算Th17/Treg比值;免疫组织化学方法检测Foxp3、RORγt蛋白表达情况;ELISA法检测外周血IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β等相关细胞因子的含量。结果与HC组比较,AC组Th17细胞频率及其相关因子(Foxp3、IL-17、IL-6等)水平显著升高(P0.05),Treg细胞频率及其相关因子(RORγt、IL-10等)水平亦升高(P0.05),但Th17/Treg比值较正常组上升(P0.05);与AC组相比较,CC组Th17细胞水平显著降低,Treg细胞显著升高,Th17/Treg比值较正常组下降(P0.05)。结论 Th17/Treg比值在急性免疫性肝损伤模型中明显上升,在慢性肝损伤模型中明显下降,Th17/Treg的失衡可能与肝损伤的发生和发展密切相关。     

大鼠肝损伤模型中Th17/Treg失衡的研究

目的探究Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在急、慢性大鼠免疫性肝损伤模型中的意义和作用。方法将雄性Wistar大鼠随机分为3组。尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)分别建立急性肝损伤模型组(AC)和慢性肝损伤模型组(CC),尾静脉注射PBS作为健康对照组(HC)。流式细胞分析术(FCM)检测Th17细胞和Treg细胞频率变化,并计算Th17/Treg比值;免疫组织化学方法检测Foxp3、RORγt蛋白表达情况;ELISA法检测外周血IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β等相关细胞因子的含量。结果与HC组比较,AC组Th17细胞频率及其相关因子(Foxp3、IL-17、IL-6等)水平显著升高(P0.05),Treg细胞频率及其相关因子(RORγt、IL-10等)水平亦升高(P0.05),但Th17/Treg比值较正常组上升(P0.05);与AC组相比较,CC组Th17细胞水平显著降低,Treg细胞显著升高,Th17/Treg比值较正常组下降(P0.05)。结论 Th17/Treg比值在急性免疫性肝损伤模型中明显上升,在慢性肝损伤模型中明显下降,Th17/Treg的失衡可能与肝损伤的发生和发展密切相关。     

类风湿性关节炎患者外周血Th17/Treg细胞比率失衡的研究

目的:观察类风湿性关节炎(RA)患者外周血Th17细胞与Foxp3+CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的平衡状态与疾病状态的关系,初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在RA发病机制中的作用和意义。方法:流式细胞术(FCM)检测RA患者和健康人外周血中Th17细胞和Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞的比率。结果:活动期RA患者外周血CD3+CD4+T细胞和Th17细胞的比率均明显高于健康对照组(P均0.05);而Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞的比率明显低于健康对照组(P0.05)。随疾病活动性的增加,Th17细胞表达增高(P0.05);而Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞表达降低,但无统计学意义(P0.05)。结论:RA患者外周血T细胞紊乱以CD4+T细胞的增加为主,Th17细胞比率的增加和Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞比率的降低所致的Th17/Treg细胞比率失衡,可能在RA的发生发展中起重要作用。     

不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义

目的:探讨不同类型HBV感染者外周血中CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞的变化及意义.方法:选取15例急性乙型肝炎(Acute Hepatitis B,AHB)患者、40例慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者、40例无症状携带者(Asymptomatic HBV carriers,AsC)及30例健康对照者,分别采用流式细胞术、RT-PCR和ELISA检测外周血CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞百分率、核转录因子foxhead winged-helix box protein 3 (Foxp3)/retinoid-related orphan receptor gamma-t (RORγt) mRNA的表达以及血浆转化生长因子-β1(Transforming growth factor-31,TGF-β1)/IL-17的水平.结果:AHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA及TGF-β1水平与正常对照组相比无明显差异(P＞0.05);而CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγtmRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).CHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA、TGF-31水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平与正常对照组相比均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与正常对照组相比,AsC组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mR-NA、TGF-β1水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平无明显差异(P＞0.05).结论:在不同类型HBV感染者外周血中Treg/Th17细胞失衡,Treg/Th17细胞可能与HBV感染的状态有关.     

Treg/Th17在变应性鼻炎患者血液中的意义

观察Treg/Th17转录因子及其细胞因子在变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者外周血单个核细胞和血清中的表达并探讨其临床意义。选择42例AR患者根据视觉模拟量表(visual analog scale,VAS)分为轻度组(n=23例)和中重度组(n=19例),同期选择20例门诊健康体检者作为对照组。采用RT-PCR检测各组Foxp3、RAR相关孤儿受体mRNA(RARrelated orphan receptor C mRNA,RORC mRNA),采用ELISA检测各组血清TGF-β和IL-17表达水平。结果显示,中重度组和轻度组变应性鼻炎患者Foxp3mRNA及血清TGF-β表达水平明显低于对照组(P<0.05),RORC mRNA和血清IL-17表达水平明显高于对照组(P<0.05),且随病情严重程度加重,Foxp3 mRNA及血清TGF-β表达水平明显降低(P<0.05),而RORC mRNA及血清TGF-β表达水平明显升高(P<0.05)。本研究证明,Treg/Th17细胞失衡可能在AR发病中占有重要的地位。     

新疆黑蜂胶对结肠癌模型大鼠T细胞的影响

探讨新疆黑蜂胶对结肠癌大鼠模型中T细胞的影响及其作用机制。雄性Wistar大鼠55只,随机分为对照组、模型组、蜂胶预防组、蜂胶治疗组和5-FU组。采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)灌肠建立结肠癌大鼠模型。各治疗组给予相应药物治疗30d,其中蜂胶预防组于造模初便给予蜂胶预防性灌胃。每周观察大鼠体质量变化,HE染色观察结肠癌组织病理学变化、ELISA检测血清细胞因子TGF-β和IL-6水平、流式细胞术检测脾脏T细胞亚群数量、RT-PCR检测脾脏组织中转录因子Foxp3及ROR-γt mRNA的表达水平。结果显示,与模型组相比蜂胶治疗组及5-FU组大鼠体质量显著增高(P0.05);模型组Treg数量及其转录因子Foxp3的表达较对照组明显增高(P0.05),蜂胶预防组及5-FU组Treg数量及其转录因子Foxp3的表达较模型组明显降低(P0.05);模型组Th17及其转录因子ROR-γt的表达较对照组明显增高(P0.05),5-FU组Th17数量及其转录因子ROR-γt的表达较模型组显著降低(P0.05);模型组大鼠Th17/Treg比值较对照组明显降低,而5-FU组大鼠Th17/Treg比值较模型组显著升高。这提示新疆黑蜂胶具有预防和治疗结肠癌的作用,调节相关T细胞的功能及细胞因子的表达可能是其作用机制之一。     

骨髓间充质干细胞对重症哮喘患儿外周血Th17/Treg的免疫调节作用

 目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）在体外对重度哮喘患儿外周血辅助性T细胞17（Th17）和CD4+ CD25+ 调节性T细胞（Treg）的免疫调节作用。方法：体外分离、培养和鉴定MSCs。MSCs经丝裂霉素处理后按不同比例（1∶1、1∶2、1∶10和1∶20）与哮喘患儿外周血T淋巴细胞（TLC）直接接触共培养,检测各组MSCs 对TLC的增殖调节作用。选取上述1∶2比例共培养体系和单独TLC培养体系,ELISA法分别检测Th17的效应分子白细胞介素17（IL-17）和Treg效应分子转化生长因子β（TGF-β）水平,qRT-PCR法检测转录因子维甲酸相关孤儿核受体（RORC）及叉头框蛋白3（Foxp3）mRNA表达水平。结果：MSCs可显著抑制重度哮喘患儿TLC增殖,且随着MSCs数量的增加,抑制作用增强。MSCs+TLC共培养组Th17转录因子RORC mRNA和效应因子IL-17表达较TLC组下降,同时TGF-β表达增高,而Treg细胞调控基因Foxp3 mRNA表达无明显改变。结论：MSCs在体外可能通过抑制Th17分化及IL-17的分泌,同时上调TGF-β的表达,进而有效改善哮喘患儿的Th17/Treg失衡状态。     

母-胎免疫调节机制在妊娠高血压综合征病理过程中的作用

目的：分析妊娠高血压综合征（PIH）患者外周血中免疫细胞因子水平变化及滋养层细胞中免疫相关转录因子的基因、蛋白表达情况,探讨母 胎免疫调节机制在妊娠高血压综合征病理过程中的作用。方法：纳入PIH患者50例作为观察组,选择同期分娩的正常妊娠妇女40例作为对照组。ELISA法检测两组孕妇外周血中IFN-γ、IL-4、IL-17及TGF β水平;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和蛋白质印迹法（Western blot）分别测定两组孕妇胎盘滋养层细胞中转录因子T-bet、GATA-3、RORC、Foxp3的mRNA及蛋白表达情况。结果：①观察组外周血中IFN-γ和IL 17水平明显高于对照组,TGF β水平明显低于对照组（P＜0.05）;两组间IL 4水平无明显差异（P＞0.05）;观察组IFN-γ/IL-4、IL-17/TGF β比值均明显大于对照组（P＜0.05）。②与对照组比,观察组T bet、RORC的mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,而GATA 3、Foxp3的mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）,T-bet/GATA-3及RORC/Foxp3比值均显著增大（P＜0.05）。结论：PIH具有明显的Th1/Th2及Th17/Treg比例失衡现象,其病理机制可能与Th细胞介导的母 胎免疫耐受机制功能紊乱有关。     

佐剂性关节炎大鼠肺功能变化与Th1/Th2细胞、调节性T细胞的相关性研究

目的:探讨细胞因子、Th1/Th2细胞及调节性T细胞(Treg)、转录因子Foxp3在佐剂性关节炎(AA)大鼠肺功能损害中的作用机制。方法:将24只Wistar大鼠随机分为正常对照(NC)组和模型(Model)组,每组12只,向Model组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL致炎,复制成AA模型。致炎48d后,观察两组大鼠足跖肿胀度(E)及关节炎指数(AI),HE染色观察肺组织病理学改变,计算两组大鼠肺系数(LI)、肺泡炎积分,免疫组化染色法检测Foxp3、TGF-β1蛋白表达情况。通过小动物肺功能仪检测肺功能,ELISA法测定细胞因子的变化,流式细胞术(FCM)测定Treg的表达。结果:与NC组相比,Model组大鼠E、AI、LI、1s内平均呼气流量(FEV1/FVC%)、肺泡炎积分、血清TNF-α、Th1/Th2、肺组织TGF-β1、CD4+ CD25- T细胞的表达水平明显升高,且两者差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);用力肺活量(FVC)、25%肺活量的最大呼气流量(FEF25)、50%肺活量的最大呼气流量(FEF50)、75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、最大呼气中期流量(MMF)、用力最大呼气流量(PEF)、肺动态顺应性(Cldyn)、血清IL-10、CD4+ Treg、CD4+ CD25- Treg、肺组织Foxp3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。Spearman相关分析结果显示,AA大鼠肺功能参数分别与E、AI、TNF-α、IL-10、Th1/Th2及CD4+ Treg、CD4+CD25+Treg、CD4+ CD25- T细胞、Foxp3、TGF-β1表达呈相关性,且相关有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:大鼠在致炎后对抗原刺激呈高敏反应状态,Th1/Th2状态失衡、CD4+ CD25- T细胞转化成CD4+ CD25+ Treg受阻,免疫调节功能紊乱,释放大量细胞因子和炎症介质,导致局部关节的病变和肺组织损害,从而发生AA肺功能降低。     

干燥综合征患者Th17与调节性T细胞免疫失衡的观察

目的 检测干燥综合征（Sjogren＇s syndrome,SS）患者唇腺组织及外周静脉血中Th17细胞和调节性T细胞（Treg）相关细胞因子的表达水平,分析Th17/Treg免疫平衡在SS发病机制中的作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法,检测60例SS（实验组）和30例正常唇腺组织（对照组）中IL-17A、FOXP3mRNA的表达水平;另采用ELISA检测上述两组血清中IL-17、IL-10的含量.结果与对照组相比,SS患者唇腺组织内IL-17AmRNA的表达显著升高（P〈0.05）（SS者唇腺组织中FoxP3mRNA的表达降低（P〈0.05）SS患者血清IL-17水平明显高于对照组（P〈0.05）,SS患者血清IL-10水平明显低于对照组（P〈0.05）.结论 SS患者唇腺组织和外周血中Th17细胞应答增强,而Treg细胞免疫抑制下降;Th17/Treg免疫失衡可能参与SS的发生发展.     

尿毒症患者外周Th17/Treg细胞变化与机体微炎症状态的关系

目的: 通过研究尿毒症患者外周血维甲酸相关孤儿受体γt (RORγt)和叉头框P3蛋白(Foxp3)mRNA的表达,明确调节性T细胞(Treg细胞)和辅助性T细胞17(Th17细胞)在尿毒症患者中的变化情况,探讨这种变化与尿毒症患者微炎症状态的关系。方法: 选取尿毒症患者30例,其中未接受透析治疗的10例,维持性血液透析患者20例,年龄及性别相匹配的健康志愿者20例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫透射比浊法检测外周血RORγt和Foxp3 mRNA的表达、血浆白细胞介素6(IL-6)、IL-17、IL-10和高敏C反应蛋白(hs-CRP)的浓度及其相关性,并分析Treg细胞与Th17细胞的平衡性变化。结果: 与健康对照组相比,尿毒症组RORγt mRNA表达量、IL-6、IL-17和hs-CRP显著上升(P<0.05),而Foxp3 mRNA表达量和IL-6明显下降(P<0.05)。未接受透析治疗与维持性血液透析患者之间,上述指标无显著差异。同时,RORγt与hs-CRP存在正相关,而Foxp3与hs-CRP存在负相关。结论: Treg细胞与Th17细胞在尿毒症患者体内存在不平衡性,这种不平衡性与尿毒症患者微炎症状态有关。