衰老模型小鼠胰腺结构与功能的变化

目的探讨D-半乳糖(D-gal)致衰小鼠胰腺结构与功能变化。方法 2月龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为两组,每组10只。衰老组:小鼠皮下注射D-gal(120mg/kg),每天1次,共42 d;对照组:小鼠皮下注射等时与等量生理盐水。衰老模型建立完成第2天,采外周血测定空腹血糖(FBG)与空腹胰岛素(FINS)水平;称小鼠体重(g)与胰腺湿重(mg)计算胰腺脏器指数;石蜡切片,HE染色观察胰腺光学显微镜下形态;制备胰腺冷冻切片,检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性胰腺细胞的相对吸光度(RA);免疫组织化学法观察胰腺组织晚期糖基化终产物(AGEs)的RA;制备胰腺组织匀浆检测超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)的含量。结果衰老组小鼠FBG显著升高,FINS水平降低;胰腺湿重和胰腺脏器指数明显升高;胰腺光学显微镜下结构未见显著改变,但胰岛内单个有核细胞所占面积增加;胰腺SA-β-Gal染色阳性细胞数显著增加;AGEs阳性表达区域RA值明显升高;SOD与T-AOC含量显著降低,MDA含量显著升高。结论 D-gal复制衰老小鼠可致其胰腺损伤,其机制与D-gal致胰腺组织细胞的氧化应激损伤有密切关系。     

当归多糖对D-半乳糖致小鼠胰腺损伤的保护作用

目的 探讨当归多糖（ASP）对D-半乳糖（D-gal）致小鼠胰腺损伤的保护作用。 方法 雄性C57BL/6 J 小鼠随机分为3组,每组10只。D-gal组: 小鼠皮下注射- gal (120 mg/kg, qd×42 d）; ASP+D-gal组: D-gal注射时间与剂量同D-gal模型组,从模型复制第16天起,腹腔注射ASP(40 mg/kg,qd×27 d）;正常对照组: 小鼠皮下注射等量与等时的生理盐水。各组给药完成后第2天检测相关指标,取外周血检测空腹血糖含量并行口服葡萄糖耐量测定（OGTT）;取胰腺称湿重计算脏器指数;制备石蜡切片,HE染色观察胰腺组织病理结构,图像分析法计数胰岛内有核细胞数和相关面积;制备胰腺组织匀浆,检测丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力（T-AOC）。 结果 从注射D-gal第16天开始,腹腔注射ASP共27 d（ASP+D-gal组）,小鼠胰腺湿重与脏器指数明显降低,组织病理损伤减轻;空腹血糖显著下降;在30 min和120 min的OGTT水平差别不明显;OGTT曲线下面积（AUC）降低;胰岛内有核细胞数减少,单个细胞面积减小;T-AOC活性上升,MDA含量下降。 结论 D-gal可致胰腺结构损伤和功能衰退,ASP能拮抗D-gal从而减轻对胰腺的损伤,其机制可能与减轻氧化损伤有关。     

当归多糖对D-半乳糖致衰老小鼠睾丸的保护作用

目的探讨当归多糖(ASP)对D-半乳糖(D-Gal)所致衰老小鼠睾丸的保护作用与机制。方法C57BL/6 J雄性小鼠40只,随机分为对照组、ASP对照组、衰老模型组ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组:小鼠颈背部皮下注射D-Gal(120 mg/kg,qd×42);对照组小鼠皮下注射等时与等量生理盐水; ASP对照组小鼠皮下注射等量生理盐水15 d,第16天开始腹腔注射ASP(140 mg/kg,qd×27); ASP衰老模型组小鼠建立方法同衰老模型组小鼠,第16天开始腹腔注射ASP(同ASP对照组)。模型复制完成第2天,采集各组小鼠内眦静脉血测定血清睾酮水平;取睾丸测定脏器指数;石蜡切片,HE染色观察睾丸组织学形态;做冷冻睾丸组织切片,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察睾丸组织细胞衰老情况;制备睾丸组织匀浆上清液,酶学法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,2,2’-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法检测总抗氧化能力(T-AOC),硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量; Western blotting检测衰老相关蛋白P53、P21表达水平。结果各组间睾丸湿重及睾丸器官指数无明显差异,但衰老模型组小鼠睾丸组织结构损伤明显,生精小管的细胞层数减少,生精细胞出现退变,睾丸间质细胞明显减少;血清睾酮水平显著降低; SA-β-Gal染色阳性细胞密度显著增加;睾丸组织匀浆中SOD活性及T-AOC显著降低,MDA含量显著升高; P53、P21蛋白表达显著升高。与衰老模型组比较,注射ASP干预衰老过程,睾丸组织学结构损伤明显减轻,生精细胞退变与睾丸间质细胞减少均不明显;血清睾酮水平降低不明显; SA-β-Gal染色阳性细胞密度减少; SOD活性和T-AOC增高,MDA含量降低; P53、P21蛋白表达显著降低。结论 ASP具有拮抗致衰剂Dgal对睾丸的损伤作用,其机制可能与ASP抑制氧化应激损伤及抑制衰老相关基因表达有关。     

硫氧还蛋白相互作用蛋白降低GLP-1促小鼠胰岛β细胞的增殖效应

目的观察硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在胰高血糖素样肽-1(GLP-1)促小鼠胰岛β细胞的增殖效应中的作用。方法小鼠分为db/m组和db/db组,每组10只;慢病毒构建TXNIP过表达(Ad-TXNIP-GFP)稳转小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞,分为对照组、Ad-GFP组和Ad-TXNIP-GFP组。Western blot检测TXNIP、增殖细胞核抗原(PCNA)和GLP-1受体(GLP-1R)的表达,HE和免疫荧光观察胰岛形态和β细胞数量,GLP-1R、Ki67,ELISA检测小鼠血清中GLP-1的表达,免疫组化检测GLP-1R水平。结果 db/db鼠胰岛形态破坏且β细胞数量减少;胰腺组织PCNA表达降低(P0.05);血清GLP-1水平降低(P0.05);胰腺组织和胰岛GLP-1R水平降低(P0.05);胰腺组织TXNIP表达升高(P0.05);TXNIP过表达细胞模型构建成功(P0.05);TXNIP过表达时GLP-1R水平降低(P0.05);TXNIP过表达使GLP-1对胰岛β细胞的增殖效应降低(P0.05)。结论 TXNIP作用于GLP-1R从而降低GLP-1对小鼠胰岛β细胞的增殖效应。     

神经干细胞衰老与核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路的关系

目的 建立D-半乳糖（D-gal）诱导小鼠神经干细胞（NSCs）体外衰老模型,探讨NSCs衰老与细胞核因子E2相关因子2（Nrf2）/抗氧化反应元件（ARE）信号通路的关系。方法 取新生C57BL/6J小鼠全脑,分离、鉴定NSCs,培养至第3代,随机分为对照组和衰老组。对照组细胞在NSCs培养基中常规培养48 h,衰老组细胞在对照组基础上加入D-gal（终浓度为10 g/L）。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测NSCs增殖活力;衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色检测衰老阳性神经球百分率;锥虫蓝染色检测细胞存活率;酶标比色法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶（SOD）与过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量;Western boltting检测NSCs中Nrf2和血红素加氧酶 1（HO-1）蛋白表达水平;Real-time PCR检测GCLC和GCLM基因表达水平。结果 与对照组相比,衰老组NSCs增殖活力明显下降,锥虫蓝染色显示,NSCs存活率下降明显,S-β-gal染色阳性神经球百分率显著上升,SOD活性与CAT活性均显著降低,MDA含量显著升高,NSCs中Nrf2/ARE信号通路相关蛋白Nrf2和HO-1表达水平显著下调,通路相关GCLC和GCLM基因表达下调。结论 采用D-gal可以构建NSCs体外衰老模型,其氧化损伤机制可能与抑制Nrf2/ARE抗氧化信号通路有关。     

当归多糖延缓D-半乳糖所致巢蛋白-绿色荧光蛋白小鼠脑衰老作用及其机制

目的探讨当归多糖(ASP)延缓D-半乳糖(D-Gal)所致巢蛋白(Nestin)-绿色荧光蛋白(GFP)小鼠脑衰老作用及可能机制。方法 6~8周龄雄性Nestin-GFP转基因小鼠40只,随机分为正常组(n=10)、ASP正常组(n=10)、脑衰老模型组(n=10)、ASP脑衰老模型组(n=10)。脑衰老模型组:小鼠皮下注射D-gal 200 mg/kg qd×42 d;ASP脑衰老模型组:从脑衰老模型建立的16d起腹腔注射ASP 140 mg/kg qd×27 d;ASP正常组:皮下注射等量生理盐水,第16天起腹腔注射ASP(剂量与时间同上);正常组:小鼠皮下注射等量生理盐水42d。模型建立完成第2天水迷宫实验检测各组小鼠的空间记忆能力;取海马制备冷冻切片,观察海马区神经干细胞荧光强度;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察海马组织中染色阳性细胞百分率;酶标比色法检测海马区超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测海马区白细胞介素(IL)-1β,IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α炎症因子变化。结果脑衰老模型组小鼠空间记忆能力减退,海马齿状回(DG区)荧光强度降低,SA-β-Gal染色阳性颗粒增加,海马组织SOD活性和T-AOC降低,MDA含量升高,IL-1β,IL-6和TNF-α含量增多。与脑衰老模型组比较ASP脑衰老模型组小鼠空间记忆能力有明显改善,海马DG区荧光强度增强,SA-β-Gal染色阳性颗粒减少,海马组织SOD活性和T-AOC升高,MDA含量降低,IL-1β,IL-6和TNF-α含量减少。结论 ASP能延缓D-Gal所致小鼠脑衰老,其机制可能与抑制氧化应激损伤、下调炎症因子水平、维持海马区神经干细胞数量有关。     

1型糖尿病小鼠胰岛微血管内皮细胞超微结构受损

目的:探讨1型糖尿病小鼠胰岛微血管内皮细胞的超微结构改变。方法:BALB/c小鼠随机分为糖尿病组和对照组,每组6只。应用免疫组化染色检测胰岛素及胰岛微血管血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)表达水平;应用透射电镜观察糖尿病小鼠胰岛β细胞及胰岛微血管超微结构变化。结果:糖尿病组小鼠胰岛β细胞数量、β细胞/α细胞数量比、β细胞分泌颗粒数量及胰岛素阳性染色面积百分比显著降低(P0.01)。糖尿病组小鼠胰岛微血管数量,CD31表达水平显著降低(P0.01);微血管内皮细胞及胰岛周细胞线粒体肿胀变性;微血管基膜厚度显著升高(P0.01)。结论:1型糖尿病小鼠胰岛微血管内皮细胞超微结构受损。     

六黄合剂对胰岛素抵抗大鼠胰岛β细胞的保护作用

目的探讨中药复方六黄合剂对胰岛素抵抗大鼠胰岛β细胞的影响。方法动物随机分为空白对照组、模型对照组、六黄合剂组,每组8只。应用地塞米松致大鼠胰岛素抵抗模型,给予六黄合剂干预,检测空腹血糖(FBG),放射免疫分析法检测血清胰岛素(FINS)水平,化学比色法检测胰腺丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,透射电镜观察胰岛β细胞超微结构的变化。结果与模型对照组相比,六黄合剂组FINS水平和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显下降(p0.01),胰腺MDA含量下降(p0.01),SOD活性升高(p0.05)、GSH-Px活性升高(p0.01)。电镜观察IR大鼠胰岛β细胞可见凋亡早期改变,六黄合剂组β细胞超微结构的病理改变明显减轻。结论中药复方六黄合剂对β细胞的保护作用可能与减轻IR大鼠胰腺的氧化应激和增强抗氧化能力相关。     

氯化锂激活Wnt/β-catenin信号通路致小鼠造血干/祖细胞衰老及其机制

目的探讨氯化锂(Li Cl)激活Wnt/β-catenin信号通路致小鼠Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)衰老及其机制。方法免疫磁珠法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC。纯化后细胞分为:正常对照组,常规培养;Li Cl组,正常对照组基础上,加入Li Cl(终浓度10mmol/L);D-半乳糖致衰组,正常对照组基础上,加入D-半乳糖(终浓度166mmol/L),各组培养48h。造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养检测Sca-1+HSC/HPC多向分化潜能,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测Sca-1+HSC/HPC增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老,免疫细胞化学染色和Western blotting检测细胞内β-catenin、糖原合成激酶3β(GSK-3β)、P53、P21蛋白表达,ELISA检测细胞胞质内8羟基脱氧鸟苷(8-OH-d G)含量。结果与正常对照组相比,Li Cl组与D-半乳糖致衰组Sca-1+HSC/HPC增殖能力下降,形成CFU-Mix数量下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,β-catenin、P53、P21蛋白表达上调,GSK-3β蛋白表达下调,细胞内8-OH-d G水平升高。结论 Li Cl可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,使细胞DNA氧化损伤,上调P53/P21途径,这可能是导致小鼠造血干/祖细胞衰老的机制之一。     

利拉鲁肽通过调节microRNA-375对胰岛细胞凋亡的影响

目的:观察利拉鲁肽通过微小RNA-375(microRNA-375,miR-375)对db/db小鼠胰岛细胞凋亡的影响,探讨其可能作用机制,为临床应用提供药效学依据。方法:20只8周龄雄性db/m小鼠为正常对照组,皮下注射等量的生理盐水。40只8周龄雄性db/db小鼠随机分为2组,每组20只:糖尿病对照组的db/db小鼠皮下注射等量生理盐水;利拉鲁肽组的db/db小鼠皮下注射利拉鲁肽300μg·kg~(-1)·d~(-1)。给药8周后,检测各组小鼠体重(BW)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,并进行腹腔注射葡萄糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐量实验(ITT);苏木精-伊红(HE)染色检测胰岛组织病理学变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测胰岛凋亡情况;Western blot法检测胰岛凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平;实时荧光定量PCR检测胰岛miR-375的表达水平。小鼠胰岛β细胞系MIN-6分为对照组(等量溶媒孵育)、miRNA-375 mimic组和miRNA-375 mimic+利拉鲁肽组,MTT实验检测细胞活力,Western blot法检测各组细胞caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平。结果:整体实验中,与对照组相比,利拉鲁肽组BW、FBG、FINS、TC、TG及LDL-C含量明显降低(P0.05);胰岛数量较模型组增多,体积较大,细胞结构明显改善;胰岛细胞凋亡减少;利拉鲁肽组的Bcl-2表达明显增高,caspase-3和Bax的表达显著下降(P0.05);胰岛组织miR-375的水平显著降低(P0.01)。细胞实验中,经miRNA-375 mimic处理24 h后,MIN-6细胞活力显著降低,Bcl-2表达减少,而caspase-3和Bax的蛋白水平显著增加(P0.05),给予利拉鲁肽组治疗后,MIN-6细胞活力明显上升,Bcl-2表达明显增高,caspase-3和Bax的蛋白水平显著下降(P0.05)。结论:利拉鲁肽可以抑制糖尿病胰岛β细胞的凋亡,其机制可能与调控胰岛组织中miR-375的表达有关。     

慢性应激对糖尿病倾向鼠几种组织抗氧化酶影响的差异及其意义

目的：研究慢性应激对正常及糖尿病倾向小鼠各组织抗氧化酶影响的差异并探讨其意义。方法：用链脲佐菌素复制糖尿病倾向小鼠模型,予以６周慢性多相性应激,检测其空腹血嚓腹胰岛素水平和胰,心,肝,组织超氧化物歧化酶,谷肽甘肽过氧化物酶活性及脂质过氧化物含量。     

二甲双胍抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞的光老化效应

目的研究二甲双胍(MF)对长波紫外线(UVA)诱导的人皮肤成纤维细胞(HSF)光老化效应的抑制作用及相关机制。方法体外培养人皮肤成纤维细胞,分为对照组(control)、UVA组、UVA+MF组。以CCK-8法检测细胞增殖;对各组细胞进行细胞衰老β-半乳糖苷酶染色;以荧光探针DCF-DA染色流式细胞仪检测细胞内ROS水平;real-time PCR检测衰老相关基因MMP1、MMP3的mRNA相对表达量;Western blot检测蛋白MMP1、MMP3、SOD1和SOD2的表达。结果 0.01 mmol/L二甲双胍对HSF增殖无显著影响,0.1和1 mmol/L二甲双胍则显著抑制HSF的细胞增殖(P0.05)。与对照组相比,UVA组β-半乳糖苷酶染色阳性率显著增高(P0.01);ROS水平显著升高(P0.05);MMP1和MMP3 mRNA相对表达量显著增加(P0.01);MMP1和MMP3蛋白表达量显著增多(P0.01);SOD1、SOD2蛋白表达显著减少(P0.01)。与UVA组相比,UVA+MF组β-半乳糖苷酶染色阳性率显著降低(P0.05);ROS水平显著下降(P0.05);MMP1和MMP3的mRNA相对表达量显著降低(P0.05);蛋白MMP1和MMP3表达量显著降低(P0.05);蛋白SOD1表达显著增加(P0.01);SOD2表达量增加。结论二甲双胍可通过抑制细胞内ROS水平和相关基质金属蛋白酶的表达,提高细胞抗氧化能力,从而抑制UVA诱导的皮肤成纤维细胞的光老化效应。     

不同治疗方式对新发2型糖尿病患者胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗的影响

目的 比较采用胰岛素治疗(INS)与口服降糖药物治疗(OHA)等不同治疗方式对新发2型糖尿病(T2DM)患者胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗的影响,推断新发T2DM的最佳治疗方案.方法 将62例新发T2DM患者随机分为胰岛素治疗组(INS组)和口服降糖药物组(OHA组).OHA组首选磺脲类或二甲双胍,或二者合用,疗效欠佳时增加噻唑烷二酮类,一般为2药或3药合用.两组治疗期均为3个月.每组根据血糖调整剂量,目标为空腹血糖(FBG)＜6.0 mmol/L,餐后2h血糖(2hPG)＜8.0mmol/L.观察两组治疗前后FBG、2h PG、糖化血红蛋白(HbA1C)、空腹胰岛素(FINS)、空腹及餐后2hC肽(FCP、2hCP)水平的变化;用稳态模型(Homa)计算胰岛β细胞功能指数(Homaβ=20×FINS/(FBG-3.5)和胰岛素抵抗指数[HomaIR=(FBG×FINS)/22.5].用治疗后CP、Homaβ、HomaIR等相关指标进行组间比较,以评价胰岛β细胞功能及外周胰岛素抵抗的变化.结果 :(1)治疗后,两组患者FBG、2hPG、HbA1C水平较治疗前均有明显下降(P＜0.01),而在两组间比较差异无统计学意义;(2)治疗后,INS组患者FINS、FCP、2hCP、Homaβ较治疗前升高(P＜0.05),OHA组则无明显变化(P＞0.05),两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);(3)治疗后,INS组患者HomaIR较治疗前有明显下降(P＜0.05),OHA组仅略有下降,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 早期应用胰岛素治疗可以改善新发T2DM患者胰岛β细胞分泌功能及外周胰岛素抵抗.与OHA相比,INS能更好地保护患者的胰岛B细胞功能.     

糖尿病大鼠血管糖基化终产物含量与其受体的ICAM—1表达的关系

探讨糖尿病大鼠血管组织糖基化终产物（AGEs)含量与其受体（RAGE）和细胞间粘附因子－1（ICAM－1）表达的关系。复制糖尿病大鼠模型,采用荧光法、RT－PCR及原位杂交方法检测主动脉及心肌组织的AGEs含量以及RAGE和ICAM－1基因的表达。发现糖尿病大鼠主动脉和心肌组织AGEs含量升高（P＜0．01）;RAGE和ICAM－1基因表达增强（P＜0．05－0．05）;AGEs含量与RAGE及ICAM－1呈明显正相关（P＜0．01）;氨基胍治疗可缓解上述指标的变化。提示 AGEs可诱导RAGE和ICAM－1的表达。推测AGEs-RAGE相互作用是引起糖尿病血管内皮细胞功能紊乱和损伤的关键环节。     

麻黄素对小鼠心肌组织结构和总抗氧化能力、过氧化氢酶活力的影响

目的探讨麻黄素对小鼠心肌组织的毒性影响。方法 60只小鼠随机分为麻黄素组和对照组,每组各30只,用递增剂量腹腔连续注射麻黄素溶液(0.0315 g/kg、0.0477 g/kg、0.0564 g/kg)和等量的生理盐水15d(每天两次,每次0.2ml),称量检测小鼠体重和心重的变化,用生物显微技术观察心肌组织结构的变化,用比色法检测血浆肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶-MB(CK-MB)和心肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)含量的变化。结果麻黄素组小鼠体重和心重均低于对照组,小鼠心肌组织出现不同程度的损伤,心肌细胞排列紊乱,闰盘间隙增宽,心肌纤维断裂;麻黄素组小鼠血浆CK、CK-MB活性高于对照组(P0.01),心肌组织T-AOC和CAT的活性降低(P0.05或P0.01),MDA含量则升高(P0.01)。结论麻黄素影响小鼠心肌组织结构,可能与心肌组织抗氧化酶活性降低和丙二醛含量升高有关。     

β-淀粉样蛋白对D-半乳糖致衰大鼠海马线粒体膜流动性的影响

目的:研究β-淀粉样蛋白(β-AP)对衰老大鼠海马线粒体膜流动性的影响。方法:用D-半乳糖(D-gal)建立衰老动物模型,并且海马内微注射β-AP;检测各组大鼠学习记忆行为;以DPH为荧光探针,测定大鼠海马线粒体膜粘滞系数,同时测定海马Na⁺-K⁺ATP酶活性的变化。结果:D+A组大鼠Na⁺-K⁺ATP酶活性明显低于D组和A组(P＜0.05),与N组比较有显著差异(P＜0.01);海马线粒体膜流动性显著低于N组(P＜0.01),与D组和A组比较也有显著差异(P＜0.05)。结论:β-AP与D-gal联合可导致脑海马自由基损伤效应加重,海马线粒体膜流动性显著降低,Na⁺-K⁺ATP酶活性明显降低。