siRNA介导的nestin基因沉默对人食管癌ECA109细胞侵袭和迁移的影响及机制

目的:探讨巢蛋白(nestin)对食管鳞癌ECA109细胞的侵袭与迁移能力的影响及可能的分子机制。方法:通过靶向沉默食管癌ECA109细胞内源性nestin基因后,采用real-time PCR和Western blot分别检测nestin基因的干扰效率及细胞内MMP2、MMP9、VEGF及β-catenin的表达水平;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果:与control-siRNA组相比,nestin-siRNA组中nestin mRNA和蛋白水平明显降低;细胞侵袭迁移能力受到明显抑制;MMP2,MMP9及VEGF表达明显降低;细胞总β-catenin及核内β-catenin表达明显减少。结论:Nestin与食管癌侵袭迁移能力密切相关,下调nestin表达可明显抑制食管癌细胞ECA109的侵袭迁移能力,其机制可能与抑制β-catenin的核内转移与下调MMP2、MMP9及VEGF的表达有关。     

CXCL8/CXCR1驱动FOXS1蛋白促进食管癌ECA109细胞增殖、侵袭及迁移

为了探讨CXC趋化因子配体8(CXC motif chemokine ligand 8,CXCL8)/CXC趋化因子受体1(CXC chemokine receptor 1,CXCR1)对体外人食管癌细胞ECA109增殖、凋亡及侵袭迁移的影响,并观察其与叉头框家族S1(forkhead box S1,FOXS1)蛋白的关系,将人食管癌细胞ECA109转染后分为对照组、CXCL8组、CXCL8+Con-siRNA组和CXCL8+CXCR1-siRNA组。CXCL8终浓度为10μg/mL。采用MTT试验检测细胞增殖情况,克隆试验检测克隆形成情况,流式细胞仪进行细胞凋亡测试,侵袭与迁移能力由Transwell试验和划痕试验测定,Western blotting检测细胞中CXCR1、FOXS1蛋白表达水平。结果显示,与对照组比较,CXCL8能够显著促进ECA109细胞增殖、克隆、侵袭和迁移(P<0.05),而干扰CXCR1后这些作用被阻断(P<0.05)。CXCL8组、CXCL8+Con-siRNA组细胞凋亡率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),CXCL8+CXC...     

沉默UHMK1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨干扰乳腺癌细胞系中UHMK1的表达对乳腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰乳腺癌细胞株MDA-MB-231中UHMK1的表达,分别采用qRT-PCR和Western blot实验检测shRNA的干扰效率.应用MTT实验检测细胞活力...     

ZNF259促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力

目的锌指蛋白259(ZNF259)可以结合表皮生长因子受体细胞内的酪氨酸激酶功能域,但其在肿瘤细胞中的生物学功能尚不明确。本研究拟探索其对人乳腺癌细胞生物学行为的调控。方法通过ZNF259特异性小RNA干扰实现在人乳腺癌细胞系中下调ZNF259的蛋白表达水平,利用此细胞模型通过基质胶侵袭和划痕实验来揭示ZNF259对肿瘤细胞的侵袭和转移的调控作用。结果在乳腺癌细胞系中ZNF259表达显著高于其在人正常乳腺上皮细胞系的表达。在乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中特异性干扰ZNF259的表达可显著抑制肿瘤细胞的侵袭和转移能力。结论 ZNF259促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移,参与乳腺癌的发生和发展。     

过表达细胞黏附分子1抑制卵巢癌细胞迁移及侵袭

目的:研究过表达细胞黏附分子1(cell adhesion molecule 1,CADM1)对卵巢癌增殖、迁移和侵袭的影响.方法:qRT-PCR测定CADM1mRNA在卵巢癌细胞系SKOV3及人正常卵巢上皮细胞hose中的表达,将SKOV3细胞分成两组,即CADM1过表达组和对照组,转染48 h后Western印迹测定两组CADM1蛋白表达量,采用lipofectamine 2000分别转染pcDNA3.1-CADM1及pcDNA3.1质粒,采用CCK-8、克隆形成、细胞划痕及Transwell实验分别检测两组细胞增殖、克隆形成、细胞迁移及侵袭能力.结果:CADM1mRNA在SKOV3中表达水平显著低于hose细胞系(1.54±0.34 vs.5.63±0.96,p＜0.05);转染48 h后,CADM1过表达组和对照组CADM1蛋白表达量分别为2.53±0.42,0.37±0.09,差异具有统计学意义(P＜0.05).CADM1过表达组和对照组在0,24,48,72 h 450 nm处的OD值差异无统计学意义(P＞0.05);CADM1过表达组与对照组克隆形成数相比(60.4±7.6 vs.58.3±8.2),差异无统计学意义(P＞0.05);CADM1过表达组细胞迁移率显著低于对照组(20.3％±3.5％vs.60.1％±4.2％,P＜0.05);CADM1过表达组侵袭细胞数显著少于对照组(24.5±5.3 vs.65.1±6.9,P＜0.05).结论:CADM1在卵巢癌细胞系中低表达,过表达CADM1对卵巢癌细胞增殖和克隆形成无影响,但可抑制迁移和侵袭,起抑癌基因的作用.     

miR-186介导YAP1调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-186介导的YAP1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot法检测miR-186、YAP1蛋白在正常乳腺细胞MDA-kb2及人乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达;利用Lipofectamine 2000试剂将miR-186 mimic转染至乳腺癌细胞,荧光显微镜下观察转染效率;采用CCK-8法检测乳腺癌细胞的增殖能力;细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell细胞侵袭实验检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测YAP1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-186与YAP1的靶向关系。结果 与正常乳腺细胞相比,乳腺癌细胞中miR-186表达量显著减少(P<0.01),YAP1蛋白表达量显著增加(P<0.01)。与对照组相比,miR-186过表达可明显降低乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),同时降低了YAP1蛋白表达(P<0.01)。miR-186和野生型YAP1载体共转染细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.01)。结论 miR-186在乳腺癌细胞中表达下...     

LINC00847促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探究体外LINC00847表达对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 应用shRNA干扰乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中LINC00847的表达后,qRT-PCR法检测shRNA的干扰效率.确认干扰效率后分别使用MTT法、克隆形成实验和Transwell小室实验检测干扰LINC00847后MCF-...     

MTA1基因调节神经胶质母细胞瘤细胞U-87-MG侵袭与迁移

目的评价沉默MTA1基因对神经胶质瘤细胞U-87-MG侵袭与迁移能力的影响。方法应用慢病毒转染技术沉默MTA1基因的表达,通过Western blot实验与荧光共聚焦实验检测MTA1蛋白与F-actin蛋白的表达;通过Transwell实验评估细胞侵袭与迁移能力;Western blot实验检测E-cadherin,N-cadherin蛋白的表达。结果沉默MTA1基因可下调F-actin蛋白的表达水平,抑制U-87-MG细胞的侵袭与迁移能力,并且上调N-cadherin蛋白,下调E-cadherin蛋白的表达。结论沉默MTA1基因抑制胶质母细胞瘤细胞系U-87-MG的侵袭与迁移能力与影响F-actin的集聚与EMT相关蛋白N-cadherin与E-cadherin表达相关。     

高表达ITGB1促进人乳腺上皮MCF10A细胞EMT及迁移

目的探讨ITGB1基因过表达对人乳腺上皮MCF10A细胞迁移和侵袭的影响。方法构建重组质粒p BABEpuro-myc-ITGB1,在人胚肾上皮细胞系293T细胞中包装反转录病毒,转染人乳腺上皮MCF10A细胞系,构建ITGB1基因过表达的稳定细胞系;实验设空白对照组(MCF10A)、阴性对照组(MCF10A-vector)和ITGB1基因过表达组(MCF10A-ITGB1);经嘌呤霉素筛选后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测ITGB1 mRNA及蛋白的表达;Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞株迁移和侵袭能力;蛋白质印迹法进一步检测上皮间质转换(EMT)相关蛋白E-cadherin、vimentin、fibronectin、N-cadherin以及ITGB1下游ILK、p-FAK和FAK蛋白的表达。结果成功构建ITGB1基因稳定过表达人乳腺上皮MCF10A细胞系;ITGB1基因过表达组(MCF10A-ITGB1)与空白对照组(MCF10A)和阴性对照组(MCF10A-vector)细胞相比,迁移能力(P0.05)和侵袭能力(P0.01)显著增强;EMT相关蛋白E-cadherin显著下调(P0.05),vimentin、fibronectin、N-cadherin以及ITGB1下游ILK,p-FAK蛋白显著上调(P0.05)。结论在人乳腺上皮MCF10A细胞中,过表达ITGB1基因诱导细胞EMT并促进其迁移和侵袭。     

人食管鳞癌细胞系EC9706的建立及其比较基因组杂交分析

目的 以中国男性食管鳞癌为来源，建立一个可良好传代的细胞系，从而提价七个有用的体外模式用于食管癌的研究。方法 采用组织块培养法，以新鲜的食管癌组织细胞系EC9706，做了初步的生物学特性观察，并采用比较基因组杂交的方法进行细胞遗传学的检测。结果 食管癌细胞系EC9706生长曲线显示其生长良好，易于培养。传代时间为26h，平皿集落形成率为91．9％，且能够在软琼脂中形成集落。经异种接种到裸鼠中均形成移植性肿瘤，肿瘤的病理诊断为中－低分化鳞状细胞癌。比较基因组杂交结果得出染色体1p1,q2-4,2p1,5p,7p14,7q21,11q1,11q2,20q扩增，其中5p表现出高水平的扩增。而染色体2p2,2q2,3p,4,9p,14,18,Xq缺失。结论 建立的细胞系EC9706可用于研究食管癌的癌变过程。     

靶向COL1A1基因的shRNA对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭与迁移的影响

目的探讨Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭与转移的影响。方法设计2条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞。用Western blot法筛选抑制效率最高的细胞进行细胞平板集落形成实验、细胞黏附实验、细胞迁移及侵袭实验,观察COL1A1基因对MDA-MB-231细胞黏附、运动及侵袭能力的影响。结果转染pshRNA-COL1A1-2干扰载体的MDA-MB-231细胞COL1A1蛋白表达降低最明显,抑制率达66.98%±2.08%,选择该组细胞作为有效干扰组进行后续实验。pshRNA-COL1A1转染组细胞的集落形成率显著低于空白对照组和阴性质粒pshRNA-scramble转染组(P<0.05);细胞黏附实验中pshRNA-COL1A1转染组细胞的吸光度值较对照组明显降低(P<0.001);转染pshRNA-COL1A1质粒组细胞的穿膜细胞数也显著低于空白对照组和阴性质粒pshRNA-scramble转染组(P<0.001)。结论 COL1A1基因沉默可在体外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的黏附、侵袭和迁移。     

重组人源TNC诱导胰腺癌细胞系PANC1的EMT及迁移和侵袭

目的构建人肌腱蛋白C(TNC)真核表达质粒,利用稳定过表达TNC的胰腺癌细胞系以及探索TNC在胰腺癌转移中的作用及分子机制。方法采用独特的引物设计方法构建TNC表达质粒,经转染和G418筛选获得稳定过表达TNC的胰腺癌PANC1细胞系。通过RT-qPCR和Western blot对细胞系中TNC的表达进行鉴定。采用Transwell小室法和Western blot检测TNC对细胞迁移、侵袭能力以及上皮间质转化(EMT)相关分子表达的影响。结果成功构建TNC质粒,稳定过表达TNC的PANC1细胞迁移、侵袭能力显著增强(P<0. 05),上皮标志物E-cadherin表达减少而间质标志物N-cadherin表达增加(P<0. 05)。结论 TNC真核表达质粒以及TNC稳定表达胰腺癌细胞系的建立,可用于TNC对细胞EMT、迁移和侵袭等方面的机制研究,也是研究TNC生物学功能和胰腺癌发生发展机制的基础。     

MST1过表达抑制宫颈癌细胞系SiHa的增殖、迁移和侵袭

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)对子宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法Western blot检测正常宫颈上皮细胞H8与宫颈癌细胞SiHa中MST1的表达;构建p J3H-HA-MST1质粒并转染SiHa细胞系,Western blot检测MST1、Ki-67和MMP9的蛋白表达;MTS、划痕实验和Transwell分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 SiHa细胞的MST1蛋白表达水平明显低于H8细胞(P0.05);SiHa细胞转染MST1质粒后,MST1蛋白表达明显升高,而Ki-67和MMP9蛋白表达水平显著下降(P0.05),SiHa细胞的增殖被明显抑制(P0.05),同时细胞的迁移和侵袭能力也显著降低(P0.01)。结论 MST1过表达可以抑制宫颈癌细胞SiHa的增殖、迁移和侵袭能力。     

Granulocyte-colony stimulating factor promotes invasion by human lung cancer cell lines in vitro

The effects of exogenous and endogenous granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) on invasion by cancer cells were studied, using lung cancer cell lines that produce G-CSF (NCI-H157) and lines that do not (PC-9 and NCI-H23). The invasive capacity of NCI-H157 cells was 26- to 27-fold higher than that of PC-9 and NCI-H23 cells. The invasiveness of PC-9 cells was stimulated by exogenous G-CSF, while that of NCI-H157 cells was not. Antibodies against G-CSF blocked the stimulation of PC-9 cell invasiveness by exogenous G-CSF. Anti G-CSF antibodies also inhibited invasion by NCI-H157 cells in the absence of exogenous G-CSF. These results suggest that endogenous and exogenous G-CSF both stimulate invasion by lung cancer cells.     

罗哌卡因抑制人肝癌细胞系Hep3B增殖、迁移和侵袭

目的 研究罗哌卡因对人肝癌细胞系Hep3B生物学行为的影响,并探讨其分子机制.方法 设置对照组、罗哌卡因组、si-NC组、si-LINC00853组、pcDNA-NC组、pcDNA-LINC00853组、(罗哌卡因+pcDNA-NC)组、(罗哌卡因+pcDNA-LINC00853)组.采用细胞计数试剂盒(CCK-8法)...     

异丙酚通过miR-218抑制人食管鳞癌细胞系KYSE150的侵袭和迁移

目的探讨异丙酚对人食管鳞癌细胞系KYSE150侵袭和迁移的影响及其机制。方法以0、2.5、5和10μg/L异丙酚处理KYSE150细胞,24 h后分别采用Transwell小室法和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力;RT-qPCR检测细胞中miR-218的表达;Western blot检测HMGB1蛋白的表达;生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验检测miR-218和HMGB1的靶向关系,观察miR-218对HMGB1蛋白的调控作用。采用脂质体法转染miR-218抑制剂或pcDNA3.1-HMGB1-GFP过表达载体质粒后,观察miR-218和HMGB1蛋白的表达以及下调miR-218或上调HMGB1表达对10μg/L异丙酚处理的KYSE150细胞侵袭和迁移的影响。结果异丙酚呈浓度依赖性地抑制KYSE150细胞侵袭、迁移和细胞中HMGB1蛋白的表达,并促进miR-218的表达(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-218的靶基因,miR-218可负向调控HMGB1蛋白的表达(P<0.05)。下调miR-218表达可逆转异丙酚对KYSE150细胞侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05);同时上调HMGB1表达可逆转异丙酚对KYSE150细胞侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05)。结论异丙酚抑制食管鳞癌KYSE150细胞侵袭和迁移,其作用机制可能与miR-218靶向调控HMGB1有关。     

利用pTet-Off系统研究NAIF1对食管癌细胞系EC9706生物学行为的影响

目的:利用pTet-off可诱导表达系统将NAIF1重组质粒导入食管癌EC9706中进行生物学行为影响研究。方法:构建pTRE2-NAIF1质粒,与PTK-Hyg质粒共转染入可诱导表达细胞系TF93(由EC9706构建而得),经筛选并鉴定获得稳定可诱导表达克隆。以此克隆采用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术(FCM)检测细胞周期、Transwell小室法检测细胞迁移和检测细胞黏附能力的改变。结果:经筛选并鉴定获得了稳定的可诱导表达TF93-pTRE2-NAIF1克隆。NAIF1在体外可以抑制EC9706细胞增殖、导致G0/G1期细胞阻滞、抑制其迁移和黏附能力。结论:NAIF1能抑制食管癌细胞系EC9706的恶性生物学行为,为食管癌的基因治疗提供了可能的新靶点。     

热休克蛋白70在人食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达与定位变化

目的 探讨姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用,热休克蛋白70(HSP70)在肿瘤细胞凋亡过程中在核基质上的变化及其与凋亡调控相关蛋白的关系.方法 用细胞计数和流式细胞仪检测姜黄素对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用,以光学显微镜和透射电镜观察姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡前后的细胞结构变化,琼脂糖凝胶电泳观察人食管癌EC9706细胞凋亡前后的DNA结构变化.双向凝胶电泳和质谱鉴定分析HSP70在核基质中的存在与变化;并以Western blotting进行确证;激光扫描共焦显微镜观察HSP70在EC9706细胞凋亡过程中的定位及其与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系.结果 姜黄素能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖并诱导人食管癌EC9706细胞凋亡,双向凝胶电泳、质谱鉴定和结果 发现并证实,HSP70在姜黄素处理前后的EC9706细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.激光扫描共焦显微镜观察结果 显示,HSP70在EC9706细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2等基因产物具有共定位关系,且其共定位区域发生了变化.结论 姜黄素对人食管癌EC9706细胞具有显著的凋亡诱导作用;HSP70作为一种新发现的核基质蛋白,在姜黄素诱导人食管癌EC9706凋亡过程中的表达与分布发生了显著变化.HSP70与凋亡相关基因的关系对EC9706细胞凋亡具有重要影响.     

FABP-5基因沉默联合放疗对人食管癌细胞株EC9706的抑制作用

目的 探讨脂肪酸结合蛋白-5(fatty acid binding proteins-5,FABP-5)基因沉默联合放疗对人食管癌细胞株EC9706的影响.方法 根据FABP-5mRNA编码序列设计并合成干扰SiRNA序列,转染入EC9706细胞,实验分为四组:空白对照组(Control)、转染FABP-5沉默组(FA...