lncRNA LOC285194在肾癌组织中的表达及其对786-O细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的探讨lncRNA LOC285194在肾癌组织中的表达及其对肾透明细胞癌786-O细胞的增殖、迁移与侵袭的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA LOC285194在28例肾透明细胞癌患者癌组织及相应的癌旁组织、ccRCC细胞株786-O及正常肾上皮细胞系KiMA中的表达。将载有lncRNALOC285194序列的质粒和阴性对照质粒转染ccRCC细胞株786-O,CCK-8实验检测转染后786-O细胞的增殖能力变化,划痕实验检测转染后786-O细胞的迁移能力变化,Transwell法检测转染后786-O细胞的侵袭能力变化,Western blot实验检测转染后786-O细胞周期蛋白D1(cyclinD1)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。结果lncRNA LOC285194在肾透明细胞癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.01),在ccRCC细胞株786-O中的表达明显低于正常肾上皮细胞系KiMA中的表达(P0.01)。上调lncRNA LOC285194的表达后,786-O细胞的增殖、迁移与侵袭能力明显降低,cyclin D1与VEGF蛋白的表达明显降低(P0.01)。结论 lncRNA LOC285194在肾癌组织中低表达,lncRNA LOC285194过表达能够抑制786-O细胞的增殖、迁移与侵袭。     

CRIM1通过激活ERK1/2-VEGF信号通路促进子宫颈鳞状细胞癌微血管生成

目的 探讨CRIM1表达与子宫颈鳞状细胞癌微血管生成的关系及其分子机制。方法 采用免疫组化MaxVision法检测并结合光密度分析CRIM1蛋白的组织表达;采用CD34内皮标记及Weinner计数法检测子宫颈鳞状细胞癌组织中的微血管密度(microvascular density,MVD)。通过真核表达质粒pCMV3-CRIM1转染子宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞获得CRIM1基因过表达;采用Western blot法检测癌细胞中p-ERK和VEGF的表达,并利用ERK抑制处理癌细胞,观察ERK信号抑制对VEGF表达的影响;通过ELISA法检测细胞上清液中VEGF蛋白含量。分别利用CCK-8实验和Matrigel管腔形成实验检测人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的增殖和管腔形成能力。结果 子宫颈鳞状细胞癌组织中CRIM1表达水平(200 039±163 274.86)显著高于慢性子宫颈炎组织(28 258.0±16 606.04,P 0.001),且CRIM1表达与子宫颈鳞状细胞癌MVD表达呈正相关(r=0.546,P0.01)。CRIM1基因转染诱导SiHa细胞VEGF表达水平升高(P 0.001),且细胞上清液中VEGF含量也升高(P 0.01)。CRIM1转染后的癌细胞上清液刺激下的内皮细胞增殖能力和管腔形成能力均显著增强。CRIM1基因转染诱导SiHa细胞p-ERK和VEGF蛋白表达上调,而ERK抑制剂(U0126)能显著抑制CRIM1诱导的VEGF上调。人重组蛋白CRIM1直接作用于SiHa细胞后,VEGF蛋白表达及上清液中VEGF含量无明显变化。结论 CRIM1促进子宫颈鳞状细胞癌微血管生成,其机制可能与CRIM1激活ERK1/2-VEGF信号通路有关。     

miR-497与肾癌预后的关系及其对肾癌786-0细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-497(miR-497)与肾癌预后的关系及其对肾癌786-0细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:收集2011年~2015年80例肾细胞癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织并回顾性分析患者随访资料。采用实时定量PCR法检测癌组织及配对的癌旁组织中miR-497的表达。在肾癌细胞系786-0中转染miR-497模拟物,应用MTT法、台盼兰拒染法活细胞计数、流式细胞术和Transwell小室实验检测miR-497对786-0细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。通过生物信息学预测miR-497在786-0细胞中作用的靶基因。Western blotting法检测miR-497对靶基因蛋白表达影响。结果:肾癌组织中miR-497的表达量明显低于癌旁组织(P0.05)。786-0中miR-497表达量明显低于正常肾上皮细胞中miR-497表达量(P0.05)。随访时间2~48个月,中位随访时间29个月,失访6例,随访率92.5%。76例患者3年无复发生存率(recurrence-free survival,RFS)为55.2%。高miR-497表达组和低miR-497表达组肾癌患者的RFS分别为71.2%和40.1%,差异有统计学显著性(P0.05)。过表达miR-497可显著抑制786-0细胞的增殖和侵袭能力,显著促进细胞凋亡(P0.05)。过表达miR-497可显著抑制786-0细胞中cyclin D1蛋白的表达(P0.05)。结论:miR-497与肾癌预后相关,miR-497能明显抑制肾癌786-0细胞的增殖和凋亡,其机制可能与其靶向抑制cyclin D1有关。     

过表达RNF43抑制肾透明细胞癌细胞系786-O增殖、迁移与侵袭

目的 探究RNF43对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞系786-O的增殖、迁移及侵袭功能的影响及其潜在机制.方法 应用GEPIA网站分析人肾透明细胞癌样本的RNF43表达并预测RNF43对肾透明细胞癌患者预后的影响.将786-O细胞分为RNF43过表达组和Wnt通路抑制剂LGK974药物干预组.用Western blot...     

miR-198过表达抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的实验研究

目的探究微小RNA-198(miR-198)过表达对视网膜母细胞瘤(RB) Y79细胞系生长、侵袭及裸鼠异体移植瘤的影响。方法培养RB Y79细胞系,随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照组和过表达组,采用Lipofectamine~?2000分别转染miR-NC、miR-198模拟物至阴性对照组和过表达组Y79细胞。qRT-PCR检测转染后Y79细胞中miR-198的相对表达水平;利用干细胞成球试验和Transwell小室试验分别检测各组Y79细胞的增殖及侵袭能力; Western blot检测各组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平。将培养好的miR-NC和miR-198 mimic细胞分别进行裸鼠皮下注射,60只裸鼠分为阴性对照组和过表达组,各组每5 d随机处死3只裸鼠,检测RB质量及体积,qRT-PCR检测瘤体中miR-198的mRNA相对表达水平;免疫组化法检测Ki67、SOX2、VEGF阳性表达率。结果与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中miR-198的相对表达水平较高(P 0.05),并且干细胞成球直径、数量、细胞侵袭率均较低(P 0.05); Western blot结果显示,与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平均较低(P 0.05)。过表达组裸鼠的瘤体质量及体积均小于阴性对照组(P 0.05),并且过表达组裸鼠瘤体组织中miR-198的mRNA相对表达水平高于阴性对照组(P 0.05),过表达组Ki67、SOX2、VEGF的阳性表达率低于阴性对照组(P 0.05)。结论 miR-198可能在RB中作为抑癌基因发挥作用,过表达miR-198可明显抑制RB的增殖及侵袭能力,并抑制裸鼠瘤体生成。     

miR-210对血管内皮细胞VEGF-Notch信号通路的调控

目的: 观察过表达miR-210对血管内皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)-Notch信号通路相关分子表达的影响,探讨miR-210调控血管新生的分子机制。方法: 采用常规方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)。通过转染LV- miR-210-GFP重组慢病毒载体上调内皮细胞miR-210表达,实验分为miR-210过表达组(LV- miR-210-GFP)和对照组(LV-GFP)。采用real-time PCR检测miR-210的表达变化,流式细胞术检测ephrin-A3的表达,采用real-time PCR、Western blotting、免疫荧光细胞化学染色法分别检测VEGF-Notch信号通路相关分子VEGF、VEGF 2(VEGFR 2)、Notch1的mRNA和蛋白表达水平。结果: Real-time PCR结果显示,与对照组相比,miR-210过表达组miR-210表达水平上调了(32.10±1.26)倍;流式细胞术结果显示,miR-210过表达组阳性细胞率 较对照组 明显增加(P<0.05)。Real-time PCR结果显示,miR-210过表达组 VEGF、VEGFR2、Notch1 mRNA分别较对照组上调了(7.40±0.67)、(2.50±0.10)、(9.70±0.72)倍,P<0.05;免疫荧光结果显示,miR-210过表达组VEGF和VEGFR2红色荧光信号均显著强于对照组(P<0.05)。Western blotting 结果显示,miR-210过表达组血管内皮细胞中Notch1的蛋白表达量(4.22±0.60)较对照组明显升高(P<0.05)。结论: miR-210过表达可显著上调VEGF-Notch信号通路分子的表达水平。     

过表达miR-299-3p抑制人肾癌细胞系增殖和迁移

目的探讨miR-299-3p在肾癌细胞系增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 RT-qPCR检测肾癌细胞系(786-O、769-P、ACHN和A498)和人正常肾小管上皮细胞系(HK-2)中miR-299-3p的表达;MTT法、细胞划痕实验、Transwell小室法检测miR-299-3p mimic对肾癌786-O细胞系增殖、迁移和侵袭的影响;在线生物信息学数据库对miR-299-3p的靶基因进行了预测。Western blot检测E-cadherin,N-cadherin、vimentin和MAP3K12的蛋白表达。结果 miR-299-3p在肾癌细胞系中均低表达(P0.05),且在786-O细胞中表达最低。过表达miR-299-3p可显著抑制肾癌细胞系786-O增殖、迁移、侵袭、体外成瘤和上皮间质转化(EMT),综合4个数据库的结果,发现预测的miR-299-3p的共同靶基为MAP3K12,荧光素酶报告基因验证了miR-299-3p与MAP3K12的靶向关系。miR-299-3p+MAP3K12共转染786-O细胞后,能够有效降低miR-299-3p mimic诱导的细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-299-3p在肾癌细胞中的作用机制可能是通过miR-299-3p靶向下调MAP3K12表达,调控EMT途径影响肾癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-429对肾透明细胞癌细胞侵袭能力的影响

目的研究miR-429在肾透明细胞癌中的表达,及其对肾透明细胞癌Caki-1细胞侵袭能力的影响。方法实时定量PCR检测肾透明细胞癌组织中miR-429基因的表达水平。培养肾透明细胞癌Caki-1细胞,将mi R-429的前体转染Caki-1细胞,检测转染后Caki-1细胞的侵袭能力。结果与癌旁组织相比,miR-429在肾透明细胞癌组织中的表达下调显著,且与肾透明细胞癌的分级和淋巴结转移相关。miR-429的前体能够使Caki-1细胞穿透滤膜的数量明显减少。结论 miR-429能够抑制肾透明细胞癌细胞侵袭,发挥转移抑制基因的作用。     

下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响

研究下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响。利用反义核酸技术设计针对miRNA-21成熟体的ASO序列,构建pcDNA-6.2-miRNA-21-ASO真核表达载体(命名为p-miR-21-ASO);将重组载体p-miR-21-ASO体外瞬时转染HCT116细胞,real-time PCR检测细胞中miRNA-21的表达变化;CCK-8法及克隆形成实验检测HCT116细胞的增殖及克隆形成能力改变;划痕法观察HCT116细胞的体外迁移能力变化;western blot检测细胞中VEGF蛋白的表达变化。结果显示,p-miR-21-ASO载体能下调miRNA-21的表达(P0.05);CCK-8及克隆形成实验结果显示HCT116细胞的增殖及克隆形成能力明显下降(P0.05);划痕实验结果发现细胞的体外迁移能力削弱(P0.05);western blot检测结果表明转染组细胞VEGF表达下调(P0.05)。结果表明,下调miRNA-21能明显抑制HCT116细胞的体外生长,这可能与VEGF的表达降低有关。     

miR-150在胎盘表达与复发性流产的关系研究

目的探讨miR-150通过靶向血管内皮生长因子(VEGF)表达调控胎盘血管生成参与复发性流产的关系。方法选择华中科技大学同济医学院附属梨园医院妇产科单胎晚期妊娠分娩的产妇40例为对照组(年龄23~29岁,平均年龄26.72岁),同期选择于该院妇产科3次或更多次自然流产的妇女40例为病例组(年龄23~29岁,平均年龄26.18岁)。测定两组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。设立HTR-8/SVNEO细胞组、miR-150mimics组、miR-150 inhibitor组,测定3组细胞活力、凋亡水平、血管形成水平、miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。建立正常小鼠组、miR-150 mimics小鼠组、miR-150 inhibitor小鼠组模型,测定3组小鼠平均流产数、胎鼠质量、胎盘质量、胎盘毛细血管数目、miR-150 mRNA及VEGF表达水平。结果病例组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平高于对照组胎盘组织,VEGF表达水平低于对照组胎盘组织(P <0.05)。miR-150 mimics组光密度(OD)值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05);miR-150 inhibitor组OD值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05),miR-150 inhibitor组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平高于正常小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量低于正常小鼠组(P <0.05)。miR-150inhibitor小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平低于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均胎盘毛细血管数目水平、VEGF表达水平低于正常小鼠组(P <0.05),miR-150 inhibitor小鼠组平均胎盘毛细血管数目、VEGF表达水平高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。结论复发性流产患者胎盘组织中miR-150表达水平升高,VEGF表达水平降低;miR-150靶向抑制胎盘中VEGF表达水平进而抑制胎盘中血管的生成可能是复发性流产的发病机制之一。     

MicroRNA-140-5p通过蛋白激酶C亚型ε促进肾癌细胞增殖

目的 探讨microRNA-140-5p(miR-140-5p)在肾癌发生中的作用。 方法 Real-time PCR方法检测肾癌细胞（Caki-1、ACHN、OS-RC-2和786-O）中miR-140-5p的表达。MTS,流式细胞术和Western blotting检测细胞增殖,细胞周期和相关蛋白的改变。 结果 降低Caki-1细胞中miR-140-5p的水平后,细胞增殖被抑制,G₀/G₁期细胞数量显着增加,cyclin D、cyclin E和CDK2、CDK4也随之减少;此外,增加786-O细胞中miR-140-5p的水平后,促进体外细胞增殖和体内肿瘤发生。基因芯片结果发现,蛋白激酶C亚型ε（PKCε)基因在改变Caki-1和786-O的细胞中显著性升高。siPKCε在降低肾癌细胞（RCC)中PKCε蛋白表达的同时,还能显著性反转抑制物/模拟物诱导的细胞增殖和细胞周期的改变。 结论 miR-140-5p通过PKCε促进肾癌细胞增殖。     

siRNA targeting Survivin inhibits growth and induces apoptosis in human renal clear cell carcinoma 786-O cells

We investigated the inhibitory effect of small interfering RNA (siRNA) targeting Survivin gene on cell proliferation and apoptosis in human renal clear cell carcinoma 786-O cells. qRT-PCR, immunocytochemistry, and Western Blot were used to detect Survivin gene expression in 786-O cells. Cell proliferation was determined by BrdU assay and PCNA expression. Cell apoptosis was analyzed through detection of caspase-3 activity, and the effect of Survivin-siRNA on Bcl-2 gene expression was also examined. Forty-eight hours after transfection, Survivin expression was markedly inhibited at the mRNA and protein level. Downregulation of Survivin resulted in a significant inhibition of tumor cell growth. Caspase-3 activity showed that siRNA targeting Survivin gene induced cell apoptosis in 786-O cells. Moreover, Bcl-2 protein expression was markedly inhibited by transfection with siRNA against Survivin. These results indicate that siRNA targeting Survivin gene can downregulate Survivin gene expression in 786-O cells, inhibit growth, and induce apoptosis of renal carcinoma cells.     

Down-regulation of miR-497 is associated with poor prognosis in renal cancer

Introduction: Clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common type of cancer in the adult kidney, and the prognosis of metastatic ccRCC remains poor with high mortality. Recent study indicated that microRNAs (miRNAs) played critical roles in tumor progression. The aim of this study was to investigate the expression, biological role and clinical significance of miR-497 in ccRCC. Methods: Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) was performed to detect the expression of miR-497 in renal cancer cell lines and ccRCC tissues. The association between miR-497 expression and overall survival was estimated by the Kaplan-Meier method. Gain of function assays were performed in the 786-O renal cancer cell line. Results: Expression of the miR-497 was significantly decreased in renal cancer cell lines and ccRCC tissues when compared with normal human proximal tubule epithelial cells and adjacent non-tumor tissues. Decreased miR-497 expression was significantly associated with tumor stage, histological grade and lymph node metastases. Significantly shorter overall survival was observed in patients with lower expression of the miR-497. Overexpression of miR-497 significantly inhibited renal cancer cell proliferation, migration and invasion. Conclusions: Our results demonstrated that miR-497 was decreased in ccRCC tissues and may provide a potential prognostic biomarker and a potential target for therapeutic intervention.     

Overexpression of miR-210, a downstream target of HIF1α, causes centrosome amplification in renal carcinoma cells

MiR-210 is significantly up-regulated in clear cell renal cell carcinoma (CCC), but the mechanism and biological consequences of miR-210 up-regulation are poorly understood. Here, we show that miR-210 is highly expressed in renal carcinoma cell lines and that its expression is clearly correlated with accumulation of hypoxia-inducible factor 1α (HIF1α) under normoxia as well as hypoxia, suggesting that miR-210 up-regulation in renal carcinoma cells is most likely due to accumulation of HIF1α. To reveal the effects of miR-210 up-regulation, the miR-210 precursor was transfected into renal carcinoma cells. After transfection, the cells accumulated at the G2/M phase of the cell cycle and their viability was decreased, suggesting that miR-210 overexpression may trigger an event that hinders normal cell division. Immunocytochemistry demonstrated a multipolar spindle accompanied by centrosome amplification in cells overexpressing miR-210. It has been reported that centrosome amplification induces chromosome mis-segregation, finally leading to chromosome instability and aneuploidy. Indeed, the proportion of aneuploid cells (>4n) was increased in miR-210 overexpressed cells. By using the TargetScan and PicTar algorithms, E2F3 was identified as one of the possible targets of miR-210 and was suppressed at the protein level by miR-210. Moreover, the proportion of aneuploid cells was increased in E2F3 siRNA transfected cells. On the basis of these results, we propose that miR-210 up-regulation due to HIF1α accumulation may induce aneuploidy via E2F3 down-regulation at least in part, and may play a role in tumourigenesis and/or progression of CCC.     

miR-634 在肝癌中的表达及对肝癌细胞生物学行为的影响

目的:检测microRNA-634(miR-634)在肝癌中的表达水平及其对肝癌细胞常见生物学行为的调控作用。方法:采用实时荧光定量PCR(RT鄄qPCR)法检测肝癌细胞系(HepG2、SMMC7721、Bel7402、Bel7404、SNU739)、69 例肝癌组织及匹配癌旁组织中miR-634 的相对定量,分析miR-634 表达与肝癌患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、Child-Pugh 分级、BCLC 分期、门静脉癌栓及肝外转移的关系,同时构建miR-634 的真核表达载体并转染肝癌细胞系,采用活细胞计数试剂盒CCK-8、流式细胞仪Annexin V/ PI 双染法和Transwell 侵袭实验检测转染miR鄄634 对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果:与正常人肝细胞系L-02 相比,肝癌细胞的miR-634 水平均降低(P <0.05),表达量依次为HepG2 >SNU739 >Bel7402 > Bel7404 >SMMC7721;69 例肝癌组织的miR鄄634 水平为(0.253±0.019),低于匹配癌旁组织(P<0.05),且与肿瘤直径、分化程度、BCLC分期、门静脉癌栓及肝外转移均有关(P<0.05)。过表达组转染24 ~96 h 后的miR鄄634 水平持续升高,与对照组和空转染组的差异有统计学意义(P<0.05);与对照组和空转染组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率均升高,但穿膜细胞数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-634 在肝癌组织和细胞中均为低表达,且与临床病理参数有关,上调其水平可抑制肝癌细胞增殖及侵袭并诱导凋亡,对于肝癌防治有重要借鉴价值。     

Ki67反义多肽核酸抑制肾癌生长的体外及动物实验研究

为研究肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(AS-PNAs)对人肾癌细胞的体内外抑制作用.将AS-PNAs(10.0μmol/L)转染人肾癌786-0细胞,采用免疫组化、Western印迹技术检测Ki67表达;3H-TdR掺入试验检测细胞增殖;免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。裸鼠移植瘤内注射AS-PNAs(10.0μmol/L)连续4d后,第3、6、12天处死小鼠,取瘤组织检测肿瘤体积、Ki67表达、细胞凋亡。结果发现,AS-PNAs处理组786-0细胞Ki67表达明显降低,3H-TdR掺入率明显降低,细胞凋亡率明显增加,与随机PNAs对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。动物实验AS-PNAs处理组小鼠肿瘤体积明显缩小,Ki-67抗原表达明显降低,细胞凋亡明显增加,与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。Ki67基囚AS-PNAs在体外及动物体内均有抑制增殖、促进凋亡作用,是一种有前途的反义治疗药物。     

miR-133-3p对甲状腺癌SW579细胞生物学行为和移植瘤生长的影响

目的 探究miR-133-3p对甲状腺癌SW579细胞和体内移植瘤生长的影响。方法 甲状腺癌SW579细胞分为对照组,miR-NC组,miR-133-3p mimic组,按分组转染miR-NC和miR-133-3p mimic。qRT-PCR检测甲状腺癌组织和癌旁组织及转染后细胞中miR-133-3p的表达,克隆形成;EDU染色检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化;Western blot检测Survivin,caspase-3蛋白表达;试剂盒检测细胞上清液中SOD和MDA含量。裸鼠皮下注射转染miR-133-3p mimic或miR-NC的SW579细胞,qRT-PCR检测瘤组织中miR-133-3p表达量,记录瘤组织体积,TUNEL检测瘤组织凋亡,免疫组化检测瘤组织中Survivin和caspase-3的表达。结果 甲状腺癌组织中miR-133-3p的表达降低。体外细胞实验结果显示,与对照组相比,miR-133-3p组miR-133-3p表达量增加,细胞克隆形成率、EDU阳性细胞率和Survivin蛋白表达降低,细胞凋亡率和caspase-3的蛋白表达升高,线粒体膜电位...     

miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响.方法 采用miR-137模拟物转染至肾癌GRC-1细胞,实验分为未转染组(未进行miR-137模拟物转染)、miR-137对照组(转染随机序列)、miR-137转染组(进行miR-137模拟物转染).荧光定量PCR检测各组转染后48h细胞中miR-137表达水平,应用噻唑蓝细胞增殖试验(MTT)、流式细胞检测技术与免疫荧光评价miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖和凋亡的影响.结果 转染miR-137模拟物48h后,荧光定量PCR检测发现未转染组、miR-137对照组及miR-137转染组GRC-1细胞中miR-137的相对表达量依次为(24.43±2.03)％、(26.57±2.55)％、和(73.30±3.29)％,差异有统计学意义(P＜0.05).MTT细胞增殖实验与流式细胞仪检测结果显示,与未转染组、miR-137对照组相比,miR-137转染组转染48h后肾癌GRC-1细胞的增殖率显著降低,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而未转染组、miR-137对照组肾癌GRC-1细胞的增殖率、凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.02).结论 miR-137可明显抑制肾癌GRC-1细胞增殖和促进其凋亡,故有望成为肾癌基因治疗的新靶点.     

MicroRNA-539靶向调控E2F转录因子3抑制肝癌的发生与发展

目的 探讨肝癌组织中microRNA-539（miR-539）表达水平及其抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法 收集90例肝癌患者术后肝癌组织及癌旁组织标本,用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测组织中miR-539表达量。在PCL/PRF5、Huh7和QGY-7701肝癌细胞中转染miR-539 模拟物（mimics）,用Real-time PCR检测miR-539表达量。用MTT法检测miR-539对肝癌细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测miR-539对肝癌细胞凋亡的影响;用免疫印迹法检测miR-539对肝癌细胞中E2F转录因子3（E2F3）蛋白表达的影响。结果 肝癌组织中miR-539表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）;miR-539表达量与肝癌患者性别、年龄及肝癌组织分化程度无关（P>0.05）;与肿瘤直径和淋巴结转移相关（P<0.05）。转染miR-539 mimics组肝癌细胞中miR-539表达量显著高于空白组和miR-539 NC组（P<0.05）。在QGY-7701细胞中,过表达miR-539能显著抑制细胞增殖（P<0.05）,降低E2F3蛋白的表达（P<0.05）,对细胞凋亡无明显作用（P>0.05）。结论 miR-539是肝癌发生中的抑癌因子,可能是通过靶向下调E2F3蛋白水平达到抑制癌细胞的增殖。