Par3蛋白对体外培养子宫颈癌SiHa细胞生物学性状的影响

目的探讨Par3蛋白对子宫颈癌SiHa细胞生物学性状的影响。方法采用基因过表达和RNA干扰技术分别上调和下调子宫颈癌SiHa细胞中PARD3的表达;qRT-PCR和Western blot法检测PARD3 mRNA和Par3蛋白水平变化。Transwell小室体外实验检测其对SiHa细胞侵袭、迁移能力的影响;应用流式细胞术分析其对SiHa细胞周期及凋亡的影响。结果 SiHa细胞转染基因PARD3过表达质粒后mRNA和蛋白表达水平显著增高,PARD3 siRNA干扰SiHa细胞后PARD3 mRNA和Par3蛋白表达水平显著降低;Transwell小室体外实验表明Par3过表达后细胞侵袭、迁移能力降低,而经干扰组蛋白表达下调后细胞侵袭、迁移能力增强;流式细胞术检测提示与空白对照组相比,PARD3基因被干扰后细胞被阻滞在S期,干扰组细胞凋亡率明显降低(P0.01)。然而,上调PARD3的表达后细胞被阻滞在G_0/G_1期,过表达组细胞凋亡率明显增高(P0.01)。结论 Par3蛋白参与子宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭以及凋亡的过程,PARD3基因的异常低表达很可能对子宫颈癌的发生、发展以及侵袭、转移起促进作用。     

E-cadherin参与IL-24抑制肺癌细胞增殖和侵袭迁移的实验研究

目的:研究E-cadherin介导参与IL-24抑制肺癌细胞增殖和侵袭迁移的机制。方法:选用肺癌细胞A549作为体外研究对象,在细胞中转染pcDNA3.1-IL-24,Realtime PCR和Western blot方法测定过表达效果,MTT测定增殖变化,Transwell小室测定侵袭和迁移变化,Western blot检测E-cadherin、MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达变化。将E-cadherin shRNA和pcDNA3.1-IL-24共转染至肺癌细胞中,按照上述MTT、Transwell小室和Western blot方法测定细胞增殖、侵袭迁移和E-cadherin、MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达变化。结果:转染pcDNA3.1-IL-24后的肺癌细胞中IL-24表达水平升高,细胞增殖、侵袭和迁移能力下降,细胞中MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达水平降低,E-cadherin蛋白表达水平升高。E-cadherin shRNA可以逆转pcDNA3.1-IL-24对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达的抑制...     

ILF3-AS1干扰通过促进miR-204/IL-6R影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)白介素增强因子3反义1(ILF3-AS1)对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和可能机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织中ILF3-AS1和miR-204的表达水平。将ILF3-AS1小干扰RNA、miR-204模拟物分别转染SiHa细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印记(Western blot)检测白介素6受体(IL-6R)表达。双荧光素酶报告实验验证ILF3-AS1与miR-204、miR-204与IL-6R的调控关系。结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织中ILF3-AS1表达显著升高,miR-204表达显著降低(P0.05)。干扰ILF3-AS1表达后SiHa细胞存活率、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例、IL-6R蛋白表达显著降低,G0-G1期细胞比例、miR-204表达显著升高(P0.05)。过表达miR-204后SiHa细胞存活率、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例、IL-6R蛋白表达显著降低,G0-G1期细胞比例显著升高(P0.05)。抑制miR-204表达可逆转干扰ILF3-AS1对SiHa细胞增殖、周期分布、迁移和侵袭的影响(P0.05)。结论干扰ILF3-AS1可能通过上调miR-204/IL-6R途径来抑制宫颈癌细胞SiHa的增殖、迁移和侵袭。     

CNTN-1促进人食管癌EC9706细胞侵袭和迁移

目的探讨接触蛋白-1(CNTN-1)在食管癌转移中的作用。方法 q PCR和Western blot检测食管癌细胞系EC9706中CNTN-1的表达;RNA干扰和CNTN-1过表达质粒转染调整EC9706细胞CNTN-1的表达,并将细胞分为空白对照组、scrambled siRNA组、CNTN-1 siRNA组、pcDNA3.1-vector组和pcDNA3.1-CNTN-1组;Brd U和Transwell实验分别检测EC9706细胞增殖、侵袭和迁移能力;qPCR和Western blot检测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达。结果 CNTN-1在食管癌细胞EC9706中mRNA和蛋白水平较与正常食管上皮细胞显著上调(P0.05);转染CNTN-1siRNA后,EC9706细胞CNTN-1表达水平显著降低(P0.05),细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降(P0.05),同时细胞中侵袭转移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下降(P0.05);CNTN-1过表达质粒转染细胞后,EC9706细胞内CNTN-1表达水平上调(P0.05),细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高,同时MMP-2和MMP-9表达明显升高(P0.05)。结论 CNTN-1可能通过调节MMP-2和MMP-9表达促进食管癌细胞的侵袭转移。     

子宫颈癌中SIX1的表达及其与细胞增殖的关系

目的探讨SIX1在子宫颈癌组织中的表达以及生物学作用。方法采用免疫组化Eli Vision两步法检测35例子宫颈癌、42例子宫颈上皮内病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及15例正常子宫颈组织中SIX1的表达及Ki-67增殖指数。应用RNA干扰技术,采用SIX1-siRNA表达质粒转染子宫颈癌Hela细胞,检测转染后子宫颈癌Hela细胞SIX1的mRNA和蛋白表达水平;应用MTT检测Hela细胞的增殖能力。结果子宫颈癌组织中SIX1阳性率高于CIN组织及正常子宫颈组织(P0.05),且与Ki-67增殖指数呈正相关(P0.05)。RT-PCR和Western blot检测显示转染SIX1-siRNA子宫颈癌Hela细胞中SIX1在mRNA和蛋白水平均显著下调;Hela细胞生长速度减慢。结论 SIX1可能通过促进子宫颈癌细胞的增殖,在子宫颈癌的发生、发展过程中发挥重要作用。     

miR-30c抑制宫颈癌细胞恶性表型的分子机制研究

目的:探讨微小RNA(miR)-30c过表达抑制宫颈癌细胞恶性表型的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000转染法将pGenesil-1-miR-30 c质粒转染宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa和CaSki,以转染p-Geresil-1的细胞为阴性对照;运用TaqMan real-time PCR检测各组细胞中miR-30c的表达水平;采用MTT法、集落形成实验、Transwell法、Annexin V-FITC及流式细胞术分别测定细胞活力抑制率、集落形成能力、迁移率及凋亡率;Western blot检测Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的蛋白表达水平。结果:转染p Genesil-1-miR-30c质粒的宫颈癌细胞系中miR-30c表达水平均显著高于阴性对照组(P0.01);过表达miR-30 c的宫颈癌细胞活力抑制率显著高于阴性对照组(P0.05),细胞集落形成率和迁移率显著低于阴性对照组(P0.05);流式细胞术检测结果显示,miR-30c过表达的宫颈癌细胞凋亡率显著高于对照组(P0.05);Western blot结果显示miR-30 c过表达促进Bax和TIMP-1蛋白的表达,而抑制Bcl-2和MMP-13蛋白的表达(P0.05或P0.01)。结论 :miR-30 c过表达抑制宫颈癌细胞活力和迁移,诱导宫颈癌细胞凋亡,其机制与激活细胞凋亡通路及抑制MMP-13表达有关。     

DEC1基因过表达对人食管癌ECA109细胞增殖及侵袭能力的影响

目的:探讨DEC1基因过表达对人食管癌ECA109细胞增殖和侵袭能力的影响及可能机制。方法:将质粒pc DNA3.1(-)/DEC1(DEC1组)和pc DNA3.1(-)(vector组)利用脂质体分别转染至人食管癌ECA109细胞中,通过real-time PCR检测转染48 h后的细胞内DEC1 mRNA表达,Western blot分别检测转染72 h后细胞内DEC1、基质金属蛋白酶9(MMP9)及细胞周期蛋白cyclin D1的蛋白表达;采用CCK-8实验、平板集落实验及Transwell实验分别检测DEC1过表达对细胞的增殖和侵袭能力的影响。结果:与vector组相比,DEC1组中DEC1的表达明显增高(P0.01);cyclin D1和MMP9的表达明显降低(P0.05);细胞增殖与侵袭能力明显受到抑制(P0.01)。结论:过表达DEC1可明显抑制ECA109细胞的增殖和侵袭能力,DEC1可能通过影响MMP9和cyclin D1参与其中。     

STAT3短发夹RNA表达载体的构建及对SiHa细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(shRNA)真核表达载体对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用.方法:根据siRNA设计原则, 结合pSilencer2.1-U6-neo质粒特点, 针对STAT3基因设计并合成两条寡聚DNA片段, 退火后克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒, 脂质体法将重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞.RT-PCR和Western blot检测SiHa细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达水平;MTT法和流式细胞术(FCM)检测细胞的增殖和凋亡.结果:成功构建了STAT3基因shRNA真核表达载体, 转染人宫颈癌SiHa细胞.细胞STAT3蛋白及mRNA表达下降;同时SiHa细胞增殖能力下降, 细胞凋亡增加.结论:构建的STAT3基因shRNA真核表达载体能够通过下调STAT3基因表达, 抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖能力, 诱导细胞凋亡.     

高迁移率族蛋白B1促进结肠癌细胞增殖、迁移与侵袭的机制探讨

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在结肠癌细胞中的表达和对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qPCR与Western blot法检测人结肠癌SW620细胞与正常结肠上皮细胞FHC中HMGB1的mRNA和蛋白表达。通过Lipofectamine 3000转染质粒构建稳定下调HMGB1表达(shHMGB1)的SW620细胞,同时设置阴性对照(shNC)细胞和空白对照(blank)细胞;采用CCK-8、平板集落形成实验和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用Western blot检测HMGB1表达下调对p-ERK、ERK、c-Myc、基质金属蛋白酶(MMP)-2/9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平的影响。结果:SW620细胞中HMGB1在mRNA及蛋白水平表达均高于正常结肠上皮细胞FHC(P0.05)。经qPCR与Western blot验证,HMGB1低表达细胞构建成功。与blank组和shNC组相比,shHMGB1组细胞增殖、迁移和侵袭能力受到显著抑制(P0.01)。Western blot结果表明,同blank组和shNC组比较,shHMGB1组细胞的MMP-2、MMP-9、N-cadherin、c-Myc、Bcl-2及ERK磷酸化蛋白表达显著下调,Bax蛋白表达显著上调(P0.05)。结论:HMGB1可促进结肠癌SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力,ERK/c-Myc信号通路参与了这一过程。     

利多卡因通过LncRNA H19/miR-671-5p分子轴调控胃癌细胞增殖、迁移及侵袭北大核心CSCD

目的:探讨利多卡因对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其对LncRNA H19/miR-671-5p的调控机制。方法:体外培养胃癌细胞AGS,使用不同浓度的利多卡因处理细胞;MTT检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;qRT-PCR检测H19及miR-671-5p的表达量;双荧光素酶报告实验验证H19与miR-671-5p的靶向关系;将pcDNA-H19及其阴性对照pcDNA转染至AGS细胞,使用利多卡因处理细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;Western blot检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量。结果:与Con组相比,利多卡因不同剂量可明显降低细胞活力和Ki-67、PCNA、N-cadherin蛋白水平及H19的表达量(P<0.05),并可减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05),提高E-cadherin蛋白水平及miR-671-5p的表达量(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实H19可靶向结合miR-671-5p;H19过表达可明显逆转利多卡因对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:利多卡因可能通过抑制H19表达及促进miR-671-5p表达从而抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

lncRNA PSMA3-AS1 靶向 miR-3619-5p 调控宫颈癌 SiHa 细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

目的 探讨 lncRNA PSMA3-AS1 调控宫颈癌细胞增殖、 迁移及侵袭的分子机制。 方法 收集 2020 年 3 月至 2021 年 6 月西安医学院第二附属医院收治的 42 例宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织标本, 采用 qRT-PCR 法检测宫颈癌组织、 癌旁组织、 人宫颈上皮永生化细胞 H8、 与人宫颈癌细胞系 SiHa、 HeLa、 Caski 中 lncRNA PSMA3-AS1、 miR-3619-5p 的表达量; 以 SiHa 细胞为研究对象, 分组为: si-NC 组、 si-lncRNA PSMA3-AS1 组、 miR-NC 组、 miR-3619-5p 组、 anti-miR-NC + si-lncRNA PSMA3-AS1 组、 anti-miR-3619-5p + si-lncRNA PSMA3-AS1 组; MTT 法与 Transwells 实验分别检测每组 SiHa 细胞的增殖活力、 迁移及侵袭能力; 双 荧光素酶报告实验检测 miR-3619-5p 过表达对野生型载体 lncRNA PSMA3-AS1-WT、 突变型载体 lncRNA PSMA3-AS1-MUT 荧光素酶活性的影响; Western 印迹检测 MMP2、 MMP9 蛋白表达量。 结果 宫颈癌组织中 lncRNA PSMA3-AS1 的表达量比癌旁组织增加 ( P < 0. 01), miR-3619-5p 的表达量比癌旁组织减少 ( P < 0. 01); 与 H8 细胞比较, SiHa、 HeLa、 Caski 细胞中 lncRNA PSMA3-AS1 的表达量升高 (P< 0. 01), miR-3619-5p 的表达量降低 (P< 0. 01); 与 si-NC 组比较, si-lncRNA PSMA3-AS1 组细胞活力和 MMP2、 MMP9 蛋 白水平降低 (P< 0. 05), 迁移及侵袭细胞数减少 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, miR-3619-5p 组细胞活力 和 MMP2、 MMP9 蛋白水平降低 (P< 0. 01), 迁移及侵袭细胞数减少 (P< 0. 05); miR-3619-5p 过表达可抑 制 lncRNA PSMA3-AS1-WT 的荧光素酶活性 (P< 0. 01), 而未能影响 lncRNA PSMA3-AS1-MUT 的荧光素酶活 性; 与 anti-miR-NC + si-lncRNA PSMA3-AS1 组比较, anti-miR-3619-5p + si-lncRNA PSMA3-AS1 组细胞活力和 MMP2、 MMP9 蛋白水平升高 (P< 0. 01), 迁移及侵袭细胞数增多 (P< 0. 01)。 结论 干扰 lncRNA PSMA3- AS1 表达可通过促进 miR-3619-5p 而降低宫颈癌细胞增殖、 迁移及侵袭能力。     

下调MARCH8基因的表达对宫颈癌Siha细胞侵袭、迁移与增殖的影响

目的：研究下调MARCH8基因表达对人宫颈癌Siha细胞侵袭、迁移、增殖以及克隆的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：构建特异性针对MARCH8基因的siRNA片段,并将其通过脂质体介导转染至宫颈癌Siha细胞,同时设立转染无义序列的阴性对照组。分别采用Real-time PCR法与蛋白质印迹法检测转染后,细胞中MARCH8在mRNA和蛋白水平上的表达改变。通过Transwell小室实验、划痕实验检测MARCH8表达下调对细胞侵袭、迁移能力的影响,通过CCK-8法、细胞平板克隆实验检测MARCH8表达下调对细胞增殖、克隆形成能力的影响,并采用蛋白质印迹法检测MARCH8基因表达下调对基质金属蛋白酶9（MMP9）,波形蛋白（Vimentin）以及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的影响。最后采用蛋白质印迹法检测MARCH8基因表达下调,对Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin以及E钙黏蛋白（E-cadherin）表达的影响。结果：与转入siRNA-NC组相比,转入siRNA-MARCH8组细胞MARCH8在 mRNA和蛋白表达水平上均明显降低,细胞的侵袭、迁移以及增殖和克隆形成能力明显被抑制（P<0.05）,且侵袭标记蛋白MMP9,Vimentin以及增殖标记蛋白PCNA的表达也明显下降。MARCH8基因表达成功下调后,转入siRNA-MARCH8组细胞中β-catenin蛋白的表达水平较阴性对照组明显下降（P<0.05）,而E-cadherin蛋白的表达水平明显升高（P<0.05）。结论：下调MARCH8基因的表达可以抑制宫颈癌Siha细胞的侵袭、迁移、增殖和克隆能力,其机制可能与Wnt/β-catenin通路的抑制有关。     

敲除EZH2抑制人宫颈癌细胞系迁移和侵袭

目的 研究zeste基因同源蛋白2(EZH2)对人宫颈癌细胞系迁移和侵袭的影响,并初步探讨其作用机制.方法 利用CRISPR/Cas9敲除人宫颈癌HeLa和人子宫颈鳞癌SiHa细胞系中EZH2的表达.划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞体外迁移和侵袭;实时荧光定量PCR检测STAT3 mRNA水平;W...     

miR-196a通过靶向NR6A1降低宫颈癌Hela细胞生存和运动能力

目的探究微小型RNA-196a(miR-196a)对宫颈癌Hela细胞生存和运动能力的影响和作用机制。方法RT-PCR检测正常宫颈上皮HcerEpic细胞和宫颈癌Hela细胞、CaSki细胞中miR-196a和核受体NR6A1的mRNA水平;阴性对照miR-NC和miR-196a inhibitor转染Hela细胞,分别记为NC组和miR-196a inhibitor组,免疫印迹检测NR6A1蛋白的表达,生物信息学和荧光素酶报告实验分析和验证miR-196a和NR6A1的靶向调控关系;阴性对照质粒pcDNA和过表达质粒pcDNA-NR6A1转染Hela细胞,分别记为pcDNA组和pcDNA-NR6A1组,免疫印迹检测NR6A1蛋白表达;将miR-196a inhibitor和pcDNA-NR6A1单独或联合转染Hela细胞,分别记为miR-196a inhibitor组、pcDNA-NR6A1组和inhibitor+NR6A1组,CCK8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫印迹检测Ki-67、Caspase-3、VEGF和MMP-9的表达。结果与HcerEpic细胞比较,Hela细胞和CaSki细胞中miR-196a和NR6A1 mRNA表达水平均较高(P<0.01),Hela细胞中miR-196a和NR6A1 mRNA表达变化最为显著(P<0.05);miR-196a inhibitor组Hela细胞中NR6A1蛋白表达显著降低(P<0.01),pcDNA-NR6A1组NR6A1的蛋白表达显著升高(P<0.01);miR-196a inhibitor能显著降低Hela细胞增殖倍数和Ki-67表达水平(P<0.05),同时还能提高Hela细胞凋亡率和Caspase-3表达(P<0.01);此外,miR-196a inhibitor还能减少侵袭细胞数,降低Hela细胞划痕闭合率并抑制VEGF和MMP-9的表达(P<0.01);NR6A1能显著减弱miR-196a inhibitor对Hela细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及对Ki-67、Casapse-3、VEGF和MMP-9表达的调控作用(P<0.01)。结论miR-196a inhibitor能通过靶向抑制NR6A1表达降低宫颈癌Hela细胞的生存和运动能力。     

罗哌卡因抑制人肝癌细胞系Hep3B增殖、迁移和侵袭

目的 研究罗哌卡因对人肝癌细胞系Hep3B生物学行为的影响,并探讨其分子机制.方法 设置对照组、罗哌卡因组、si-NC组、si-LINC00853组、pcDNA-NC组、pcDNA-LINC00853组、(罗哌卡因+pcDNA-NC)组、(罗哌卡因+pcDNA-LINC00853)组.采用细胞计数试剂盒(CCK-8法)...     

干扰ADAM17抑制人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖

目的 探讨干扰去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖的影响,并对其作用机制进行初步探索.方法 在HeLa细胞中转染ADAM17干扰质粒,荧光定量PCR和Western blot验证转染效率;CCK-8法检测细胞增殖,划痕实验和Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭;Western ...     

siRNA介导的nestin基因沉默对人食管癌ECA109细胞侵袭和迁移的影响及机制

目的:探讨巢蛋白(nestin)对食管鳞癌ECA109细胞的侵袭与迁移能力的影响及可能的分子机制。方法:通过靶向沉默食管癌ECA109细胞内源性nestin基因后,采用real-time PCR和Western blot分别检测nestin基因的干扰效率及细胞内MMP2、MMP9、VEGF及β-catenin的表达水平;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果:与control-siRNA组相比,nestin-siRNA组中nestin mRNA和蛋白水平明显降低;细胞侵袭迁移能力受到明显抑制;MMP2,MMP9及VEGF表达明显降低;细胞总β-catenin及核内β-catenin表达明显减少。结论:Nestin与食管癌侵袭迁移能力密切相关,下调nestin表达可明显抑制食管癌细胞ECA109的侵袭迁移能力,其机制可能与抑制β-catenin的核内转移与下调MMP2、MMP9及VEGF的表达有关。     

AEG-1表达下调对人宫颈癌细胞细胞周期和侵袭能力的影响及其机制

 目的：研究星形细胞上调基因1（astrocyte elevated gene-1,AEG-1）在人宫颈鳞癌细胞和组织中的表达,探讨AEG-1表达下调对宫颈癌SiHa细胞细胞周期和侵袭能力的影响,并分析其可能的分子机制。方法：采用Western blotting检测正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织、HeLa、SiHa和CaSki细胞中AEG-1蛋白的表达。将对照siRNA和AEG-1 siRNA分别转染SiHa细胞,利用Western blotting检测SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达,采用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,采用Boyden小室检测细胞侵袭能力的变化,最后采用Western blotting检测cyclin D1、细胞周期素依赖性激酶 2（CDK2）和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的变化。结果：宫颈鳞癌组织中AEG-1蛋白表达显著高于正常宫颈组织（P<0.05）,同时3株宫颈癌细胞中AEG-1蛋白表达均显著高于正常宫颈组织,其中SiHa细胞中AEG-1蛋白表达最高（P<0.05）。此外,AEG-1 siRNA能显著下调SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达（P<0.05）,其表达下调能明显促使SiHa细胞在G0/G1期的比例增加和降低其侵袭能力。Western blotting结果表明,AEG-1 siRNA组中cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白的表达均显著低于未处理组和对照siRNA组（P<0.05）。结论：AEG-1在宫颈癌中的高表达可能与宫颈癌的发生发展密切相关,其表达下调介导的细胞周期静止和侵袭能力降低可能与cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白表达下调密切相关。     

过表达BMP9对人肺鳞状细胞癌细胞NCI-H520迁移和侵袭的影响

目的:探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)对人肺鳞状细胞癌细胞NCIH520迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用RT-PCR和Western blot法分别检测NCI-H520细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中BMP9的mRNA和蛋白表达水平;用Ad BMP9感染NCI-H520细胞,RT-PCR和Western blot法验证BMP9的变化;应用划痕愈合实验检测各组细胞的迁移能力,Transwell小室检测迁移和侵袭能力,并用RTPCR和Western blot法检测迁移相关因子基质金属蛋白酶2(MMP2)的mRNA和蛋白水平。Western blot法检测BMP-Smad经典通路中Smad1/5的磷酸化水平(p-Smad1/5)。用BMP特异性拮抗剂Ad Noggin与Ad BMP9共处理NCI-H520细胞,检测p-Smad1/5及细胞迁移能力的变化。结果:BMP9在NCI-H520细胞中的mRNA和蛋白水平均比在HBE细胞中低;Ad BMP9感染的NCI-H520细胞中BMP9的mRNA和蛋白水平均明显升高,细胞迁移和侵袭能力均明显下降,MMP2的mRNA和蛋白水平下降,且p-Smad1/5的表达水平明显上调。在NCI-H520细胞中,Noggin能有效逆转BMP9导致的p-Smad1/5升高和细胞迁移抑制能力。结论:外源性BMP9转入肺鳞癌细胞NCI-H520可明显抑制其迁移侵袭的能力,该抑制作用可能与BMP-Smad信号通路的激活有关。     

Cripto-1基因沉默对人肝癌MHCC-97H细胞侵袭、迁移能力的影响

 目的: 探讨Cripto-1蛋白在人肝癌组织和肝癌细胞系中的表达,研究沉默Cripto-1基因后对肝癌细胞MHCC-97H侵袭和迁移能力的影响及可能的机制。方法: 采用Western blot检测11对肝癌组织及相应的癌旁组织和不同肝癌细胞株中Cripto-1蛋白的表达;收集80例肝癌石蜡标本,免疫组织化学方法检测Cripto-1蛋白的表达情况;Cripto-1 siRNA转染肝癌细胞MHCC-97H细胞后,real-time PCR和Western blot分别检测转染效率;Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot分别检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达。结果: Western blot检测结果显示肝癌组织中Cripto-1蛋白的表达明显高于对应的癌旁组织,Cripto-1蛋白在各肝癌细胞系中均有表达,且表达量高于对照细胞,其中高侵袭性肝癌细胞MHCC-97H表达量最高;免疫组织化学结果显示Cripto-1蛋白在88.7%的肝癌组织中表达;Cripto-1 siRNA转染MHCC-97H细胞后能显著降低Cripto-1 mRNA和蛋白的表达水平,并且能降低其侵袭和迁移能力;Western blot结果表明,Cripto-1基因沉默后能抑制MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论: Cripto-1在肝细胞癌中的高表达可能与肝癌的发生发展密切相关,下调Cripto-1的表达可以抑制肝癌细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9的表达有关。