GSTP1基因在急性低压低氧大鼠模型肺组织中的定量检测

通过模拟低压低氧(7000±50 m)考察谷胱苷肽转移酶p1基因(G lu tath ione S-transferase p1,G STP 1)对低压低氧的敏感性,以探讨G STP 1在机体适应急性低压低氧环境中的分子机制。30只雄性SD大鼠随机分为5组:0、1、3、5、7 d组,每天在模拟7000±50 m高度的低压低氧舱内暴露12 h,连续暴露6 h后,休息1 h,再继续暴露6h。采用荧光定量-反转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)技术对急性低压低氧大鼠模型肺组织中G STP 1基因表达进行定量分析,同时用分光光度法测定了肺组织中谷胱苷肽转移酶(g lu tath ione S-transferases,G ST s)的活性和丙二醛(M a le ic d ia ldehyde,M DA)的变化。结果显示,与未暴露组相比,G STP 1基因从第1 d到第7 d的表达有显著性差异(P<0.05);G ST s活性从第1 d到第7 d呈下降趋势,M DA呈上升趋势,与未暴露组相比,均有显著性差异(P<0.05)。结果表明:G STP 1基因对低压低氧敏感,并可考虑作为机体适应特殊环境进行基因选材的一个新指标。     

通心络对低压低氧性肺动脉高压大鼠HIF-1α及相关因子的作用

目的:探讨通心络对低压低氧性肺动脉高压大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及相关因子的影响。方法:30只体重200-250g的SD雄性大鼠,随机分为常压常氧对照组(对照组)、低压低氧模型组(模型组)、低压低氧+通心络干预组(通心络干预组),每组10只。采用低压低氧舱模拟海拔5 000m的高原环境(大气压50kp,氧浓度10%)。模型组和通心络干预组大鼠每日入舱8h,其余时间为常压常氧环境。通心络干预组每天入舱前给予通心络1.2g生药/kg灌胃1次,对照组于同一实验室的常压常氧环境中饲养。4周后比较各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室(RV)肥厚指数以及血清HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素-1(ET-1)等因子水平。结果:4周后,与对照组相比,模型组大鼠mPAP、RV肥厚指数及HIF-1α、VEGF、ET-1等因子水平显著升高(P0.05)。与模型组相比,通心络干预组大鼠mPAP、RV肥厚指数及血清HIF-1α、VEGF、ET-1等因子水平均显著降低(P0.05),且RV肥厚指数及血清HIF-1α、ET-1水平与对照组水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:通心络可能通过降低HIF-1α水平等干预低压低氧性肺动脉高压的发生发展。     

慢性间歇性低氧对大鼠肾脏氧化应激损伤及HIF-1α表达的影响

目的:观察慢性间歇性低氧(CIH)大鼠肾组织形态学及其氧化应激相关指标变化,探讨CIH的肾损害机制。方法:将40只SD大鼠随机分为4组,CIH组2周和4周组(2IH和4IH)以及对照组2周和4周组(2C和4C),每组10只,采用化学比色法检测血清SOD活性,肾脏称重计算肾体比,HE染色、PAS染色和Masson染色法观察肾组织病理结构变化,real-time PCR法检测肾组织HIF-1α、Cu/Zn SOD和Mn SOD mRNA的表达变化。结果:(1)各组大鼠平均肾重、体重和肾体比差异无统计学意义(均P0.05);IH组大鼠肾组织存在病理损害,HE和PAS染色示肾小球系膜和基底膜轻度增生,肾小管上皮水肿,4周组损害较明显;Masson染色IH和对照组均未见纤维化改变。(2)化学比色法示IH组血清SOD活性低于相应对照组(均P0.05),4IH组下降更明显(P0.05)。Cu/Zn SOD和Mn SOD mRNA组间比较差异有统计学意义(均P0.05);Cu/Zn SOD mRNA表现为IH组低于相应对照组(均P0.05),4IH组与2IH组比较差异无统计学意义;Mn SOD mRNA的表达4IH组较4C组下调,差异有统计学意义(P0.05),4IH组明显高于2IH组(P0.05),2IH和2C组比较差异无统计学意义(P0.05)。IH组肾组织HIF-1α的mRNA表达均高于相应对照组(均P0.05),4IH组高于2IH组(P0.05)。结论:CIH可诱导大鼠肾小球、小管结构异常,但4周CIH尚未引起肾组织纤维化改变。CIH可通过上调HIF-1αmRNA和下调Cu/Zn SOD、Mn SOD mRNA的表达,参与氧化应激损伤过程。     

胍丁胺减轻大鼠低压低氧性肺动脉高压

低压低氧可诱导肺动脉高压等并发疾病.低氧可刺激肺小血管平滑肌增殖,致肺小血管官腔变窄.胍丁胺是L-精氨酸在精氨酸脱羧酶作用下的产物,广泛分布于哺乳动物体内,可抑制多种细胞的增殖.本研究胍丁胺对对低压低氧环境所形成肺动脉高压的干预产生的影响.     

内皮素-1对COPD炎症和氧化应激反应的影响

目的:研究内皮素-1对慢性阻塞性肺疾病(COPD)炎症和氧化应激反应的影响。方法:收集健康不吸烟者(30例)、健康吸烟者(30例)和COPD患者(29例)并诱导其产生痰液,检测内皮素-1在诱导痰中的浓度。采用香烟烟雾提取物刺激SD大鼠,构建肺气肿模型,采用内皮素A受体拮抗剂BQ123和非选择性内皮素受体拮抗剂波生坦进行干预,实验分为对照组、香烟烟雾干预组、选择性内皮素受体拮抗组和非选择性内皮素受体拮抗组。采用Western blot法测定肺组织中cleaved caspase-3的蛋白水平;明胶酶谱法检测肺组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性;ELISA法检测肺组织上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的浓度;采用生物抗氧化能力(BAP)检测试剂盒检测血清中BAP。结果:内皮素-1在健康吸烟者和COPD患者诱导痰中的浓度显著高于健康不吸烟者(P0.05);COPD患者诱导痰中内皮素-1的浓度高于健康吸烟者(P0.05)。香烟烟雾干预组肺组织中cleaved caspase-3蛋白水平、MMP-2和MMP-9的活性及上清液中TNF-α和IL-1β的含量显著高于对照组(P0.05);内皮素A受体拮抗剂能显著抑制肺组织中cleaved caspase-3蛋白水平、MMP-2和MMP-9的活性及上清液中TNF-α和IL-1β的含量(P0.05)。香烟烟雾干预组血清中的BAP较对照组显著降低(P0.05);内皮素A受体拮抗剂能显著增加血清中的BAP(P0.05)。结论:内皮素-1可能通过调节细胞凋亡、基质金属蛋白酶活性、炎症以及氧化应激反应在COPD发生发展中发挥重要作用。     

慢性缺氧对大鼠肺内细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的：探讨慢性缺氧性肺动脉高压肺血管结构改建（ｐｕｌｍｏｎａｒｙｖａｓｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ，ＰＶＳＲ）的细胞及分子机制。方法：大鼠慢性缺氧模型复制，免疫组化及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测大鼠肺内ｃ－ｍｙｃ及ｂｃｌ－２两基因蛋白及ｍＲＮＡ的表达，免疫组化及原位缺口末端标记法检测大鼠肺内增殖相关抗原Ｋｉ－６７及凋亡细胞。结果：正常及慢性缺氧大鼠肺内均检出一定比率的增殖或凋亡细胞，缺氧１、２周大鼠肺内细胞增殖／凋亡比值比对照组分别增高约３、３５倍。与细胞增殖、凋亡密切相关的ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达在缺氧１周大鼠肺内显著增高，在缺氧２周更显著。结论：细胞增殖、凋亡机制共同参与了慢性缺氧性肺动脉高压时ＰＶＳＲ的调节。     

慢性肺动脉高压大鼠肺小动脉内HIF-1α的表达增强并与NO有关

慢性低氧引起肺血管收缩、肺血管重建而致肺血管阻力持续升高,最终可导致肺动脉高压和右心室肥大,其发病机制至今尚不十分清楚。低氧诱导因子-1α(H IF-1α)作为一种转录因子,是一种重要的肺动脉对低氧反应的中介物。本实验采用慢性低氧伴高二氧化碳性肺动脉高压大鼠模型,观察H     

siRNA沉默HIF-1α对大鼠心肌细胞CT-1表达的影响

目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1 α)在心肌细胞适应低氧环境中作用机制.方法 合成针对HIF-1α的siRNA片段,转染大鼠心肌细胞系H9C2.Real-time PCR检测HIF-1α和心肌营养素(CT-1) mRNA水平,Westernblot检测HIF-1α和CT-1蛋白水平.结果 低氧环境下,转染针对HIF-1α siRNA片段后HIF-1α mRNA水平、HIF-1 α蛋白质水平、CT-1 mRNA水平和蛋白水平均明显减低(P＜0.05).不进行转染时,CT-1 mRNA水平、HIF-1α蛋白和CT-1蛋白水平在低氧下比常氧下明显增高(P＜0.05).CT-1蛋白由对照组的0.34 ±0.05增至0.55 ±0.05(P＜0.05).结论 低氧情况下CT-1基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在心肌细胞适应低氧环境中具有重要作用.     

低压低氧对SD大鼠肺动脉压及肺组织OPN表达的影响

<正>目的:观察低氧对大鼠肺动脉压及肺组织骨桥蛋白(OPN)表达的变化,探讨OPN在肺动脉高压发病中的作用。方法:将30只SD大鼠随机分成5组:常氧组以及低氧(低压氧舱,5 000 m海拔)1 d组、7 d组、14 d组和21 d组,测定平均肺动脉压(m PAP)和右心室肥厚指数[RV/(LV+S)];Western blot法检测肺组织中OPN表达。结果:低氧各组动物m PAP均高于常氧     

瘦素对矽肺大鼠肺组织纤维化的影响及与HIF-1α的相关性分析

目的观察瘦素(LP)在矽肺模型大鼠肺组织的表达和对肺组织纤维化的影响以及与低氧诱导因子1α(HIF-1α)的相关性。方法 120只SD大鼠随机分为正常对照组、矽肺模型组、LP干预组(根据LP浓度分为LP5干预组、LP10干预组、LP20干预组)。对照组大鼠气管内灌注1 mL生理盐水,其余各组大鼠气管内灌注1 mL SiO2混悬液(40 mg/mL),从造模后1 d开始,LP5、LP10及LP20干预组分别给予5 ng/kg·d、10 ng/kg·d、20 ng/kg·d LP腹腔注射,第7天、14天、21天、28天各组分别处死6只大鼠。采用ELISA检测4个时间点各组大鼠肺组织LP的表达以及第28天羟脯氨酸含量。应用Western blot法测定矽肺模型组大鼠肺组织LP及HIF-1α蛋白表达。结果相同时期各组肺组织LP表达差异均有统计学意义(P0.05),矽肺模型组显著高于正常对照组,3个不同浓度LP干预组均高于矽肺模型组(P0.05)。第28天羟脯氨酸含量在正常对照组、矽肺模型组、LP5干预组、LP10干预组、LP20干预组分别为(0.89±0.16)mg/g、(3.14±0.40)mg/g、(3.78±0.27)mg/g、(4.35±0.13)mg/g、(4.87±0.16)mg/g,矽肺模型组LP表达较正常对照组明显增加(P0.05),LP干预组LP表达均显著高于矽肺模型组(P0.05)。各时间点模型组HIF-1α与LP的表达均呈正相关(r=0.88,0.79,0.86,0.85,P0.05)。结论 LP在矽肺模型大鼠肺组织表达增加,增加外源性LP,能增加矽肺大鼠肺组织胶原蛋白沉积,且LP与HIF-1α蛋白表达呈正相关。     

门冬氨酸钾镁对低氧性肺动脉高压大鼠肺组织血栓素A2、前列环素及肺腺泡内动脉结构的影响

慢性低氧性肺动脉高压(HPH)的形成与腺泡内肺小动脉内皮增生、肥厚及无肌型动脉向肌型动脉转化有关[1]。血栓素A2(TXA2)、前列环素(PGI2)之间存在相互调控关系,对HPH起着重要的作用。门冬氨酸钾镁是门冬氨酸钾盐与镁盐的等量混合物,目前临床上广泛应用于治疗心血管疾病。本实验建立慢性HPH大鼠模型,旨在观察门冬氨酸钾镁对低氧性肺血管结构重建(HPVR)及肺组织TXA2、PGI2含量的影响,探讨低氧性肺血管结构重建的机制及防治作用。材料与方法1雄性Wistar大鼠21只,体质量210～310g,随机分对照组,低氧组[大鼠置在常压低氧舱内,氧浓度在…     

辛伐他汀对大鼠心肌组织中低氧诱导因子1α表达的影响

目的：了解他汀类降脂药对低氧诱导因子1α（HIF1α）表达的影响,探讨其除降脂以外的抗心肌缺血作用机制。方法：将大鼠随机分为对照组、辛伐他汀组、心肌缺血组和辛伐他汀＋心肌缺血组。给辛伐他汀药4周后心肌缺血组和辛伐他汀＋心肌缺血组通过结扎冠状动脉左前降支致大鼠急性心肌缺血。分别用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和Western blotting法及免疫组化法检测各组心肌组织中HIF1α mRNA 和蛋白的表达。结果：辛伐他汀和心肌缺血组均能使HIF1α表达明显高于对照组(P<0.01)，心肌缺血前辛伐他汀预处理可使HIF1α表达进一步增高(P<0.01)。结论：辛伐他汀可能是通过上调HIF1α表达促进新生血管形成，治疗心肌缺血。     

肝肺综合征大鼠血浆和肺组织ET-1的动态变化及其基因表达

目的 :探讨ET 1在肝肺综合征 (HPS)发生机制中的作用。方法 :采用Wistar大鼠行胆总管结扎术 (CBDL)制备HPS动物模型 ,抽取动脉血进行血气分析 ,使用放射免疫方法检测血浆和肺组织中ET 1水平 ,采用RT PCR方法检测肺组织中ET 1前体原 (ppET 1)mRNA的表达。结果 :CBDL组大鼠血浆和肺组织ET 1含量随时间延长而逐渐升高 ,CBDL各组血浆ET 1水平与假手术组 (Sham组 )比较差异有显著意义 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;CBDL5周组肺组织ET 1含量及肺组织ET 1前体原 ( ppET 1)mRNA与Sham组比较差异有显著意义 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;相关分析表明 ,血浆和肺组织中ET 1与肺泡动脉氧分压差A aDO2 显著相关 (P <0 .0 1)。结论 :在HPS形成过程中 ,血浆和肺组织中ET -1水平升高参与了HPS的发生     

肺癌组织中血管生成拟态和HIF-1α的表达及意义

目的 探讨血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)和低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在肺癌中的表达及意义.方法 收集64例人肺癌石蜡包埋样本,进行PAS及CD34免疫组化双重染色,检测肺癌中是否存在VM;采用免疫组化SP法检测HIF-1α蛋白在肺癌组织中的表达特点.结果 肺癌中VM和HIF-1α表达阳性率分别为37.50%(24/64)、57.81%(37/64),显著高于癌旁正常肺组织(0/15)(P<0.05).VM在低分化肺癌组(56.67%)高于高-中分化肺癌组(20.59%),与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05).HIF-1α的表达也与淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05);VM与HIF-1α的表达呈正相关(r=0.335,P<0.05).结论肺癌中存在VM,HIF-1α高表达可能促进VM.VM与HIF-1α高表达可能是肺癌浸润、转移重要生物学标志.VM与HIF-1α联合检测对肺癌的进展及预后判断有重要意义.     

肺癌组织中E-cadherin、HIF-1α蛋白表达及意义

目的 研究肺癌组织中E-cad、HIF-1α蛋白的表达.方法 应用免疫组织化学SP法检测99例肺癌组织中E-cad和HIF-1α蛋白表达状况.结果 E-cad和HIF-1α蛋白在99例肺癌中的总阳性率分别为63.6%和56.6%.E-cad蛋白在细支气管肺泡癌组的表达显著高于小细胞癌组,HIF-1α蛋白的表达低于小细胞癌组(P均<0.05).E-cad蛋白在淋巴结无转移组的表达显著高于淋巴结转移组(P<0.05),HIF-1α蛋白在两组间的表达差异无显著性(P>0.05).E-cad蛋白在Ⅰ~Ⅱ期肺癌组表达高于Ⅲ~Ⅳ期肺癌组(P<0.01),HIF-1α蛋白的表达低于Ⅲ~Ⅳ期肺癌组(P<0.05).E-cad蛋白表达与HIF-1α蛋白表达呈负相关(P<0.05).结论 肺癌组织中E-cad和HIF-1α蛋白表达可能与肿瘤侵袭性有关.     

慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶9及组织金属蛋白酶抑制剂1与固本颗粒胶囊

背景:中医药防治慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)的有效性和安全性已初步得到临床认证。 目的：观察COPD模型大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9及其特异性抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1表达与固本颗粒胶囊干预的影响。 方法：将50只Wistar大鼠随机等分为5组,除正常组外,其余大鼠均以烟熏及气管内滴注脂多糖的方式建立COPD模型。造模   29 d,泼尼松组、固本颗粒胶囊低、高剂量组分别灌胃给予醋酸泼尼松            1.04 mg/(kg•d),固本颗粒胶囊0.47,0.94 g/(kg•d),1次/d,观察记录大鼠的一般状况。免疫组织化学方法检测大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9及组织金属蛋白酶抑制剂1的表达。 结果与结论：COPD大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9及组织金属蛋白酶抑制剂1的表达显著增强(P < 0.05)。药物干预后,COPD大鼠的一般状况明显改善,肺组织中基质金属蛋白酶9及组织金属蛋白酶抑制剂1的表达有所降低;其中,醋酸泼尼松的作用最为显著,固本颗粒高剂量次之,低剂量最弱。说明固本颗粒胶囊能以剂量依赖的方式缓解COPD大鼠的临床表现,改善气道重塑,纠正COPD大鼠体内蛋白酶和抗蛋白酶失衡。     

间断性低氧暴露对红细胞参数及血清HIF-1α、EPO的影响

目的:探讨间断性低氧暴露及复氧休息对红细胞参数及血清低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、促红细胞生成素(EPO)的影响.方法:制备间断性低氧动物模型,检测全血RBC、Hb、HCT红细胞参数,采用ELISA法检测血清HIF-1α、EPO水平,结合现场调查,检测间断性高原作业人员红细胞参数及EPO水平.结果:IH7、14、21、28 d组大鼠RBC、Hb、HCT水平明显高于常氧对照组(P<0.05),复氧后各参数水平下降.IH3、7、14 d组HIF-1α高于常氧对照组(P<0.05),EPO在IH3、7 d组高于对照组(P<0.05),复氧后HIF-1α、EPO水平下降.8个月组高原作业人员RBC水平高于平原对照组(P<0.05),Hb在2年组高于平原对照组(P<0.05).HCT与RBC大致呈同一规律,且2年组HCT仍明显高于平原对照组(P<0.05).与平原对照组比较,各组EPO的差异不显著.结论:间断性低氧暴露可以增加血清HIF-1α、EPO的含量,提高红细胞数量和血红蛋白的浓度,并随低氧周期的延长存在一定变化规律;复氧休息有利于低氧后机体的调整,使升高的红细胞参数及HIF-1、EPO水平下降.     

低氧微环境对小鼠皮肤成纤维细胞HIF-1、Oct4、Uhrf1表达的影响

目的探讨低氧条件下小鼠皮肤成纤维细胞内低氧调节关键转录因子HIF-1、多潜能转录因子Oct4及表观遗传调控因子Uhrf1的表达,为低氧微环境影响细胞重编程效率的机制研究奠定基础。方法将体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞分为低氧(2%O_2+5%CO_2+93%N_2)6h、12h、24h、48h组和常氧(20%O_2+5%CO_2)对照组。用免疫荧光化学方法和RT-PCR检测小鼠皮肤成纤维细胞中HIF-1,Oct4和Uhrf1的表达,在蛋白和m RNA水平对其进行分析。结果成纤维细胞内HIF-1、Oct4、Uhrf1蛋白的阳性表达率随着低氧时间的延长逐渐增多,常氧组均未见表达。低氧6h、12h、24h组m RNA表达量均比常氧组高,但差异不显著(>0.05);而低氧48h组三个基因m RNA表达明显高于常氧组(<0.01)。结论低氧微环境HIF-1,Oct4和Uhrf1在成纤维细胞内表达水平上调,提示它们在其中发挥了重要作用。     

应激对模拟高原低压低氧环境下大鼠海马单胺递质的影响

目的:探讨心理和生理应激对模拟高原低压低氧环境下大鼠海马单胺递质含量的影响。方法:用旁观电击的方法建立大鼠心理和生理应激模型。低氧处置为将大鼠置于模拟海拔6000m的低压舱内24小时。比较不同方式和强度的应激对低压低氧性环境下大鼠海马细胞外液中去甲肾上腺素(NE),多巴胺(DA),高香草酸(HVA)和5-羟色胺(5-HT)含量的影响。用高效液相色谱-电化学法检测其中的单胺递质的含量。结果:(1)低氧组大鼠海马细胞外液中NE含量低于正常对照组(813.8±196.1/1209.2±282.0,P<0.01);心理性(应激2次 低氧组:906.0±227.6,应激4次 低氧组:1103.7±270.6)和生理性(应激2次 低氧组990.3±93.7,应激4次 低氧组:610.8±104.1)应激 低氧组大鼠海马NE含量均高于低氧环境下(813.8±196.1)大鼠(P<0.05)。(2)低氧组大鼠海马细胞外液中5-HT含量高于正常对照组(82.7±23.4/52.3±27.9,P<0.05);生理应激2次 低氧组5-HT含量高于低氧组(134.2±51.5/82.7±23.3),生理应激4次 低氧组5-HT含量则低于低氧组(41.9±13.4/82.7±23.4,P<0.05)。结论:不同方式和强度的应激对低压低氧环境下大鼠海马单胺递质的影响存在差异。     

心理应激对模拟高原低压低氧环境下大鼠海马单胺递质的影响

目的探讨心理应激对模拟高原低压低氧环境下大鼠海马单胺递质含量的影响。方法用旁观电击的方法建立大鼠心理应激模型。低氧处置为将大鼠置于模拟海拔6000m的低压舱内24小时。观察下列心理应激对低压低氧环境下大鼠海马细胞外液中去甲肾上腺素（NE），多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）含量的影响。用高效液相色谱-电化学法检测其中的单胺递质的含量。结果①低氧能显著降低大鼠海马细胞外液中NE的含量（P〈0.01）；心理性能显著增加低氧环境下NE的含量（P〈0.01）；②低氧能显著增加大鼠海马细胞外液中5-HT的含量（P〈0.01）；心理应激不能进一步增加低氧环境下5-HT的含量。结论心理应激能影响低压低氧环境下大鼠海马单胺递质的含量。