微流芯片定量检测血清HBV DNA

目的 选择一种能进行HBV DNA准确定量的检测方法。方法 比较内对照竞争PCR-微流芯片分析法与内对照竞争PCR-微孔板杂交法及PCR-微孔板杂交法在血清HBV DNA检测上的优劣。结果 微流芯片分析的线性范围高于两种微孔板杂交．前者标本稀释试验线性相关较好，后者则寿在滞现象。结论内对照竞争PCR-微流芯片分析法检测HBV DNA特异性强灵敏度高。     

微流芯片技术在耐药株结核杆菌检测中的应用

目的：探讨微流芯片技术检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变的可行性。方法：根据rpoB基因最为常见的三种突变形式(531TCG→TTG，526CAC→TAC，516GAC→GTC)设计引物，用于微流芯片检测结核分枝杆菌利福平耐药性，同时与常规药敏试验和DNA测序结果进行比较。结果：引物比例1：5，杂交温度52℃，杂交时间10min为最佳条件。在20株常规药敏试验为利福平敏感株中，微流芯片测出2株耐药株，并经DNA测序证实；而28株药敏试验为利福平耐药株中，1株微流芯片测定为敏感株，DNA测序证实为513位CAA→CTA突变。该法与常规药敏试验和DNA测序的总符合率分别为93.8％（45/48）和97.9％（47/48）。结论：微流芯片技术快速、灵敏、准确，可用于结核分枝杆菌利福平耐药性的快速检测。     

微流控芯片技术在生物学中的应用

分析装置的集成化、自动化及微型化现已成为物质分析和临床检测的研究热点。微流控芯片（microfluidic chip）作为一种新的微型分析平台建立于20世纪90年代,它通过微细加工技术在芯片上构建由储液池、微反应室、微管道等微功能元件构成的微流路系统,加载生物样品和反应液后,在压力泵或者电场作用下形成微流路,于芯片上进行一种或连续多种的反应,达到对样品的高通量快速分析的目的。微流控分析芯片由于具有高度集成性,可在一张芯片上完成采样、稀释、加试剂、反应、分离、检测等多种功能,     

PCR-微流芯片法检测HBV感染者外周血HBV cccDNA和HBV DNA

目的：探讨HBV感染的肝病患者血中HBV cccDNA、HBV DNA的临床意义。方法：采用PCR-微流芯片法检测105例HBV感染者血清HBV DNA、HBVccc DNA、白细胞中HBV cccDNA（3例进行肝组织HBV cc-cDNA检测）,以6例非乙型肝炎患者作为对照。结果：6例非乙型肝炎患者HBVM、HBV DNA、HBV cccDNA均阴性;HBV感染者中41.9%（44/105）白细胞HBVccc DNA阳性,其中2例阳性PCR产物经基因测序得到验证;HBVDNA≥105copy/ml中HBV cccDNA阳性率57.4%（35/61）显著高于HBV DNA〈105copy/ml者20.5%（9/44,P〈0.01）;18.9%HB VDNA〈103copy/mlHBV感染者HBV cccDNA阳性;抗病毒治疗的慢性肝病患者HBV cccDNA阳性率显著低于未抗病毒治疗者（5/25 VS 34/65,P〈0.01）。结论：HBV感染的患者外周血中存在HBV cccDNA;HBV DNA高浓度者HBV cccDNA检出率高;外周血白细胞HBV cccDNA、血清HBVDNA联合检测更能准确判断抗病毒治疗效果及提高HBV复制检出率。     

PCR-微流芯片在血液HBV DNA HCV/HIV RNA筛查中的初步应用

目的探讨在血液筛查中应用PCR-微流芯片技术检测献血者HBV DNA,HCV/HIV RNA的模式及可行性。方法在常规ELISA初、复检全项测定合格基础上,将献血者的血清按5人份×200μL进行汇集,用大容量磁珠法提取样本核酸,PCR-微流芯片检测技术进行扩增和检测。将国家标准质控血清进行系列稀释考评方法的灵敏度和重复性。结果342份(69个汇集池)无偿献血标本中有3份HBsAg(-)HBV DNA( ),HBV DNA阳性率为0.89%,其中1份标本两对半结果全阴性,2份标本抗-HBs( )及抗-HBc( )。PCR-微流芯片法检测HBV DNA、HCV RNA及HIV RNA的95%的灵敏度分别为11.5IU/mL、167.7拷贝/mL和57.9IU/mL结论PCR-微流芯片法具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好特点,可应用于血液HBV DNA HCV/HIV RNA的筛查工作,以进一步提高输血的安全性。     

SPR-微流控芯片技术在医学研究中的应用

SPR-微流控芯片技术已经成为21世纪最为重要的前沿技术之一,现已广泛应用于生物医学领域。对比传统的研究方法,微流控技术具有微量、快速、自动、可控的特点;SPR技术具有非标记、灵敏、实时、定量检测的特点。它们相结合将具有高灵敏度、高通量、非标记、样品和试剂耗量小等优点,它们的综合应用将会改变现代生物医学研究的格局。SPR-微流控芯片在医学方面的研究取得巨大成就,本文将在细胞、基因、蛋白质、小分子与小离子检测等方面进行综述。     

基因芯片法检测HBV多位点变异和基因分型的临床价值

目的 运用基因芯片技术检测临床乙肝患者血清中HBV病毒的相关耐药基因突变及基因分型,评价该方法 在监测HBV耐药及基因分型中的作用.方法 在使用不同核苷类药物的260例乙肝患者血清中,采用寡核苷酸探针芯片检测其携带的HBV相关耐药基凶变异情况及基因型,并随机挑取40例第2次扩增产物进行DNA序列分析.结果 经基因芯片检测到拉米呋啶耐药31例(19.4%),阿德福韦酯耐药6例(6%).260例患者中C基因型180例(69.2%),B型59例(22.7%),BC混合型21例(8.1%).结论 基因芯片法可同时检测针对拉米呋啶、阿德福韦酯、恩替卡韦、替比呋啶的多重耐药基因位点以及基因分型,与基因测序法比较,结果 完全一致,是一种可靠的检测方法 ,可为临床抗病毒药物的科学选择提供参考.     

微流控芯片技术在生命科学领域的研究进展

经过十几年的发展,微流控芯片技术已经成为21世纪最为重要的前沿技术之一,现已广泛应用于生命科学、环境监测、食品分析等领域,与传统检测方法相比,其具有高灵敏度、高通量、样品和试剂耗量小等优点。本文将微流控芯片技术在生命科学领域的研究进展从基因检测、蛋白质组学研究和细胞分析三方面做一综述。     

病毒性肝炎基因诊断芯片测定HBV DNA、HCV RNA的价值

目的：研究病毒性肝炎基因芯片的制备,评价该基因芯片对乙型和丙型肝炎的诊断价值。方法：收集乙型肝炎40例,丙型肝炎20例,40例健康人,乙型肝炎确诊用美国雅培设备试剂,荧光微离子法;丙型肝炎检测抗HCV及PCR法检测HCV RNA。确诊后同健康人血清一起进行双盲混合编组,用肝炎基因诊断芯片检测。结果：40例乙型肝炎病毒标志阳性血清,基因诊断芯片检测阳性30例,阴性10例;12例HCV RNA阳性血清,基因诊断芯片检测阳性8例;抗HCV阳性、HCV RNA阴性血清8例,基因诊断芯片检测阳性2例,阴性6例。40例健康人血清,乙型和丙型肝炎基因诊断芯片检测均为阴性。结论：肝炎基因诊断芯片可以同时检测乙型和丙型肝炎,诊断乙型肝炎的准确率可达80％,假阳性率低;诊断丙型肝炎的阳性率低,技术有待完善。     

微流控芯片在肿瘤仿生模型构建中的应用

微流控芯片是一种在微米尺度下对流体进行精确操控的新技术,已被证明是对哺乳动物细胞及其微环境进行操控的理想平台.本文拟围绕肿瘤转移过程中的一些关键环节,对微流控芯片在肿瘤仿生模型构建中的应用作一综述.目前,基于微流控芯片技术构建的肿瘤仿生模型主要包括:肿瘤原发灶模型、肿瘤细胞诱导血管新生模型、肿瘤细胞内渗模型、肿瘤细胞外渗模型、肿瘤多器官转移模型等.相对于传统的体外研究方法,这些仿生模型很大程度上再现了体内的肿瘤微环境,逐渐成为肿瘤研究极重要的平台.     

微流控芯片电泳在尿蛋白分离中的应用

目的:将微流控芯片电泳用于临床尿蛋白分离的验证试验,评价其在临床上的应用价值。方法:用微流控芯片电泳对30例尿蛋白定性试验为阴性的对照组和70例尿蛋白定性在 以上的病例组进行检测,以白球蛋白的峰面积比值判断蛋白尿的选择性,并与美国Helena琼脂糖凝胶电泳结果比较。结果:30例对照组未检出蛋白峰,70例病例组除2例外均检出蛋白峰,其中选择性蛋白尿16例,非选择性蛋白尿50例,溢出性蛋白尿2例,与美国Helena琼脂糖凝胶电泳结果100%相符,与临床诊断符合率为97.14%。结论:该法用于临床尿蛋白分离的验证试验,效果很好,适于在中小医院普遍推广。     

微流控芯片对血管紧张素原基因多态性的研究

目的：以微流控芯片为平台,以激光诱导荧光为检测手段,旨在探索AGT基因[G（-6）A]位点基因多态性在沈阳地区人群中的分布及与原发性高血压的关联,并为大规模人群基因多态性分析提供一高效、快速和灵敏的检测技术。方法：采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR-RELP）的方法,分别运用微流控芯片电泳与琼脂糖凝胶电泳对沈阳地区汉族人群103例正常人与123例高血压患者AGT基因（-6）位点的多态性进行分析。结果：（1）微流控芯片能在250s内对AGT基因PCR产物酶切片段进行芯片电泳分析;（2）沈阳地区正常对照组与高血压组中AGT基因（-6）位点A等位基因均有较高的发生频率（0.7038,0.7073）,突变位点多态性无统计学差异（χ^2=0.024,P〉0.05）。结论：（1）微流控芯片同琼脂糖凝胶电泳相比,分析速度比凝胶电泳快,耗样量少,检测灵敏度高;（2）沈阳地区汉族人群中AGT基因核心启动子区域-6位点等位基因A有较高的分布频率,但G/A的基因变异EH发病不相关联,此位点可能仅仅是一个基因多态性标志。     

微流控芯片用于肿瘤细胞分析的现状与发展趋势

自20世纪90年代,瑞士科学家Manz等[1]提出"微流控芯片实验室"以来,微流控芯片以其微型化、自动化、集成化的独特优势成为当前生命科学、分析化学、微机械、微电子及纳米科学等领域的研究热点.微流控芯片是通过微细加工技术在玻璃或硅基片上构建以微管道网络为结构特征,集样品制备、反应、分离、检测等功能于一体的微型分析平台,具有自动、高效、节约、快速等优点.目前,微流控芯片在DNA分析及测序[2,3]、蛋白质的分析与检测[4,5]、细胞操控和胞内成分分析[6,7]等研究领域显示出巨大的优势与潜力.     

微流控芯片模拟体内受精状态分选精子的应用

目的:微流控芯片作为一项全新的辅助生殖技术,尝试基于该芯片设计出一种模拟体内输卵管受精状态的分选精子的方式。方法:按功能构建微流控芯片,通过研究通道中不同部分的精子动力学及流体运动来实现精子分选。整个过程近似模拟体内输卵管受精状态。结果:通过对11例精液标本的微流控芯片分选,在通道入口,(A级+B级)%精子从37%提升到80%,同时,在通道出口,(A级+B级)%精子从37%降低到16%。结论:这种全新的微流控分选精子的方法不仅降低了分选过程中对精子的损伤,提高了分选的效率,同时实现了微量分选,从而为微量精液受精提供了可能。而且,这种方法充分模拟了体内输卵管精子运动的过程,为进一步的研究奠定了基础。     

TSH的快速免疫检测在微流控芯片系统中的应用

目的建立一种可将免疫反应原理与化学发光技术相结合的微流控芯片系统。方法采用激光直接加工法制备微流控芯片,用双抗夹心法测定TSH。结果芯片系统可以在25min内完成TSH的检测流程,所需的标本和抗体试剂量为10μl,线性范围为0-50μIU/ml,批内CV平均为4.7%,批间CV平均为4.6%,平均回收率为95.3%。结论用于检测TSH的微流控芯片系统灵敏、快速、操作简便、可重复使用。     

基因芯片技术在心脏外科的应用

进入后基因组时代以后,基因芯片技术在心脏外科诸多方面的研究与应用及其现今存在的一些问题.     

基因芯片技术在心脏外科的应用

基因芯片技术以高通量、高效率、大规模的独特优势,为心血管外科的各类疾病的研究提供了强有力的系统研究手段.本文着重阐述了基因芯片技术在先天性心脏病研究慢性心衰、心肌保护及心脏移植排斥反应四方面的应用.     

基因芯片技术在胰腺癌相关基因研究中的应用

目的　应用基因芯片技术比较胰腺癌组织与正常胰腺组织基因表达谱的差异 ,以寻找新的诊断指标和治疗位点。方法　将 12 80 0 0个人类全长基因的PCR产物点样在特殊处理后的玻片上制备基因芯片。采用逆转录的方法分别将Cy5 dUTP标记胰腺癌组织mRNA、Cy3 dUTP标记正常胰腺组织mRNA以制备探针。将每一标本的混合探针与芯片杂交 ,用ScanArray 30 0 0荧光扫描仪扫描荧光信号。应用ImaGene3.0软件分析、计算每点的Cy5和Cy3信号值。以Cy5 /Cy3比值的自然对数绝对值 >0 .6 9为标准 ,筛选差异表达基因。结果　在所检测的 6例胰腺癌标本中 ,共有 5 4个基因有差异表达 ,其中胰腺癌组织中表达上调基因 32个 (包括基因库中已登录基因 2 4个 ) ,表达下调基因 2 2个 (包括基因库中已登录基因 15个 )。结论　基因芯片技术为阐明胰腺癌特异基因表达谱提供了强有力的工具。     

基因芯片检测HBV YMDD变异的临床应用研究

目的应用基因芯片检测慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗过程中HBV YMDD变异类型以及与抗病毒疗程的关系。方法169例接受拉米夫定治疗(100mg/d,1次/d,疗程6~36个月)的慢性乙型肝炎患者和51例未抗病毒治疗的慢性乙肝患者,采用基因芯片方法检测HBV YMDD变异,荧光定量PCR检测HBV DNA含量。所有患者HBV DNA定量值均≥5×104拷贝/ml。结果①未抗病毒治疗的51例患者检出单纯YMDD阳性(未变异)35例(71.4%),变异14例(28.6%),3种变异模式,且均与野生株并存:Y(M/V)DD(10例),Y(M/I)DD(3例),Y(M/V/I)DD(1例);②接受拉米夫定治疗的169例患者单纯YMDD阳性18例(13.7%),变异113例(86.3%),显著高于未抗病毒治疗组(χ2=57.1,P<0.01),有6种变异模式:Y(M/V)DD(39例),Y(M/I)DD(10例),Y(M/V/I)DD(16例),YVDD(15例),YIDD(22例),Y(V/I)DD(11例);③抗病毒治疗6个月YMDD变异率66.7%(22/33),以Y(M/V)DD和Y(M/I)DD为主;~12个月变异率89.3%(25/28),以Y(M/V)DD,YIDD和Y(M/V/I)DD为主;~18个月变异率85.7%(18/21),以Y(M/V),YIDD和YVDD/YIDD为主;~24个月变异率97.5%(39/40),以YVDD,Y(M/V)DD和YIDD为主;治疗>24个月者9例,变异率100.0%(9/9),以YIDD,YVDD/YIDD和Y(M/V/I)DD为主。结论基因芯片检测HBV YMDD变异方法简便,特异性高,变异模式判读直观,结果可靠。抗病毒治疗前后检测YMDD变异情况,对指导和调整抗病毒治疗方案有重要的临床应用价值。     

乙型肝炎病毒c基因启动子变异与血清HBeAg及HBV DNA的关系

目的 :研究乙型肝炎病毒 (HBV ) c基因启动子 (BCP)变异与 e抗原及 HBV DNA含量的关系。方法 :采用错配引物聚合酶链反应 (PCR) -限制性片段长度多态性 (RFL P)分析及荧光定量 PCR(FQ- PCR)对 10 5例血清 HBV DNA阳性 HBV感染者进行 HBV BCP基因变异及 HBV DNA定量测定。结果 :BCP变异组 HBe Ag阴性率为 84 .4 % (5 4 / 6 4 ) ,非 BCP变异组为2 6 .8% (11/ 4 1)。 BCP变异组 HBV DNA含量在 HBe Ag+ 病例 (10 8.79± 0 .85vs 10 7.4 8± 0 .39copy/ ml,P <0 .0 1)及 HBe Ag- 病例(10 8.0 5± 1 .1 6 vs10 6 .55± 0 .91 copy/ ml,P<0 .0 1)中均较非 BCP变异组高。结论 :HBV BCP变异在下调前 c/ c基因表达的同时可能促进 HBV复制 ,对 HBs Ag+ / HBe Ag- 患者需要进一步检测 HBV DNA,以免由于基因变异导致将 HBe Ag阴性者误认为病毒的免疫清除或静息而延误抗病毒治疗时机