电离辐射和三氧化二砷联合对人脑胶质瘤SHG44细胞的杀灭作用

目的 研究电离辐射联合三氧化二砷(As2O3)对人脑胶质瘤SHG44细胞的杀灭作用。方法 以SHG44细胞为实验对象,用四氮唑盐(MTT)比色法观察不同剂量的电离辐射、单独As2O3及不同剂量的电离辐射和As2O3联合对SHG44细胞的杀灭作用;用激光共聚焦显微镜观察细胞的形态学变化。结果 (1)照射与As2O3联合组SHG44细胞存活率低于单独相应剂量照射组(P<0.01)和单独As2O3组(P<0.01);(2)2Gy剂量照射+4μmol／L As2O3组对SHG44细胞杀灭作用强于6Gy剂量单独照射组(P<0.01),相当于8Gy单独照射组(P>0.05);(3)激光共聚焦显微镜下观察到As2O3处理组细胞出现明显的凋亡形态学变化。结论 电离辐射和As2O3联合对SHG44细胞的杀灭作用分别强于电离辐射和As2O3单独作用;As2O3对SHG44细胞的杀灭作用机制主要     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG－44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响，阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法PTEN基因体外转染SHG－44细胞，筛选阳性细胞克隆，以原位杂、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况；采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况；以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG－44细胞有PTEN蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核破裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现；流式细胞仪显示细胞周期从G1期到S期发生抑制，并且在G1期峰前出现一明显的凋亡峰（15．9％）；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带；bcl-2的表达也显著下调。结论 PTEN基因可诱导SHG－44细胞凋亡，并下调bcl-2蛋白的表达，这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ—39可变区基因特征的初步分析

应用逆转录聚合酶链式反应技术扩增出单克隆抗体ＳＺ－３９可变区基因，以测序证实重链可变区基因长３４８ｂｐ，编码１１６个氨基酸，轻链可变区基因长３１８ｂｐ，编码１０６个氨基酸。同源性比较显示它们与小鼠免疫球蛋白可变区基因同源性最高，分别达８８％和６５％。     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体的制备及其相关特征的研究

目的：研究单克隆抗体荧光标记脑胶质瘤术中显像。方法：采用人脑恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４作为抗原，制备了一组分泌抗人脑胶质瘤细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果：该杂交瘤细胞株分泌抗人脑胶质瘤细胞单克隆抗体Ｈ１２具有与脑胶质瘤细胞物异性结合的特性。结论：可以进一步用于研究单克隆抗体荧光标记脑胶质瘤术中显像的脑胶质瘤组织与正常脑组织之间的界线识别。     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体H12的荧光标记

目的：探讨H12单克隆抗体的不同浓度对FITC荧光标记结果的影响。方法：紫外吸收法测定抗体蛋白质浓度,透析标记法进行抗体荧光标记,并以ELISA法对抗体进行特异性鉴定及效价分析。结果：标记前后抗体特异性经ELISA鉴定未见明显差异。结论：①FITC荧光标记前抗体蛋白质浓度应达（10－20）mg/mL,才能得到合适的F／P比值。②F／P值在1－2之间者较为理想,如果过标记的抗体F／P＞2则可导致非特异性染色的增加,增加假阳性率;标记不足F／P＜1则可导致假阴性率增加。③标记后虽可出现特异性下降和蛋白量的丢失;但特异性鉴定与标记前未见明显差异。故标记后抗体H12的特异性适用于肿瘤组织与正常脑组织间界限的确定。     

人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究

目的：比较人恶性肿瘤胶质瘤细胞系CHG－5和SHG－44的细胞骨架系统成分,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法：利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果：除微管和微丝均被染色外,所有细胞表达Vimentin(波形蛋白）,而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似,但两种相细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG－44细胞中表达较强,而GFAP在CHG－5细胞中表达较强。丙酮、75％酒精和4％多聚甲醛对微管的固定效果较好;用醛类固定后中间丝（尤其是Vimentin）染色极弱。结论：CHG－5分化程度较SHG－44高,两种细胞系细胞骨架状态的差异可能是二者生物学特性差异的结论基础。     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体的研究

以本研究室建立的恶性胶质瘤细胞系SHG-44为抗原,通过杂交瘤技术建立了两株恒定地分泌抗胶质瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞株SZ-38、SZ-39。以该两株单克隆抗体为生物探针,在分子生物学水平研究了两种新的胶质瘤抗原,它们分别为胶质瘤细胞表面分子量47 000及180 000的糖蛋白。通过SZ-39对脑瘤内的放射免疫定位研究,确认了该单克隆抗体应用于临床肿瘤定位诊断和导向治疗的可能性。     

人肝癌培养细胞粗提膜相关抗原的单克隆抗体

用人肝癌培养细胞粗提膜免疫Balb/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤(SP_2/o)细胞在PEG作用下融合。以LLISA筛选抗体。通过免疫荧光和免疫酶标进行组织定位。初步获得一株抗人肝癌细胞膜相关抗原的单克隆抗体杂交瘤—命名FP—5。用此抗体在涂片上对人肝癌细胞膜呈阳性反应,在3例手术切除的人肝癌活检冰冻切片中,肝癌组织细胞亦呈阳性反应。FP—5细胞株染色体为83—108条,含1—2条中着丝点标记染色体。经6次克隆化体外培养6个多月,仍持续分泌特异性抗体,此抗体鉴定属鼠的IgM型。     

抗热休克蛋白抗体H3F识别分子的分析及意义

研究目的探讨肿瘤相关抗原的表达及在肿瘤免疫中的作用。研究设计用人Hela细胞株提取含热休克蛋白的ATP结合蛋白,制取单抗,分析相应热休克蛋白在肿瘤细胞株及人体肿瘤中的表达。研究对象 Hela、W14、Brash-2等肿瘤细胞株,WFB、BALB_3T_3正常细胞株,人食管、胃等癌组织。处理方法按Garsia法将提取的ATP结合蛋白免疫BALB/c小鼠,制取杂交瘤,所得单抗对肿瘤细胞株及人体肿瘤作免疫组化及流式细胞分析。结果获取一株稳定分泌IgM的杂交瘤H3F。H3F抗原具有热及化学诱导性,是一种分子量为90kD的热休克蛋白,可在多种肿瘤细胞株及人体肿瘤细胞表面表达,并与浸润性γδT淋巴细胞呈正相关系。H3F在正常细胞株及人体细胞表面阴性。结论 H3F为一种瘤相关抗原,可介异γδT淋巴细胞对肿瘤的免疫监视作用。     

GENERATION AND PARTIAL CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST SOLUBILIZED MEMBRANE FRACTION OF HUMAN SPERMATOZOA

Human sperm membrane antigens extracted by deoxycholate (DOC) were used to immunizeBALB/c mice.Hybrid cell lines secreting sperm-specific monoclonal antibodies were generatedby cell fusion in a semi-solid medium and screened by indirect immunofluorescent assay usinglive and methanol-fixed sperm.Out of 850 hybrid clones from cell fusion,28 were shownto secrete sperm-specific antibodies which reacted with the acrosome,equatorial segment,whole surface plasma membrane or tail of spermatozoa.Finally,seven hybrid cell lineswere established and shown to secrete monoclonal antibodies which had no cross-reactivitywith arty human tissues other than testis and sperm.The majority were also shown toinhibit fertilization of mouse oocytes in vitro and human sperm penetration of zona-freehamster ova.Western blot analysis revealed that some of these antibodies reacted withsperm membrane antigens of distinct molecular size.     

铅对人红细胞膜脂质及膜蛋白的作用

①目的研究铅对人红细胞膜脂质及膜蛋白的作用，并观察尼克酰胺（ＮＭ）的抗铅作用。②方法用荧光偏振法与电子自旋共振自旋标记法，检测了铅处理组及对照组人红细胞膜的荧光偏振度（Ｐ）、微粘度（η）（ｎ＝４）及膜蛋白的电子自旋共振波谱中弱、强固定化组分峰值的比值ｈｗ／ｈｓ（ｎ＝３），结果经ｔ检验统计处理。③结果铅处理过人红细胞膜的荧光偏振度、微粘度及ｈｗ／ｈｓ比值均减小，与对照组比较差异均有显著性（ｔ＝３．１８８～９．１６５，Ｐ均＜０．０５）。尼克酰胺能减弱铅致人红细胞膜荧光偏振度、微粘度及ｈｗ／ｈｓ比值的减小（ｔ＝３．２２８～９．８０６，Ｐ均＜０．０５）。④结论铅可致红细胞膜脂双层疏水区的流动性增大，膜蛋白的构象发生变化。尼克酰胺能减弱铅对红细胞膜的作用     

瘤腔灌注aCD3AK细胞治疗脑胶质瘤的临床研究

目的：观察瘤腔灌注抗ＣＤ３活化杀伤细胞（ａＣＤ３ＡＫ细胞）治疗脑胶质瘤的作用。方法：观察组１６例肿瘤切除术后经预埋置于瘤腔的储液囊（ＯＭＭＡＹＡ）灌注ａＣＤ３ＡＫ细胞进行免疫治疗，同期与未用ａＣＤ３ＡＫ细胞治疗的对照组１６例作对照，测定治疗前后外周血淋巴细胞转化率（ＬＴＴ）及追踪观察肿瘤复发情况。结果：观察组ＬＴＴ在近、远期增高程度和抑制肿瘤复发均较对照组优（Ｐ〈０．０５）。结论：经瘤腔灌注ａＣＤ     

猪胰细胞膜缩胆囊肽结合蛋白的纯化

从猪胰细胞膜提取、纯化得到一种缩胆囊肽（ＣＣＫ）结合蛋白，达电泳纯。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），其亚基分子量为４３．１×１０－２２ｋｇ。此结合蛋白与不同的ＣＣＫ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ作用时显示，其与硫酸化ＣＣＫ－８、ＣＣＫ－８、硫酸化亮氨酸脑啡肽（Ｌｅｕ－ｅｎｋ）结合活性较大，而与ＣＣＫ－６、ＣＣＫ－４及Ｌｅｕ－ｅｎｋ结合活性较弱。说明ＣＣＫ羧基末端第七位上酪氨酸的硫酸化对ＣＣＫ结合活性有较大影响。并与ＣＣＫ肽链的长度有关。     

组合单克隆抗体提高人胃癌细胞系反应性的研究

目的：将胃癌单克隆抗体（ ＭｃＡｂ） 组合提高ＭｃＡｂ 与人胃癌细胞系的反应性，为肿瘤定位诊断及导向治疗提供有效的ＭｃＡｂ 组合。方法：采用ＥＬＩＳＡ、ＦＣＭ 观察了单一胃癌ＭｃＡｂ 及组合ＭｃＡｂ 与人胃癌细胞系的反应性。结果：经ＥＬＩＳＡ、ＦＣＭ 分析单一的ＭｃＡｂ３Ｇ９ 、ＢＢ４．３ 与胃癌细胞结合的膜荧光阳性率分别为７４－２ ％ 和５４－９ ％ 。平均膜荧光强度分别为５３－６ 和６５－８。两者组合后，在相同抗体浓度下，膜荧光阳性率为９７－４ ％ （ Ｐ＜０－０１）；平均膜荧光强度为１２５－５（ Ｐ＜ ０－０１） 。结论：合理采用组合的ＭｃＡｂ 可提高ＭｃＡｂ 与人胃癌细胞系的反应性，降低抗原表达的异质性，从而提高ＭｃＡｂ 的载体效应。     

再生障碍性贫血红细胞膜蛋白SDS－PAG电泳分析

为了探讨慢性再生障碍性贫血（ＣＡＡ）患者红细胞膜蛋白组分的异常改变，用ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳法分析了ＣＡＡ患者和健康人各２０例，实验性溶血性贫血（ＨＡ）兔，再生障碍性贫血（ＡＡ）兔和正常兔各２０只的红细胞膜蛋白的生化组分。结果显示ＣＡＡ患者的膜蛋区带Ⅲ和区带Ⅳ均明显短于正常人，其中有８例所有区带均缩短，有１２例带Ⅰ－Ⅶ缩短。经光密度计扫描计算各区带蛋白质百分含量显示，ＣＡＡ患者的带Ⅰ－Ⅶ低于健康人，带Ⅷ高于健康人，差异均有高度显著性（Ｐ＜０．０１）。所有模型兔与正常兔比较带Ⅳ缩短比带Ⅲ更明显，其它谱带也有不同程度的改变。这些结果表明ＣＡＡ患者红细胞膜蛋白组分有异常改变。     

周围神经43kD蛋白单克隆抗体的制备

目的：制备周围神经43kD蛋白单克隆抗体。方法：通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶系统,从周围神经组织中分离回收43kD蛋白作为抗原,免疫BALB／C小鼠,通过杂交瘤技术,点膜印迹法检测,获得相应的分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并以Western blot方法检测抗体的特异性。结果：阳性克隆可持续稳定分泌抗43kD蛋白抗体,Western Blot显示在43kD处出现特异的阳性反应条带。结论：建立了分泌抗43kD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,获得了43kD蛋白单克隆抗体。     

PURIFICATION AND IDENTIFICATION OF THE ANTIGEN ASSOCIATED WITH MONOCLONAL ANTIBODY 3H11 AGAINST GASTRIC CANCER CELL

The object of this study is to investigate the properties of gastric cancer assoiciated antigen by McAb3H11 against gastric cancer cell line. Antigen purified by affinity chromatography and further characterized by biochemical and immunological techiques. Results showed that assoiciated antigen of McAb 3H11 was mainly located on the membrane of target calls. It was sensitive to heat and digestion of proteases,but resistant to treatment with sodium perioclate. Schiff‘s reagent staining was negative. SDS-PAGE and IEF-analysis showed that the antigen was a 210 kD molecular weight with pl of 8.5 protein. The molecular weight of antigen extracted from target cell with tunicamycin was not changed. We concluded that the corresponding antigen of MeAb 3H11 might be an alkaline protein.