大鼠损伤神经组织中睫状神经节营养因子的基因表达

探索大鼠损伤神经组织中ＣＮＴＦ基因表达,方法采用ＲＴ－ＰＣＲ,半定量分析大鼠正常坐神经与坐骨神经横断损伤１周、２周、４周远侧端中ＣＮＴＦ的基因表达。结果在正常大鼠坐骨神经组织中,ＣＮＴＦ基因呈低表达。     

坐骨神经损伤后生长相关蛋白表达的免疫组化研究

目的：探讨周围神经在损伤后远侧端生长相关蛋白（GA9－43）的表达。方法：切除SD大鼠－侧坐骨神经5mm,造成坐骨神经缺损伤模型,两周后用免疫组化法检测损伤远侧端神经组织中GAP－43的表达,结果：损伤神经远侧端雪旺细胞表可见棕色阳性产物,而正常神经组织中未见阳性反应产物。结论：损伤神经远侧端雪旺细胞中可见GAP－43表达,在正常神经组织中GAP－43低表达或无表达。     

周围神经43kD蛋白在损伤坐骨神经中的表达

目的：探索SD大鼠损伤坐骨神经组织中43kD蛋白的表达。方法：采用周围神经43kD蛋白单克隆抗体,以Western Blot方法检测大鼠损伤坐骨神经中相应蛋白的表达情况。结果：正常大鼠坐骨神经组织与大鼠损伤后2周的坐骨神经远侧端组织,在43kD处均有免疫反应阳性条带,在大鼠损伤后2周的坐骨神经远侧端组织中阳性反应产物着色较深。结论：大鼠坐骨神经组织中有43kD蛋白的表达,而损伤神经远侧端43kD蛋白表达增强。     

大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化

目的：探讨大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化。方法：采用RT-PCR法，半定量分析坐骨神经横断后1d、2d、4d、1W、2W、4W远侧端组织中GAP-43m．RNA含量的变化。结果：大鼠正常坐骨神经中存在NGF mRNA，但表达量较低。坐骨神经横断后，其远侧端组织中GAP-43 mRNA表达量显著升高，1周达到高峰，两周开始下降，4周则降至一般水平。结论：坐骨神经损伤后,GAP-43基础的表达呈现出增高现象，提示OAP-43 mRNA的表达和蛋白质合成与神经损伤再生密切相关。     

周围神经65KD蛋白对培养鼠胚脊髓运动神经元的影响

目的：为了解周围神经损伤后期远侧端特异性表达的６５ＫＤ蛋白对鼠胚脊髓神经元的影响。方法：选用ＳＤ大鼠坐骨神经横断后２周的动物模型，自然凝胶系统电泳分析损务后神经远侧端中的蛋白组分，将６５ＫＤ蛋白区带胶条与１４天鼠胚脊髓运动神经元联合培养，结果：损伤后２周的坐骨神经元侧端中特异性地出现表达增强的６５ＫＤ蛋白；与含６５ＫＤ蛋白区带胶条联合培养的脊髓运动神经元细胞存活数量多，突起生长旺盛，结论：坐骨神经     

长期喉返神经损伤后疑核运动神经元睫状神经营养因子的表达

目的：研究长期喉返神损伤后疑核运动神经元睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）的表达及分布。方法：以犬单侧喉返神经损伤为实验模型,采用原位杂交及免疫组织化学技术,结合图像分析技术测定疑核ＣＭＴＦｍＲＮＡ及其蛋白表达呈阳性反应的神经元胞体灰度、体积及数量。结果：疑核运动神经元能自分泌ＣＮＴＦ,神经损伤３周内神经元ＣＮＴＦ基因表达强度及反应的胞体数明显下降,而ＣＮＴＦ蛋白表达增强,但表达的胞体数无改变。４周后基     

NGF,CNTF和CGRP在人周围神经再生过程中的表达与分布

本研究以５例成年人正中神经切割伤后２－３个月的神经为材料，取损伤处的近侧端与远侧端，４％多聚甲醛固定，冰冻切片，切片分别与特异性抗体孵育，兔抗ＣＮＴＦ、小鼠抗ＣＧＲＰ和小鼠抗ＮＧＦ，显色反应采用兔疫酶组化的ＡＢＣ系统。     

脑缺血再灌流后大鼠海马脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子mRNA的表达

目的：观察大鼠脑缺血再灌流损伤后脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）和睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）ｍＲＮＡ在海马中的分布及其表达。方法：大鼠颈总动脉夹闭造成脑缺血３０ｍｉｎ，于６，１２，２４，７２ｈ进行点杂交和原位杂交，７２ｈ时进行神经元尼氏小体染色。结果：脑缺血后，海马ＣＡ１区神经元大量死亡，ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达于６ｈ开始增加，７２ｈ恢复正常。２４ｈ时齿状回ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达高于ＣＡ１区。ＣＮＴＦｍＲＮＡ表达于１２ｈ开始持续增加。结论：脑缺血再灌流损伤后，海马ＢＤＮＦｍＲ－ＮＡ和ＣＮＴＦｍＲＮＡ的表达均增加。ＢＤＮＦ可能有利于齿状回神经元耐受缺血，ＣＮＴＦ可能在局部发挥神经营养作用     

坐骨神经损伤中HMGB1对施万细胞迁移作用的研究

目的：研究周围神经损伤后高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)在损伤神经远侧端的细胞定位及表达变化,探讨HMGB1对施万细胞(Schwann cells,SCs)迁移特性的影响,阐明HMGB1功能作用的细胞学基础。方法：建立Sprague-Dawley(SD)大鼠坐骨神经损伤模型,采用免疫荧光组织双标化学染色观察神经损伤后HMGB1的定位和表达情况,新生1～3 d SD大鼠取材体外培养SCs并进行纯化,利用Transwell小室检测HMGB1对SCs迁移的影响。结果：大鼠坐骨神经中HMGB1和S100共定位,主要定位于细胞核内,损伤后远侧端HMGB1表达明显升高;体外培养的SCs经过纯化后排列整齐、胞体透亮,纯度可达95%以上,可用于后续体外试验;HMGB1蛋白能够促进SCs迁移。结论：HMGB1参与损伤坐骨神经远侧端SCs的功能调节。     

人睫状神经营养因子结构和功能的研究

制备高活性的重组人睫状神经营养因子，并研究其生物学功能。方法：应用大肠杆菌表达ｈＣＮＴＦ，用片段插入和法研究其结构与功能关系；切断大鼠骨神经，局部及皮下给予ＣＮＴＦ，应用辣根过氧化物酶逆行追踪技术显示再生轴突通过修复部位的胞体。结果；ｈＣＮＴＦ分子中α－螺旋结构的维持对其生物活性十分重要Ｃ端松散地其生物活性贡献不大，Ｄ螺旋中后段可能与生物活性有密切关系；     

周围神经65KD蛋白单克隆抗体的制备

神经化学诱向生长的研究是神经科学中的一个重要方向。本文以自然系统聚丙酰胺凝胶电泳,分离提取坐骨神经损伤后的远侧端中具有诱神经生长作用的65KD蛋白。以该蛋白作为抗原免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术获得一株(VI5E)稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。免疫印迹法表明,该单克隆抗体特异性地与65KD区带结合。免疫组化法显示,在损伤后的坐骨神经远侧端组织中的雪旺氏细胞呈阳性反应。单克隆抗体的制备为进一步阐明该蛋白的生物学特性奠定了基础。     

周围神经断端桥接后数量放大效应的研究

目的证实周围神经横截面不对等修复时神经纤维数量的放大效应。方法选用雄性Sprague-Dawley大鼠50只,分为A、B、C、D、E5组。A、B、C3组将大鼠坐骨神经切断后,A组近端保留完整断端与远端坐骨神经用甲壳质套管留置2mm间隙套接,B组在近端5mm处将坐骨神经中的腓总神经束结扎切断,将胫神经束与远端坐骨神经套接,C组在近端5mm处将坐骨神经中的胫神经束结扎切断,将腓总神经神经束与远端坐骨神经套接;D、E两组将胫神经在分叉处远端5mm组将胫神经切断;D组结扎切断2／3近端纤维,将剩余神经纤维与远端胫神经进行甲壳质套管套接,E组将全部近端纤维与远端胫神经进行甲壳质套管套接。1、2、4、12周后分别取材进行组织学和电生理研究。结果采用SPSS软件进行统计学分析。结果12周后电生理检查发现,各组诱发出的最大波幅下面积B、C两组小于A组（均P〈0．05）,D组小于E组（P〈0．05）。A组与B、C组之间,D、E组之间感觉神经传导速度相近。锇酸染色有髓神经纤维计数：各组远端均大于近端：A组远端比近端增加34．4％,B组增加39．6％,C组增加80．4％,D组增加101．1％,E组增加48．9％（P〈0．05）。结论在周围神经桥接后,远端神经纤维数量明显大于近端,存在神经纤维数量的放大;同源的神经桥接的放大效应大于非同源的神经。临床上较细神经修复远端粗大神经是可能的。     

神经再生中靶器官的诱向作用

本研究以细胞培养的方法证明了在周围神经再生过程中,远侧端即轴突衍生的靶器官,很强地诱导着神经轴突的定向生长。进而采用了自然凝胶电泳系统,分析了与神经诱向再生相关的活性因子,其结果提示在远侧端组织中,出现的18KD和89KD因子具有很强的诱向性作用,诱导轴突在再生的过程中准确到达靶器官;并很强地提示雪旺氏细胞在神经再生过程中扮演着重要角色。     

猫胚神经加自体雪旺氏细胞桥接大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的:研究修复周围神经缺损新材料。方法:Wistar大鼠80只,切断左大腿坐骨神经,造成15 mm缺损,分别用自体神经(C组)、液氮冷冻猫胚神经(B组)、液氮冷冻猫胚神经加自体雪旺氏细胞粗制品(C组)桥接。术后4,12,24周取桥体、桥体远端坐骨神经分别行光镜观察、图像分析、电生理检测。所得数据经多因数方差分析和q检验。结果:加入自体雪旺氏细胞猫胚神经组(C组)有髓纤维数目、复合动作电位峰值恢复率、传导速度恢复率与自体神经移植组(A组)比较无显著性差异;而单纯猫胚神经组(B组)大多数指标均不及A、C两组(P<0.01)。结论:植入自体雪旺氏细胞的胚胎神经桥接周围神经缺损效果优于单纯胚胎神经,是一种良好的替代自体神经的桥接物。     

大鼠坐骨神经缺损后损伤近端神经TNC表达变化及功能分析

目的:研究大鼠坐骨神经缺损后损伤近端神经组织中胞外基质分子TNC(tenascin-C)的表达变化及初步功能分析。方法:采用冰冻切片和免疫荧光染色法,检测神经缺损0d(对照组),4d(实验组)损伤近端神经组织TNC的表达变化及表达位置;并利用体外共培养施万细胞/成纤维细胞及细胞划痕实验初步研究TNC的作用。结果:免疫荧光染色发现TNC在损伤后4d处于高表达状态,并在神经外膜处与波形蛋白(Vimentin)共定位状况良好;体外细胞共培养实验发现下调成纤维细胞中的TNC可以降低与之共培养的施万细胞的迁移速度。结论:在神经损伤后成纤维细胞分泌TNC并比对照组表达大幅上调,且体外实验发现TNC可促进施万细胞的迁移速度。     

脂肪源性干细胞对大鼠坐骨神经功能恢复的影响

目的：：探讨脂肪源性干细胞（ADSCs）对大鼠坐骨神经功能恢复的影响。方法：将第4代ADSCs移植入脱细胞神经移植物（ANA）中,构建组织工程神经。大鼠随机分为正常对照组、培养基组和实验组,培养基组和实验组均建立坐骨神经损伤模型,然后用相应的组织工程神经桥接损伤神经的断端。术后6W和12W采用神经电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅。结果：术后6 W、12W,实验组坐骨神经传导速度和波幅明显高于培养基组（P<0.05）,但低于正常对照组（P<0.01）;并且,实验组术后12W时的神经传导速度和波幅明显高于术后6W（P<0.05）。结论：ADSCs可增加坐骨神经传导速度和波幅,促进坐骨神经功能的恢复。