睫状神经营养因子对大鼠脊髓损伤后GFAP表达的影响

目的 研究磊鼠脊髓损伤后睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）是否能够影响胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达和脊髓损伤后大鼠功能的恢复情况。方法 将动物分为脊髓 务＋ＣＮＴＦ注射组（Ａ组）、脊髓损伤＋灭活的ＣＮＴＦ注射组（Ｂ组）。手术后１、３、７、１４、２８ｄ应用原位杂交和免疫细胞化学方法观察ＧＦＡＰ的表达,彩和计算机图像分析蜓一量分析,并用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况。结果 大鼠脊髓 务后ＧＦＡ     

睫状神经营养因子促进大鼠周围神经再生的实验研究

探讨局部应用睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）对大鼠周围神经损伤后再生的影响。方法３４只大鼠分为４组,１～３组每组各１０只,切除两侧坐骨神经各１０ｍｍ并用硅胶管套接,左侧套管内注入ＣＮＴＦ５０μｇ,右侧注入生理盐水对照。术后１、３、４个月分别进行电生理和组织学检查。另４只鼠于术后３个月行ＨＲＰ逆行示踪检查。结果ＣＮＴＦ治疗组术后１、３、４个月时的电生理和组织学检查结果均明显优于对照组。相应节段脊髓前角标记辣根过氧化物酶的神经元明显多于对照组。结论ＣＮＴＦ可促进周围神经特别是运动神经损伤后的再生。     

外源性睫状神经营养因子对离断面神经修复的实验研究

OBJECTIVE: To study the role of extrinsic (CNTF) in the regeneration of severed facial nerve in cats. METHOD: The facial nerve in temporal bone of adult cats were severed and the severed ends were connected with CNTF or saline applied at the connection. Electrophysiological examination and immunocytochemistry were performed with immunoelectron microscope for morphological analysis at 2, 4 and 8 weeks after the operation. RESULTS: Two weeks after operation, both CNTF and saline groups failed to exhibit muscular excitement by facial nerve stimulation, but the amount of myelinated nerve fibers had statistical difference between the two groups (P<0.05). At 4 weeks, the latency of the facial muscle excitement was 7.832+/-2.695 ms in CNTF group and 16.120+/-3.516 ms in saline group, and the average number of myelinated axons was significantly different between the two groups (1,435+/-318 vs 957+/-269, P<0.05). At the 8th weeks, the latency of facial muscle excitement was reduced to 3.125+/-0.165 ms in CNTF group and to a comparable level of 3.095+/-0.178 ms in saline group (P>0.05), and the average number of myelinated axons increased to 1,695+/-283 and 1,543+/-320 respectively in the two groups (P>0.05). Significant increase of Schwann cells was noted in both groups at this stage. CONCLUSION: Local application of CNTF may enhance facial early-stage nerve regeneration in adult cats, but its long-term effects remain unclear.     

睫状神经营养因子单克隆抗体制备

目的：制备睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)单克隆抗体。方法：将CNTF免疫的BALB/c小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次克隆化培养,获得分泌CNTF单克隆抗体的杂交瘤细胞株;然后进行体内诱生获取含大量CNTF单克隆抗体的腹水和血清;再进行CNTF单克隆抗体鉴定和效价测定。结果：获得5株分泌CNTF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型为IgG2a;腹水和血清中该抗体效价分别为1∶107-1∶108和1∶106;该抗体能特异性地显示SD大鼠脑内表达CNTF的神经元,其中1株单克隆抗体能抑制CNTF促进体外培养新生SD大鼠骨骼肌细胞增殖的功能。结论：制备成功高效且特异的CNTF单克隆抗体,为CNTF结构、功能和机制的研究提供了有效工具。     

睫状神经营养因子和雪旺细胞神经营养活性物质对大鼠视神经损伤后轴突数的影响

目的　观察睫状神经生长因子 ( ciliary neurotrophicfactor,CNTF)和雪旺细胞神经营养活性物质 ( Schwann cellsneurotrophic agent,SCNA)对视神经损伤后轴突的形态和纤维数目变化的作用 .方法　采用镊夹法制作大鼠视神经损伤模型 ,损伤后立即一次性向玻璃体内注射 CNTF( 5 0 ng)或SCNA ( 10μL ) ,在损伤后 1,2 ,3和 4 wk时观察夹伤视神经的形态 ,及进行图像分析和轴突纤维计数 .结果　损伤后视神经轴突减少 ,间质增多 .CNTF组和 SCNA组的轴突数密度在 1wk时分别为正常值 ( 0 .10 65± 0 .0 0 5 6个·μm- 2 )的0 .5 9和 0 .61,而对照组为 0 .5 5 ,实验组与对照组比较差异显著 ( P<0 .0 5 ) .但在夹伤 2 wk后 3个组间、各时间点间数据差异均不显著 ( P>0 .0 5 ) .结论　 CNTF及 SCNA一次玻璃体给药能在 1wk内减缓视神经损伤后轴突数目的减少 .     

睫状神经营养因子cDNA的克隆、表达、纯化及生物活性测定

目的：利用基因工程技术获得有较高生物学活性的睫状神经营养因子（CNTF）蛋白。方法：应用反转录PCR技术直接扩增出人CNTF cDNA,克隆入pUC19载体中,用双脱氧法进行手工序列分析,构建表达菌株pBV220-CNTF/DH5α。表达的蛋白质得到纯化,用鸡胚背根节无血清培养法检测表达蛋白生物学活性。结果：所克隆的CNTF基因序列与文献报道完全一致,pBV220-CNTF/DH5α能特异表达分子量大约为26000的蛋白质,表达量约为菌体总蛋白量的35％。CNTF蛋白质经纯化后纯度约95％,而且表达蛋白有很高的生物学活性。结论：该研究结果为CNTF的结构和功能的研究及临床应用打下基础。     

睫状神经营养因子对大鼠视神经损伤后视觉电生理的影响

目的 观察睫状神经生长因子（ciliary neurotrophic factor,CNTF)对视神经损伤后视觉电生理变化的作用。方法 采用镊 视神经法制作大鼠视神经损伤模型，夹伤后立即向球后一次性注射CNTF 50ng，并于损伤当时和损伤后1，2，3和4wk时检测夹伤视神经眼的闪光视觉诱发电位（flarevisional evoked potential,F-VEP)。结果 视神经夹伤后损伤眼F－VEP的P1波振幅（wave amplitude,WA)在1wk时下降，后回升，峰潜时(wave latency,WL)延长。CNTF组中WA在视神经夹伤后1wk和2wk时与对照组相比差异显著（P＜0．05），WL仅在视神经夹伤后1wk时与对照组相比具显著差异（P＜0．05）。结论 视神经损伤后一次性球后注射CNTF在早期加强了神经系统对损伤的反应强度，促进了视神经损伤后神经冲动传导功能的恢复。     

长期喉返神经损伤后疑核运动神经元睫状神经营养因子的表达

目的：研究长期喉返神损伤后疑核运动神经元睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）的表达及分布。方法：以犬单侧喉返神经损伤为实验模型,采用原位杂交及免疫组织化学技术,结合图像分析技术测定疑核ＣＭＴＦｍＲＮＡ及其蛋白表达呈阳性反应的神经元胞体灰度、体积及数量。结果：疑核运动神经元能自分泌ＣＮＴＦ,神经损伤３周内神经元ＣＮＴＦ基因表达强度及反应的胞体数明显下降,而ＣＮＴＦ蛋白表达增强,但表达的胞体数无改变。４周后基     

外源性睫状神经营养因子对离断面神经修复的实验研究

目的 探讨应用外源性睫状神经营养因子(CNTF)对成年猫面神经损伤后的再生修复作用。方法 猫颞骨内面神经横断损伤后端端对合,局部应用CNTF作实验组,对照组用同等量生理盐水(SAL);于术后2、4和8周各组进行电生理、免疫组织化学细胞化学技术结合免疫电镜观察及形态学分析。结果 术后2周两组电刺激面神经均未诱发面肌兴奋,有髓纤维计数实验组(834±326)、对照组(235±152)t检验(P<0.05),有显著意义。术后4周CNTF组,面神经复合肌动作电位潜伏期实验组(7.832±2.695)、对照组(16.120±3.516);有髓神经纤维数实验组(1435±318)、对照组(957±269),有显著性差异。术后8周CNTF组,面神经复合肌动作电位潜伏期实验组(3.125±0.156)、对照组(3.095±0.178),有髓神经纤维数实验组(1695±283)、对照组(1543±320),t检验(P>0.05),两组差异均无明显意义。但髓鞘厚度较均匀、结构尚完整,轴突再生明显,雪旺细胞增多。结论 局部应用CNTF在正常猫神经损伤的较早期(4周左右)有促进再生修复作用,但远期作用尚不明确。     

睫状神经营养因子对应激引起行为障碍的作用

目的 探讨睫状神经营养因子对应激引起行为障碍的作用。方法 采用ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ测定，观察急性和慢性足底电击应激大鼠的ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为变化，及双侧海马注射睫状神经营养因子对其影响。结果 急性应激大鼠ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为活动增加，慢性应激大鼠ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为活动减少；睫状神经营养因子对对照组大鼠和急性应激大鼠的ｏｐｅｎ ｆｉｅｌｄ行为无明显作用，但可显著改善慢性应激大鼠的行为障     

大鼠损伤神经组织中睫状神经节营养因子的基因表达

探索大鼠损伤神经组织中ＣＮＴＦ基因表达,方法采用ＲＴ－ＰＣＲ,半定量分析大鼠正常坐神经与坐骨神经横断损伤１周、２周、４周远侧端中ＣＮＴＦ的基因表达。结果在正常大鼠坐骨神经组织中,ＣＮＴＦ基因呈低表达。     

大鼠损伤神经组织中Tropic 1808基因相关蛋白的亲和层析法纯化

目的：纯化大鼠损伤坐骨神经组织中Tropic 1808基因特异表达的蛋白。方法：将Tropic1808基因重组蛋白的单克隆抗体与CNBr-activated Sepharose 4B交联，用亲和层析的方法，提取在大鼠损伤坐骨神经组织中Tropic1808基因特异表达的蛋白，并将纯化的蛋白进行SDS-PAGE分析。结果：(1)经层析系统紫外检测，新生层析后洗脱，在280nm波长处获得两个不同的紫外吸收峰。（2）亲和层析的洗脱液，经冷冻浓缩，SDS-PAGE分析，出现43.0kDa.320kDa,31.0kDa和14.4kDa蛋白条带，其中在32.0kDa的蛋白条带与预期的Tropic1808基因在组织中的编码蛋白基本相符，而43.0kDa.31.0kDa,14.4kDa蛋白，预测为Tropic1808基因在大鼠损伤坐骨神经组织中表达的相关蛋白。结论：用亲和层析的方法，获得了大鼠损伤坐骨神经组织中Tropic1808基因特异表达的相关蛋白，为进一步研究其结构和功能提供了实验依据。     

睫状神经营养因子对培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的 :观察睫状神经营养因子 (CNTF)对培养大鼠视网膜神经节细胞 (RGCs)凋亡的影响。方法 :15只生后 2～ 3dWistar大鼠 ,视网膜采用胰酶消化法制成细胞悬液后接种于 2 4孔培养板 (每孔 1× 10 5个细胞 ) ,取培养 72h的细胞行免疫细胞化学鉴定。将培养的细胞随机分为对照组、三种浓度CNTF组 (10ng/ml、2 0ng/ml、4 0ng/ml) ,培养 72h后采用TUNEL法和流式细胞仪检测培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡的变化。结果 :培养 72h的细胞 90 %以上为视网膜神经节细胞 ,TUNEL法检测显示培养细胞有凋亡细胞存在 ,流式细胞仪检测结果显示对照组凋亡率为 (11.95± 4 .4 0 0 ) % ,10ng/ml、2 0ng/ml、4 0ng/mlCNTF组凋亡率分别为(7.883± 2 .14 6 ) % ,(6 .4 17± 3.317) % ,(8.0 33± 2 .0 2 3) % ,CNTF组凋亡率显著降低 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 ) ,其中2 0ng/mlCNTF组差异非常显著 (P <0 .0 1)。结论 :CNTF能降低培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡率 ,其促视网膜神经节细胞存活可能是通过减少视网膜神经节细胞凋亡来起作用 ,而高浓度CNTF对视网膜神经节细胞有毒副作用。     

不同年龄大鼠心肌中CNTF表达的免疫组织化学研究

目的 :为了解睫状神经营养因子 ( CNTF)在大鼠生后心肌中的表达变化。方法 :用免疫组织化学法和计算机图像处理系统 ,研究 1天龄、1月龄、2月龄、3月龄、2年龄大鼠心肌中 CNTF免疫反应的变化。结果 :在各年龄组中均存在阳性免疫反应 ,阳性免疫反应见于心肌细胞膜上 ,各年龄组的平均灰度值分别为 2 5 .12± 0 .5 4、5 0 .12± 0 .6 7、5 7.2 5± 0 .6 2、43 .81± 0 .83、3 2 .14± 0 .73。结论 :睫状神经节因子在出生后的心肌细胞内即存在 ,其含量随心肌的发育而有所变化     

大鼠坐骨神经损伤后肌肉组织乙酰胆碱酯酶的变化

目的：探讨坐骨神经损伤后不同时间点大鼠小腿肌肉组织乙酰胆碱酯酶（AChE)的变化。方法：建立大鼠坐骨神经损伤的动物模型，制备特异识别神经系统AChE的单克隆抗体，以该抗体作为一抗，酶标羊抗鼠IgG作为二抗，建立酶联免疫检测方法；测定正常对照组，坐骨神经损伤后0．5，3，12h组，坐骨神经断点，胫神经及腓总神经所支配的肌肉组织AChE含量，结果：坐骨神经损伤0．5h后，断点处AChE含量最高，随时间延长逐渐降低，胫神经，腓总神经支配的肌肉组织中AChE 含量0．5h 时最低，3h时最高，12h时降低，结论：坐骨神经损伤后，断点及其远端神经支配的肌肉组织中AChE的变化呈时间依赖性，但变化不一。     

HRP逆行示踪对人工组织神经移植物辅加NRF修复大鼠坐骨神经缺损的评价

目的：用HRP逆行示踪法评价人工组织神经移植物辅加神经再生素修复大鼠周围神经缺损的效果。方法：壳聚糖套管和聚乙醇酸纤维组成人工组织神经移植物并辅加神经再生素，修复大鼠的坐骨神经缺损（10mm)。术后24周时，进行大鼠HRP逆行示踪试验。结果：脊髓及背根神经节中均出现数量不等的被HRP标记的神经元胞体。结论：人工组织神经移植物辅加神经再生素对缺损的神经修复具有良好的桥梁作用和促神经生长作用。     

坐骨神经损伤后生长相关蛋白表达的免疫组化研究

目的：探讨周围神经在损伤后远侧端生长相关蛋白（GA9－43）的表达。方法：切除SD大鼠－侧坐骨神经5mm,造成坐骨神经缺损伤模型,两周后用免疫组化法检测损伤远侧端神经组织中GAP－43的表达,结果：损伤神经远侧端雪旺细胞表可见棕色阳性产物,而正常神经组织中未见阳性反应产物。结论：损伤神经远侧端雪旺细胞中可见GAP－43表达,在正常神经组织中GAP－43低表达或无表达。     

肌电图对肌肉注射引起坐骨神经损伤诊断及预后的临床意义

目的：了解肌肉注射损伤坐骨神经程度及预后的关系;方法：用Ｊ—Ｄ２型的肌电图仪对４３例肌肉注射损伤坐骨神经患者进行常规肌电图检查;结果：肌肉注射直接损伤坐骨神经和间接药物浸润性损伤有插入电位延长、肌休状态有纤颤正相电位,轻收缩无多相电位时限不长,最大收缩单纯相或单纯混合相。较重患者轻收缩无运动单位电位。感觉及运动神经传导速度变慢;结论：肌电图检查可明确坐骨神经有无直接或间接神经源性损伤     

神经营养因子mRNA在损伤肝组织中的表达

目的 :检测大鼠肝脏损伤后 3种神经营养因子的mRNA表达的规律 ,为进一步探讨肝脏再生的分子机制提供新线索。方法 :提取成年大鼠部分肝切除后再生肝中的总RNA ,利用半定量RT -PCR法分析BDNF ,GDNF和FGF - 2基因在不同时间点的表达水平和变化规律。结果 :GDNFmRNA在正常时几乎检测不到 ,部分肝切除后 ,其表达水平明显上升。BDNF和FGF - 2的mRNA水平在手术后也同样有显著的升高。结论 :以上结果表明 ,这三个神经营养因子可能参与了肝再生的过程。     

交变磁场对大鼠坐骨神经再生的影响

为研究交变磁场对大鼠坐骨神经横断损伤后再生修复的影响，切除２４只大鼠双侧坐骨神经股部的一部分，用硅管桥接神经两断端，其间距６ｍｍ，术后将大鼠随机分为实验组和对照组。实验组大鼠置于强度为０．５ｍＴ的交变磁场中饲养，分别于术后２、４、１６周观察神经再生状况。结果显示，术后２周可测出实验组再生神经冲动传导潜速率；用ＣＢ－ＨＲＰ逆行示踪在相应脊髓节段能标记出神经元胞体；术后４周和１６周，实验组大鼠坐骨神经传导潜速率明显快于对照组（Ｐ＜０．００１）。图像分析显示，实验组的再生神经轴突直径、髓鞘厚度和再生神经血管面积明显优于对照组；电镜下见实验组再生神经比对照组有较多的微丝、微管和线粒体。表明交变磁场可促进大鼠缺损的坐骨神经再生