坐骨神经切断致脊髓背根神经节损伤的实验研究

坐骨神经切断致脊髓背根神经节损伤的实验研究△庞清江罗永湘＊毛宾尧＊＊李保文目前，修复周围神经损伤的显微外科技术已相当精湛，但神经损伤后的恢复效果仍不尽人意。究其原因，虽然与周围神经损伤的部位、程度、修复时间及方法等诸多因素有关，但周围神经损伤后导致该...     

坐骨神经损伤及神经生长因子对背根神经节中TrkA及其mRNA表达的调控

目的 研究周围神经损伤、神经再生及外源性神经生长因子对脊神经背根神经节中TrkA及TrkA mRNA表达的影响。方法 将24只SD大鼠坐骨神经从神经中段切断后，外膜缝合修复神经。实验组动物的胫后肌内每日注射NGF200U，术后3、7、14、28d，采用免疫组织化学及原位杂交方法，检查大鼠坐骨神经损伤、神经再生及外源性NGF靶肌肉注射后脊神经背根神经节中TrkA及TrkA mRNA表达。结果 正常背根神经节中有大量的神经元表达TrkA及TrkA mRNA；坐骨神经损伤后，背根神经节中TrkA的表达下降，术后7d组最低，28d接近正常；NGF靶肌肉注射后，背根神经节中TrkA的表达明显增高。结论 神经损伤后背根神经节中TrkA的表达降低，靶肌肉注射外源性NGF背根神经节中TrkA的表达增加，表明靶肌肉注射可作为NGF的有效给药途径.     

坐骨神经结扎大鼠脊髓背根神经节GDNF和NCAM表达的变化

目的 观察坐骨神经结扎大鼠脊髓背根神经节(隙G)胶质细胞源性神经营养因子(GD-NF)和神经细胞黏附分子(NCAM)表达的变化.方法 成年SD大鼠42只,随机均分为疼痛组(CCI组)和对照组(C组).CCI组行左侧坐骨神经结扎术,建立慢性限制性损伤模型;C组行假手术.分别于术前1d和术后1、3、5、7、14、21 d测机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL).采用免疫组织化学染色和适时PCR技术检测DRG中GDNF和NCAM的表达.结果 CCI组术后3、5、7、14 d MWT明显低于、TWL短于C组(P<0.01),而GDNF和NCAM表达明显高于C组(P<0.05或P<0.01).结论 坐骨神经结扎大鼠术后可出现痛阈下降,同时伴有DRG中GDNF和NCAM的表达增高.     

罗比卡因对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感钠电流的影响

目的 探讨酰胺类局麻药罗比卡因硬膜外麻醉对钠电流(INa)影响。方法 以全细胞膜片钳技术记录罗比卡因对急性分离大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感钠电流(TTX-R INa)的影响。结果 在电压钳的状态下(钳制电压Vh-90mV，刺激电压Vt0 mV)，罗比卡因(10～1000μmol／L)对TTX-R INa均有抑制作用，且呈浓度依赖性，与其他局麻药不同的是罗比卡因使TTX-R激活曲线向去极化方向移动。结论 罗比卡因对大鼠背根神经节神经元TTX-R INa有抑制作用，且使TTX-R激活曲线向去极化方向移动，这可能是罗比卡因与布比卡因不同临床效应的主要原因。     

Foxo3a和p27kip1在大鼠坐骨神经损伤后背根神经节中的表达

目的 探讨坐骨神经夹伤后Foxo3a和p27kip1在腰段背根神经节(DRG)中表达变化及其意义.方法 将成年SD大鼠随机分为正常对照组和实验组.对实验组实行坐骨神经夹伤术.运用蛋白质印迹、免疫荧光双标,研究大鼠坐骨神经夹伤后,腰段DRG中Foxo3a和p27kip1的表达、分布以及细胞增殖和轴突再生情况.结果 Foxo3a在坐骨神经夹伤后1 d表达值(7.0±3.5)开始明显下降,2 d表达值(6.0±3.8)达到最低值,随之逐渐升高,p27kip1在坐骨神经夹伤后2 d表达值(29.0±3.5)表达开始明显下降,7 d表达值(21.0±3.0)达到最低值,随之逐渐升高;Foxo3a和p27kip1分布于神经元和神经胶质细胞内且在坐骨神经夹伤后2d DRG中,Foxo3a和p27kip1在神经元细胞[(37.8±5.7)%、(43.3±4.3)%]和神经胶质细胞[(22.4±3.9)%、(13.8±3.2)%]中表达较在正常组神经元细胞[(73.6±2.5)%、(84.1±3.7)%]和神经胶质细胞[(61.3±4.4)%、(68.7±5.6)%]减少;细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和神经元生长相关蛋白(GAP-43)在坐骨神经夹伤后2 d DRG中表达值[12±2.6,15±1.9]均开始上调,PCNA在7 d表达值(25.0±3.2)达到最高点,GAP-43则保持较高水平;此外,PCNA与神经胶质细胞共定位明显,与神经元细胞几乎无共定位.结论 大鼠坐骨神经损伤后,Foxo3a和p27kip1在腰段DRG中的表达减少与神经胶质细胞增殖和轴突再生密切相关.     

氟哌利多对大鼠背根神经节细胞钠电流的影响

目的 研究氟哌利多对大鼠背根神经节细胞钠通道电流的影响。方法 在急性分离的大鼠背根神经节细胞标本上,应用全细胞膜片钳技术记录氟哌利多对钠通道电流的影响。结果3～300μmol·L-1的氟哌利多对钠电流的抑制率为14.12％～78.46％（P<0.01,n=7）,该抑制作用具有浓度依赖性。钳制电位不同,氟哌利多对钠电流的抑制作用亦不同,在Vh分别为-80mV与-60mV时,其IC50值分别为（48.72±10.67）μmol·L-1和（35.37±10.51）μmol·L-1（P<0.05,0=7）。30μmol. L-1的氟哌利多使电流-电压曲线峰值平均降低53.18％（P<0.01,n=7）,对激活曲线无明显影响（P>0.05,n=7）,但可使稳态失活曲线向超极化方向移动7.95mV,用药前、后的V1/2分别为-28.58mV和-36.06mV（P<0.01,n=7）。结论 氟哌利多对背根神经节细胞钠通道电流有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性,提示硬膜外镇痛时应用临床浓度的氟哌利多具有增强硬膜外镇痛效果的作用。     

Foxo3a和p27kip1在大鼠坐骨神经损伤后背根神经节中的表达

Objective To investigate the expression of Foxo3a and p27kip1 in lumbar dorsal root ganglia (DRG) after injury of sciatic nerve in rats. Methods Adult rats were randomly divided into control group and experimental group. The rats in experimental group were subjected to sciatic nerve clamp.Expression and distribution of Foxo3a and p27kip1 and cellular proliferation and axon regeneration in DRG was detected by western blot and immunohistochemistry. Results Foxo3a protein levels begined to reduce at 1 day (7.0 ± 3.5), reached valley at 2 day (6.0 ± 3.8) after injury, and following Foxo3a downregulation, p27kip1 protein levels begined to decrease at 2 day (29.0 ± 3.5), reached valley at 7 day (21.0± 3.0) after injury. Down-regulation of Foxo3a and p27kip1 was expressed predominantly in neurons and glial cells by double immunolabelling. Foxo3a and p27kip1 were expressed in neurons [(37.8 ± 5.7)%, (43.3 ±4.3)%] and glial [(22.4 ± 3.9)%, (13.8 ± 3.2)%] cells in sections of DRG at 2 day after injury less than neurons [(73.6 ± 2.5)%, (84.1 ± 3.7)%] and glial [(61.3 ± 4.4)%, (68.7 ± 5.6)%] cells in sections of normal DRG. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and GAP-43 were up-regulation from 2 day, and PCNA reached peak at 7 day after injury.The glial cells were the main type of cellular proliferation.Conclusion Down-regulation of Foxo3a and p27kip1 in lumbar DRG is correlated with the proliferation of glial cells and axonal regeneration after sciatic nerve injury.     

Foxo3a和p27kip1在大鼠坐骨神经损伤后背根神经节中的表达

Objective To investigate the expression of Foxo3a and p27kip1 in lumbar dorsal root ganglia (DRG) after injury of sciatic nerve in rats. Methods Adult rats were randomly divided into control group and experimental group. The rats in experimental group were subjected to sciatic nerve clamp.Expression and distribution of Foxo3a and p27kip1 and cellular proliferation and axon regeneration in DRG was detected by western blot and immunohistochemistry. Results Foxo3a protein levels begined to reduce at 1 day (7.0 ± 3.5), reached valley at 2 day (6.0 ± 3.8) after injury, and following Foxo3a downregulation, p27kip1 protein levels begined to decrease at 2 day (29.0 ± 3.5), reached valley at 7 day (21.0± 3.0) after injury. Down-regulation of Foxo3a and p27kip1 was expressed predominantly in neurons and glial cells by double immunolabelling. Foxo3a and p27kip1 were expressed in neurons [(37.8 ± 5.7)%, (43.3 ±4.3)%] and glial [(22.4 ± 3.9)%, (13.8 ± 3.2)%] cells in sections of DRG at 2 day after injury less than neurons [(73.6 ± 2.5)%, (84.1 ± 3.7)%] and glial [(61.3 ± 4.4)%, (68.7 ± 5.6)%] cells in sections of normal DRG. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and GAP-43 were up-regulation from 2 day, and PCNA reached peak at 7 day after injury.The glial cells were the main type of cellular proliferation.Conclusion Down-regulation of Foxo3a and p27kip1 in lumbar DRG is correlated with the proliferation of glial cells and axonal regeneration after sciatic nerve injury.     

骨癌痛大鼠背根神经节电压依赖性钠通道Nav1.8 mRNA的表达

目的 探讨骨癌痛大鼠背根神经节(DRG)电压依赖性钠通道Nav1.8 mRNA的表达.方法 成年雌性SD大鼠16只,体重180～200 g,随机分为对照组和骨癌痛组,每组8只.对照组腹腔注射10%水合氯醛300 mg/kg麻醉后处死,冰上取L5,6 DRG.骨癌痛组采用胫骨内注射肿瘤细胞的方法制备大鼠骨癌痛模型,术前及术后14 d测定大鼠机械痛阈和CO2激光热痛阈,术后14 d处死大鼠,取L5,6 DRG.采用定量PCR方法测定DRG Nav1.8 mRNA的表达.结果 骨癌痛组机械痛阈与热痛阈较术前明显降低(P＜0.01);与对照组相比,骨癌痛组术后14 d DRG Na 1.8 mRNA表达上调(P＜0.01).结论 骨癌痛大鼠DRG Nav1.8 mRNA表达上调,该通道可能参与骨癌痛的发生.     

神经病理性疼痛大鼠背根神经节钠离子通道β亚基mRNA表达的变化

目的观察神经病理性疼痛大鼠背根神经节（DRG）电压门控性钠离子通道β亚基mRNA表达的变化。方法雄性sD大鼠32只，体重250～400g，随机分为2组，假手术组（Sham组，n=12）和神经病理性疼痛组（PSNL组，n=20），PSNL组参照Seltzer等的方法建立大鼠坐骨神经部分结扎模型，Sham组手术操作与PSNL组基本相同，但不结扎坐骨神经。于PSNL前及PSNL1、2、3、5、8、11、14、28d测定机械痛阈和热痛阈；PSNL14d时分别处死PSNL组的8只大鼠和Sham组的4只大鼠，取L4,5，的DRG，做冰冻切片，以地高辛标记的三种β比较，PSNL组PSNL3～28d时热痛阈和机械痛阈降低（P＜0．01）；各组区亚基mRNA表达无明显变化，β2亚基mRNA表达较少，与Sham组和PSNL组结扎对侧比较，PSNL组结扎侧β2亚基mRNA表达增加（P＜0．05）。结论DRG中钠离子通道β3亚基mRNA表达上调在神经病理性疼痛中起重要作用。     

神经病理痛大鼠背根神经节细胞钙电流的变化

目的 观察神经病理痛大鼠背根神经节细胞钙通道电流的变化。方法建立改良脊神经结扎神经病理痛模型,在急性分离的神经病理痛及正常大鼠背根神经节细胞标本上,应用全细胞膜片钳技术记录钙通道电流。结果 神经病理痛组大背根神经节细胞的钙通道的电流-电压曲线峰值为(-66±lO)pA/pF(n=11),较正常组的(-105±13)pA,pF(n=9)降低(P<0.01)。神经病理痛组大背根神经节细胞的钙通道快速相失活曲线向去极化方向移动3.22 mV,疼痛组与对照组的V1/2分别为(-41.8±0.3)mV(n=11)和(-45.0±0.8)mv(n=9)(P<0.05)。两组钙电流激活曲线差异无显著性(P>0.05)。结论神经病理痛鼠大背根神经节细胞钙电流较正常降低,钙电流快速相失活曲线向去极化方向移动,这可能是痛觉过敏、痛性感觉异常等神经病理痛症状的原因。     

骨癌痛大鼠背根神经节酸感受离子通道3表达的变化

目的 探讨骨癌痛大鼠背根神经节酸感受离子通道3(ASIC3)表达的变化.方法 雌性SD大鼠24只,3～4周龄,体重180 ～ 220 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组∶假手术组(S组,n=8)和骨癌痛组(P组,n=16).P组于左侧胫骨骨髓腔内注射5μl Walker256肿瘤细胞制备骨癌痛模型,S组注射生理盐水5μl.分别于接种当天(T0)和接种后1、3、5、7、9、11、14 d(T1～7)时,称量大鼠体重,测定机械痛阈.S组于T7时,P组于T4、T7时,取大鼠胫骨,行病理学检查和影像学检查,观察肿瘤细胞的生长和骨质破坏状况,采用免疫荧光法测定背根神经节ASIC3的表达.结果 P组骨髓腔内出现了肿瘤细胞浸润,胫骨发生病理学损伤,胫骨破坏明显,多处骨皮质缺失.与S组比较,P组T3～T7时体重降低,T4～T7时机械痛阈降低,T7时背根神经节ASIC3表达上调(P＜0.05).结论 骨癌痛大鼠背根神经节ASIC3表达上调,提示该通道可能参与骨癌痛的病理生理机制.     

神经病理性痛大鼠背根神经节TRESK mRNA表达的变化

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节(DRG) 孔钾离子通道TRESK mRNA表达的变化.方法 雄性SD大鼠32只,体重22、0～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n=16):假手术组(S组)和神经病理性痛组(NP组).采用坐骨神经分支选择性损伤法制备神经病理性痛模型.S组仅暴露神经,不结扎.于术前1 d和术后1、3、5、7、14 d取8只大鼠,测定左后肢机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于术前1 d和术后14 d痛阈测定结束后取L4,5术侧DRG,采用RT-PCR法测定TRESK mRNA的表达.结果 与S组比较,NP组MWT明显降低,DRG TRESK mRNA表达明显下调(P<0.05或0.01),TWL差异无统计学意义(P>0.05).结论 神经病理性痛大鼠DRG TRESK mRNA表达下调,该变化可能与神经病理性痛的形成有关.

Abstract：

Objective To evaluate the changes in the expression of diplopore potassium ion channel TRESK mRNA in dorsal root ganlion (DRG) in rats with neuropathic pain (NP) .Methods Thirty-two male SD rats weighing 220-250 g were randomly divided into 2 groups ( n = 16 each) : group sham operation (group S) and group NP. NP was induced by ligation and severance of left tibial and common fibular nerves according to the technique described by Decosterd. Eight rats in each group were sacrificed 1 day before and 14 day after operation and their L4,5 DRGs in the operated side were isolated for determination of TRESK mRNA expression by RT-PCR. In the remaining 8 rats in each group paw withdrawal threshold to mechanical stimuli ( MWT) and paw withdrawal latency to a thermal nociceptive stimulus (TWL) were measured at 1 day before (baseline) and 1, 3, 5, 7, 14 day after operation. Results MWT was significantly lower in group NP than in group S. The TRESK mRNA expression in L4,5 DRGs in the operated side was significantly decreased after operation as compared with the baseline before operation in group NP and was significantly lower in group NP than in group S. Conclusion The development and maintenance of NP may be closely related with down-regulation of TRESK mRNA.     

拉科酰胺对神经病理性痛大鼠背根神经节Nav1.8表达的影响

目的 探讨拉科酰胺对神经病理性痛大鼠背根神经节(DRG)Nav1.8表达的影响.方法 SPF级雌性SD大鼠36只,体重120～130 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、模型组(M组)、拉科酰胺组(L组).M组和L组将钢棒插入椎间孔压迫L5DRG制备神经病理性痛模型.于术前2 d、术后2,4、6、7、8、9、10 d(T0-7)时测定机械痛阈.于T4时,S组和L组腹腔注射拉科酰胺20 mg/kg(生理盐水溶解至0.5 ml),M组注射生理盐水0.5 ml,2次/d,连续4 d.每天末次给药后测定痛阈.于T7时痛阈测定后取术侧L5DRG,采用RT-PCR法和免疫组织化学法测定Nav1.8mRNA和蛋白表达水平.结果 与S组比较,M组和L组T1～7时机械痛阚降低,Nav1.8 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05);与M组比较,L组T4～7时机械痛阈升高,Nav1.8 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05).结论 拉科酰胺减轻大鼠慢性神经病理性痛的机制与下调损伤DRG的Nav1.8表达有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of lacosamide on expression of Nav1 .8 in dorsal root ganglia (DRG) in a rat model of chronic neuropathic pain.Methods Thirty-six female specific-pathogen-free (SPF)SD rats were randomly assigned into 3 groups ( n = 12 each): sham operation group (group S), model group (group M) and lacosamide group (group L) . Chronic neuropathic pain was produced by insertion of a small stainless steel rod (4.00 mm in length and 0.63 mm in diameter) into the L, intervertebral foramen in the rat, producing a chronic steady compression of the DRG in M and L groups. The mechanical threshold was measured 2 days before operation and on the 2, 4, 6, 7, 8, 9 and 10 days after operation (T0-7 ) . Intraperitoneal lacosamide 20mg/kg (in normal saline 0.5 ml) was injected at T4-7, twice a day in S and L groups. In group M, normal saline 0.5 ml was injected at T4-7 twice a day and the mechanical threshold was measured after the last administration everyday . The L, DRG on the operated side was removed after measurement of pain threshold to detect the expression of Na, 1.8 mRNA and protein by RT-PCR and immuno-histochemistry respectively. Results Compared with group S, the mechanical pain threshold was significantly decreased at T1-7 and the expression of Navl .8 mRNA and protein was up-regulated in M and L groups ( P < 0.05) . Compared with group M, the mechanical pain threshold was significantly increased at T4-7 and the expression of Nav 1.8 mRNA and protein was down-regulated in group L ( P < 0.05) . Conclusion The mechanism by which lacosamide reduces chronic neuropathic pain is related to the down-regulation of the expression of Nav 1.8 in rat DRG.     

神经病理性痛大鼠背根神经节JNK的表达

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节C-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)的表达.方法 雄性SD大鼠88只,体重200～250 g.随机分为2组(n=44):假手术组(SH组)和慢性压迫性损伤组(CCI组).结扎大鼠右侧坐骨神经建立CCI模型.各组取8只大鼠,于CCI前、CCI后1、3、5、7、14 d时,测定热刺激缩足反射潜伏期(TWL).各组于CCI前、CCI后1、3、5、7、14 d时,各取6只大鼠测定背根神经节磷酸化JNK(p-JNK)的表达.结果 与CCI前比较,CCI组CCI后各时点TWL降低,p-JNK表达增加(P＜0.01);与SH组比较,CCI组CCI后3、5、7、14 d时TWL降低,p-JNK表达增加(P＜0.01).结论 背根神经节JNK表达升高可能参与了大鼠神经病理性痛的形成.     

神经病理性痛大鼠背根神经节神经元电生理学的改变

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节(DRG)神经元电生理学的改变.方法 成年雄性sD大鼠20只,周龄3～4周,体重100～150 g,随机分为对照组(C组,n=5)和神经病理性痛组(NP组,n=15).采用坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)法制备神经病理性痛模型.于CCI前1d和CCI 后第4天测定热痛阈和机械痛阈.痛阈测定后,急性分离大鼠DRG神经元,采用全细胞膜片钳技术记录其电生理学活动.结果 与CCI前1d比较,NP组CCI后第4天热痛阈和机械痛阈均降低(P<0.05);与c组比较,NP组DRG小神经元基强度降低,膜电位、重复放电率和自发放电率均升高(P<0.05或0.01),阚电位和超射值差异无统计学意义(P>0.05),DRG中神经元膜电位、阈电位、自发放电率升高,基强度降低(P<0.05或0.01),超射值差异无统计学意义(P>0.05),DRG大神经元阈电位升高(P<0.05),其余指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 神经病理性痛大鼠DRG神经元电生理学的改变主要发生在DRG中、小神经元上,表现为兴奋性升高、重复放电和自发放电现象增多.     

神经病理性痛大鼠背根神经节神经元高电压激活钙电流的变化

目的 观察神经病理性痛大鼠损伤和邻近未损伤背根神经节神经元高电压激活钙电流的变化.方法 雄性SD大鼠,周龄4～6周,采用结扎左侧L5脊神经的方法制备神经病理性痛模型.于结扎后14 d时采用酶消化法急性分离结扎侧邻近未损伤L4背根神经节神经元(L4组)和损伤L5背根神经节神经元(L5组),另取正常大鼠L4.5背根神经节神经元作为对照组(C组).采用全细胞膜片钳技术记录神经元高电压激活钙电流,绘制钙电流激活曲线及稳态失活曲线;记录各亚型高电压激活钙电流.结果 与C组比较,L4组和L5组峰电流密度降低,L5组钙电流激活曲线向超极化方向移动,N型钙电流比例升高,L型钙电流比例降低(P＜0.05);与L4组比较,L5组峰电流密度降低,钙电流激活曲线向超极化方向移动,N型钙电流比例升高,L型钙电流比例降低(P＜0.05).3组钙电流半数失活电压差异无统计学意义(P＞0.05).结论 损伤背根神经节神经元高电压激活钙电流可能在诱发大鼠神经病理性痛的过程中起主要作用.     

背根神经节Nav1.7在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用

目的 评价背根神经节(DRG) Nav1.7在大鼠糖尿病神经病理性痛中的作用.方法 雌性Wistar大鼠32只,月龄3个月,体重180～220 g.采用腹腔注射链脲菌素65 mg/kg的方法制备糖尿病神经病理性痛模型.模型制备成功后第10天鞘内置管.采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n＝8),正常对照组(C组):不做任何处理;假手术组(S组):仅鞘内置管;糖尿病神经病理性痛(DNP组):制备糖尿病神经病理性痛模型,并鞘内置管;Nav1.7阻断剂组(E组):制备糖尿病神经病理性痛模型,鞘内置管后第4天鞘内注射Nav1.7阻断剂ProTx-Ⅱ10 μg/kg,DNP组和S组注射等容量生理盐水.于鞘内注射后1h测定机械缩足阈值(MWT)和神经传导速度(NCV),随后处死大鼠,取L4-6 DRG,采用免疫组化法和Western blot法测定DRG Nav1.7蛋白的表达水平,采用RT-PCR法测定Nav1.7mRNA的表达水平.结果 与C组比较,DNP组和E组MWT和NCV明显下降,DRGNav1.7 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05),S组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与DNP组比较,E组MWT升高(P<0.05),NCV、DRG Nav1.7 mRNA及其蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DRG Nav1.7参与了大鼠糖尿病神经病理性痛的维持.