Hsa_circ_0001946/miR-7/KLF4轴调控乳腺癌进展的研究

目的探讨环状RNAhsa_circ_0001946在乳腺癌组织中的表达情况及hsa_circ_0001946/miR-7/Kruppel样因子4（KLF4）轴调控乳腺癌细胞发生侵袭和转移的机制。方法收集2018年6月至2019年8月在温州医科大学附属第三医院切除的乳腺癌组织标本及其癌旁正常乳腺组织标本91例。采用实时荧光定量PCR法检测乳腺癌及其癌旁正常组织中hsa_circ_0001946、miR-7、KLF4mRNA表达情况及乳腺癌细胞株MCF-7中hsa_circ_0001946、miR-7、KLF4、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）mRNA表达情况;采用细胞侵袭实验分析乳腺癌MCF-7细胞株的侵袭能力;采用Westernblot法检测乳腺癌细胞株MCF-7中E-cadherin及N-cadherin蛋白表达情况。结果与癌旁正常乳腺组织比较,乳腺癌组织中hsa_circ_0001946和KLF4mRNA表达水平均升高,miR-7表达水平下降（均P＜0.05）。与正常乳腺组织、乳腺导管原位癌组织比较,乳腺浸润性导管癌组织中hsa_circ_0001946mRNA表达水平升高（均P＜0.05）。分析82例乳腺浸润性导管癌患者发现,有淋巴结转移者hsa_circ_0001946mRNA表达水平高于无淋巴结转移者（P＜0.05）。Pearson相关显示,乳腺癌组织中hsa_circ_0001946mRNA的表达与miR-7的表达呈负相关（r=-0.418,P＜0.05）,miR-7的表达与KLF4mRNAmRNA的表达呈负相关（r=-0.340,P＜0.05）。与阴性对照组相比,转染sh-hsa_circ_0001946组MCF-7细胞中miR-7表达升高,KLF4mRNA表达下降（均P＜0.05）;与阴性对照组相比,转染miR-7mimics组MCF-7细胞中KLF4mRNA表达下降（P＜0.05）;与阴性对照组相比,转染sh-hsa_circ_0001946组侵袭细胞数减少（P＜0.05）;与阴性对照组相比,转染KLF4siRNA组MCF-7细胞中E-cadherinmRNA及蛋白表达水平均升高,N-cadherinmRNA及蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）。结论Hsa_circ_0001946在乳腺癌细胞中表达升高,可通过miR-7/KLF4调控轴使癌细胞发生上皮-间质转化,促进癌细胞的侵袭和转移。     

环状RNACdr1as/miR-7/SP1轴调控乳腺癌细胞侵袭和转移的研究

目的探讨环状RNACdr1as/miR-7/SP1轴调控乳腺癌细胞发生侵袭和转移的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR技术检测乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞转染miR-7模拟物、sh-Cdr1as、转录因子SP1siRNA前后,正常乳腺MCF-10A细胞及乳腺癌组织中环状RNACdr1as、miR-7、SP1mRNA的表达水平;MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）mRNA的表达水平;采用Transwell实验分析MDA-MB-231、MCF-7细胞的侵袭和迁移能力;Westernblot法检测MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-cadherin及Vimentin蛋白的表达情况。结果与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞环状RNACdr1as表达上调,miR-7表达下调,SP1mRNA表达上调（均P＜0.05）。与转染前相比,MCF-7、MDA-MB-231细胞转染sh-Cdr1as后,miR-7表达上调（均P＜0.05）,SP1mRNA表达下调（均P＜0.05）;而转染miR-7mimics后,SP1mRNA表达下调（均P＜0.05）。与转染前相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞转染sh-Cdr1as后,侵袭细胞数明显减少（均P＜0.05）。与乳腺导管原位癌患者相比,乳腺浸润性导管癌环状RNACdr1as表达上调（P＜0.05）;与无腋窝淋巴结转移患者相比,有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者环状RNACdr1as表达上调（P＜0.05）;Pearson相关性分析显示环状RNACdr1as与miR-7的表达存在负相关（r=-0.541,P＜0.05）,miR-7与SP1mRNA的表达也存在负相关（r=-0.467,P＜0.05）。MDA-MB-231、MCF-7细胞转染SP1siRNA后,E-cadherinmRNA、蛋白表达均上调（均P＜0.05）,VimentinmRNA、蛋白表达均下调（均P＜0.05）。结论乳腺癌细胞环状RNACdr1as表达上调,通过环状RNACdr1as/miR-7/SP1调控轴促使癌细胞发生上皮间质转化,使乳腺癌细胞发生侵袭和转移。环状RNACdr1as可能成为乳腺癌治疗的新靶点。     

MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调（P<0.01）;而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05）,并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）;转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。     

miR-384增加乳腺癌MCF-7细胞多西他赛敏感性

【摘要】 目的 探讨miR-384对乳腺癌MCF-7细胞多西他赛（DOC）敏感性的影响。 方法 乳腺癌MCF-7细胞分成Control组（空白对照）、miR-NC组(转染模拟物阴性对照）、miR-384组(转染miR-384模拟物）、miR-NC+DOC组（转染模拟物阴性对照,DOC处理）、miR-384+DOC组（转染miR-384模拟物,DOC处理）,MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡。在线靶基因预测软件预测性别决定区Y框蛋白4(SOX4)可能是miR-384的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。Western blot测定细胞中SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4和miR-384模拟物共转染,以DOC处理,检测SOX4对上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结果 与miR-NC组比较,miR-384组和miR-NC+DOC组细胞中miR-384表达水平升高,细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。与miR-NC+DOC组比较,miR-384+DOC组细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。miR-384靶向抑制SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4能够逆转上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结论 miR-384靶向调控SOX4,增加乳腺癌MCF-7细胞DOC敏感性。     

miR-135b-5p通过靶向下调XBP1增强MCF-7/DOXR 细胞对阿霉素敏感性的机制

【摘要】 目的 探讨miR 135b 5p通过调控X盒结合蛋白（XBP1）对MCF-7/DOXR细胞阿霉素敏感性的机制。方法 采用Westernblot检测XBP1的表达水平;RT-qPCR法检测XBP1 mRNA在乳腺癌细胞MCF 7和乳腺癌阿霉素耐药MCF-7/DOXR细胞中的表达水平以及miR-135b 5p的表达水平;CCK-8检测MCF 7/DOXR细胞的增殖情况;Annexin-V-FITC双染流式细胞术检测MCF-7/DOXR细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因验证miR-135b-5p与XBP1的调控关系。结果 XBP1在乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7/DOXR细胞中均高表达（P＜0.05）,敲降XBP1可显著抑制MCF-7/DOXR细胞增殖并促进了细胞凋亡（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因证实,XBP1是miR-135b-5p的潜在靶基因,miR-135b-5p靶向下调XBP1的表达水平（P＜0.05）。实验进一步证实,过表达miR-135b-5p下调XBP1进而显著抑制MCF-7/DOXR细胞增殖并诱导细胞凋亡（P＜0.05）。结论 miR-135b-5p通过下调XBP1增强MCF-7/DOXR细胞对阿霉素的敏感性。     

miR-99b-5p通过靶向TRIB1基因调控乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨miR-99b-5p靶向Tribbles同源蛋白1(Tribbles pseudokinase 1,TRIB1)基因调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡。方法采用RT-PCR检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达水平,采用Western blotting检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中TRIB1蛋白表达量。在MCF-7细胞中转染miR-99b-5p mimics或mimics对照,分别记为miR-99b-5p组和miR-NC组,RT-PCR检测细胞中miR-99b-5p表达变化,Western blotting检测TRIB1蛋白表达量,MTT法检测细胞增殖能力,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-99b-5p和TRIB1的靶向关系。结果与人乳腺上皮细胞HBL-100比较,乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量明显降低(P < 0.01),而TRIB1蛋白的表达明显升高(P < 0.01)。与miR-NC组比较,miR-99b-5p组MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量升高(P < 0.05),TRIB1蛋白表达水平降低(P < 0.05),细胞增殖能力减弱(P < 0.05),细胞凋亡率升高(P < 0.05)。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,miR-99b-5p能够明显降低TRIB1-Wt MCF-7细胞相对荧光素酶活性(P < 0.01),而对TRIB1-Mut MCF-7细胞相对荧光素酶活性无明显影响(P>0.05)。结论miR-99b-5p在乳腺癌MCF-7细胞中呈低表达,TRIB1蛋白呈高表达,过表达miR-99b-5p能够靶向抑制TRIB1阻碍MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡。     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

MiR433 靶向调控Notch1 逆转人乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性

目的探讨miR-433在多西他赛对乳腺癌耐药机制中的作用。方法将MCF-7乳腺癌细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他 赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞（MCF-7/DOX）,并用miR-433 抑制剂及对照剂转染MCF-7/DOX细胞,采用酶标仪 （BioTek）测量吸光度和FACS流式细胞仪检测来评估miR-433的功能和作用;通过生物信息学分析、荧光素酶报告基因测定法 等技术确定miR-433的下游靶标。结果实时定量PCR结果显示miR-433在MCF-7/DOX细胞中的表达下调;细胞活力测定结 果表明miR-433抑制剂能促进产生多西他赛耐药,并减弱MCF-7细胞的凋亡,而miR-433过表达能增强多西他赛的敏感性并且 诱导MCF-7/DOX细胞凋亡。荧光素酶报告基因测定结果显示在miR-433表达显著下调的MCF-7细胞中,Notch1的mRNA和 蛋白质表达水平明显增强;miR-433mimics转染的MCF-7/DOX细胞与对照组（mimics-Ctrl）相比,Notch1的mRNA和蛋白表达 显着降低。结论miR-433可通过抑制Notch1的表达来逆转乳腺癌对多西他赛的耐药性,继续发挥药物的有效性。     

MicroRNA-143对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨microRNA-143（miR-143）对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭、迁移和增殖的影响。方法在脂质体介导下将miR-143抑制剂（miR-143 inhibitors）转染入MCF-7细胞,以inhibitor negative control（inhibitor NC）作为阴性对照。通过MTS试剂盒检测细胞增殖能力,以Transwel 侵袭实验和迁移实验分别检测细胞侵袭能力和迁移能力。结果（1）miR-143 inhibitors组与inhibitor NC组间细胞增殖活性无明显差异（P＞0.05）;（2）Transwel 侵袭及迁移实验显示转染miR-143 inhibitors后,MCF-7细胞的侵袭及迁移能力均明显增强（P＜0.05）。结论 miR-143对人乳腺癌MCF-7细胞的侵袭及迁移能力存在负性调控作用,可能成为乳腺癌治疗的潜在靶点。     

miR-133过表达对结肠癌细胞SW480凋亡、增殖和裸鼠成瘤的影响

目的:探究miR-133过表达对结肠癌细胞SW480凋亡、增殖和裸鼠成瘤的影响。方法:将miR-133 mimic转染至SW480细胞,将细胞分为3组:对照组、Scramble组和miR-133 mimic组。RT-PCR检测miR-133表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western 印迹检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、c-Myc蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖倍数;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;裸鼠右侧腋窝处皮下注射SW480细胞悬液建立裸鼠移植瘤模型,检测肿瘤重量,RT-PCR检测肿瘤组织miR-133表达水平,免疫组化检测Caspase-3、Ki67阳性细胞数。结果:与对照组相比,miR-133 mimic组miR-133表达升高（F=136.70,P＜0.05）,细胞凋亡率升高（F=59.995,P＜0.05）,Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9表达升高（F=726.85、138.76、55.85,均P＜0.05）,c-Myc蛋白表达水平降低（F=88.98,P＜0.05）,细胞活力降低（F=48.50,P＜0.05）,克隆形成率降低（F=42.63,P＜0.05）,肿瘤重量降低（t=1.788,P＜0.05）,肿瘤组织miR-133表达水平升高（t=1.043,P＜0.05）,Caspase-3阳性细胞数升高（t=1.167,P＜0.05）,Ki67阳性细胞数降低（t=1.557,P＜0.05）。结论:miR-133过表达诱导SW480细胞凋亡,抑制SW480细胞增殖和裸鼠肿瘤的形成。     

miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-376c-3p在乳腺癌中的表达水平、生物学功能及分子调控机制.方法:通过实时荧光定量PCR检测乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞中miR-376c-3p表达水平;然后,用miR-376c-3p mimic转染乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞,用平板克隆实验、划痕实验以及Transwell...     

MiR-671-3p靶向DEPTOR而抑制乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的 研究miR-671-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭生物学功能的影响及其可能的作用机制。方法 以实时荧光定量PCR方法检测正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）与乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3）中miR-671-3p表达情况;检测miR-671-3p 在MCF-7细胞中的转染效率;通过CCK-8法检测miR-671-3p对MCF-7细胞增殖的影响;通过Transwell实验、划痕实验检测miR-671-3p对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响;Targetscan预测miR-671-3p的靶基因,并通过双荧光素酶法和Western blot法对靶基因DEPTOR进行验证,并检测DEPTOR的表达。结果 miR-671-3p在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3的表达量低于乳腺正常上皮细胞MCF-10A的表达。通过mimics、inhibitor分别促进、抑制miR-671-3p在MCF-7细胞中的表达后,结果显示miR-671-3p对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）,对肿瘤细胞的侵袭和迁移有抑制作用（P<0.05）。双荧光素酶结果 显示DEPTOR蛋白为miR-671-3p的直接作用靶点,过表达miR-671-3p可直接抑制DEPTOR蛋白的表达。结论 miR-671-3p直接靶向作用于DEPTOR蛋白从而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF7细胞生长的研究

目的探讨S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDC shRNA表达载体(pGPU6 SAMDC)转染乳腺癌MCF 7细胞,采用RT PCR和Western blot技术分别检测SAMDC mRNA和蛋白质表达水平;细胞增殖实验（CCK 8法）和细胞周期分析评价SAMDC基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖的影响,肿瘤侵袭实验观察SAMDC基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7侵袭活性的影响。结果SAMDC shRNA表达载体转染后,MCF 7细胞SAMDC mRNA水平下调43.8％,蛋白表达水平下降66.5％;MCF 7细胞的增殖活性和侵袭能力均受到明显抑制,细胞增殖活性下降37%,细胞周期分析G1期细胞增加。结论SAMDC基因沉默可通过延长细胞周期的G1期而抑制乳腺癌MCF7细胞的增殖,并能降低癌细胞侵袭活性,提示SAMDC可作为乳腺癌基因治疗的靶分子。     

黄芩苷抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MCF-7,观察黄芩苷对乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的影响及其作用机制.方法 实验分为正常组、模型组、黄芩苷组、miR-126组、LNA组、LNA-126组和LNA-126+黄芩苷组.采用RT-PCR检测miR-126、miR-145、miR-100和let-7c的表达水平,MTT法检测细...     

TBB对乳腺癌细胞miR-411表达及细胞凋亡的影响

目的 观察TBB作用下乳腺癌细胞中miR-411的表达,研究过表达miR-411对乳腺癌细胞凋亡和细胞周期改变的影响。方法 Real-time PCR验证生物芯片检测的差异miRNAs,流式细胞术分析转染前后细胞周期及细胞凋亡情况,针对miR-411进行下游靶基因预测,以real-time PCR验证预测结果。结果 TBB作用下MCF-7细胞株中miR-411显著升高;与对照组相比,转染组早期凋亡细胞比例升高;FoxO1 mRNA表达含量显著增高。结论TBB能够改变乳腺癌MCF-7细胞株中miR-411的表达,过表达miR-411能够抑制乳腺癌细胞株的凋亡,其机制可能与通过影响FoxO1表达有关。     

转录因子ETS-1对乳腺癌细胞增殖作用的影响

目的:研究转录因子ETS-1通过调节miR-96对乳腺癌细胞增殖的影响.方法:通过RNAi技术下调乳腺癌细胞MCF-7中ETS-1的表达后,检测miR-96的表达;运用生物信息学方法预测转录因子ETS-1的结合位点,染色体免疫共沉淀反应加以验证;将miR-96转染入乳腺癌细胞MCF-7,观察对乳腺癌细胞增殖和克隆形成的影响.结果:抑制ETS-1表达,miR-96在乳腺癌细胞MCF-7中的表达明显上调(P<0.01);ETS-1通过结合在miR-96启动子区域,调节miR-96的表达;与对照组比较,过表达miR-96后,MCF-7的增殖能力和克隆形成能力均明显增强(P<0.01).结论:ETS-1通过调节miR-96的表达,影响乳腺癌细胞增殖和克隆形成能力,有望在乳腺癌治疗中成为新的靶标.     

黄芩苷通过上调miR-126诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察黄芩苷对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制.方法 用qRT-PCR检测miR-126的表达变化,Western-blot检测Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、p-p38和p53的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 miR-126在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达比正常乳腺细胞低,黄芩苷干预乳腺癌细胞后miR-126上调最为明显(P<0.05).用miR-126 mimics、miR-126 inhibitors转染乳腺癌细胞,Western-blot显示黄芩苷及miR-126 mimics作用于人乳腺癌细胞后Bcl-2表达水平下降,Caspase-9和Caspase-3的裂解产物、p-p38、p53表达增加,差异有统计学意义(P<0.05).MTT法显示黄芩苷和miR-126均可抑制乳腺癌细胞的增殖,流式细胞术显示黄芩苷与miR-126 mimics促进癌细胞凋亡.结论 黄芩苷可以抑制乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与通过上调miR-126调节凋亡相关基因有关.     

实时定量PCR检测miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞中的表达及其靶基因预测

目的分析miR-373*、miR-200c在乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)和MCF-7乳腺癌细胞株中的差异表达。方法 Trizol法分别抽提乳腺癌干细胞和MCF-7细胞总RNA,实时定量PCR检测miRNAs表达,对表达差异显著的miRNAs进行潜在靶基因预测。结果 miR-373*在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞高表达(6.684±0.548),而miR-200c在乳腺癌干细胞中较MCF-7细胞低表达(0.345±0.031)。通过软件分析预测,miR-373*与TP53INP2、CASP8、EIF4A1、EEF1A1等基因均具有可能靶位点,miR-200c与TCF2、TDE2、SYVN1、PDCD10、RAP2C等基因均具有可能靶位点。结论 miR-373*在乳腺癌干细胞中高表达,可能是一个潜在的癌基因。miR-200c在乳腺癌干细胞中低表达,可能是一个潜在的抑癌基因。