肺鳞癌组织中脆性组氨酸三联体基因的表达

目的探讨肺鳞癌组织中脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学(Streptavidin peroxidase,SP)法检测FHIT在42例肺鳞癌患者癌组织及13例癌旁组织中的表达,并研究FHIT蛋白阳性表达与肺癌临床病理特征、临床病理分期的关系。结果肺癌组织中FHIT蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织(47.6%vs.92.3%,P<0.05)。中/高分化患者FHIT蛋白阳性表达率显著高于低分化患者(54.2%vs.38.9%,P<0.01);有淋巴结转移患者FHIT蛋白阳性表达率显著低于无淋巴结转移患者[45.9%(17/37)vs.60.0%(3/5),P<0.05];期 期患者FHIT蛋白阳性表达率显著高于期患者[55.0%(11/20)vs.45.5%(10/22),P<0.05]。结论FHIT基因在肺鳞癌的发生、发展中起重要作用,对其蛋白的检测有望作为判定肺鳞癌发生及转移能力的客观指标之一。     

脆性组氨酸三联体基因甲基化与前列腺癌的相关性及临床意义

目的:检测前列腺癌患者血清中脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad, FHIT)甲基化状态,探讨FHIT甲基化与前列腺癌患者临床病理特征及5年生化复发和临床进展之间的关系。方法:采用MSP法检测78例前列腺癌和45例前列腺增生患者血清中FHIT甲基化表达状态,分析FHIT甲基化率与前列腺癌患者临床病理的关系,采用Kaplan-Meier生存分析FHIT甲基化率与前列腺癌5年生化复发和5年临床进展之间的关系。结果:前列腺癌患者血清中FHIT基因甲基化率为48.72%,高于前列腺增生患者的4.44%,差异有显著意义(P<0.05)。FHIT甲基化与前列腺癌患者年龄、术前PSA、TNM分期、Gleason分级有关;在前列腺癌Gleason分级≤7和Gleason 8~10分级中,FHIT甲基化率分别为59.18%和31.03%,在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期前列腺癌患者中,FHIT甲基化率分别为37.50%和66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。甲基化组5年复发率和5年累计临床进展率高于非甲基化组(P<0.05)。结论:FHIT甲基化与前列腺癌临床病理有关,检测FHIT甲基化状态有助于评估前列腺癌患者的临床预后。     

大肠癌中脆性组氨酸三联体基因和Survivin基因的表达及临床意义

目的检测脆性组氨酸三联体（FHIT）基因和Survivin基因在大肠癌、正常大肠黏膜上皮组织中的表达，探讨FHIT基因和Survivin基因与大肠癌．发生发展及转移的关系，探讨其与大肠癌临床病理特征的关系。方法利用免疫组织化学法对56例大肠癌和33例正常大肠黏膜组织检测FHIT、Survivin基因的表达。结果FHIT蛋白在33例癌旁正常大肠黏膜上皮和56例发癌中的阳性表达率分别为93．9％、48．2％，原发癌中FHIT蛋白的阳性表达率明显低于癌症正常大的黏膜上皮（P〈0，01）。Survivin在56例大肠癌的表达率为48．2％，显著高于33例癌症正常大肠黏膜上皮（P〈0．01）。结论FHIT基因表达的下调与Survivin基因表达的上调可能促进了大肠癌的发生。这样临床上通过检测FHIT、Survivin的基因的表达率对患者的预后有重要的指导意义。     

胃癌中脆性组氨酸三联体基因的甲基化和表达及其意义

目的检测脆性组氨酸三联体（FHIT）基因在胃癌中的蛋白表达及其甲基化情况，探讨FHIT在胃癌中的作用。方法收集胃癌新鲜组织标本共33例，采用免疫组织化学和甲基化特异性聚合酶链反应（PCR）的方法检测FHIT基因的蛋白表达和异常甲基化。结果33例胃癌组织中，24例表达FHIT蛋白，阳性率为73％，有13例发生了甲基化。阳性率为39％。胃癌中FHIT基因的蛋白表达和异常甲基化呈负相关。结论FHIT基因的异常甲基化是引起FHIT基因失活并导致胃癌发生的重要机制。     

脊索瘤与脆性组氨酸三联体基因的相关性研究

目的 探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因改变与脊索瘤发生的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学（SP）方法对18例脊索瘤和瘤旁正常组织FHIT基因RNA转录本和蛋白表达进行检测。结果 RT-PCR检测可见11例（61．1％）存在FHIT基因RNA转录本缺失．1例还同时含有正常和异常转录本。对其中2例进行测序，证实1例转录本缺失全部E5～E7外显子及部分E8外显子和部分E10外显子等2个片段；另1例转录本缺失全部E5～E9外显子及绝大部分E10外显子。脊索瘤中FHIT蛋白表达阳性百分比为55．6％（10／18）．瘤周正常组织为100．0％（18／18），差异有统计学意义（P〈0．05），FHIT蛋白在脊索瘤中表达减低。结论 FHIT基因表达缺失是脊索瘤发生的重要事件之一，可能与脊索瘤的发生机制有关。     

脆性组氨酸三联体基因蛋白在直肠癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性研究

目的探讨脆性组氨酸三联体基因蛋白(FHIT)在直肠癌组织中的表达情况及其与细胞凋亡间的关系。方法利用组织芯片和免疫组织化学技术,检测16例正常直肠和16例腺瘤组织标本及80例直肠癌组织中的FHIT、Bax、Bcl-2和survivin基因蛋白的表达,并运用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测直肠癌细胞凋亡。结果(1)直肠癌组织FHIT蛋白异常表达率为53.8%(43/80),其表达减弱与患者年龄、性别及肿瘤组织分型无关(P>0.05);而与肿瘤Dukes分期、淋巴结转移和患者的5年生存率关系密切(P<0.05,P<0.01)。(2)Bax、Bcl-2和survivin在直肠癌组织中的表达率分别为72.5%、51.3%和77.5%;survivin蛋白高表达与FHIT蛋白低表达密切相关(P<0.05);FHIT蛋白表达下降的同时,Bcl-2上调及Bax下调(P<0.01)。(3)FHIT蛋白表达减弱时细胞凋亡指数(AI)也下降;FHIT蛋白不同表达组间的AI比较,P<0.01。结论FHIT基因表达下降可能与直肠癌的发生密切相关,FHIT基因可能参与肿瘤细胞凋亡的调节。     

脆性组氨酸三联体基因转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响

目的 观察脆性组氨酸三联体基因(FHIT)转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响.方法 将重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞(SW480-pRc/CMV2)和正常SW480细胞为对照.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测FHIT基因的mRNA转录水平.以奥沙利铂作用于3组细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞的生长抑制率,用流式细胞仪检测奥沙利铂处理前后各组结肠癌细胞的凋亡率及细胞周期的变化.结果 SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;经奥沙利铂处理后,转染FHIT基因的SW480细胞的凋亡水平与空质粒转染组及结肠癌细胞株组比较明显增高(第2、3、4天A值比较P<0.05),并且FHIT基因与奥沙利铂有轻度的协同促进凋亡作用;同时奥沙利铂处理前后实验组结肠癌细胞的生长周期较对照组均出现了明显的G_0/G_1期阻滞,且细胞的生长抑制率存在浓度和时间依赖性.结论 外源性FHIT基因表达与奥沙利铂协同促进SW480细胞凋亡及细胞周期阻滞,FHIT基因可增加结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性.     

胆囊癌中脆性组氨酸三联体基因表达缺失的研究

抑癌基因的改变在肿瘤的病理形成过程中具有重要作用 ,我们采用免疫组化方法研究脆性组氨酸三联体 (fragilehistidinetriad ,FHIT)基因与胆囊癌发生发展的关系 ,现报告如下。材料与方法1 材料 :收集我院 1993～ 2 0 0 2年手术切除的胆囊癌标本 4 3例 ,男 15例 ,女 2 8例。年龄 34～ 85岁。根据国际抗癌协会 (UICC)的标准 ,TNM分期 :Ⅰ期 7例 ,Ⅱ期 9例 ,Ⅲ期10例 ,Ⅳ期 17例 ,组织学分级 :高分化癌 2 2例 ,中分化癌 6例 ,低分化癌及未分化癌 15例 ;胆囊腺瘤 12例 ;10例正常胆囊组织取自因壶腹部肿瘤行胰十二指肠切除术及外伤的患者 ,患…     

基质金属蛋白酶-9和脆性组氨酸三联体基因在人类膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在膀胱移行细胞癌组织中的表达、相互关系和临床意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法观察50例膀胱移行细胞癌石蜡标本和10例正常膀胱组织中MMP-9和FHIT的表达.结果 50例膀胱癌组织中的FHIT和MMP-9的阳性表达率分别为58.0％和52.0％,与正常膀胱组织中的表达比较差异有统计学意义(P＜0.05和P ＜0.01).FHIT和MMP-9的表达与膀胱移行细胞癌的临床分期、病理分级和肿瘤的复发相关;肿瘤组织中的FHIT与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.412,P＜0.01).结论 膀胱癌组织中FHIT和MMP-9的表达在肿瘤进展中发挥重要作用.     

肝细胞癌脆性组氨酸三联体Fhit蛋白表达丢失研究

目的　探讨肝细胞癌中FHIT基因蛋白 (Fhit)表达状况及其与临床病理指标的可能关系。方法　采用兔抗人Fhit蛋白抗体和枸橼酸 微波 SP免疫组化方法检测 83例福尔马林固定、石蜡包埋的肝细胞癌蜡块标本中Fhit表达状况并分析其与组织学分级、临床分期以及肿瘤大小的关系。结果　 83例肝细胞癌组织Fhit表达较正常肝组织明显降低或缺失者为 5 0例 (6 5 2 % ) ,与正常肝组织相等者为 33例 (34 8% )。Fhit蛋白低表达癌在癌组织学分级中的分布为Ⅰ级癌 4 6 7% (7/15 ) ,Ⅱ级癌 5 3 8% (2 1/ 39) ,Ⅲ级癌 75 9% (2 2 / 2 9) ,各级癌组间比较 ,相差无显著性 (P >0 0 5 )。Fhit蛋白低表达癌在临床分期中的分布为Ⅰ～Ⅱ期癌 2 1 6 % (8/ 37) ,Ⅲ～Ⅳ期癌 91 3% (42 / 4 6 ) ,二组比较 ,有非常显著性差异 (P <0 0 1)。Fhit蛋白低表达癌在非小肝癌 (>5 0mm)和 (≥ 30mm)病例组中的分布分别为 75 0 % (33/ 4 4)和 6 4 9% (46 / 71) ,而在≤ 5 0mm组和 <30mm(小肝癌 )组中则为4 3 6 % (17/ 39)和 33 3% (4/ 12 ) ,组间比较 ,均有显著性差异 (P均 <0 0 5 )。结论　肝细胞癌Fhit表达状况可能与临床分期以及肿瘤大小相关 ,提示Fhit表达降低可能对肝细胞癌的演化和进展具有重要作用并可能成为一个新的预后指标。     

温热疗法增强前药氟胞嘧啶对转基因结肠癌细胞株的杀伤作用

目的 探讨温热疗法能否增强前药5-氟胞嘧啶（5-fluorocytosine，5-FC）对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶（cytosine deaminase，CD）基因的结肠癌细胞SW480的靶向性杀伤作用及其机制。方法 将转染G1CEACDNa之结肠癌SW480细胞接种到96孔细胞培养板中，同时加入含各种浓度梯度的前药5-FC。实验组以水浴加温法在43℃下热处理30min，对照组不加热。第8d去除培养液，以MTT法测定活细胞比率，分析前药5-FC联合温热疗法对转CD基因结肠癌SW480细胞的杀伤作用，并以流式细胞仪分析热化疗对肿瘤细胞周期的影响，透射电镜观察热化疗前后肿瘤细胞形态学改变。结果 实验组细胞的杀伤率明显高于对照组（P〈0．05，t=2．403，n=9）；流式细胞仪检测显示实验组S期细胞比例明显增高（P〈0．001，t=7．158，n=6）；透射电镜观察下显示实验组细胞膜微绒毛消失，边缘变平直，细胞核皱缩，染色质聚集在核模下。结论 温热疗法能明显提高转CD基因结肠癌SW480细胞对前药5-FC的敏感性；两者联用能使转CD基因结肠癌SW480细胞产生S期阻滞，从而促进细胞凋亡。     

RNA干扰转录因子激活蛋白4基因表达对结肠癌细胞株SW480的影响

目的观察转录因子激活蛋白4（AP-4）基因对结肠癌细胞株SW480生物学行为的影响。方法设计合成针对AP-4基因外显子7的小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒,用脂质体转染SW480细胞,通过RT-PCR技术、Western印迹、四甲基偶氮唑盐实验（MTT法）、流式细胞仪和Transwell体外侵袭实验等检测该siRNA对SW480细胞基因表达、细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡能力和浸润转移能力等生物学行为的影响。结果AP-4siRNA转染SW480细胞96h后,其AP-4mRNA水平下降了58%,培养液上清AP-4蛋白浓度下降了75%（P〈0.01）。细胞增殖受到明显抑制,抑制率达61%～78%;流式细胞仪检测结果显示,AP-4siRNA组SW480细胞凋亡率为（21.70±2.51）%,显著高于阴性对照组的（2.31±0.14）%（P〈0.01）,G0-G1期细胞比例增加（P〈0.01）,G2-M期细胞减少（P〈0.05）;Transwell体外侵袭实验显示,AP-4siRNA能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力（P〈0.01）。结论应用siRNA技术沉默AP-4基因能有效抑制SW-480细胞AP-4的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡,为以AP-4为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。     

紫草素下调CXCR4表达及抑制结肠癌细胞株SW480在CXCL12诱导下的定向迁移

目的探讨紫草素对结肠癌细胞增殖、CXCR4表达及对CXCL12诱导的定向迁移能力的影响。方法采用MTT法观察紫草素对SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测紫草素对SW480细胞表面CXCR4表达的影响．Transwell方法观察紫草素对SW480细胞定向迁移能力的影响。结果紫草素对SW480细胞生长有抑制作用．这种抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强。SW480细胞CXCR4阳性表达率为（99．1±0．7）％,用紫草素0.01、0．1及1．0μmol／L作用24h后,CXCR4阳性表达率分别降至（76．0±2．4）％、（59．1±2．5）％和（35．5±1．9）％（F=1098．041．P〈0．001）。上述不同浓度紫草素对CXCL12诱导的SW480迁移抑制率分别为25．2％、38．5％和55．7％（F=48．970,P〈0．001）。结论紫草素除了抑制结肠癌细胞增殖外,还可能通过下调CXCR4表达从而抑制肿瘤细胞在CXCL12诱导下的定向迁移。     

结直肠癌转移生物标记物的蛋白质组学研究

目的应用蛋白质组学技术寻找结直肠癌转移潜在标志物,研究氟尿嘧啶（5-Fu）对差异蛋白表达的影响,并初步探讨结直肠癌的转移机制。方法常规培养Lovo及SW480细胞至指数生长期后提取蛋白。采用MTF法检测5-Fu对此两种细胞的半数抑制浓度（IC50）,分别用IC50的5-FU干预Lovo和SW480细胞后提取蛋白。对所提取的蛋白进一步行二维凝胶电泳,选取表达有显著差异的点进行质谱检验和生物信息学分析。采用Western blot及免疫荧光验证5-FU作用前后两种细胞显著差异蛋白的表达。结果二维凝胶电泳和质谱分析成功鉴定出11种差异蛋白．根据预设条件筛选出：核内不均匀核糖核蛋白K（hnRNP K）、蛋白质二硫键异构酶（PDI）。Western blot及免疫荧光实验显示;Lovo细胞株中hnRNPK蛋白表达较SW480高,PDI蛋白表达较SW480低：5-Fu干预后．Lovo细胞株中hnRNP K蛋白表达下调程度较SW480显著．免疫荧光强度减弱,SW480细胞株中PDI蛋白表达上调幅度较Lovo细胞显著,免疫荧光强度增强。结论hnRNP K和PDI表达在不同转移潜能结直肠癌细胞系Lovo和SW480存在显著差异,5-Fu干预后其表达有着规律性改变。     

咖啡酸苯乙酯对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对培养的大肠癌SW480细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法不同浓度CAPE处理培养的大肠癌SW480细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,TUNEL染色观察凋亡细胞。结果CAPE对SW480细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪检测发现2.5、5.0、10mg/L的CAPE对SW480处理24h后,G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,细胞凋亡率上升,呈剂量依赖性。TUNEL染色也发现CAPE作用后凋亡细胞数量增加。结论CAPE对大肠癌SW480细胞株具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与阻滞细胞周期G期和诱导细胞凋亡有关。     

环氧化酶2抑制剂对结肠癌细胞中BCL-3及细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨环氧化酶2（COX-2）抑制剂对BCL-3基因及其靶向基因细胞周期蛋白1（cyclin D1）的转录和表达的影响.方法 实验组分别以25、50、100及200 μmol/L的NS398（COX-2抑制剂）处理结肠癌SW480细胞48 h或72 h;对照组以不含NS398的溶媒处理SW480细胞.采用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学染色方法分别从mRNA和蛋白水平检测各组细胞中BCL-3和cyclin D1的表达情况.结果 各组细胞处理48 h后,与对照组相比,实验组BCL-3和cyclin D1 mRNA水平下降,呈剂量依赖性;而蛋白水平则无明显差异（P〉0.05）.处理72 h后,与对照组相比,实验组BCL-3和cyclin D1蛋白水平下降,亦呈现剂量依赖性.当NS398浓度达到100 μmol/L时,其BCL-3 mRNA及蛋白表达水平与对照组比较差异即有统计学意义（P〈0.01）：当NS398浓度达到50 μmol/L时,其cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平与对照组比较差异即有统计学意义（P〈0.05）.结论 结肠癌细胞株SW480中有BCL-3的表达.COX-2抑制剂NS398可从基因及蛋白水平对BCL-3及cyclinD1进行抑制,并呈剂量依赖性.NS398可能通过BCL-3而抑制cyclinD1.     

小干扰RNA对结肠癌细胞株TLR4沉默效果的分析

目的 建立SYBR Green荧光定量聚合酶链反应(PCR) TLR4检测方法,构建标准曲线,并测定小干扰RNA( siRNA)沉默TLR4的效率.方法 设计TLR4 qPCR扩增引物,以SYBRGreen qPCR master mix,95℃15min,95℃15s,60℃ 1min 50个循环进行扩增,同时1:4稀释阳性对照,构建标准曲线.以65℃为起点,0.5℃为阶梯逐步增加至95℃,于每个温度点测定荧光强度,获得熔解曲线.LipofectamineTM 2000介导不同浓度的siRNA(60、80、100 nmol/L)转染SW480细胞6h后撤除.分别于24、48 h后,使用qPCR检测TLR4 mRNA水平表达变化.结果 (1)SYBR Green定量检测TLR4扩增曲线呈典型S型动力学曲线,扩增效率为100.9％,熔解曲线成单峰,熔解温度为81.5℃.(2) siRNA在24h、80 nmol/L时,TLR4 Ct值为27.72,较未干扰组(25.96)明显增加.(3)琼脂糖凝胶电泳显示转染组(24h、80 nmol/L)在PCR扩增28个循环时不能被检出,而阳性对照则扩增条带清晰.结论 (1) qPCR检测TLR4方法稳定,结果可靠.(2) siRNA浓度80 nmol/L,可对肠癌SW480细胞的TLR4 24 h时的表达水平明显抑制.