芬太尼对胃癌MGC-803细胞E2F-1、p53基因表达的影响

目的观察芬太尼对人胃癌MGC-803细胞生长增殖及E2F-1、p53基因表达的影响。方法芬太尼10-4μmol/L与胃癌MGC-803细胞共同孵育为芬太尼组,未加入芬太尼的胃癌MGC-803细胞孵育为对照组。7d后检测胃癌MGC-803细胞生长增殖的变化,观察细胞超微结构的变化,检测细胞E2F-1、p53基因的表达。结果与对照组相比,芬太尼组MGC-803细胞生长增殖缓慢,细胞克隆形成率更低(P<0.05);细胞胞质深染、细胞核固缩、染色质碎裂,出现明显的凋亡表现;细胞E2F-1基因表达增加、p53基因表达减少。结论 10-4μmol/L芬太尼可抑制胃癌MGC-803细胞的生长增殖,促进细胞的凋亡,并改变E2F-1、p53基因的表达。     

E2F-1蛋白在胃癌中的表达及意义

目的探讨E2F-1蛋白在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达与意义。方法采用免疫组化技术对80例原发性胃癌癌组织与癌旁黏膜中E2F-1的表达进行检测，同时对40例正常胃黏膜组织进行对照性研究，并进行统计学分析。结果E2F-1在癌组织与癌旁黏膜中的阳性表达率为72．5％（58／80）和30．0％（24／80），在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为22．5％（9／40），差异有非常显著性（P〈0．001）。癌组织、癌旁黏膜中E2F-1的表达在不同的临床病理特征之间差异无显著性（P〉0．05）。结论E2F-1蛋白在胃癌组织中超表达，E2F-1的反常表达与胃癌的发生有关。     

MCM5和E2F-1在胃癌组织中的表达及临床病理意义

目的：观察微小染色体维持蛋白5（MCM5）和转录因子1（E2F-1）在胃癌组织中的表达及其与胃癌病理参数之间的关系,探讨二者相关性。方法：采用免疫组织化学SP方法,对57例胃癌患者的癌组织及20例正常胃黏膜进行检测,分析MCM5、E2F-1蛋白表达及其与胃癌病理参数之间的关系。结果：MCM5在胃癌组中的阳性表达率为71～％（41／57）,显著高于正常组0（0／20）,2组差异有统计学意义（P〈0．001）.E2F-1在正常胃组织、胃癌组织中的阳性表达率分别为35．0％（7／20）,66．7％（38／57）,差异有统计学意义（P〈0．05）。MCM5和E2F-1的表达与性别、年龄、胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期均无关（P〉0.05）。MCM5和E2F-1在胃癌组织中的表达呈正相关（r=0．635,P=0．000）。结论：MCM5和1E2F-1在胃癌细胞中阳性表达,参与了胃癌的发生、发展oMCM5和E2F-1可能共同作用于胃癌发生的早期阶段。     

芬太尼对人胃癌MGC-803细胞活力的影响

目的 评价芬太尼对人胃癌MGC-803细胞活力的影响.方法 人胃癌MGC-803细胞,接种于6孔或96孔培养板中,随机分为3组(n=60),正常对照组(C组)不作任何处理,低浓度芬太尼(F1组)和高浓度芬太尼组(F2组)芬太尼的终浓度分别为0.01、1.00 μmol/L,分别于芬太尼孵育12、24、36、48、60、72 h时测定细胞活力,于芬太尼孵育7 d时测定细胞增殖情况,于芬太尼孵育24 h时测定细胞周期和细胞凋亡情况,于芬太尼孵育24 h时采用透射电子显微镜观察细胞超微结构.结果 与C组比较,F1组和F2组细胞活力、克隆形成率和S期比例均降低,细胞凋亡率和G2/M期比例升高(P＜0.05);F1组与F2组比较上述指标差异无统计学意义(P＜0.05);C组细胞核膜完整、核仁及染色质清晰,F1组细胞核膜及核仁碎裂、染色质边集,F2组细胞核膜破裂、核仁碎裂,并出现凋亡小体.结论 芬太尼可抑制人胃癌细胞的活力,其机制与诱导促细胞凋亡作用有关.     

p53对HepG2细胞AMPKβ1基因表达的影响

目的研究p53对HepG2细胞AMPKβ1基因表达的影响,探讨p53通路对细胞生长的调控机制。方法体外培养HepG2细胞,利用依托泊苷（VP-16）对细胞DNA损伤作用引起细胞内p53蛋白的变化,以未处理细胞作对照。采用WesternBlot定量检测细胞内p53蛋白量和半定量RT-PCR检测AMPKβ1 mRNA相对表达量。结果在VP-16处理6h、12h、24h后,细胞内p53蛋白水平显著高于对照组（P〈0．05）,同时AMPKβ1mRNA相对表达量亦显著高于对照组（P〈0．05）。结论细胞内p53蛋白的升高与AMPKβ1mRNA的表达增强呈现一致,AMPKβ1可能是抑癌基因p53影响细胞生长的下游调控基因。     

吗啡对人胃癌MGC-803细胞caspase-3表达的影响

目的观察吗啡对人胃癌MGC-803细胞凋亡及caspase-3表达的影响。方法胃癌MGC-803细胞分为两组:对照组和吗啡组。对照组不加任何药物,吗啡组将吗啡加入细胞培养液中使吗啡终浓度为0.1μmol/L。孵育24h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中caspase-3基因mRNA和蛋白的表达情况。结果吗啡组胃癌细胞凋亡率为(17.20±2.95)%,明显高于对照组的(11.40±2.86)%(P<0.05)。RT-PCR和Western blot结果显示,吗啡组胃癌MGC-803细胞中caspase-3mRNA和蛋白表达增加。结论 0.1μmol/L吗啡通过增加caspase-3的表达而促进胃癌细胞的凋亡。     

RNA干扰下调p53抑制因子iASPP表达对膀胱癌细胞的影响

目的 探讨RNA干扰使p53抑制因子iASPP表达下调对膀胱癌细胞的影响.方法 iASPP siRNA慢病毒感染入膀胱癌细胞株5637和T24,实时定量PCR和蛋白质印迹法检测iASPP的表达;噻唑盐法测定细胞生长;集落形成测定法检测集落形成比率;荧光激活细胞分选术检测细胞周期.结果 iASPP siRNA慢病毒感染后细胞iASPP mRNA为0.60±0.02,低于阴性对照慢病毒组(1.00±0.03,P＜0.05).膀胱癌细胞iASPP蛋白表达降低.iASPP下调能抑制入膀胱癌细胞5637和T24的生长和增殖(P＜0.05),每个集落中细胞数显著减少(P＜0.05),集落数目也低于阴性对照组(P＜0.05).iASPP siRNA慢病毒5637细胞培养中的G1期细胞比率明显高于阴性对照慢病毒组,分别为(51.94±0.98)%和(46.00±0.77)%;T24细胞结果与之类似,分别为(60.04±0.45)%和(53.62±0.69)%;组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RNA干扰能够使膀胱癌细胞iASPP表达下调,从而抑制膀胱癌细胞的生长和增殖.

Abstract：

Objective To discuss the effects of silencing of iASPP gene on human bladder cancer cells. Methods RNAi silencing of iASPP gene in bladder cancer cell 5637 and T24 cells were used by lentiviral mediated interfering short hairpin RNAs. Cell proliferation was tested by MTT assay, and rate of colony was tested by colony formation assay. Cell cycles were tested by using fluorescence-activated cell sorting. Results Down-regulation of iASPP could inhibit the growth and proliferation of human bladder cancer cells (P＜0.05). iASPP know-down could decrease the colony formation of 5637 and T24 cells (P＜0, 05). Knocking down of iASPP in 5637 and T24 cells showed cell arrested at G1. Conclusions Silencing of iASPP gene could inhibit proliferation and colony formation of bladder cancer, iASPP might be an important target for gene therapy of bladder cancer.     

野生型p53基因对人胃癌细胞端粒酶逆转录酶mRNA转录的影响

目的 研究野生型p53基因对人胃癌细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA转录及端粒酶活性的影响。方法 将含人野生型p53基因的pcDNA3—p53转染人胃癌细胞系BGG—823，通过半定量逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)检测转染后细胞hTERT基因mRNA的转录，聚合酶链式反应结合酶联免疫吸附(PCR ELISA)方法检测端粒酶活性。结果 转染野生型p53基因后48、72h BGC-823细胞的hTERT基因mRNA转录量由对照组的( )下降为( )和( )；转染前BGC—823细胞表达高水平的端粒酶活性(3．049)，而转染48、72h后的端粒酶活性分别为1．678和0．757。结论 野生型p53基因能够显著抑制人胃癌细胞hTERT基因mRNA的转录，通过下调hTERT、基因mRNA的转录来抑制胃癌细胞的端粒酶活性。     

RNA干扰下调p53抑制因子iASPP表达对膀胱癌细胞的影响

Objective To discuss the effects of silencing of iASPP gene on human bladder cancer cells. Methods RNAi silencing of iASPP gene in bladder cancer cell 5637 and T24 cells were used by lentiviral mediated interfering short hairpin RNAs. Cell proliferation was tested by MTT assay, and rate of colony was tested by colony formation assay. Cell cycles were tested by using fluorescence-activated cell sorting. Results Down-regulation of iASPP could inhibit the growth and proliferation of human bladder cancer cells (P＜0.05). iASPP know-down could decrease the colony formation of 5637 and T24 cells (P＜0, 05). Knocking down of iASPP in 5637 and T24 cells showed cell arrested at G1. Conclusions Silencing of iASPP gene could inhibit proliferation and colony formation of bladder cancer, iASPP might be an important target for gene therapy of bladder cancer.     

RNA干扰下调p53抑制因子iASPP表达对膀胱癌细胞的影响

Objective To discuss the effects of silencing of iASPP gene on human bladder cancer cells. Methods RNAi silencing of iASPP gene in bladder cancer cell 5637 and T24 cells were used by lentiviral mediated interfering short hairpin RNAs. Cell proliferation was tested by MTT assay, and rate of colony was tested by colony formation assay. Cell cycles were tested by using fluorescence-activated cell sorting. Results Down-regulation of iASPP could inhibit the growth and proliferation of human bladder cancer cells (P＜0.05). iASPP know-down could decrease the colony formation of 5637 and T24 cells (P＜0, 05). Knocking down of iASPP in 5637 and T24 cells showed cell arrested at G1. Conclusions Silencing of iASPP gene could inhibit proliferation and colony formation of bladder cancer, iASPP might be an important target for gene therapy of bladder cancer.     

榄香烯对小鼠肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-16A3的视网膜母细胞瘤抑癌蛋白及腺病毒E2启动子结合因子表达的影响

目的：探讨榄香烯对小鼠肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-16A3治疗的作用机制。方法：将22只小鼠分成两组，对照组12只，治疗组10只。从荷瘤次日起，治疗组用榄香烯腹腔注射治疗，对照组用生理盐水治疗。20d后取瘤组织用免疫组织化学染色方法观察荷瘤小鼠两组肿瘤组织的视网膜母细胞瘤抑癌蛋白（pRB）和腺病毒E2启动子结合因子（E2F－1）蛋白的表达情况。结果：对照组肿瘤组织pRB阳性率为50％（6／12），用药组阳性率为100％（10／10），两组间差异有显著性（P＜0．05）。对照组和用药组E2F－1均呈阳性表达，表达率均为100％（12／12）和（10／10），两组间差异无显著性（P＞0．05）。结论：榄香烯对小鼠肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-16A3有明显的抑制作用。其作用机制与pRB蛋白表达有关，与E2F－1无关。     

细胞周期相关转录因子E2F-1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的 研究E2F-1在结直肠癌中的表达情况及其临床意义.方法 采用免疫组织化学技术检测35例原发性结直肠癌标本中E2F-1的表达情况,并统计分析其阳性率与临床病理特征的相关性；采用蛋白印迹技术比较结直肠癌组织与癌旁正常组织间E2F-1表达量的差异.结果 35对结直肠癌及癌旁对照组织标本中,E2F-1阳性率分别为60.0％和5.7％,肿瘤组中E2F-1的表达明显高于癌旁对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).E2F-1在肿瘤组织中的表达情况与患者年龄、性别、分化程度及部位等因素无相关性,与淋巴结转移及TNM分期均显著相关(P＜0.05).肿瘤组中E2F-1的蛋白表达量高于癌旁对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 结直肠癌组织中表达E2F-1的细胞数目及其表达量均显著增加,E2F-1与结直肠癌临床病理特征相关.     

吗啡对胃癌细胞Survivin和Caspase-9表达的影响

目的 观察吗啡对人胃癌MGC-803细胞Survivin和Caspase-9基因表达的影响.方法 胃癌MGC-803细胞分为两组:对照组和吗啡组.对照组不加任何药物,吗啡组将吗啡加入细胞培养液中使吗啡终质量浓度为0.1 μmol/L.孵育24h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中Survivin和Caspase-9基因mRNA和蛋白的表达.结果 吗啡组胃癌细胞凋亡率为(17.20±2.95)％,明显高于对照组的凋亡率(11.40±2.86)％(P＜0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,吗啡组胃癌细胞中Survivin mRNA和蛋白表达降低,而Caspase-9 mRNA和蛋白表达增高(P＜0.05).结论 0.1μmol/L吗啡通过抑制Survivin的表达、增强Caspase-9的活性而促进胃癌细胞的凋亡.     

小分子干扰RNA对胃癌MGC803细胞E2F-1表达及其生物学行为的影响

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响.方法 将实验组(E2F-1-siRNA)和阴性对照组(negative control-siRNA)转染进MGC803细胞,48 h后采用实时定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测MGC803细胞增殖的变化,流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化.结果 E2F-1-siRNA有效抑制胃癌细胞E2F-1 mRNA和蛋白的表达并且影响MGC803细胞的增殖,与阴性对照组及未转染组细胞比较mRNA降低了84.8%和85.3%(F=14.35,P＜0.05),蛋白降低T77.2%和79.6%,MGC803细胞增殖分别抑制了69.0%和81.6%,差异有统计学意义(F=170.18,P＜0.05);同时E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2/M期附近,G2/M期DNA含量比例为(54.98±3.46)%,与阴性对照组(44.70±3.82)%和未转染组(31.47±2.12)%比较,差异有统计学意义(F=88.90,P＜0.05).结论 E2F-1-siRNA可以有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1 mRNA及蛋白的表达,使G1 期细胞的DNA含量下调,细胞分裂停滞在G2/M期附近,抑制胃癌细胞的增殖.     

p53 ser249突变对小鼠EF细胞周期和凋亡的影响

目的 研究p53 249编码子突变对小鼠EF细胞p53功能和信号传导的影响.方法 利用基因打靶技术在小鼠ES细胞p53基因249编码子中引入点突变.使编码子249由Arg变成Ser,根据同源重组规律采用PCR或Southern方法筛选带有p53 249突变的阳性ES细胞,并通过测序确定该ES细胞的p53 249编码子已经由Arg变成Ser,然后将含突变而不含筛选标记的ES细胞微注射到从Hprt-/-小鼠收集的囊胚中,将注射过的囊胚植入假孕的雌性小鼠子宫,到第14天取小鼠胚胎EF细胞,用含HAT的培养液[DMEM含10%FCS,glutamine,antibiotics,50 mM mecaptoethanol,和HAT(0.016 mg of hypoxanthine/ml,0.01 mM aminopterin,0.0048 mg of thymidine/ml)]筛选出从ES细胞分化而成的MEF细胞,经测序证实该细胞含有249 Arg到Ser的突变后,该细胞用于研究.利用细胞流式仪检测该突变对MEF细胞周期及凋亡的影响,并利用Western检测相关蛋白的表达.结果 (1)用UV处理EF细胞后,含p53 249编码子突变的EF细胞凋亡百分数,较含野生型p53的EF细胞凋亡百分数明显减少(P＜0.05).(2)用UV处理EF细胞后,含p53 249编码子突变的EF细胞对UV诱导的G1/G0细胞周期阻滞作用减弱.(3)用UV处理细胞后,含p53 249编码子突变EF细胞的p53的表达,与含野生型p53 EF细胞p53的表达没有差别,但含p53 249编码子突变EF细胞的BAX和p21的表达,较含野生型p53 EF细胞的BAX和P21的表达减少.结论 p53 249编码子突变可以减弱p53在uV诱导MEF细胞周期阻滞和凋亡过程中的作用,但对p53的表达没有影响.     

RNA干扰E2F-1表达对胃癌MGC803细胞生物学行为的影响及其机制

目的 利用基因表达谱芯片技术探讨E2F-1小分子干扰RNA(E2F-1-siRNA)影响胃癌细胞MGC803生物学行为的分子机制.方法 分别抽取E2F-1-siRNA转染组和对照组(negative control-siRNA)的细胞总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记cDNA探针,与含有21522条人类22k基因表达潜芯片进行杂交.采用LuxScan 10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析.结果 在21522条基因中,两组胃癌细胞间差异性表达基因为18条,其中上调基因8条,下调基因10条,下调的基因中有1条功能信息不明.结论 体外干扰E2F-1基因表达后,胃癌MGC803细胞生物学行为的变化是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果,其中的关键基因和信号传导通路值得进一步研究.     

纳洛酮复合吗啡对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响

目的观察纳洛酮复合吗啡对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响。方法建立裸鼠人胃癌MGC-803细胞皮下瘤模型,将50只裸鼠随机分为五组:对照组(C组)、生理盐水组(S组)、20mg/kg吗啡组(M组)、1mg/kg纳洛酮组(N组)、1 mg/kg纳洛酮+20 mg/kg吗啡组(NM组),每组10只。成瘤后,C组不作任何处理;S、M、N组裸鼠每天在右下腹分别腹腔注射生理盐水1.5ml/kg、吗啡20mg/kg或纳洛酮1mg/kg;NM组裸鼠每天在右下腹先腹腔注射纳洛酮1mg/kg,30min后再给予吗啡20mg/kg;连续注射14d。每2天测量1次肿瘤的长径和短径,计算肿瘤相对体积(RTV);用药结束后拉颈处死裸鼠,采用透射电镜观察肿瘤组织的结构变化,免疫组化、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测肿瘤组织中Cyclin D1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。结果 M组裸鼠皮下瘤RTV为(2.21±0.62)%,明显小于C组的(3.16±0.68)%、S组的(2.98±0.61)%、N组的(3.16±0.35)%和NM组的(2.64±0.37)%(P0.05);NM组裸鼠皮下瘤RTV明显小于C、S和N组(P0.05)。电镜下,C、S、N及NM组皮下瘤组织结构基本正常,M组皮下瘤细胞出现胞浆空泡化、核膜破裂、核染色质边集等。M组裸鼠皮下瘤组织内Cyclin D1、VEGF、MMP-9阳性染色肿瘤细胞、mRNA和蛋白的表达明显低于C组(P0.05);NM组裸鼠皮下瘤组织内Cyclin D1、VEGF、MMP-9阳性染色肿瘤细胞、mRNA和蛋白的表达明显高于M组(P0.05)。结论吗啡可抑制裸鼠人胃癌皮下瘤的生长,纳洛酮可拮抗这一作用,其机制可能与其调节Cyclin D1、VEGF、MMP-9的表达有关。     

p53凋亡刺激蛋白2对饥饿诱导的大肠癌HCT116 p53-/-细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 0f p53,ASPP2)对饥饿诱导的大肠癌HCT116 p53-/-(p53缺失)细胞自噬和凋亡的影响.方法 实验分3组:(1)绿色荧光蛋白腺病毒(green fluorescent protein adenovirus,rAd-GFP)感染组(对照组);(2)自噬抑制剂LY294002处理组;(3) ASPP 2腺病毒(ASPP2 adenovirus,rAd-ASPP2)感染组.无血清培养基分别培养0、24、48 h诱导细胞自噬和凋亡.利用calcein/PI吸收试验观察各组细胞凋亡水平.细胞转染红色荧光蛋白自噬质粒Lc3(cerise fluorescent protein autophagy plasmid Lc3,CFP-Lc3),在荧光显微镜下观察各组细胞自噬水平.结果 rAd-GFP感染组饥饿24h细胞的自噬水平升高显著(0 h:1.04±0.24;24 h:12.17 ±0.86,P＜0.05),而凋亡水平改变差异无统计学意义(0 h:2.01％±0.06％;24 h:3.23％±0.34％,P＞0.05);饥饿时间延长至48 h,自噬水平(0 h:1.04±0.24;48 h:21.09±3.32)和凋亡水平(0h:2.01％±0.06％;48 h:30.20％±3.18％)升高,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).使用LY294002抑制细胞自噬,饥饿24 h细胞凋亡显著增多(rAd-GFP组:3.23％±0.34％;LY294002组:15.68％±1.24％,P＜0.01),而饥饿48 h凋亡显著减少(rAd-GFP组:30.20％±3.18％;LY294002组:25.44％±3.01％,P ＜0.05).rAd-ASPP2感染组饥饿24 h自噬显著降低(rAd-GFP组:12.17±0.86;ASPP2组:1.45±0.45,P＜0.01),而凋亡显著升高(rAd-GFP组:3.23％±0.34％;ASPP2组:10.45％ ±0.81％,P＜0.05);饥饿48 h自噬(rAd-GFP组:21.09 ±3.32;ASPP2组:29.93±3.48)和凋亡(rAd-GFP组:30.20％±3.18％;ASPP2组:36.72％±2.74％)水平均显著升高(均P＜0.05).结论 ASPP2通过对自噬的双向调节促进饥饿诱导的大肠癌HCT116 p53-/-细胞凋亡.